用高效离子交换色谱和脉冲安培检测器测定
离子色谱-脉冲安培检测法测定双黄连注射液中葡萄糖、果糖及蔗糖的含量
离子色谱-脉冲安培检测法测定双黄连注射液中葡萄糖、果糖及蔗糖的含量摘要：本文建立了离子色谱法测定双黄连注射液中单糖含量测定的方法。
样品稀释后，使用戴安CarboPac PA20分析柱分离，流动相为氢氧化钠溶液梯度淋洗，流速0.5mL/min，脉冲安培检测。
本方法简便快捷,用于测定双黄连注射液中糖类物质的含量,具有较高的灵敏度。
关键词双黄连注射液糖离子色谱法安培检测器双黄连注射液是中药金银花、黄芩、连翘的提取物制剂,有广谱抗菌、抗病毒的作用,对呼吸道疾病具有疗效确切、使用安全、无耐药性等优点。
【1】但随着应用的增多,也出现了一些过敏反应。
双黄连口服液中，绿原酸、黄芩苷、连翘苷、汉黄芩素是其主要活性成分。
此外，双黄连注射液中还含有多种糖类物质。
对双黄连注射液成分的全面研究，有助于优化工艺，提高疗效，降低不良反应的发生率。
离子色谱法与脉冲安培检测器联用（HPAEC-PAD），是近年来发展起来的检测糖类物质的方法。
该方法具有样品前处理简单，不需衍生，灵敏度高，分离度好等优点，广泛应用于食品、生物样品中糖类物质的检测。
本文建立了离子色谱法测定双黄连注射液中糖类物质含量的方法。
通过样品前处理方法和色谱条件的优化，建立了一种较为完善的分离和检验方法，可检测出注射液中低含量的糖类物质。
1.仪器及色谱条件1.1 仪器Dionex ICS3000型离子色谱仪，Dionex CarboPac PA20分析柱及保护柱。
1.2 样品前处理取双黄连注射液，稀释500倍后，过0.22μm滤膜和Dionex RP柱。
1.3 色谱条件流动相：0-10min，23mM NaOH；10.1-15min，200 mM NaOH；15.1-20min，23 mM NaOH；流速：0.5mL/min；柱温：30℃；检测波形：标准糖四电位波形。
2. 结果与讨论2.1 样品前处理双黄连注射液成分复杂，除含有绿原酸、黄芩苷、连翘苷、汉黄芩素等物质外，还含有大分子物质。
高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培检测法同时测定黄酒中的单糖和
胡贝贞， 等： 高效阴离子交换色谱一 积分脉冲安培检测法同时测定黄酒中的
单糖 和低 聚糖 及其 指纹 图谱 的构建 。６ ６ ３‘
黄酒 是 我 国的 传 统 酿造 酒 ， 其 中含 有 功 能 性 氨
基 酸和 肽类 、 糖类 （ 低 聚糖 为 主 ） 、 无 机元 素 、 多 酚等
酸钠 ， 用 水溶 解后 稀释 定 容 至 １ Ｌ ， 混 匀后 立 即 通 氮
方 法用 于 不 同含糖 量 的绍兴 黄酒 的检 测 。
指 纹 图谱 是指 经光谱 或 色谱 测定 得到 的组 分群
气（ ５ ５ ０ ０ ０ Ｐ ａ ） 保护。
１ ． ３ 样 品 前 处 理
体 的特征 图谱 或 图像 ， 建 立 指 纹 图谱 能 较 为 全 面地 反 映产 品 中所含 的化 学 成 分 的 种类 与数 量 ， 进 而对
ｌ ｅ ｏ ｎ ６ ． ８色 谱 工 作 站 、 ＡＳ — Ａ Ｐ 自动 进 样 器 。Ｃ ａ ｒ － ｂ ｏ Ｐ ａ ｃ ｌ ０ 保护柱（ ５ ０ ｍｉ ｎｘ ４ ｍｍ） ，Ｃ ａ ｒ ｂ ｏ Ｐ ａ ｃ Ｔ Ｍ ｌ ０
分析柱 （ ２ ５ ０ ｍｉ ｎｘ ４ ｍｍ） 。Ｓ Ｙ Ｎ Ｅ Ｒ Ｙ型 超 纯 水 发生
有 益成 分 的研究 ¨ ’ 。糖类 是 黄 酒 中 的 主要 成 分 之
一
，
主要 来 源于生 产 过 程 中未 完 全发 酵 的残 糖 和 糊
精 ， 其 中含 量最 高 的是 葡 萄 糖 ， ， 它 们赋 予 了酒液 甜 味和 黏稠 的 口感 。 由于发 酵 工 艺上 的差 别 ， 不 同 品种 的黄 酒
