抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)检测试剂盒(PNP比色法)

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碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP比色法)

碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP比色法)

碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP 比色法)简介:碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase ,简称ALP 或AKP)为一类磷酸酯酶,广泛分布于哺乳动物组织内,其活性所需最适pH 9.2~9.8。

Leagene 碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP 比色法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用PNP 比色法,其检测原理是Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物,可在碱性磷酸酶的作用下生成p -nitrophenol 。

在碱性条件下p -nitrophenol 转变成醌式结构,呈较深的黄色,通过分光光度比色法测定400~415nm处吸光度,据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。

该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的碱性磷酸酯酶活性。

该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

组成:操作步骤(仅供参考):1、 配制检测工作液:① 配制显色工作液: 取出1支pNPP ,恢复至室温后溶解于2ml ALP Assay buffer ,混匀,冰上预冷备用。

新配制的显色工作液应在6h 内用完。

② 配制标准品工作液。

2、 准备样品:① 细胞或组织样品:取恰当细胞或组织裂解液,如果有必要需进行适当匀浆,低速离心取上清,-80℃冻存,用于碱性磷酸酯酶的检测。

② 血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定,尿液通常也可以直接用于测定,-80℃冻存,但为了消除样品本身颜色的干扰,需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。

③ 高活性样品:如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶,可以使用原有的裂解液或PBS 等进行稀释,也可以采用ALP Assay buffer 稀释。

编号 名称TE0003 100T Storage试剂(A): ALP Assay buffer 15ml 4℃ 试剂(B): pNPP2支 -20℃ 避光 试剂(C): p -nitrophenol(10mM) 0.1ml -20℃ 避光 试剂(D): Stopping Solution 12mlRT 使用说明书1份3、加样:按照下表设置96孔板空白对照、标准品、待测样品,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡。

抗酒石酸酸性磷酸酶

抗酒石酸酸性磷酸酶

30-40岁2型糖尿病患者血清TRACP-5b及BALP临床分析目的:分析30-40岁糖尿病患者血清骨形成指标TRACP-5b及BALP 骨吸收指标水平与骨重建失衡的机理,为糖尿病骨质疏松的早期诊断提供可能的依据。

方法:选择30-40岁2型糖尿病患者23例及对照组病例21例,分别对其血清TRACP-5b及BALP进行测量,并做统计分析。

结果:T2DM患者组血清TRACP-5b水平高于对照组(P<0.05)具有统计学差异,T2DM患者组血清BALP水平低于对照组(P<0.05)具有统计学差异。

结论:1. 2型糖尿病患者较健康对照组患者血清骨吸收指标TRACP-5b水平升高,骨形成指标BALP 水平降低,成骨作用小于破骨作用,骨质疏松的风险有增加的可能性。

(2型糖尿病患者骨质疏松风险的增加可能与BALP及TRACP-5b 存在一定的关系)。

2.骨形成标记物BALP及骨吸收标记TRACP-5b可能是2型糖尿病骨质疏松早期预测的敏感指标。

引言:2型糖尿病是一种严重威胁人类健康的慢性疾病,在造成起心、脑、肾损伤的同时,还极易引起骨重建负平衡,导致骨质疏松。

有研究明,TRACP-5b是骨吸收的特异性标志物,可反映破骨细胞的活性及骨吸收的状态;BALP是骨形成的特异性标志物,可反映成骨细胞的活性及骨形成的状态。

本课题通过对40岁以下T2DM患者观察组和健康人对照组的血清TRCAP-5b及BALP水平测量,分析骨重建失衡的机理,为糖尿病骨质疏松的早期诊断提供可能的理论依据。

1.对象和方法1.1研究对象观察组:选取23例为我院2015年3月~2015年6月住院病人,按WHO标准确诊为T2DM 患者,其中男10例,女13例,年龄30-40岁,平均年龄(65. 5 ±1 0. 7)岁, 体质量指数[ BMI=体重( kg) /身高2( m2)] 平均为24. 4 ±3. 1, 病程6月~21 年, 均为口服降糖药及通过饮食控制血糖健康对照组:同期我院健康体检者21例,其中男10例,女11例,年龄30-40岁,平均年龄xx岁,体重指数xx.且经口服葡萄糖耐量试验排除糖尿病。

