双黄连口服液含量测定比对试验中的问题分析
双黄连口服液质量标准的研究
双黄连口服液质量标准的研究发布时间：2021-12-31T07:03:07.080Z 来源：《中国科技人才》2021年第25期作者：段晓红黄晓蕾张黎达[导读] 采用薄层色谱法对处方中的金银花、黄芩和连翘成分进行定性鉴别，用高效液相色谱法对该口服液中的黄芩苷和绿原酸进行定量分析。
黄芩苷在0.72-2.58μg/mL的范围内线性关系良好；绿原酸在0.113-0.519μg/mL的范围内线性关系良好。
实验所采用的方法简便易行，准确可靠，能够为双黄连的质量标准研究提供依据。
哈药集团三精制药有限公司黑龙江省哈尔滨市 150069摘要：双黄连口服液是由金银花、黄芩、连翘三味中药经提取制成的口服液，具有疏风解表、清热解毒的功效，主要用于治疗病毒或细菌感染而引起的风热感冒发热、肺炎、呼吸道感染、扁桃体炎等疾病，疗效确切、安全有效。
研究对双黄连口服液中的中药材及其主要成分进行了定性、定量试验，采用薄层色谱法进行定性鉴别，采用高效液相色谱法来测定口服液中的绿原酸、黄芩苷、连翘苷成分的含量。
从而为双黄连口服液的质量标准研究提供依据。
关键词：双黄连口服液；薄层色谱法；高效液相色谱法采用薄层色谱法对处方中的金银花、黄芩和连翘成分进行定性鉴别，用高效液相色谱法对该口服液中的黄芩苷和绿原酸进行定量分析。
黄芩苷在0.72-2.58μg/mL的范围内线性关系良好；绿原酸在0.113-0.519μg/mL的范围内线性关系良好。
实验所采用的方法简便易行，准确可靠，能够为双黄连的质量标准研究提供依据。
一、实验材料1.药品和对照品。
双黄连口服液（哈药集团三精制药股份有限公司，批号：081109220811246208121342）。
绿原酸对照品、黄芩苷对照品、连翘药材对照品（中国药品生物制品鉴定所）。
2.仪器。
高校液相色谱仪：岛津LC－2A；超声处理器：LCQ－500E（昆山超声仪器有限公司）；分析天平：上海天平仪器厂生产。
二、实验方法和结果1.定性分析。
双黄连口服液口服液中黄芩苷的含量测定
问题 9 ：外标一点法的优缺点 ？
优点：操作简单，计算较简单，适合大 样本数据分析 缺点：要求严格控制进样体积，误差较 大。
问题 10 ：流动相如何处理？
用于高效液相色谱仪的流动相需是色谱 级别，水用纯化水。流动相需要经过除 杂和排气泡处理。装置如下
0.45μm 滤膜 滤器 流动相过滤（除杂） 超声清洗器 流动相超的 浓度，无法准确测量其峰面积，下列公 式中 CR 、 AR 不准确，故无法计算结果
问题 8 ：为什么配制供试品的 溶剂是 50% 甲醇，而不用其他 溶剂
答：本次实验的流动相甲醇占得比例即 50% ，用 50% 甲醇在进样前充分溶解样品，保证 样品在仪器内部也能溶解，不会析出而堵塞色 谱柱和管路
问题 3 ：紫外检测器有何优缺 点
优点：灵敏度高，准确度高，快速 缺点：不是通用显色器，只针对有共轭 系统的有机物才响应。
问题 4 ：什么样的溶剂才能作 为流动相？
答： 1. 溶解样品 2. 不与样品进发生反应 3. 适应相应的检测器（如紫外检测器的 溶剂要无紫外吸收，或者其紫外吸收不 影响样品的测定）。 4. 黏度不大。
实验 双黄连口服液口服液 中黄芩苷的含量测定
常见问题解答
问题 1 ：实验中为什么要超声
解答：本次实验溶剂（甲醇、水）需要 超声，目的是除去溶剂中的气泡；样品 需要超声，是使双黄连口服液中的黄芩 苷充分被溶剂溶解
问题 2 ：为什么样品要进三针 ？
解答：增加平行操作次数为了考察数据 的精密度，减小偶然误差
问题 5 ：检测器对温度有何要求 ？
高效液相色谱仪在室温下进行就行了， 不需要控制温度。 气相色谱根据柱温控制温度
问题 6 ：压力与流量不稳定怎 么办
答：检查仪器管路是否有堵塞。观察压 力表，压力恒定即可
双黄连口服液的质量分析
双黄连口服液的质量分析一、实验目的1.掌握对照品对照法和对照药材对照法鉴别复方制剂中药材的方法。
