钝顶螺旋藻多糖Sevage法脱蛋白工艺的研究
细胞冻融辅助热水浸提螺旋藻多糖及脱蛋白工艺优化
中图分类号：TS201.1
文献标识码：A
文章编号：1002-6630(2012)24-0111-06
钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)是一种具有极大经济 价值的微藻，富含蛋白质、多糖、γ-亚麻酸、维生素及 钙、锌、铁、硒等矿物质和微量元素，目前已广泛应用 于食品、保健品、化妆品、医药及饲料行业[1-3]。其中， 碳水化合物约占螺旋藻细胞干质量的15%～20%，主要为 分枝状的多糖类。大量研究表明，螺旋藻多糖具有抗肿 瘤、抗辐射、抗衰老、提高人体免疫力及降血脂等多种
Optimization of Polysaccharide Extraction from Spirulina platensis by Cell Freeze-Thaw Cooperated with Hot Water Extraction and Deproteinization
ZHU Jie1，REN Shu-zhen1，PENG Jiang-chen2 (1. School of Pharmaceutical Engineering and Life Science, Changzhou University, Changzhou 213164, China；
extraction alone. The optimal conditions for deprotenizing crude polysaccharide by Sevag’s method were found to be three treatment cycles with a mixture of chloroform and n-butyl alcohol (5:1, V/V) at a solid-to-solvent ratio of 1:3 (g/mL). Under
云南产钝顶螺旋藻提取物及活性研究的开题报告
云南产钝顶螺旋藻提取物及活性研究的开题报告一、研究背景钝顶螺旋藻是一种重要的海洋微藻，其在生物多样性保护和生物资源开发中具有重要意义。
目前，越来越多的研究表明，钝顶螺旋藻中所含有的生物活性物质具有良好的医药和保健功能，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等。
而云南作为我国西南地区的代表性地区，其丰富的自然资源和气候条件是钝顶螺旋藻生长繁殖的优越环境。
因此，对钝顶螺旋藻进行深入研究，探索云南产钝顶螺旋藻的活性物质及其应用具有重要意义。
二、研究目的本研究旨在提取云南产钝顶螺旋藻中的活性物质，并对其进行活性评价和应用研究。
具体目的如下：1. 提取云南产钝顶螺旋藻中的多糖类、蛋白质、多酚类等活性物质；2. 对提取物进行物化性质分析，并通过红外光谱、氨基酸组成分析等手段对提取物进行结构分析；3. 对提取物进行抗氧化、抗炎、抗肿瘤等方面的活性评价；4. 探究提取物在化妆品、保健品等领域的应用价值。
三、研究方法1. 样品采集：在云南某海域采集足够数量的钝顶螺旋藻样品，并进行鉴定和分离纯化。
2. 提取活性物质：对纯化后的钝顶螺旋藻进行超声波辅助提取，得到多糖类、蛋白质、多酚类等活性物质。
3. 物化性质分析：对提取物进行颜色、pH值、溶解度等方面的物化性质分析。
4. 结构分析：通过红外光谱、氨基酸组成分析等手段对提取物进行结构分析。
5. 活性评价：对提取物进行抗氧化、抗炎、抗肿瘤等方面的活性评价。
6. 应用研究：探究提取物在化妆品、保健品等领域的应用价值。
四、研究意义和预期成果本研究对于深入探究云南产钝顶螺旋藻的活性物质和应用具有重要意义，能够为钝顶螺旋藻的开发和利用提供理论和实践基础。
预期成果为：1. 成功提取云南产钝顶螺旋藻中多糖类、蛋白质、多酚类等活性物质；2. 对提取物进行物化性质分析和结构分析，明确其组成和结构特征；3. 对提取物进行抗氧化、抗炎、抗肿瘤等方面的活性评价，探索其应用潜力；4. 探究提取物在化妆品、保健品等领域的应用价值，为钝顶螺旋藻资源的开发和利用提供新思路和新方向。
钝顶螺旋藻中藻蓝蛋白的分离纯化及特研究
钝顶螺旋藻中藻蓝蛋白的分离纯化及特*研究
为发展新型海洋*物,采用SephacrylS-200凝胶层析和羟基*灰石柱层析对人工养殖钝顶螺旋藻中的藻蓝蛋白进行了分离和纯化,得到了藻蓝蛋白纯品.测定了藻蓝蛋白的氨基*组成和含量.藻蓝蛋白的紫外、可见吸收光谱表明其最大特征吸收波长为278,360,620nm.得到的藻蓝蛋白经等电聚焦显示为一条带,其等电点为pH＝4.3.还测量了藻蓝蛋白红外吸收光谱.研究所获得的藻蓝蛋白为后续开展临床应用提供了可靠的样品.
