荧光原位杂交法 pcr-荧光对比
基因工程题库版--名词解释
各种题型确定题目重要题目候补题目不确定答案的题目试卷与题库重复题目名词解释同裂酶（同切点酶）：有一些来源不同的限制酶识别的是同样的核苷酸靶序列，这类酶称为同裂酶。
同尾酶：与同裂酶对应的一类限制性内切酶,它们来源各异，识别的靶序列也各不相同,但切割后都能产生相同的黏性末端,特称为同尾酶。
测序酶：是经修饰过的T7噬菌体DNA聚合酶，是采用缺失的方法，从外切核酸酶结构域中除去28个氨基酸，这样使得T7DNA聚合酶完全失去了3~-5~外切酶活性，只有5~-3~聚合酶活性，而且聚合能力很强，测序时常用此酶。
与klenow相比优点是：是双脱氧链终止法对长片段进行测序的理想用酶。
限制性核酸内切酶：是一类能识别和切割双链DNA分子中特定碱基系列的核酸水解酶。
限制-修饰系统中的限制和修饰作用：限制-修饰系统中的限制作用是指一定类型的细菌可以通过限制性酶的作用，破坏入侵的外源DNA(如噬菌体DNA等)，使得外源DNA对生物细胞的入侵受到限制；而生物细胞(如宿主)自身的DNA分子合成后，通过修饰酶的作用，在碱基中特定的位置上发生了甲基化而得到了修饰，可免遭自身限制性酶的破坏，这就是限制-修饰系统中的修饰作用。
5. 限制性片段长度多态性（RFLP）：当DNA序列的差异发生在限制性内切酶的识别位点时，或当DNA片段的插入、缺失或重复导致基因组DNA经限制性内切酶酶解后，其片段长度的改变可以经过凝胶电泳区分，出现的这种DNA多态性称为限制性片段长度多态性。
6. 星号活性：限制性内切核酸酶识别和切割特异性位点是在特定的条件下测定的。
当条件改变时，许多酶的识别位点会改变，导致识别与切割序列的非特异性，这种现象称为星号活性。
（“非最适的”反应条件例如高浓度的核酸内切限制酶、高浓度的甘油、低离子强度、用Mn2+取代Mg2+以及高pH值等。
)克服星号活性的方法：维持反应体系适当的离子强度、较低的温度或酶浓度，尽可能缩短反应时间或DNA 样品的重新处理等。
基因检测的方法有哪些
基因检测的方法有哪些
基因检测的方法有以下几种：
1. 基因测序（DNA测序）：通过测定DNA序列来分析基因的组成和变异。
常用的方法包括Sanger测序和下一代测序（Next Generation Sequencing，简称NGS）。
2. 基因组检测（全基因组测序）：对整个基因组进行测序，包括编码蛋白质的基因和非编码RNA的基因。
3. 基因检测芯片（基因芯片）：使用已知的基因序列将DNA或RNA样本与芯片上的特定位点匹配，以检测基因的变异。
4. PCR（聚合酶链反应）：通过多轮温度变化，复制和扩增DNA片段，以检测特定的基因序列。
5. 荧光原位杂交（FISH）：使用特定标记的DNA探针与待测样本中的特定基因序列结合，以观察该基因的存在与否以及其位置。
6. 基因特异性PCR（Polymerase Chain Reaction，简称PCR）：通过使用一对特异性引物来扩增特定基因序列，以确定是否存在该基因或其变异。
7. 基因芯片：通过固相法加上光学检测手段，可以检测样本中特定的基因型或基因表达谱。
以上方法可以用于检测基因变异、遗传病风险、个体药物反应性等与基因相关的信息。
荧光原位杂交
一、概述1、克隆性染色体异常是肿瘤的特征1914年德国遗传学家Boveri就提出染色体畸变与肿瘤起源相关，然而这还仅仅只是一个假说；1960年Nowell和Hungerford在7例慢性髓系白血病（chronic myeloid leukemia，CML）的患者中发现后来被称为费城染色体（Philadelphia chromosome）的微小染色体；1973年Rowley 证实了Ph染色体是9号和22号染色体易位所致，这是人们在肿瘤中认识到的第一个染色体易位；目前，已经有11,500篇文献报道了55,600多种克隆性细胞遗传学异常。