中糖 类 的标 准方 法均 是测 定 总糖含 量 的化学 滴定 方 法， 结果 以葡 萄 糖 含量 计 ， 仅 有 少 量 仪 器 分 析 的 研
固相萃取-高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培法检测人体尿液中的异黄蝶呤
对 人体 尿液 中包括 异 黄蝶 呤在 内的蝶 呤类 化合物 进
行 了分 析检 测 ， 敏度 得到 了显 著提高 ， 灵 但该 方法 同 样 采用 了氧 化步骤 。 以上两 种方 法均 使用 了有机 溶 剂， 不但 会 对环境 造成 二次 污染 ， 同时 也不利 于操 作
纯 水 稀 释 至 刻 度 ， 匀 ， 制 成 １ ０ｍｇ Ｌ异 黄 蝶 呤 摇 配 ０ ／
测 定糖 和氨基 酸 的直 接 分析 法 。该 方 法 无 需 衍 生 ， 操 作方便 ， 免 ｒ衍 生物 不稳 定 ， 生 反应 的副产 物 避 衍 及 试剂本 身 的干扰 等 问题 ； 验 不 使用 有 毒 的 化 学 实 试 剂和溶 剂 ， 利 于 环 境 保 护 和 操 作 人 员 的健 康 。 有 目前 已经应 用 于保 健 食 品 ” 、 烟草 和 液 体 调 味 品 等 的分 析测 定 ， 得 了很 好 的效 果 。然而 还 未 取 见将 Ｈ Ａ Ｃ Ｉ Ａ Ｐ Ｅ — Ｄ应 用 于 检 测 人 体 尿 液 中 蝶 呤 类 Ｐ 化 合物 的报道 。 本 文在 系统地 探讨 异黄 蝶呤 色谱分 离条 件 的基
积 分 脉 冲 安 培 法 （ Ａ Ｃ Ｉ Ａ 是 近 年 来 出 现 的 ＨＰ Ｅ — Ｄ） Ｐ
ｍｏ／ ａ ｌＬ Ｎ ＯＨ各 浸泡 ８ｈ 。其 他处理 步骤 同上 。
１ ２ 实 验 方 法 ．
１２１ 标准 溶液 的配 制 ． ．
滴加 数滴 ０ １ｍｏ／ ． ｌＬ的 Ｎ ＯＨ溶 液 溶 解 ， 超 ａ 用
标 准储备 液 ， 并置 于 ４℃冰 箱 内保 存 ， 用时 用超纯 使 水稀 释至 所需 浓度 。
离子色谱-脉冲安培法测定链霉素及杂质
离子色谱-脉冲安培法测定链霉素及杂质摘要：本文采用离子色谱-脉冲安培法测定链霉素以及其杂质的含量。
采用Carbonpac PA1阴离子分析柱分离，以电化学为检测器。
用去离子水提取YPD发酵液的链霉素，以16000r/min 的速度离心后，上清液稀释100倍直接进样分析。
实验结果表明，在一定的色谱条件下，链霉素及其杂质离子具体很好的线性，和重现性，及较低的检出限。
关键词：离子色谱；脉冲安培；链霉素新霉素是水溶性的氨基糖苷类抗生素复合体，一般是从放射菌类链霉素的发酵产物中纯化出来的，主要用于静脉注射以治疗感染。
在临床使用前，链霉素在使用之前必须测定主成分以及标注所有的杂质成分。
氨基糖苷类抗生素及其杂质的结构和糖类似，都没有明显的发色基团，用紫外－可见光检测器的灵敏度达不到要求。
另外在制备和贮藏过程中引入的一些中间体或杂质具有较好的紫外或可见光吸收基团，使用紫外－可见光检测器直接进样分析会有很大的干扰链霉素A及其杂质的定量。
示差折光率检测器与紫外－可见光检测器的局限性类似。
在本文中采用高效阴离子交换色谱（HPAE）分离链霉素A及其杂质[13，17]，选用的CarboPac PA1阴离子交换柱对链霉素A及其杂质进行分离，采用EG50淋洗液发生器，采用一次性金（Au）工作电极作为电化学检测器的工作电极。
此方法精确度好、检出限低、线性和方法的重现性好[17，25，26]。
图1.检测链霉素和二氢链霉素的色谱图2. 70和63mM NaOH分析链霉素的对比1．实验部分1.1 仪器及试剂Dionex ICS3000系统，包括D梯度双泵或者SP梯度单泵（带有真空脱气装置和GM-4梯度混合装置），DC检测器模块(带双温控区)，20 uL进样环，ECD电化学池配复合pH/Ag/AgCl参比电极，一次性金工作电极；AS自动进样器（带分流阀）以及2ml进样瓶；Chremoleon工作站。