投诉
云南天然钝顶螺旋藻片多糖提取工艺的正交实验优化与脱色脱蛋白方法研究
６ １０ ７ ０ ０； ２ 云南 大学 生命科 学 院 ， ． 云南 昆 明 ６ １０ ） ５００ （ ． 理学 院基础 医学 院 ， １大 云南 大理
摘要 ： 目的 研究云南钝顶螺旋藻片中多糖的提取与纯化工艺， 并筛选出云南钝顶螺旋藻多糖脱色、 脱蛋白的最佳方法。
Ｌ ＨＺ Ｅ Ｅ ＩＩＥＡ ＤＭ Ｔ ＲＡＭ ＤＣ Ｅ Ｅ Ｒ Ｈ２ １ Ｏ １ Ｏ Ｌ Ｉ ＩＨ ＮＭ ＤＣＮ Ｎ Ａ Ｅ Ｉ Ｅ ＩＡＲ Ｓ Ａ Ｃ ０Ｖ Ｌ ２ ．ｌ Ｓ ０年 第 ２ 卷 第 １ 期 ｌ １
云 南 天 然 钝 顶 螺 旋 藻 片 多 糖 提 取 工 艺 的 正 交 实 验 优 化 与 脱 色 脱 蛋 白方 法 研 究
方 法 正 交 实验 设 计 优 选 出提 取 云 南钝 顶 螺旋 藻 片 中 多糖 的 方 法 ， 以提 取 多糖 物 质 多 糖 损 失 率 、 白质 去 除 率 为 测 定 指 蛋
标 ， 别 考 察 不 同 实验 方 法对 多糖 脱 蛋 白 、 色的 影 响 。 结 果 云 南 钝 顶 螺 旋 藻 片 多糖 的 最 佳 提 取 工 艺 为 ： 提 温 度 为 分 脱 水 ８℃ ， Ｏ 水提 时间 ２ｈ 固液 比 １ ｌ ， 此 条 件 下 多糖 提 取 率 为 ２ １％ ， ， ： ５在 ．８ 水提 温 度 和 固液 比是 影 响 多糖 得 率 的主 要 因 素 ： 三 氯 乙酸 脱 蛋 白 法 为 云 南钝 顶 螺 旋 藻 片 多糖 脱 蛋 白的 最 佳 方 法 ， 性 炭 脱 色 法 对 云 南钝 顶 螺 旋 藻 多糖 片 的 脱 色效 果 优 于 活 过 氧 化 氢 脱 色法 ：结 论 云 南 钝 顶 螺 旋 藻 片粗 多糖 的 纯化 ， 色与 脱 蛋 白方 法 的优 化 为 进 一 步 研 究 云 南 钝 顶 螺 旋 藻 片 的 脱
钝顶螺旋藻多糖的提取工艺和其对果蝇抗氧化能力的影响的开题报告
钝顶螺旋藻多糖的提取工艺和其对果蝇抗氧化能力的影响的开题报告一、研究背景螺旋藻（Spirulina）是一种单细胞蓝藻，是被广泛运用在食品、保健品和化妆品等领域的一种现代绿色食品。
同时螺旋藻富含多种营养成分，如蛋白质、多糖、叶绿素等，且具有抗氧化、降血脂、抗糖尿病、抗突变等多种生理活性。
钝顶螺旋藻（Spirulina platensis）是螺旋藻的一种，该种藻类分布广泛，含有丰富的多糖，因此具有较高的生物活性。
近年来，钝顶螺旋藻多糖的生物活性研究也引起了学者们的广泛关注。
研究表明，钝顶螺旋藻多糖具有多种生理活性作用，如抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等。
因此，研究钝顶螺旋藻多糖的提取工艺以及其在果蝇中的抗氧化能力，具有一定的研究意义。
二、研究目的本研究旨在探究钝顶螺旋藻多糖的提取工艺，并研究其对果蝇抗氧化能力的影响，为其在医药领域、食品、保健品等应用提供一定的实验依据。
三、研究内容（一）钝顶螺旋藻多糖提取工艺研究采用单因素实验和响应面分析方法，对不同提取工艺对钝顶螺旋藻多糖的提取率进行研究，并得出最佳提取工艺。
（二）果蝇培养和抗氧化实验采用果蝇作为实验材料，建立抗氧化实验体系，通过添加不同浓度的钝顶螺旋藻多糖，研究其对果蝇的抗氧化能力，包括提高果蝇生存率，减少果蝇的氧化损伤等方面。
（三）数据统计和分析对实验获得的数据进行统计和分析，通过图表等形式展示实验结果，以期达到更好的结果解释和阐述实验现象。
四、研究意义本研究结果对于提高钝顶螺旋藻多糖提取工艺的效率以及其在医药领域、食品、保健品等领域中的应用具有重要意义。