这些染色体畸变，尤其是染色体易位及其相应的融合基因在肿瘤致病的起始阶段有着重要的作用，无不说明克隆性细胞遗传学异常是肿瘤的特征，在肿瘤起源中起重要作用。
下图是各种疾病报告的克隆性染色体异常病例数2、染色体异常的常见类型染色体异常指数目异常和结构异常两类：前者包括整条染色体数目的扩增和缺失；后者包括染色体易位、插入、倒置、区带的缺失或扩增等。
下图是染色体数目异常染色体结构异常3、染色体异常的检测方法染色体异常的识别得益于二十世纪六十年代后发展起来的胰蛋白酶－姬姆萨染色和常规显带技术，使得常规筛查全基因组染色体异常和检测染色体核型改变成为可能。
染色体显带是细胞遗传学分析技术中标准和常用的方法，但耗时且依赖于获得良好的分裂相，还难于分析复杂和隐匿的异常。
PCR或荧光原位杂交（FISH，fluorescent in situ hybridization）对染色体异常的检出依赖于引物或探针与模板的结合，因此较常规显带具有更高的特异性，是高通量检测染色体异常的敏感和特异的方法。
二、荧光原位杂交及其探针1、荧光原位杂交的原理染色体荧光原位杂交始于传统的细胞遗传学和DNA技术的结合，这种结合开创了一门新的学科——分子细胞遗传学。
其基础是Southern blot原理，以半抗原如生物素、地高辛间接标记或以荧光素直接标记的已知核酸分子为探针，探针和靶序列双链DNA变性后杂交，互补的异源单链DNA分子在适宜的温度和离子强度下退火形成稳定的异源双链DNA，通过荧光标记的亲和素或抗地高辛抗体将半抗原显示出来，通过荧光显微镜观察杂交信号。
基因组学考试资料 整理版
基因组学考试资料整理版第一章一、基因组1、基因组：生物所具有的携带遗传信息的遗传物质的总和,是指生物细胞中所有的DNA，包括所有的基因和基因间区域。
2、基因组学：指以分子生物学技术、计算机技术和信息网络技术为研究手段，以生物体内全部基因为研究对象，在全基因背景下和整体水平上探索生命活动的内在规律及其内外环境影响机制的科学。
基因组学包括3个不同的亚领域结构基因组学(structural genomics) ：以全基因组测序为目标功能基因组学(functional genomics)：以基因功能鉴定为目标比较基因组学(xxparative genomics)二、基因组序列复杂性1、C值是指一个单倍体基因组中DNA的总量，以基因组的碱基对来表示。
每个细胞中以皮克(pg，10-12g)水平表示。
C 值悖理：指基因内部被一个或更多不翻译的编码顺序即内含子所隔裂。
3、异常结构基因分类重叠基因：编码序列彼此重叠的基因，含有不同蛋白质的编码序列。
基因内基因:一个基因的内含子中包含其他基因。
反义基因: 与已知基因编码序列互补的的负链编码基因，参与基因的表达调控，可以干扰靶基因mRNA转录与翻译。
4、假基因：功能基因但已失去活性或者改变原来活性功能的DNA序列. 四、基因组特征比较真核生物基因组的特征：复杂性较高的生物基因组结构松弛，在整个基因组范围内分布大量重复顺序；含有大量数目不等的线性DNA分子，并且，每个长链DNA都与蛋白质组成染色体结构；含有细胞器基因组原核生物基因组的特征 :原核生物基因数目比真核生物少，大小在5 Mb以下; 原核生物基因组结构更紧凑;第二章一、为何要绘制遗传图与物理图？1)基因组太大,必需分散测序,然后将分散的顺序按原来位置组装,需要图谱进行指导。
2)基因组存在大量重复顺序,会干扰排序,因此要高密度基因组图。
3)遗传图和物理图各有优缺点,必须相互整合校正。
二、基因组测序方法、原理及特点：1. 克隆重叠群法：先构建遗传图，再利用几套高度覆盖的大片段基因组文库获得精细的物理图，选择合适的BAC 或PAC克隆测序，利用计算机拼装。
转基因拷贝数鉴定
转基因拷贝数鉴定引言转基因技术是指通过人为的方式将外源基因导入到目标生物体中，从而使其获得新的性状或功能。
转基因作物在农业生产中得到广泛应用，但其安全性和可行性一直备受争议。