骨标记物临床意义

骨标记物临床意义

骨标记物临床意义一、骨标记物的概述骨标记物是一类反映骨代谢和骨形成过程的生物标志物,其在临床诊断、病情监测和治疗评估等方面具有重要价值。

骨标记物可以分为以下两类:1.骨形成标志物:如骨钙素(BGP)、Ⅰ型胶原羧基端前肽(P1NP)等,它们在骨形成过程中起到关键作用,水平升高表明骨形成活跃。

2.骨吸收标志物:如抗酒石酸盐酸性磷酸酶(TRAP)、钙离子浓度等,它们与骨吸收过程密切相关,水平升高提示骨吸收增加。

二、骨标记物的临床应用骨标记物在临床应用中主要包括以下方面:1.诊断骨质疏松症:通过检测骨形成和骨吸收标志物,有助于评估患者骨质疏松症的风险和发展程度。

2.评估骨折风险:骨标记物水平低下时,提示骨折风险增加,需采取相应预防措施。

3.监测骨代谢性疾病:如甲状旁腺功能亢进症、骨代谢异常等,骨标记物检测有助于病情监测和治疗效果评估。

4.评估骨移植和骨科手术效果:骨标记物水平的变化可作为评估骨移植和骨科手术疗效的指标。

三、常见骨标记物的临床意义1.钙离子浓度:钙离子是骨形成和骨吸收的关键调节因子,其浓度变化反映骨代谢状态。

2.骨碱性磷酸酶(BALP):主要来源于成骨细胞,活性升高表明骨形成活跃。

3.骨钙素(BGP):由骨细胞分泌,水平升高提示骨形成增加。

4.Ⅰ型胶原羧基端前肽(P1NP)和Ⅰ型胶原羧基端肽(PYD):为骨胶原降解产物,水平升高表示骨形成增加。

5.抗酒石酸盐酸性磷酸酶(TRAP):来源于破骨细胞,活性升高提示骨吸收增加。

四、骨标记物在临床应用中的注意事项1.骨标记物的检测方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)等方法进行检测。

2.结果的解释和评估:需结合患者年龄、性别、骨密度等相关因素,综合分析骨标记物水平。

3.与其他检测方法的结合应用:如双能X线吸收法、骨密度测量等,以获得更全面的诊断依据。

五、未来发展趋势与展望1.新型骨标记物的研发:随着科学技术的进步,新型骨标记物将不断涌现,为临床诊断提供更多依据。

抗洒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP 5b)定量测定

抗洒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP 5b)定量测定

抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP 5b)定量测定一、简介和用途、适用范围大量的抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)是由骨吸收的破骨细胞和有活力的巨噬细胞所释放的。

在血液循环中的TRACP有TRACP 5b 和TRACP 5a二种形式, TRACP 5b 来源于破骨细胞,而TRACP 5a来源于巨噬细胞。

由破骨细胞刚分泌到血液中的TRACP 5b是有活性的酶,但当TRACP 5b在血液循环中被清除之前已无活性,并被降解为碎片。

这样TRACP 5b不会因肝、肾功能受损而在血液中积蓄。

血清中TRACP 5b均来源于破骨细胞,此酶在昼夜的活性水平变化不明显,且不受进食的影响,故可在一天的任何时候都可以采集标本进行检验。

此试剂盒依据测定由破骨细胞释放的TRACP 5b的特异性测定方法。

它可以用于测定骨吸收亢进的病人,如原发性骨质疏松和肾性骨病,也可以预测骨折的危险性,并便于了解抗骨吸收治疗的效果。

在肿瘤病人中,当TRACP 5b 的活力增高提示肿瘤骨转移。

在体外,培养基中TRACP 5b的活力大小代表了破骨细胞数量的多少,因此应用于此试剂盒在进行人的破骨细胞培养时,可用于检测破骨细胞的数量。

二、试验原理测试孔内已包被抗TRACP单克隆抗体→加入校准液、质控品和样品→加入释放剂→有活性的TRACP 5b从结合蛋白质上离解→TRACP 5b与孔内包被的抗TRACP单克隆抗体结合→加入底物pNPP孵育→加入终止液终止反应→在酶标仪上检测结果。