同时，在探究钝顶螺旋藻多糖的抗氧化能力方面，也有助于深入挖掘钝顶螺旋藻多糖的生理活性和作用机理，为其应用成果提供可靠实验依据。
钝顶螺旋藻对硒、碘、锌复合培养的响应与蛋白质组学研究的开题报告
钝顶螺旋藻对硒、碘、锌复合培养的响应与蛋白质组学研
究的开题报告
一、研究背景
钝顶螺旋藻是一种重要的海洋微藻，是海洋生物链的主要组成部分之一。
这种微藻含有丰富的蛋白质、多糖、多种维生素和微量元素等，具有很高的营养价值和商业
价值。
其中，硒、碘、锌是人体必需的微量元素，在生物体内有着重要的生理功能。
研究钝顶螺旋藻对这三种元素复合培养的响应，可以为其高效培育和应用提供理论和
实践基础。
二、研究目的
本研究旨在探究钝顶螺旋藻对硒、碘、锌复合培养的响应，并结合蛋白质组学分析，探究其响应机制。
三、研究内容
1. 确定适宜的硒、碘、锌复合培养液配方，建立复合培养体系。
2. 以不同添加剂组成的培养液为处理组和对照组，测定钝顶螺旋藻在复合培养体系中生长情况的变化，包括生物量、光合作用速率等的变化。
3. 通过蛋白质组学方法，比较不同处理组和对照组藻细胞中蛋白质的表达和差异，并鉴定与元素响应相关的蛋白质。
四、研究意义
本研究对于钝顶螺旋藻的高效培养、利用和资源化具有一定的探索意义。
此外，该研究还有助于深入探讨微藻在复合培养体系中的适应机制以及与元素响应相关的蛋
白质鉴定等方面的问题，为海洋微藻相关研究提供参考和借鉴。
铁皮石斛多糖Sevage法脱蛋白效果分析
铁皮石斛多糖Sevage法脱蛋白效果分析潘雪丰【摘要】Polysaccharides extracts from Dendrobium candidum Wall. ex Lindll were hydrolyzed with equimolar solutions of cellulase and pectinase. The efficiency of removing proteins from the polysaccharide extracts using a deproteinization Sevage method was inves-tigated in this study. The results showed that one time of sevage treatment resulted in removal of 21.9% of the protein, but also lost about 28.3% of the polysaccharides, from the sugar extracts. No significant increases in protein removal were observed with two or more sevage treatments, which adversely caused polysaccharide losses to 56.6%-62.1%. Therefore, we recommend that the depro-teinization Sevage method be applied only once during the protein removal process from the polysaccharide extracts.%采用纤维素酶与果胶酶等量混合酶解法提取铁皮石斛多糖,分析Sevage法脱多糖溶液蛋白效果. 结果表明,Sevage法脱多糖溶液蛋白1次,脱蛋白率为21.9%,多糖损失率为28.3%;脱蛋白2次或2次以上,脱蛋白率提高不明显,但多糖损失严重,损失率高达56.6%-62.1%. 因此,铁皮石斛多糖Sevage法脱除蛋白次数以1次为宜.【期刊名称】《亚热带农业研究》【年(卷),期】2015(011)004【总页数】4页(P258-261)【关键词】铁皮石斛;多糖;Sevage法;酶解法【作者】潘雪丰【作者单位】福建卫生职业技术学院药学系,福建福州350101【正文语种】中文【中图分类】R284.2铁皮石斛(Dendrobium candidum Wall.ex Lindll)，属兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobbium)多年生附生型草本植物，主要分布于安徽、浙江、福建等地。
