水稻UBox蛋白质在不同发育时期的表达分析
水稻生育后期蛋白质组差异表达的图谱分析
水稻生育后期蛋白质组差异表达的图谱分析
邵彩虹;林文雄
【期刊名称】《中国农学通报》
【年(卷),期】2007(23)9
【摘要】从蛋白质组学角度对水稻生育后期的叶片蛋白质组变化进行了研究,利用Imagemaster 2D Elite 5.0软件对所得到的双向电泳图谱进行分析比较,以揭示水稻叶片蛋白质组的表达差异。
结果表明,经图谱分析共得到差异蛋白质点47个,其中孕穗期及抽穗期新增蛋白质点6个,21个随生育进程表达丰度增加,6个蛋白质点表达丰度逐渐减弱,其它14个蛋白质点呈无规则变化,多表现为在某个生育时期具有峰值;蛋白质是细胞功能执行者,受细胞功能或细胞环境变化的影响,因此,上述蛋白质发生变化的原因可能与水稻后期的发育转变有关系。
【总页数】5页(P139-143)
【关键词】水稻;发育;蛋白质组学;差异蛋白
【作者】邵彩虹;林文雄
【作者单位】福建农林大学农业生态研究所
【正文语种】中文
【中图分类】S312
【相关文献】
1.养分胁迫对不易早衰类型水稻生育后期叶片影响的蛋白质组学分析 [J], 邵彩虹;王萍;陈金;李瑶;刘光荣;谢金水;彭春瑞
2.养分胁迫对威优916生育后期根系衰老影响的蛋白质组学分析 [J], 邵彩虹;李瑶;钱银飞;邱才飞;彭春瑞;刘光荣;谢金水
3.定量蛋白质组学技术构建系统性红斑狼疮疾病的蛋白质组差异表达图谱 [J], 王林纤;戴勇;文锦丽;涂植光;张丽;齐素文
4.新生小鼠肠边缘群细胞蛋白质组双向电泳图谱的差异表达 [J], 张永锋;杨晋;谭永港;杨敏;陈嫚茵
5.局灶性脑缺血大鼠海马蛋白质组差异表达图谱的构建及针刺影响 [J], 温景荣;赵晓峰;王舒;石学敏
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
具不同蛋白质含量水稻品种中天冬酰胺合成酶基因的表达
具不同蛋白质含量水稻品种中天冬酰胺合成酶基因的表达周丽慧;张昌泉;刘巧泉;顾铭洪【期刊名称】《基因组学与应用生物学》【年(卷),期】2009(28)1【摘要】为研究水稻中氮同化与籽粒蛋白质合成可能的关系,本实验通过Northern杂交分析比较了氮同化关键酶—天冬酰胺合成酶基因(OsAS)在不同水稻品种中的表达特性。
结果显示,OsAS基因在水稻不同组织及其不同发育时期中的表达水平不同,以发育种子中的表达量最高,叶鞘和叶片中相对较弱;在籽粒发育过程中OsAS基因的表达呈先升高后下降的趋势。
具不同种子蛋白质含量水稻品种叶片中OsAS基因的表达水平存在显著差异,相关性分析显示在籼亚种或粳亚种不同品种内OsAS基因表达量与籽粒蛋白质含量可能存在一定的关联。
【总页数】7页(P39-45)【关键词】水稻;天冬酰胺合成酶基因;蛋白质含量;基因表达【作者】周丽慧;张昌泉;刘巧泉;顾铭洪【作者单位】扬州大学农学院,教育部植物功能基因组学重点实验室,江苏省作物遗传生理重点实验室【正文语种】中文【中图分类】S512.1;S511【相关文献】1.大豆天冬酰胺合成酶β基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 [J], 张继;王相晶;于丹;王晴;向文胜2.不同基因型水稻籽粒蛋白质含量差异的研究Ⅰ.两个常规早稻品种籽粒蛋白质含量差异 [J], 朱红梅;荣湘民;刘强;彭建伟3.桃不同发育时期主要糖类含量和蔗糖合成酶基因表达水平的动态变化 [J], 张春华;俞明亮;马瑞娟;张斌斌;沈志军4.不同性别刺五加皂苷合成酶基因表达及其对皂苷含量的影响 [J], 邢朝斌;孟春燕;修乐山;劳凤云;庄鹏宇5.不同小麦品种籽粒淀粉合成酶基因的表达及其与淀粉积累的关系 [J], 谭彩霞;封超年;郭文善;朱新开;李春燕;彭永欣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
《2024年水稻OsGH3-4生物学功能分析》范文
《水稻OsGH3-4生物学功能分析》篇一一、引言水稻（Oryza sativa）是全球最重要的粮食作物之一，其产量和品质直接关系到全球粮食安全。
近年来，随着分子生物学和基因组学的发展，对于水稻的生长、发育及产量性状相关的基因和蛋白功能的研究成为了研究热点。
其中，OsGH3-4基因是水稻基因组中一个重要的基因，其编码的蛋白属于GH3家族。
本文旨在分析水稻OsGH3-4的生物学功能，为进一步了解其在水稻生长过程中的作用及提供改良品种的分子设计基础提供依据。
二、材料与方法1. 材料：实验材料为水稻品种的基因组DNA和cDNA，以及相关的转基因材料。
2. 方法：（1）生物信息学分析：通过生物信息学软件对OsGH3-4基因的序列、结构、表达模式等进行预测和分析。
（2）转基因技术：构建OsGH3-4基因的过表达和沉默的转基因材料，分析其功能变化。
（3）表型观察：观察转基因水稻在生长、发育、抗病、抗逆等方面的表型变化。
（4）qRT-PCR：对相关基因的表达量进行实时荧光定量PCR检测。
三、结果与分析1. 生物信息学分析结果：OsGH3-4基因编码一个GH3家族蛋白，具有典型的GH3结构域。
通过序列比对和表达模式分析，发现OsGH3-4在根、茎、叶等组织中均有表达，且在不同发育阶段表达量有所差异。
2. 转基因技术分析结果：成功构建了OsGH3-4基因的过表达和沉默的转基因材料。
与野生型相比，过表达OsGH3-4基因的转基因水稻在生长速度、产量等方面有显著提高；而沉默OsGH3-4基因的转基因水稻则表现出明显的生长抑制现象。
3. 表型观察与分析：在生长速度方面，过表达OsGH3-4基因的转基因水稻的生长速度明显加快，叶片颜色更加鲜绿；而沉默OsGH3-4基因的转基因水稻则表现出生长缓慢，叶片颜色较淡。