氦气（99.995％）；过滤装置，0.2 um尼龙膜过滤装置；真空泵；聚丙烯自动进样器小瓶；离心管（1.5ml）。
糖的高效阴离子交换色谱 脉冲安培检测法分析
铵功能基的乳胶颗粒。这种有机高聚物在 !$ ( $ #% 的溶液和与水互溶的有机溶剂中稳定， 可以强酸或者 强碱性溶液做流动相， 可用有机溶剂清洗疏水性有机 化合物以消除其对色谱柱的污染。这 种固定 相主要 其 分为 %& 与 ’& 两 种 类 型。 %& 型 亦 称 为 薄 壳 型， 树脂的基核没有孔， 离子交换功能基团附聚于基核的 。而 ’& 型 是 大 孔 的 基 核， 具有大的 表面 （ 见图 # " ） 表面积， 因此具有高的交换 容量 （ 见图 # ( ） 。几 种典 型的色谱柱的特性与应用列于表 # 。 )"*(+%", %&#( 和 )"*(+%", %&!( 色谱柱主要用于单糖和双糖的分 离； )"*(+%", %&!( 色谱柱的填料与 )"*(+%", %&#( 相似， 但树脂 基核及 外面 的胶乳 的颗粒 较 )"*(+%", %&#( 小， 因 此 速 度 快， 柱 效 高。 )"*(+%", %&#(( 和 )"*(+%", %&!(( 色谱柱主要用于寡糖、 多糖的分离。 )"*(+%", %&!(( 色谱柱与 )"*(+%", %&#(( 柱的 差 异和 )"*(+%", %&#( 与 )"*(+%", %&!( 的 差 异 相 似。对酸性很弱的糖醇以及糖与糖醇的同时分离， 宜 选用高交换容量的色谱柱 )"*(+%", ’&# 。
高效离子色谱_脉冲安培检测法测定食品中多聚葡萄糖
李建文 王国栋 杨月欣1
中国疾病预防控制中心营养与食品安全所 , 北京 100050
摘要 :目的 在 AOAC2000111 的基础上 ,应用高效离子色谱2脉冲安培检器联用技术 ,建立食品中多聚葡 萄糖的检测方法 。方法 匀质样品通过热水浸提 、超滤离心 、酶解等处理后 ,进样 20μl ,以 0115molΠL NaOH、 含有 0115molΠL NaOH 的 015molΠL 乙酸钠进行梯度淋漓 ,CarboPACTM PA 1 阴离子交换柱2金电极脉冲安培检 测 。结果 方法检出限 、定量限分别为 1169μgΠg、5147μgΠg ,重复性和复现性 RSD 2110 %～6162 % ,不同食品 基质多聚葡萄糖的平均加标回收率为 9214 %～10414 %。结论 该方法重现性良好 ,能够准确定量食品中多 聚葡萄糖含量 。
1 材料与方法
111 试剂及仪器 11111 仪器 DX 600 离子色谱仪 (DIONEX) :包括 GS50 梯度 泵 ; ED50A 电化学检测器 ;检测模式 ,脉冲安培 ;AS50 自动进 样器 ; LC30 柱 温 箱 ; PeakNet 6140 色 谱 工 作 站 。色 谱 柱 : CarboPaCTM PA1 250mm ×2mm i. d. , CarboPaCTM PA1 保 护 柱 , 50mm ×2mm i. d. 。
112 方法 11211 样品 1121111 自制样品
液态奶样品 :以袋装液态奶为空白基质 ,称量 215 、510 和 1010g PDX 标准 ,分别加 9715 、9510 和 9010g 液态奶 ,充分混合 均匀 。
矿泉水样品 :分别称量 0175 、110 和 210g PDX 标准 ,加矿 泉水定容至 1000g 奶粉样品 (含有糊精和菊粉) 为空白 ,称量 215 、510 和 1010g PDX 标准 ,分别加 9715 、9510 和 9010g 奶粉 , 充分混合均匀 。