转基因拷贝数鉴定是一种用于确定转基因作物中外源基因拷贝数目的方法。
本文将详细探讨转基因拷贝数鉴定的原理、方法和应用。
转基因拷贝数的重要性转基因拷贝数指的是转基因作物中外源基因的拷贝数目。
转基因拷贝数的多少直接影响着外源基因的表达水平和转基因作物的性状稳定性。
因此，准确鉴定转基因拷贝数对于转基因作物的研究和应用具有重要意义。
转基因拷贝数与外源基因表达水平的关系转基因拷贝数与外源基因的表达水平呈正相关关系。
拷贝数越多，外源基因的表达水平越高，从而使转基因作物获得更强的性状。
因此，通过鉴定转基因拷贝数，可以预测和调控转基因作物的性状。
转基因拷贝数与转基因作物的性状稳定性的关系转基因拷贝数还与转基因作物的性状稳定性密切相关。
拷贝数越多，外源基因在转基因作物中的遗传稳定性越高，性状表现越稳定。
因此，鉴定转基因拷贝数可以评估转基因作物的性状稳定性，为转基因作物的选育和推广提供重要依据。
转基因拷贝数鉴定的方法转基因拷贝数鉴定是通过比较转基因作物中外源基因与内源基因的拷贝数目来确定的。
目前常用的转基因拷贝数鉴定方法包括定量PCR法、Southern blotting法、荧光原位杂交法等。
定量PCR法定量PCR法是一种常用的转基因拷贝数鉴定方法。
该方法利用PCR技术在转基因作物中同时扩增外源基因和内源基因的DNA片段，通过比较两者的信号强度或荧光强度来确定外源基因的拷贝数。
Southern blotting法Southern blotting法是一种经典的转基因拷贝数鉴定方法。
该方法首先将转基因作物中的DNA进行限制性内切酶切割，然后通过电泳将DNA片段分离，再利用DNA 探针与目标片段进行杂交，最后通过放射性或化学荧光信号来检测外源基因的拷贝数。
染色体相互异位
染色体相互异位引言染色体相互异位是指两条染色体上的片段断裂重组到另外一条染色体上的现象。
这种基因突变事件对生物的遗传信息传递和种群进化具有重要影响。
本文将对染色体相互异位现象进行全面、详细、完整且深入地探讨。
异位重组的定义与分类1. 异位重组的定义异位重组是指在染色体间发生的片段断裂重组事件，其中一个碎片断裂并嵌入到另一个染色体上的特殊类型的染色体突变。
2. 异位重组的分类根据异位重组发生的位置和方式，可以将异位重组分为以下几种类型： - 非同源异位重组：发生在不同染色体上的片段断裂重组。
这种重组可能导致染色体上的基因顺序发生改变，从而对生物的表型产生明显影响。
- 同源异位重组：发生在同一条染色体上的两个相似序列之间的片段断裂重组。
它在基因演化过程中起到了重要作用，推动了物种的多样性和复杂性的形成。
- 非等位异位重组：发生在不同等位基因之间的片段断裂重组。
这种重组可能导致基因的丧失、突变或新的基因组合，进而影响性状表现。
- 等位异位重组：发生在同一个基因的两个等位基因之间的片段断裂重组。
这种重组会改变等位基因的组合方式，进而影响基因的表达。
异位重组的发生机制异位重组的发生机制主要有以下几种： ### 1. 非同源异位重组的发生机制非同源异位重组的发生主要通过以下几个步骤实现： 1. 染色体断裂：染色体发生断裂，形成两个断裂的末端。
2. 末端修复：染色体断裂的末端通过非同源末端连接或者不完全同源末端连接的方式修复。
3. 重组：修复的断裂末端与另一条染色体上的相应区域发生重组，形成异位重组产物。
2. 同源异位重组的发生机制同源异位重组的发生主要通过以下几个步骤实现： 1. 染色体断裂：染色体发生断裂，形成两个断裂的末端。
2. 单链侵入：一个断裂的末端侵入到相应染色体上一个相似的序列中，形成DNA双链和DNA单链结合体。
3. 基因转座：侵入的末端通过DNA修复过程与反向的同源序列结合，发生片段断裂重组。
细胞各种染色方法
细胞各种染色方法细胞染色方法是一种用于研究细胞结构和功能的重要技术。
通过对细胞进行染色，可以使细胞成分和结构可见，便于观察和研究。
下面将介绍几种常用的细胞染色方法。