此试验的优点1、所测定的TRACP 5b是由破骨细胞专一释放的。

2、此试验对TRACP 5a或其它磷酸酶没有干扰。

3、溶血不影响结果。

4、不受昼夜变化的影响。

5、不受肝脏、肾脏疾病的影响。

6、不受进食的影响。

7、酶标板容易拆卸,方便检测。

三、试剂盒(一)组成1、酶标板:96孔,已包被抗—TRACP抗体。

2、质控液:3×0.5ml。

3、校准液:3×0.5ml(3×1U/L,3×5U/L,3×10U/L)。

破骨细胞酸性磷酸酶染色后快速半定量分析

破骨细胞酸性磷酸酶染色后快速半定量分析
a medium containing 10% fetal bovine scram for 44 hours,4 h/44 h as a cycle.Eight days later,regular TRAP in situ staining was per formed. Suitable solvents were screened fo r TRAP.Acetic acid was applied for f inal solved,with uhrason— ic grinding. Supernatant was collected for assessment of OD value with a suitable absorbance wavelength,and com pared
tal, Guangzhou 510515,Guangdong ,China Co ̄esponding author:YANG De—hong .E —mail:drmyang@ yahoo.con
【Abstract】 Objective To select a suitable solvent for dissolving osteoclast tartrate resistant acid phosphatase stai. ning(the TRAP in situ staining);to explore the optimal wavelengths of light absorption;and to compare with tartrate re—
sistant acid phosphatase detection kit method.thus evaluate the stability of fast seni—quantitative analysis.M ethods

碧云天酸性磷酸酶检测试剂盒说明书

碧云天酸性磷酸酶检测试剂盒说明书

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology订货热线:400-168-3301或800-8283301订货e-mail:******************技术咨询:*****************碧云天网站微信公众号网址:酸性磷酸酶检测试剂盒产品编号产品名称包装P0326 酸性磷酸酶检测试剂盒120次产品简介:碧云天生产的酸性磷酸酶检测试剂盒(Acid Phosphatase Assay Kit)是一种用于快速、便捷地检测细胞或组织样品的裂解或匀浆产物的上清液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的酸性磷酸酯酶活性的试剂盒。

酸性磷酸酶(Acid Phosphatase),也称酸性磷酸酯酶,是一种在溶酶体中含量较高的酸性水解酶,被认为是鉴定溶酶体亚细胞组分的标志物。

酸性磷酸酶是一个蛋白家族,哺乳动物中其分子量从18kD到100kD不等。

酸性磷酸酶分为两类,一类为酒石酸盐敏感型,一类为氟离子敏感型。

溶酶体中的酸性磷酸酶为酒石酸盐敏感型,而红细胞和巨噬细胞中的酸性磷酸酶为氟离子敏感型。

血浆中的酸性磷酸酶活性范围在2-7.9U/L,血清中酸性磷酸酶的活性范围在2.5-11.7U/L。

精液(semen)中含有高浓度的酸性磷酸酯酶,活力可以达到87-436KU/L。

本试剂盒可以检测细胞或组织样品的裂解或匀浆产物的上清液、血浆、血清、尿液或纯化的酶样品等中的酸性磷酸酶活性。

Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)是一种常用的磷酸酶显色底物,在酸性条件下,可在酸性磷酸酶作用下生成para-nitrophenol。

para-nitrophenol (p-nitrophenol)在碱性条件下,呈黄色产物,可以在400-415nm检测吸光度。

产物黄色越深,说明酸性磷酸酶检活性越高,反之则酶活性越低。

据此通过比色分析就可以计算出酸性磷酸酶活性水平。

包括标准品和空白对照,本试剂盒共可进行120个样品的检测。

trap染色

trap染色

trap染色答案:Trap染色是用于检测骨组织、骨细胞中特征物质的染色,使破骨细胞呈红色,背景呈绿色或蓝色。

抗酒石酸酸性磷酸酶(Trap)为破骨细胞的标志酶,特异地分布于破骨细胞中,为破骨细胞所特有,通常作为鉴别破骨细胞的重要标志物。

在含酒石酸的酸性条件下,trap能将萘酚AS-BI 磷酸盐水解,产生的萘酚AS-BI立即与fast red或六偶氮副品红结合,在酶活性部位形成不溶性的红色染料,通过观察红色染料的形成可间接了解酸性磷酸酶的活性,进一步鉴别及分析破骨细胞的状态。