Sevag法脱蛋白-多糖提取
《多糖提取（Sevag 法去蛋白）》
1、实验原理介绍：
Sevag 法是去除游离蛋白的有效方法。
在粗多糖溶液中加入氯仿—正丁醇混合溶液进行充分振摇,将游离蛋白变性成为不溶性物质,经离心分离去除,可达到去除的目的。
2、实验方法及步骤
具体操作可以按下述操作试一试：取粗多糖溶液4 ml ,氯仿—正丁醇(预先配制成体积比为4∶1 混合液) 溶液1 ml ,置于具塞试管中,充分振摇30 min 后,经离心机离心1 min ,然后将水相与氯仿相分开。
将水相再加入相当于其体积1/ 4 的氯仿—正丁醇溶液,重复上述过程,共计重复三次。
多糖溶液体积较大时也可以采用分液漏斗，人工进行剧烈振荡后直接分离，注意振荡强度与分离效率关系很大。
操作过程中蛋白质多出现在两相界面处。
3、实验结果及讨论
1、需要取上清液重复加入sevage试剂我重复了十一次每次振摇15分
在紫外测250－280没有吸收峰才可确定除净了蛋白。
2、Sevag 法较为温和，对多糖的结构影响不大，但效率较低，往往重复五次以上才能达到理想效果。
考虑较为剧烈但效率更高的三氯乙酸法除蛋白。
3、糖蛋白不是那么容易除干净的，通常大量取多糖溶液(5%)按，用三角瓶在摇床上摇2h再放离心管里离心，得到水层再重复,如果蛋白含量多的话,除一两个星期的.直到震荡后水层上不再有白色泡茉为止。
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氯仿与正丁醇体积比 4: 1, Sevage 试剂添加量 为多糖溶液的 1 倍, 脱蛋白 1 次条件下, 振摇时间 20 min、30 m in 和 40 m in 对螺旋藻多糖除蛋白效果的 影响, 试验重复 3 次, 取平均值。 1. 7. 4 除蛋白次数对脱蛋白效果的影响
指标定为 100 分, 各号按下式评分: 综合评分= ( 脱蛋白 率/ 60. 00) * 100* 0. 5 + ( 多糖含量/ 91. 00) * 100* 0. 5
由图6 可见, 随着蛋白脱除次数的增加, 蛋白脱 除率呈显著上升趋势, 多糖损失率变化不大, 且均低
于 10% , 这与朱晓霞等( 2007) [ 18] 的报道结果一致。 脱蛋白次数为 3 时的蛋白脱除率和多糖损失率分别 为45. 2% , 蛋白脱除率较1 次、2 次的分别提高了17. 3% 和14. 7% , 多糖损失率较1 次、2 次的分别增加了 4. 4% 和1. 0% 。方差分析结果表明, 脱蛋白次数为3 时的蛋白脱除率与 1 次和 2 次的相比差异显著( P < 0. 05) , 多糖损失率相比差异不显著。 2. 5 Sevag e 法除蛋白质最佳工艺条件的确定
图 5 结果显示, 随着振时间的加长, 蛋白脱除率
பைடு நூலகம்
呈平缓上升趋势, 不同振摇时间相比差异较小; 多糖 损失率随振摇时间加长变化较大。40 min 时的多糖 损失率为18. 8% , 较20 min 和30 min 的分别升高了 13. 9% 和 11. 7% , 而脱蛋白率仅提高了 3. 7% 和 2. 1% , 方差分析结果表明, 振 40 m in 时的脱蛋白率与 20 m in 和 30 min 的相比差异不显著, 多糖损失率相 比差异显著( P < 0. 05) 。