2.掌握双黄连口服液中金银花、黄芩和连翘的质量检验方法。
二、仪器与试药1.仪器美国PE-60型高效液相色谱仪KQ-300E型超声波清洗器Mettler AL204电子天平ZF-2型三用紫外仪HHS型电热恒温干燥箱容量瓶规格：25mL 移液管规格：25mL 滤纸规格：直径10cm研钵硅胶G薄层板聚酰胺薄膜(5cm×7cm)2..试药双黄连口服液规格：每支装10mL黄芩苷、绿原酸对照品连翘对照药材乙醇二氯甲烷甲醇硫酸醋酸三、实验原理采用对照品对照法和对照药材对照法分别鉴别双黄连口服液中的金银花、黄芩和连翘三味主药。
四、实验内容【处方】金银花375g 黄芩375g 连翘750g【制法】以上三味，黄芩切片，加水煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩并在80℃时加入2mol/L盐酸溶液适量调节PH值至1.0～2.0，保温1小时，静置12小时，滤过，沉淀加6～8倍量水，用40%氢氧化钠溶液调节PH值至7.0，再加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用2mol/L盐酸溶液调节PH值至2.0，60℃保温30分钟，静置12小时，滤过，沉淀用乙醇洗至PH值7.0，挥尽乙醇备用；金银花、连翘加水温浸半小时后，煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对蜜度为1.20～1.25(70～80℃测)，冷至40℃时缓缓加入乙醇，使含醇量达75%，充分搅拌，静置12小时，滤取上清液，残渣加75%乙醇适量，搅匀，静置12小时，滤过，合并乙醇液，回收乙醇至无醇味，加入黄芩提取物，并加水适量，以40%氢氧化钠溶液调节PH值至7.0，搅匀，冷藏（4～8℃）72小时，滤过，滤液加入蔗糖300g，搅拌使溶解，再加入香精适量并调节PH值至7.0，加水制成1000mL，搅匀，静置12小时，滤过，灌装，灭菌，即得。
双黄连口服液的质量检验
4、样品溶液的测定
❖ 分别精密吸取照品溶液与供试品溶液各5μl， 注入液相色谱仪，测定，根据峰面积来计算每支 口服液中黄芩苷的含量，即得。
5、计算公式
（1）计算理论塔板数（按黄芩苷计）
n5.54( tR )2 W1/2
(其中：A=1.065×h×w1/2) （2）计算分离度
R 2(tR1 tR2) W1 W2
实验内容
鉴别试验
含量测定
鉴别试验的项目
A
性状鉴别
Ｂ
薄层鉴别
❖ 性状鉴别
本品为棕红色的澄清液体；味甜，微苦。
❖薄层鉴别实验
供试品溶液：取本品1ml，加甲醇5ml，振摇使溶解，静置， 取上清液，即得。
对照药材溶液：另取连翘对照药材0.5g，加甲醇10ml，置 水浴上加热回流20分钟，滤过，滤液即为。
药物分析实验
双黄连口服液的质量检验
1
实验目的
2
实验仪器与试剂
3
实验内容
4
实验注意事项
5
讨论与思考题
实验目的
1、掌握中成药特征成分的薄层对照品法及药材 法的鉴别。
2、掌握中成药的HPLC含量测定的方法。
实验仪器与试剂
❖ 仪器：回流提取器、高效液相色谱仪、微量进样 器、层析缸
❖试剂：黄芩苷 、连翘药材、氯仿、甲醇、冰醋酸
（3）计算黄芩苷的含量（外标法）
C A 样 样 C A 标 标 C 样 C 标 A A 样 标 m VC 样 D
其中：C—浓度（mg/ml)； A—峰面积； m—黄芩苷的质量（mg）； D—稀释倍数； V—每支样液的体积(ml)
实验注意事项
❖ 制备样品时，一定要用唯恐滤膜过滤 ❖ 进样时进样器一定要清洗干净 ❖ 进样前色谱仪一定要用流动相平衡 ❖ 进样完毕后，一定要清洗色谱柱后方可关机。
实验八高效液相色谱法测定双黄连口服液中黄芩苷的含量
实验八高效液相色谱法测定双黄连口服液中黄芩苷的含量一、目的要求1．练习使用高效液相色谱仪2．学会用外标法定量分析二、实验原理外标法可分为外标一点法、外标二点法及标准曲线法。
当标准曲线截距为零时，可用外标一点法进行定量。