高效阴离子交换色谱积分脉冲安培法测定蓝藻细胞培养液中的蔗糖和甘油葡糖苷
高效阴离子交换色谱积分脉冲安培法测定蓝藻细胞培养液中的蔗糖和甘油葡糖苷梁文辉;法芸;王明林【摘要】建立了一种测定蓝藻细胞培养液中蔗糖和甘油葡糖苷的高效阴离子交换色谱积分脉冲安培检测法。
在最佳的分离条件下，蔗糖和甘油葡糖苷的质量浓度在0.1～50.0 mg／L范围内与色谱峰面积线性良好，线性相关系数r2>0.9999。
蔗糖和甘油葡糖苷的最低检测限分别是0.15 mg／L和0.03 mg／L，测定结果的相对标准偏差小于2%（n=8）。
该方法样品处理简单，无基体干扰，测定的准确度，灵敏度高，可应用于蓝藻培养液中蔗糖和甘油葡糖苷的测定。
%A high performance anion-exchange chromatography with pulsed amperometric detection was developed for the determination of sucrose and glucosylglycerol in cyanobacterial cells. Under the optimized conditions,the concentration of sucrose and glucosylglycerol showed good linearity (r2>0.999 9) with the chromatographic peak area in the range of 0.1–50.0 mg/L. The limit of detection(LOD) was 0.15 mg/L for sucrose and 0.03 mg/L for glucosylglycerol. RSDs of the detection results were less than 2% (n=8). The result showed that the method was convenient and accurate for the determination of sucrose and glucosylglycerol in cyanobacterial cells.【期刊名称】《化学分析计量》【年(卷),期】2014(000)0z1【总页数】4页(P9-12)【关键词】高效阴离子交换色谱;积分脉冲安培检测;蓝藻;培养液;蔗糖;甘油葡糖苷【作者】梁文辉;法芸;王明林【作者单位】山东农业大学，食品科学与工程学院，山东泰安 271018; 中国科学院青岛生物能源与过程研究所，生物燃料重点实验室，山东青岛 266101;中国科学院青岛生物能源与过程研究所，生物燃料重点实验室，山东青岛 266101;山东农业大学，食品科学与工程学院，山东泰安 271018【正文语种】中文【中图分类】O657.7在小分子糖类碳源中，蔗糖可由高等植物通过光合作用直接合成，被认为是自然界最丰富的二糖；同时蔗糖结构简单，很多微生物可以利用，是一种较为理想的碳源。
高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法测定烤烟中的水溶性葡萄糖、果糖和蔗糖
（ ! ! "#$%#& ’( )$*+,-.- / " 0#*-1#$% ，314*$ 5$.6#&-.%, ，78*$98*. #$$%&& ，"8.$* ； # ! 78*$98*. :’;*<<’（ =&’1> ）"’&>’&*%.’$ ，78*$98*. #$$$’# ，"8.$* ）
［$］