由图 3 结果可以看出, 随氯仿浓度的升高, 蛋白 的脱除效果显著提高, 但多糖损失率却改变不大。氯 仿正丁醇体积比 5: 1 时的蛋白脱除率和多糖损失率 分别为34. 7% 和 8% , 较氯仿正丁醇体积比为3: 1 和 4: 1 时的脱蛋白率分别提高了 26. 3% 和 19. 5% , 而 多糖损失仅增加了4% 和3. 1% 。方差分析结果表明, 氯 仿正丁醇体积比 5: 1 时的脱蛋白率与 3: 1 和 4: 1 的相比差异均显著( P < 0. 05) 。 2. 2 Sev ag e 试剂添加量对螺旋藻多糖脱蛋白效果 的影响
2011 年第 10 期 内蒙古石油化工
1
钝顶螺旋藻多糖Sevage 法脱蛋白工艺的研究
穆文静1, 杜 玲1, 扈瑞平2, 刑莹莹1, 栗淑媛1, 乔 辰3
( 1. 内蒙古师范大学 生命科学与技术学院, 内蒙古 呼和浩特 010022; 2. 内蒙古医学院 基础医学院, 内蒙古 呼和浩特 010059; 3. 内蒙古农业大学 农学院, 内蒙古 呼和浩特 010019)
多糖损失率= ( 多糖提取液中多糖的含量- 除 蛋白后上清液中多糖的含量) / 多糖提取液中多糖 的 含量 ×100 % 1. 7 单因素试验 1. 7. 1 氯仿正丁醇体积比对脱蛋白效果的影响
振摇时间 30 min, 螺旋藻多糖提取液与 Sev ag e 试剂体积比为 1: 1, 脱蛋白 1 次条件下, 氯仿与正丁 醇体积比分别为 3: 1、4: 1 和 5: 1 时对螺旋藻多糖除 蛋白效果的影响, 试验重复 3 次, 取平均值。 1. 7. 2 Sevag e 试剂添加量对脱蛋白效果的影响
3
55. 80 64. 60 81. 99
1
46. 30 78. 80 81. 88
2
51. 60
249. 77 T = 734. 07
264. 80
73. 40
83. 33
264. 03
83. 26 88. 27
88. 01
5. 01
注: 本试验采用综合加权评分法, 权重系数均为0. 5, 分别把两项中最大的
苯酚- 硫酸法[ 14] , 标准曲线见图1。 1. 5 蛋白含量的测定
考马斯亮蓝 G - 250 比色法[ 15～16] , 标准曲线见 图 2。
1. 6 脱蛋白效果的评价 采用脱蛋白率和多糖损失率两个指标综合评价
脱蛋白效果。脱蛋白率和多糖损失率分别按下面公
式计算。
脱蛋白率= ( 多糖提取液中蛋白质的含量- 除 蛋白后溶液中蛋白质的含量) / 多糖提取液中蛋白质 的 含量 ×100 %
试验结果
C 脱蛋白率/ %多糖含量/ % 综合评分
1
38. 90 79. 00 75. 82
2
44. 20 91. 00 86. 83
3
48. 40 80. 20 84. 40
2
56. 80 86. 10 94. 64
3
60. 00 86. 70 97. 64
1
51. 60 89. 30 92. 07
题。但是, 螺旋藻中蛋白质含量高达 60～70% , 除蛋 白就成了螺旋藻多糖制备过程中一个非常关键的环 节[ 11 ] 。目前, 常用的除蛋白方法主要有蛋白酶水解 法、Sevage 法和三氯乙酸法、加热浓缩法等[ 12] 。其
中, Sevag e 法是去蛋白质的经典方法, 它 具有操作 简便、试剂廉价、去除游离蛋白质效果好等优点[ 13] 。 因此, 本试验采用单因素方法研究了不同影响因素 对Sevage 法脱除螺旋多糖蛋白质效果的影响, 并在 单因素试验基础上采用正交试验方法确定了钝顶螺 旋 藻多糖 Savag e 法除蛋白的最佳工艺条件, 以期为 螺旋藻多糖作为免疫佐剂的研究与开发奠定除蛋白