分析:骨组织切片及trap染色实验步骤1、骨组织脱钙:新鲜骨组织固定于4%多聚jia醛24h 以上。

将组织从固定液取出置于EDTA脱钙液内脱钙(不能用含酸的脱钙液脱钙),每3天换一次脱钙液,至骨组织针扎可以顺利通过为止。

2、取材:在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整,将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内。

3、脱水:将脱水盒放进吊篮里于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。

75%酒精4h-85%酒精2h-90%酒精2h-95%酒精1h-无水乙醇I 30min-无水乙醇II 30min-醇苯5-10min-二甲苯I 5-10min-二甲苯II 5-10min-蜡I 1h-蜡II 1h-蜡III 1h。

4、包埋:将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。

先将融化的蜡放入包埋框,待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。

于-20°冻台冷却,蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。

5、切片:将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片,片厚4μm。

切片漂浮于摊片机40℃ 温水上将组织展平,用载玻片将组织捞起,并放进60℃ 烘箱内烤片。

待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。

6、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20m in-无水乙醇Ⅰ10min-无水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗。

抗酒石酸酸性磷酸酶染色液使用说明

抗酒石酸酸性磷酸酶染色液使用说明

抗酒石酸酸性磷酸酶染色液使用说明货号:G4561有效期:6个月有效。

产品内容:名称规格(4×10ml)保存试剂(A):TRAP固定液50ml4℃避光试剂(B):TRAP孵育液B1:AS-BI Buffer1ml-20℃避光B2:GBC染色液0.1ml4℃避光B3:TRAP Buffer9ml RT避光临用前,按B1:B2:B3=10:1:90混合,即为TRAP孵育液,即配即用。

试剂(C):苏木素染色液10ml4℃避光试剂(D):甲基绿染色液10ml RT避光产品说明:酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)分布极广泛,遍布各种组织,主要存在于细胞的溶酶体内,所以常作为溶酶体标志酶。

溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。

各种动物中的酸性磷酸酶各有不同,酸性磷酸酶的适宜pH为4.5~5.5。

存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistnt acid phosphatase,TRAP)均在细胞滤泡中,并不是释放入血液。

血液中的TRAP绝大多数来源于破骨细胞,因此可以通过测量血液中的TRAP了解破骨细胞的功能状态。

抗酒石酸酸性磷酸酶染色液以萘酚AS-BI为底物,在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸和萘酚,萘酚不重氮盐偶联生成有色产物,定位于细胞质中,若细胞内的ACP有抗酒石酸的活性,则呈阳性反应。

该染色液可用于新鲜血涂片、细胞涂片,亦可用于冰冻切片、石蜡切片。

自备材料:1、蒸馏水、恒温箱2、载玻片、推玻片3、光学显微镜操作步骤(仅供参考):(一)血液、细胞涂片:1、推片:取新鲜血液或骨髓涂片置于载坡片上,推玻片于载玻片保持30度,置于血液或细胞滴液的正前方,稍往后移不血液或细胞滴液接触使后者沿推片下缘散开,再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动至铺满血膜为止。

2、自然晾干,TRAP固定液4℃固定30s~3min,多数情况下30~60s即可。

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抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)检测试剂盒(PNP微板法)
简介:
酸酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)分布极广泛,遍布各种组织,主要存在于细胞的溶酶体内,所以常作为溶酶体标志酶。

溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内,各种动物中的酸性磷酸酶各有不同,酸性磷酸酶的适宜pH为4.5~5.5。

存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistnt acid phosphatase,TRAP)均在细胞滤泡中,并不是释放入血液,血液中的TRAP绝大多数来源于破骨细胞,因此可以通过测量血液中的TRAP了解破骨细胞的功能状态,几乎被认为是是机体破骨活性的唯一血液指标。

TRAP一种糖基化的含金属蛋白酶,在破骨细胞(osteoclast)和破软骨细胞(chondroclast)中高表达,在活化的巨噬细胞和神经元中也有表达。

Leagene抗酒石酸酸性磷酸酶检测试剂盒(Tartrate Resistnt Acid Phosphatase Colorimetric Assay Kit)检测原理是利用Para-nitrophenyl phosphate(pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物,在酸性条件下,可在酸性磷酸酶的作用下生成p-nitrophenol。

在碱性条件下p-nitrophenol呈黄色,产物黄色越深,说明酸性磷酸酶活性越高,反之则酶活性越低,通过分光光度比色法(酶标仪)测定吸光度,据此通过比色分析就可以计算出酸性磷酸酶活性水平。