利用高效液相色谱法进行分离双黄连口服液中的黄芩苷，在λmax274nm 处进行检测。
在药物分析中，为了减小实验条件波动对分析结果的影响，采用随行外标一点法定量，即每次测定都同时进对照品与供试品溶液。
三、仪器与试药1．仪器高效液相色谱仪、超声波提取器、分析天平、微量注射器、ODS-C18反相色谱柱、容量瓶（25ml，50ml）2．试药黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所）、双黄连口服液（三精制药）、甲醇（色谱纯）、冰醋酸（A·R）、双蒸水。
四、实验内容与步骤1．色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇－水－冰醋酸（50：50：1）为流动相；检测波长为274nm。
理论塔板数按黄芩苷峰计应不低于1500。
2．对照品溶液的制备精密称取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量，加50%甲醇制成每1ml含0.1mg 的溶液，0. 45μm滤膜滤过，即得（浓度为0.1216mg/ml）。
3．供试品溶液的制备精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理20分钟，放置至室温，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，0. 45μm滤膜滤过，即得。
4．样品测定分别精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每1ml含黄芩以黄芩苷计不得少于8mg。
五、思考题1、HPLC中常用的定量方法有几种？外标一点法有何优缺点？2、紫外检测器的优缺点是什么？教你如何用WORD文档(2012-06-27 192246)转载▼标签：杂谈1. 问：WORD 里边怎样设置每页不同的页眉？如何使不同的章节显示的页眉不同？答：分节，每节可以设置不同的页眉。
文件――页面设置――版式――页眉和页脚――首页不同。
不同制备工艺对双黄连口服液有效成分含量及药效的影响
不同制备工艺对双黄连口服液有效成分含量及药效的影响【摘要】双黄连口服液在现有临床医疗环境中属于常见药品，在消毒杀菌方面有相对明显的效果，但在实际制备工艺方面却难以有效统筹，以致现有医疗市场环境中药品质量参差不齐，不但促使药品功能不稳定，同时更导致了药物市场环境难以有效开展统筹工作。
故而，针对不同制备工艺对双黄连口服液的影响，应当通过有效的成分含量分析和药效影响进行贯彻，这样才能够在明确制备优势的同时，为后续双黄连口服液制备工艺环境提供良好参照。
【关键词】双黄连口服液；制备工艺；成分含量；药效影响一、试验仪器与相关材料药品材料：黄芩、金银花、连翘药材；分析纯（盐酸、氢氧化钠、乙醇）；纤维素酶（活性度20000U/g）；木聚糖酶（活性度30000U/g）；双黄连口服液。
试剂材料：黄芩苷对照品、黄芩素对照品、绿原酸对照品、咖啡酸对照品、连翘苷对照品、除以上试剂其他皆为色谱纯。
试验仪器：高效液相色谱仪、紫外线可见检测器、色谱工作站、柱温箱、中药提取设备、管式离心机、手动进样器、中空纤维滤膜、中药浓缩罐。
二、实验选用方法1.双黄连口服液制备技术将黄芩、金银花、连翘以1:1:2的比例制备药液，通过水提醇沉法，按照加水煎煮、醇沉洗脱、浓缩过滤与限度工艺进行制备，确保样品试液保留三份；其次，酶解法的应用首先应当进行加水煎煮，而后再以酶解法措施确保物理除杂完善，通过浓缩过滤、罐装灭菌的工艺制备双黄连口服液，同样保留三个样本试液。
2.色谱条件分析纯选用乙腈和1%冰醋酸溶液，确定流动相梯度洗脱后，明确色谱柱（C18），分别以乙腈15%、25%、30%、40%、60%作为样品，检测波长为280nm且流速为1.0mL/min，参比波长为380nm，其中进样量10μL。
柱温保持在30°C。