1.基本染色方法-干燥染色法干燥染色法是最常见的染色方法之一，用于观察细胞的形态和结构。
在细胞表面涂上染色剂（如吉姆萨、范斯丁染料等），然后用胶片或显微镜进行观察。
这种方法方便快捷，适用于常规的细胞观察。
-神经元染色法神经元染色法主要用于研究神经系统的结构和功能。
常见的神经元染色方法包括尼氏染色法、戈登染色法和格尔染色法等。
这些方法可以染色神经元的胞体、突触和轴突等结构，以及神经元之间的连接方式。
2.核酸染色方法-核酸荧光染色法核酸荧光染色法是一种用于检测细胞核酸的方法。
常见的核酸染色剂包括达尔林紫、伊曼纽尔蓝和乳胶蓝等。
这些荧光染料可以与DNA或RNA 结合，生成荧光信号，便于观察和分析。
-原位杂交法原位杂交法是一种利用互补的单链DNA或RNA探针与目标细胞中的互补序列发生杂交反应的方法。
这种方法可以检测特定的基因表达情况或检测一些病毒的感染情况。
常见的原位杂交方法包括原位PCR、荧光原位杂交和非放射性原位杂交等。
3.蛋白质染色方法-共聚焦显微镜染色法共聚焦显微镜染色法是一种利用荧光染料标记特定蛋白质的方法。
常见的荧光染料包括荧光素、乳酸钙蓝和荧光蛋白等。
这种方法可以使用不同的荧光染料标记不同的蛋白质，通过共聚焦显微镜观察细胞中的蛋白质分布和相互作用。
-银染法银染法是一种用于检测蛋白质的方法，特别适用于低表达量的蛋白质。
该方法通过将目标蛋白质与银离子结合，形成黑色或棕色的颗粒，便于观察和分析。
银染法常用于检测蛋白质在凝胶电泳中的分子量和含量。
4.细胞器染色方法-非特异性染色法非特异性染色法是一种用于检测细胞器的方法，常用的非特异性染色剂包括宙斯金、吉姆萨和荧光素等。
这些染料可以与细胞器特有的成分结合，使其在显微镜下可见。
-特异性染色法特异性染色法是一种用于检测特定细胞器的方法，常见的特异性染色剂包括桡胞蛋白、核蛋白和线粒体染料等。
S20135417-肖春林-小麦外源染色体片段鉴定方法比较
小麦外源染色体片段鉴定方法比较肖春林 S2******* 作物摘要：对5种鉴定小麦背景中1BL/1RS易位染色体的生化和分子标记方法，包括酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)、荧光原位杂交(FISH)、RAPD、特异性PCR标记、和RELP，进行比较研究。
结果表明，5种方法中除了RAPD标记难以鉴定1BL/1RS易位染色体，其他方法都能对1BL/1RS易位染色体进行有效的鉴定。
RFLP和FISH方法比较费时费力且花费昂贵，特异性PCR标记又在一定程度上受模板DNA浓度的影响。
因此认为，酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)方法是一种简单、快速、经济有效的方法，最易于在小麦育种选择中应用。
关键词：小麦；1BL/1RS易位染色体；特异性PCR标记；A-PAGE；FISH； RFLP；RAPDAbstract：For five kinds of appraisal 1BL/1RS translocation chromosomes in wheat background of biochemical and molecular marker method, including acid polyacrylamide gel electrophoresis (A-PAGE), fluorescence in situ hybridization (FISH), RAPD, specific PCR markers, and RELP, A comparative study.The results showed that RAPD markers are difficult to identify 5 ways, in addition to 1BL/1RS translocation