免疫组化-书

第一节免疫组织化学及应用

高鹏

山东大学医学院病理教研室

一.概念

免疫组化技术（immunohistochemical technique）是利用抗原抗体反应进行的检测方法，即应用标记好的特异性抗原或抗体作为试剂，以检测标本中的相应抗体或抗原。它的特点是具有高度的特异性和敏感性。将试剂抗原或试剂抗体用可以微量检测的标记物（例如放射性核素、荧光素、酶等）进行标记，则在与标本中的相应抗体或抗原反应后，可以不必测定抗原抗体复合物本身，而测定复合物中的标记物，通过标记物的放大作用，进一步提高了免疫技术的敏感性。

二.标记物

首先被用作标记免疫技术中标记物的是荧光素。1941年Coons建立的荧光抗体技术（fluorescentantibody technique）使组织和细胞中抗原物质的定位成为可能。放射性核素作为标记物在免疫技术中的应用又开创了特异性的超微量测定。1956年Yalow和Berson建立的放射免疫测定（radioimmuno assay，RIA）很快普遍应用于体液中的激素、微量蛋白及药物的测定。1966年Nakene和Pierce利用酶使底物显色的作用而得到与荧光抗体技术相似的结果。70年代初，酶标抗体技术开始应用于免疫测定，其后得到迅速发展。由此发展而来的免疫组化技术在临床病理方面应用地最为广泛。

三．常用方法举例

免疫组化常用方法有：直接法、间接法、ABC法（卵白素-生物素复合物法）、LSAB法（标记的抗生蛋白链菌素-生物素法），其中后两种敏感度较高、特意性较强，是目前常用的良种方法。以下是ABC法的示意图：

A为卵白素，B为生物素，P为过氧化物酶，DAB为显色剂-二氨基联苯胺四．免疫组化的应用

１应用于肿瘤分期

1.1肿瘤的早期浸润

癌的早期浸润通常指癌侵透基底膜，但深度不超过5毫米。含基底膜成分的抗体有助于确定基底膜的完整性，两种最常用的抗体是IV型胶原或层粘蛋白（LN）抗体。免疫组化染色显示基底膜缺如或明显断裂可确定有微浸润。

1.2隐匿性微转移

免疫组化检测骨髓及淋巴结隐匿性转移癌，其原理是利用抗体能区别不同组织来源细胞的能力，从而将上皮癌细胞与骨髓及淋巴结内的正常结构区别开来。Guterson等发现，通过较细致的组织形态学观察或免疫组化方法来寻找淋巴结隐匿性微转移，约有8%--30%常规淋巴结组织病理检查“阴性”的乳腺癌病人可被检出有隐匿性微转移。

2. 检测肿瘤相关抗原

2.1甲胎蛋白（AFP）

AFP主要用于原发性肝细胞癌或性腺外某些生殖细胞肿瘤（如内胚窦瘤）的诊断和鉴别诊断。肝癌病例癌组织中AFP的阳性表达率约为60%~70%左右。生殖细胞肿瘤中的AFP表达可见于单纯性内胚窦瘤和混合性生殖细胞肿瘤，以及胚胎癌中的卵黄囊分化的区域。

2.2甲状腺球蛋白（Tg）

正常甲状腺滤泡上皮、滤泡胶质、所有类型的甲状腺腺瘤及甲状腺癌均可有Tg的阳性表达。一般说来，高分化的甲状腺癌Tg阳性率最高，甲状腺间变癌和巨细胞癌阳性率最低。甲状腺髓样癌一般Tg阴性。临床上甲状腺癌首发症状常常表现为淋巴结或远处转移，Tg是一种确认转移性甲状腺癌还是非转移性甲状腺癌的可靠标记。

3 .检测肿瘤细胞增生标志物

目前被广泛采用的两种增殖相关标志物是Ki-67及PCNA（增埴细胞核抗原）。Ki-67与PCNA免疫反应性与细胞增生的形态学特征关系密切，特别是与有丝分裂数及肿瘤分级相关。在乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、肺癌、肝癌、胃癌和一些淋巴瘤及肉瘤，采用Ki-67与PCNA免疫组化分析，均显示有增殖证据，提示这些肿瘤病人更容易进展。高Ki-67及PCNA标记指数病人无病生存率及总生存率明显下降。

4 检测癌基因产物和抑癌基因产物

4.1 c-erbB-2

c-erbB-2过表达见于25—30%的原发性乳腺癌病例，并且仅限于癌细胞，而不出现于正常乳腺上皮。c-erbB-2扩增与雌、孕激素受体表达呈负相关，与肿瘤级别较高有关。c-erbB-2的过表达病人通常对常规辅助化疗反应性差，而这些病例往往需通过改变化疗药物的类型来获得较好的疗效。

4.2 生长因子及受体

表皮生长因子受体(EGFR)广泛存在于各种组织中，但主要在上皮细胞上表达，定位于细胞膜或细胞浆。在许多肿瘤，EGFR的表达与肿瘤进展有关。大约30%的乳腺癌表达EGFR，EGFR 阳性病人的预后明显差于EGFR阴性病人且通常对激素疗法不敏感。

4.3P53

p53基因改变是人类癌症中最常见的遗传学异常。已报道涉及许多人类肿瘤，包括结肠癌、膀胱癌、肺癌、乳腺癌和其他类型癌、星形细胞瘤、白血病、肉瘤和间皮瘤等。越来越多的证据认为，至少在某些类型肿瘤，有p53改变的病人总生存率较低。在许多肿瘤，P53改变似乎是肿瘤发生的早期标志，可在原位癌

（乳腺及膀胱）、不典型增生（前列腺及结肠癌）中检出。因此，进展危险极高的肿瘤甚至可在出现浸润前即得以确认。

5. 预测治疗反应

5.1 ER和PR

免疫组化抗受体检测可预测乳腺癌对激素治疗的反应性。无ER或PR表达的肿瘤对激素治疗通常反应性差，而ER及PR阳性肿瘤则对激素治疗反应性高。

5.2多药耐药（MDR）

P糖蛋白（P-gp）：P-gp是一种跨膜蛋白，对化疗敏感的肿瘤通常P-gp表达率低，对化疗耐受的肿瘤常有P-gp表达增强。检测P-gp表达有助于确定可能对常规化疗耐药的肿瘤，从而提供适合于这些病人合理的替代治疗方法。

6. 应用于临床病理诊断

许多肿瘤组织细胞在显微镜下看起来非常相似，以致于病理医生难以完全准确地判断出肿瘤的性质。使用免疫组化检测肿瘤细胞的表面和细胞内特异性的物质表达，有助于明确肿瘤的性质和组织来源。

附表可用以下抗体对肿瘤进行分类筛选：

A 癌：Cytokeratin+，Vinentin-，LCA-

1、神经内分泌癌：Chr+，Syn+

2、甲状腺癌：Thyroglobalin+，Calatonin+

3、生殖细胞肿瘤：PLAP+，AFP+，HCG+

4、消化道癌：CA242+，CEA+

5、鳞癌：Cytokeratin+（高分子量）

6、腺癌：Cytokeratin+（低分子量）

7、乳腺癌、子宫内膜癌：ER+，PR+，C-erbB-2+

8、肝癌：AFP+，AAT+

9、前列腺癌：PsA+，PSAP+，AR+

10、卵巢癌：CA125+

B 肉瘤：Vimentin+ ，Cytokeratin- ，LCA-

1、恶黑：HMB45+，S-100+，Melon-A+，