**+ * A 以 上 ） ， 氢氧化钠 （ 分 析 纯， 上海化学试剂 厂） ， 去离子水 （ ,&+ ! 8 ! ・ ;* ） 。 % % 淋洗液的 配 制： 淋 洗 液 为 ’+ ! *+, B C DE@% 水 溶液。配制氢氧化 钠 淋 洗 液 时， 先用固体氢氧化钠 配制 成 (’ A（ 质 量 分 数 ） DE@% 储 备 溶 液， 至少放 置 !" 6 。使用时用高纯水稀释配制成 ’+ ! *+, B C 氢 氧化钠淋洗液， 经过 ’+ "( " * 滤膜过滤后使用。 ! ! #" 色谱条件 % % 色 谱 柱： (.+/01 !E7F+&E; &’#, 阴 离 子 交 换 柱， 包括分析柱 （ " ** .G HG - !(’ ** ） 和保护 柱 （" ** .G HG - (’ ** ） ； 进 样 体 积： !’ " C 。 淋 洗 条 件： 淋洗 液 为 ’+ ! *+, B C DE@% 水 溶 液， 流 速 为 ,+ ’ *C B *./ ； 检 测 条 件： 积 分 脉 冲 安 培 检 测，!, . / ’+ ,’ I ， !! . 0 !+ ’’ I ， !) . / ’+ #’ I ， !" . 0 ’+ ,’ I ， 检 测 波 形 见 图 ,。 与 常 用 的 其 他 波 形 相 比， 该法采用主 动 型 的 清 洗 电 位 （ !! ） ， 可降低对工 作电极的损耗， 提高分析的长期稳定性。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
用高效离子交换色谱和脉冲安培检测器测定果汁和糖果中糖醇
摘要：本文讨论了糖果和果汁中糖醇的分析,采用戴安公司的Carbopac MA1色谱柱，NaOH 为淋洗液梯度洗脱样品，用脉冲安培检测器分离糖醇。
由于Carbopac MA1色谱柱是分离糖醇的推荐柱子，适合于糖的选择性差异较大的分离，允许淋洗液的浓度有较大的变化。
CarboPac MA1柱分离糖醇具有高的灵敏度和选择性，用PAD检测所以不需要加入柱后衍生试剂。
该方法适合糖醇的分析，具有很好的重复性及灵敏度。
关键词：糖醇；阴离子交换柱；脉冲安培检测器
糖醇有甜味而无热量，因此在糖果生产中用糖醇作甜味剂。
食品中（特别是减肥食品中）常用山梨醇（蔗糖甜度的60％）和甘露醇代替蔗糖[1]，但因其有轻泻性和利尿性，在食品中它们的用量有一定限制。
糖醇（也称醛醇）是醛糖的还原型。
例如：D-葡萄糖可被还原成葡萄糖醇（山梨糖醇）[2]。
Carbopac MA1对糖醇有独特的选择性。
作为高效高容量的阴离子交换柱，Carbopac MA1 可用高浓度的NaOH为淋洗液分离糖醇。
与金属包覆的柱子不同，MA1柱可以在室温下用高浓度NaOH作为淋洗液，并用脉冲安培检测器检测得到最高的灵敏度；另外，用金属包覆的柱子时，大分子的糖先被淋洗，糖醇洗脱在后，而用MA1时，洗脱顺序取决于pKa值。
高pKa的糖醇先被洗脱，依次为单糖和有低pKa的双糖等。
本文讨论了糖果和果汁中糖醇的分析。
此外，Carbopac MA1柱也可用于体液、活组织和糖共轭物的还原糖（即β-裂解反应产物）的分离。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂
梯度泵、脉冲安培检测器、色谱工作站
50％（w/w）低CO32-的NaOH溶液；
肌糖（纤维糖）、木糖醇、山梨糖醇、甘露醇、葡萄糖、果糖、蔗糖、己六醇、树脂醛糖甘露糖、木糖和半乳糖。
1.2色谱条件
分离柱：Carbopac MA1（4×250mm）；压力：800-1100psi
进样体积：10μL
淋洗液：A: 去离子水
B: 1.0M NaOH
流速：0.4mL/min；检测：脉冲安培，金工作电极；
1.3试剂和标准的配制
淋洗液B：1M NaOH，52mL NaOH（50％w/w）稀释至1.0L
1.4样品的配制
“无糖”硬糖：称3.4g于10mL水中，用水稀释1:1000。
苹果汁：稀释苹果汁1:1000。