chromosomes, other methods can effectively of the 1BL/1RS translocation chromosomes of identification.RFLP and FISH method is time-consuming and expensive, specific PCR markers and to a certain extent, affected by the concentration of template DNA.Therefore believe that acid polyacrylamide gel electrophoresis (A-PAGE) method is A simple, rapid, economic and effective method,the most easy to application in wheat breeding selection.Key words: Wheat;1BL/1RS translocation chromosomes ;Specific PCR markers;A - PAGE;The FISH; RFLP;RAPD在全世界范围内，1BL/1RS小麦一黑麦易位系作为优异基因资源在小麦改良中广泛利用。
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荧光原位杂交法 pcr-荧光对比
荧光原位杂交法（FISH）和PCR-荧光对比（PCR-FLP）都是分子生物学中常用的技术，可以用于基因定位、染色体结构和功能等方面的研究。
本文将分别介绍这两种技术的基本原理、应用场景和优缺点。
一、荧光原位杂交法
1.基本原理
荧光原位杂交法是一种基于DNA序列互补碱基配对原理的技术，利用荧光探针对染色体上的特定区域进行标记，以便于观察和分析。
该技术主要包括以下几个步骤：
（1）制备探针：将已知序列的DNA片段与荧光标记分子连接，生成荧光标记的DNA探针。
（2）加热解离：将待检样品中的DNA加热，使其解离成两条单链DNA。
（4）荧光显色：利用显微镜观察染色体上的荧光标记，并确定标记位置及数目。
2.应用场景
荧光原位杂交法可用于以下方面的研究：
（1）核型分析：检测染色体数目、大小和形态等信息。
（2）染色体重排：观察染色体间的换位、倒位等结构改变。
（3）基因定位：确定特定基因在染色体上的位置。
（4）肿瘤诊断：检测肿瘤细胞染色体的数目和结构变化。
3.优缺点
（1）高灵敏度：能够检测到细胞核中的单个分子。
（2）高特异性：探针与目标序列可以实现完全互补。
（3）数据可视化：能够直观地呈现染色体结构及荧光信号大小。
而其缺点主要包括：
（1）长时间实验：需要多个步骤和时间，且荧光信号非常容易被淬灭。
（2）需要DNA标记：需要荧光标记作为探针，费用较高。
二、PCR-荧光对比
PCR-荧光对比（PCR-FLP）是一种应用荧光标记测量PCR产物数量的技术，能够在短时间内准确、可靠地检测和测量DNA的含量和变异。
具体操作过程如下：
（1）样品制备：将待测DNA标记荧光标记，与另一非标记探针PCR反应。
（2）荧光PCR扩增：通过PCR反应增生DNA分子。
（3）荧光观察：利用荧光标记观察PCR产物。
（1）定量PCR：准确检测PCR反应中模板DNA的数目。
（2）基因表达：测量基因在不同实验条件下的表达水平。
（3）点突变检测：定性判断DNA中的单个碱基是否发生变异。
（4）SNP分型：检测在同一位点上的两个等位基因在 DNA中的含量和变异程度。
PCR-荧光对比技术具有如下优点：
（1）检测灵敏度高：荧光标记可以测出非常微小的DNA样品。
（2）实验时间短：只需几小时便可完成实验。
（3）自动化程度高：可使用自动化设备进行大规模测量。
（2）受杂质干扰：杂质可能会影响PCR体系，导致假阳性。