3.溶液制备条件（1）试品溶液制备精密称取双黄连口服液样品，保证两种制备技术环境下的药品容量相同，而后分别添加甲醇溶液进行稀释，再通过超声处理30分钟，经由过滤即可得到试品溶液。
高效液相色谱法测定双黄连口服液中黄芩苷含量的不确定度分析_杨修镇
2． 1． 1 对照品称量不确定度 从天平检定证书上
得到，最大允许误差为 ± 0． 010 mg，假定为矩形分
布（ K = 槡3 ） ，由于对照品的称量一般采用减重法， 由两次测量组成，故两次称量的不确定度为：
u1 （ m对照） = 2 × （ 0． 01 /槡3） = 0． 0115 mg 对照品称量 重 复 性 不 确 定 度 在 50 mg 内，称 样量变动 的 标 准 偏 差 为 0． 07 mg，故 重 复 性 不 确 定度为： u2 （ m对照 ） = 0． 07 mg 由以上两项合成为称量不确定度：
u41 （ VX） = 槡（ 7． 51 × 10 － 3 ） 2 + 0． 152 + 0． 0132
= 0． 151 相对标准不确定度为： urel41 （ VX） = 0． 151 /50 = 0． 30%
u42 （ L） = 槡（ 4． 62 × 10 － 3 ） 2 + 0． 0032 + 0． 0082
表征合理的赋予被测量之值的分散性，与测量 结果 相 联 系 的 参 数，称 为 测 量 不 确 定 度。 这 是 JJF1001—1998《通用计量术语及定义》中对其作出 的最新定义。测量不确定度是独立而又密切与测 量结果相 联 系 的、表 明 测 量 结 果 分 散 性 的 一 个 参 数。在测量完整的表示中，应该包括 测 量 不 确 定 度。测量不确定度用标准偏差表示时称为标准不 确定度，如用说明了置信水准的区间的半宽度的表 示方法则成为扩展不确定度［4］。
品溶液各 5 μL，注入液相色谱仪，记录图谱。
1． 2． 4 数学模型
X
=
Ax·C0 ·Vx A0 ·L
X － 样品中黄芩苷含量，mg / mL； Ax—样品中黄
双黄连口服液质量分析_1
双黄连口服液质量分析发布时间：2022-01-21T09:07:55.690Z 来源：《中国科技人才》2021年第29期作者：于永杰李卉[导读] 应从中药材的源头控制及制剂生产环节全过程进行产品质量控制，确保产品质量稳定可控。
哈药集团三精制药有限公司黑龙江省哈尔滨市 150069摘要：双黄连口服液是由金银花、黄芩、连翘提取精制而成，具有解表、清热解毒的功效。
现代药理研究表明，双黄连口服液具有广谱抗菌、抗病毒、解热抗炎、免疫调节等作用。
对治疗畜禽感冒、炎症、细菌感染等疾病有很好的临床效果。
，且其毒副作用小，因此被广泛应用于兽医临床。
关键词：双黄连口服液；薄层色谱；高效液相色谱法测定18批双黄连口服液的合格率为33.33%:而定性检测合格的比例为66.67%;黄芩苷含量范围为0.17%～439.61%，黄芩苷含量合格率为61.11%;绿原酸含量范围为0.02%～231.48%，绿原酸含量合格率为33.33%;连翘苷含量范围为0.46%～341.87%，连翘苷含量合格率为38.89%。
源于18个厂家的双黄连口服液的合格率仅为33.33%，且双黄连口服液中主要成分含量相差较大，因此，应从中药材的源头控制及制剂生产环节全过程进行产品质量控制，确保产品质量稳定可控。
一、方法1.定性鉴别。
（1）黄芩苷、绿原酸的定性鉴别方法。
供试品溶液的制备:分别量取18个厂家的双黄连口服液1mL，分别加75%乙醇溶液5mL，摇匀，既得。
对照品溶液的制备:精密称取黄芩苷对照品11.49mg、绿原酸对照品1.14mg，加入75%乙醇分别定容在10mL量瓶中，浓度为1.122和0.114mg/mL。
方法测定:照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以36%乙酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视。
检查供试品色谱中，在与黄芩苷对照品、绿原酸对照品色谱相应的位置上，是否显相同颜色的荧光斑点。