表 2 正交试验结果统计分析表明, 根据 R 值大 小, 正交试验中三个影响因素对 Sevag e 法除蛋白效 果影响的大小依次为 A > C > B, 即氯仿正丁醇体 积 比> 脱 蛋 白 次 数 > Sevage 试 剂 添 加 量, 构 成 Sevage 试剂的氯仿正丁醇体积比是影响钝顶螺旋 藻多糖脱蛋白效果的主导因子。根据K 值大小, 螺旋 藻 多 糖 Sevage 法 除 蛋 白 的 最 佳 工 艺 条 件 为 A 2B2C2, 即脱蛋白时间为 20 m in 条件下, 氯仿正丁 醇体积比 4: 1, Sevag e 试剂的添加量是多糖溶液的 2 倍, 脱蛋白次数为 2。 3 讨论
98% 的浓硫酸、苯酚、标准葡萄糖、考马斯亮蓝 G- 250、氯仿、正丁醇均为国产分析纯试剂。B- 220 型恒温水浴锅, RE52CS 型旋转蒸发仪, SHB- Ⅲ型 循环水式多用真空泵, 电热恒温水浴箱; GL - 22M 高速冷冻离心机。
1. 3 多糖的提取 将螺旋藻粉用适量单蒸水溶胀后经反复冻融法
2
内蒙古石油化工 2011 年第 10 期
破壁, 然后用 98% 的工业酒精按 1: 8 的比例( 藻粉: 酒精) 65 ℃脱脂2 次, 抽滤后残渣65 ℃烘干后按20: 1 的水料比80 ℃浸提8 h, 抽滤弃去残渣后得多糖提 取液, 用旋转蒸发仪将其浓缩至原体积的 1/ 3 备用。 1. 4 多糖含量的测定
由图 4 结果可见, 随着 Sevag e 试剂添加量不断 加大, 蛋白脱除率反而逐渐下降, 而多糖损失率变化
2011 年第 10 期 穆文静等 钝顶螺旋藻多糖 Sevag e 法脱蛋白工艺的研究
3
不大, 且均低于 10% 。Sevag e 试剂的添加量是多糖 提取液体积的 1 倍时脱蛋白效果最好, 其蛋白脱除 率为27. 9% , 分别较2 倍、3 倍添加量时高7. 9% 、21. 6% , 不同添加量的脱蛋白结果相比差异显著( P < 0. 05) 。 2. 3 振时间对螺旋藻多糖脱蛋白效果的影响
方面的理论基础。
1 材料与方法 1. 1 试验材料
螺旋藻粉, 由内蒙古鄂尔多斯市蒙加力螺旋藻 业有限责任公司提供。该公司生产过程中采用的藻 种为 来 自 非 洲 乍 得 湖 的 钝 顶 螺 旋 藻 ( spirulina ( Art hr ospira) plat ensis) 。 1. 2 主要试剂和仪器
2. 4 脱蛋白次数对螺旋藻多糖脱蛋白效果的影响
表 2
正交试验结果与分析
试验
号
A
1
1
2
1
3
1
4
2
5
2
6
2
7
3
8
3
9
3
K 1 247. 05
K 2 284. 35
K 3 247. 20
k1 82. 35
k2 94. 78
k3 82. 40
R 12. 43
因素
B 1 2 3 1 2 3 1 2 3 252. 45 266. 35 259. 80 84. 15 88. 78 86. 60 4. 63
摘 要: 为了研究钝顶螺旋藻多糖 Sevag e 法除蛋白工艺。采用单因素试验确定了氯仿- 正丁醇体 积比、Sevag e 试剂的添加量、振摇时间、脱蛋白次数对钝顶螺旋藻多糖脱蛋白效果的影响。在单因素试 验基础上, 采用正交试验确定了钝顶螺旋藻多糖Sev ag e 法除蛋白的最佳工艺条件。结果表明, 四个因素 中, 仅振摇时间对脱蛋白效果影响较弱, 其他三个因素对脱蛋白效果均有明显影响; 其中, 氯仿- 正丁醇 体积比对除蛋白效果的影响最大, 与Sevage 试剂添加量和脱蛋白次数的影响相比达到差异极显著水平 ( P< 0. 01) 。振摇时间 20min 条件下, Sevage 法脱除钝顶螺旋藻多糖蛋白的最佳工艺条件为: 氯仿- 正 丁醇的体积比为 4: 1, Sevage 试剂添加量为多糖溶液的 2 倍, 脱蛋白次数 2 次。