在适量的酒石酸存在的情况下进行酸性磷酸酶的活性检测,检测得到的酸性磷酸酶的活性就是抗酒石酸酸性磷酸酶的活性。

该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的抗酒石酸酸性磷酸酯酶活性。

该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

组成:
自备材料:
1、96孔板
2、水浴锅或恒温箱
3、酶标仪编号
名称TE0043
120T
Storage
试剂(A): ACP Assay buffer15ml 4℃
试剂(B): pNPP 2支-20℃避光试剂(C): T artrate Solution 1ml 4℃
试剂(D): p-nitrophenol(10mM) 0.1ml -20℃避光使用说明书1份
操作步骤(仅供参考):
1、配制检测工作液:
①配制显色工作液:取出pNPP,恢复至室温后溶解于ACP Assay buffer,混匀,冰上预冷备用。

新配制的显色工作液应在6h内用完。

②配制标准品工作液:取出p-nitrophenol(10mM) 恢复至室温后,取溶解于ACP Assay buffer,使浓度达到。

2、准备样品:
①血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定,尿液通常也可以直接用于测定,-20℃冻存,用于抗酒石酸酸性磷酸酶的检测。

②细胞或组织样品:取恰当细胞或组织裂解液,如果有必要可用PBS或生理盐水进行适当匀浆,一般细胞数量在106以上,组织应在100mg以上,离心取上清,-20℃冻存,用于抗酒石酸酸性磷酸酶的检测。

③植物样品:取适量的植物组织加入少量生理盐水或PBS,充分捣碎或研磨,静置,用纱布或滤纸过滤,离心,留取上清液并测量体积,-20℃冻存,用于抗酒石酸酸性磷酸酶的检测。

④高活性样品:如果样品中含有较高活性的抗酒石酸酸性磷酸酶,可以使用ACP Assay buffe、PBS或生理盐水稀释后再行检测。

3、加样:按照下表设置96孔板空白对照、标准品、待测样品,溶液应按照顺序依次加入,
并注意避免产生气泡。

标准品的用量分别为4、8、16、24、32、40μl,待测样品直接加40μl。

如果样品中的抗酒石酸酸性磷酸酯酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

样品的检测最好能设置平行孔。

空白对照孔标准品孔待测样品孔ACP Assay buffer 40μl (40-x)μl (40-y)μl
显色工作液40μl 40μl 40μl
Tartrate Solution 5μl 5μl 5μl
待测样品——yμl
标准品工作液—xμl —
1、轻轻混匀,37℃孵育25~30min。

2、每孔加入Stopping Solution终止反应。

3、酶标仪检测吸光值,如果无法检测410nm,亦可检测400~415nm范围内吸光值,一
般应数小时内检测完毕。

计算:
酸性磷酸酶活性单位的定义:pH4.8 37℃条件下,每分钟水解para-nitrophenyl phosphate显色底物产生1微摩尔p-nitrophenol所需的酸性磷酸酶的量定义为一个酶活力单位。

根据酶活性定义,计算出样品中的抗酒石酸酸性磷酸酶活性。

注意事项:
1、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂,同时需避免反复冻融。

2、建议每次测定时都做标准曲线,以使标准更准确,另外标准品需避免反复冻融。

3、如果没有酶标仪,也可以使用普通的分光光度计测定,但应考虑根据比色杯的最小检
测体积,尽量采用小体积的比色杯。

4、所测样本的值高于标准曲线的上限,应用ACP Assay buffer稀释样品后重新测定。

5、一支显色工作液配制后需当日使用完毕,因此请注意适当多准备一些样品一起检测。

6、p-nitrophenol溶液对人体有害,反应终止液有腐蚀性,请小心操作。

7、如果希望进行酶活性的绝对定量,进行酶反应时应精确计时,此时推荐采用孵育30min
或更长时间,以减小操作过程中的时间误差。

8、待测样品中抗酒石酸酸性磷酸酶活性较低时,可适当延长孵育时间至30min。

9、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期:12个月有效。

相关:
编号名称
CC0007 磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)
CS0001 ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)
DC0032 Masson三色染色液
DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA)
NR0001 DEPC处理水(0.1%)
PS0013 RIPA裂解液(强)
TE0002 碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(PNP微板法)。

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