口香糖：取一小片（约2.7g）口香糖放入10mL水中，超声溶解10min，过On-Guard A 预处理柱以除去阴离子，再通过0.45μm滤膜除去颗粒物。
用水稀释1000倍，备用。
2 结果与讨论
Carbopac MA1允许用NaOH淋洗液的浓度范围是0-1M。
该点非常重要，因糖醇的pKa 高，而且各不相同。
在MA1柱上分离时，淋洗液的pH值接近糖醇的pKa值。
改变淋洗液NaOH的浓度可改变淋洗液的pH值，从而改变化合物的有效电荷和洗脱顺序，达到好的分离结果。
图1A和图1B是一些糖醇的淋洗液浓度和容量因子的关系。
从图可找出糖醇分离的最佳浓度。
图1A 一些糖醇的Logk’与Log［NaOH］之间的关系
图1B 一些糖类的Logk’与Log［NaOH］之间的关系
图2为“无糖”硬糖的色谱图。
这种糖是作为减肥食品卖的。
它的电化学活性水溶组分主要是山梨醇和甘露醇。
3.4g的糖果中含的山梨醇和甘露醇分别是2.7g和50.5mg。
图2“无糖”硬糖中山梨醇和甘露醇的色谱图
图3为稀释苹果汁的色谱图，在所有果汁中都有葡萄糖、果糖和蔗糖。
而山梨糖醇只在苹果、梨、杏和另一些水果中找到[4]。
8-ounce（237-mL）的果汁中含有1.86g山梨醇、8.22g 葡萄糖、18.8g果糖和7.76g蔗糖。
图3稀释苹果汁中山梨醇的色谱图
图4为口香糖的色谱图。
4个峰分别为丙三醇、山梨糖醇、甘露醇和氢化葡萄糖。
2.7g 口香糖中含有218mg丙三醇、1140mg山梨醇、280mg甘露醇。
氢化葡萄糖没有定量测定。
图4口香糖中丙三醇、山梨醇和甘露醇的色谱图
PAD检测器通常都能检测到较低的浓度。
PAD检测器在电极上施加电压使糖氧化，从而可以得到较低的检测限并提高选择性，消除基体干扰。
PAD检测器重复施加三电位电压，具体设置见TN21[3]。
为了能够使工作电极发生氧化反应，淋洗的pH应大于12。
戴安公司生产的CarboPac 系列的柱子都是聚合物基的柱子，可以在pH 0-14稳定。
关于PAD检测糖的进一步的信息请参考TN20[5]。
3 结论
CarboPac MA1柱是分离糖醇的推荐柱子，适合于糖的选择性差异较大的分离，允许淋洗液的浓度有较大的变化。
CarboPac MA1柱分离糖醇具有高的灵敏度和选择性，用PAD检测所以不需要加入柱后衍生试剂。
柱子可以在室温下使用从而方便操作并延长柱子的使用寿命。
与其他CarboPac柱相比，具有更好的重复性。
参考文献
1. Shaw PE. CRC Handbook of Sugar Separations in Food by HPLC; CRC Press, Boca Raton, Florida, 1988.
2. Solomons TWG. Organic Chemistry, 2nd ed., John Wiley & Sons, New York, 1980.
3. Dionex Technical Note 21: “Optimal Settings for Pulsed Amperometric Detec tion of Carbohydrates using the
Dionex Pulsed Electrochemical Detector (PED-2) and the Pulsed Amperometric Detector (PAD-2)”.
4. Coppola ED. Food Technology, 1984, 38(4), 88-91.
5. Dionex Technical Note 20: “Analysis of Carbohydrates by Anion Exchange C hromatography with Pulsed Amperometric Detection”.。