在产量方面，过表达OsGH3-4基因的转基因水稻的穗长、穗粒数和千粒重均有显著提高，从而提高产量；而沉默OsGH3-4基因的转基因水稻则出现穗小、粒少等现象。
_FONT+face=Verdana_孕穗期水稻不同功能叶的发育蛋白质组学分析_FONT_
孕穗期水稻不同功能叶的发育蛋白质组学分析邵彩虹１，２ 谢金水１ 黄永兰１ 邱才飞１ 张振苗２ 林文雄２，＊（１江西省农业科学院土壤肥料与资源环境研究所，江西南昌３３０２００；２福建农林大学农业生态研究所，福建福州３５０００２；＊通讯联系人，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｅｎｘｉｏｎｇ１８１＠１６３．ｃｏｍ）ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌＰｒｏｔｅｏｍｉｃｓＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＤｉｆｆｅｒｅｎｔＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＬｅａｖｅｓｉｎＲｉｃｅ（Ｏｒｙｚａｓａｔｉｖａ）ａｔｔｈｅＢｏｏｔｉｎｇＳｔａｇｅＳＨＡＯＣａｉ－ｈｏｎｇ１，２，ＸＩＥＪｉｎ－ｓｈｕｉ１，ＨＵＡＮＧＹｏｎｇ－ｌａｎ１，ＱＩＵＣａｉ－ｆｅｉ１，ＺＨＡＮＧＺｈｅｎ－ｍｉａｏ２，ＬＩＮＷｅｎ－ｘｉｏｎｇ２，＊（１ＳｏｉｌａｎｄＦｅｒｔｉｌｉｚｅｒ＆ＲｅｓｏｕｒｃｅａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＪｉａｎｇｘｉＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎａｎｃｈａｎｇ３３０２００，Ｃｈｉｎａ；２ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｇｒｏ－Ｅｃｏｌｏｇｙ，ＦｕｊｉａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０００２，Ｃｈｉｎａ；＊Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｅｎｘｉｏｎｇ１８１＠１６３．ｃｏｍ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｒｅｖｅａｌｐｒｏｔｅｏｍｉｃｃｈａｎｇｅｓｉｎｒｉｃｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｅａｖｅｓｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍｆｏｕｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅａｆｐｏｓｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｅｏｆｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｅａｖｅｓａｔｔｈｅｂｏｏｔｉｎｇｓｔａｇｅｉｎｈｙｂｒｉｄｒｉｃｅＳｈａｎｙｏｕ６３ｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄｂｙｕｓｉｎｇｔｈｅａｐ－ｐｒｏａｃｈｏｆｐｌａｎｔｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ．Ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｅｓｏｆｔｈｅｔｏｐｌｅａｖｅｓａｔｔｈｅ１３－，１４－，１５－ａｎｄ１６－ｌｅａｆｓｔａｇｅｓ（ｔｈｅｔｏｔａｌｎｕｍｂｅｒｏｆｌｅａｖｅｓｏｆＳｈａｎｙｏｕ６３ｗａｓ１６）ｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｂｙｔｗｏ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ．ＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｍｏｎｇｔｈｅｆｏｕｒｓｔａｇｅｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙＩｍａｇｅｍａｓｔｅｒ２ＤＥｌｉｔｅ５．０，ｗｈｉｃｈａｌｌｏｗｅｄｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ２３ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｇｅｌｓｐｏｔｓ．Ｔｈｅｓｐｏｔｓｗｅｒｅｆｕｒｔｈｅｒｖｅｒｉｆｉｅｄｂｙｍａｔｒｉｘ－ａｓｓｉｓｔｅｄｌａｓｅｒｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ－ｔｉｍｅｏｆｆｌｉｇｈｔｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，ｉｎｗｈｉｃｈ１４ｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ．Ｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅｓｅ１４ｐｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄａｎｄｔｈｅｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｃａｎｂｅｄｒａｗｎｆｒｏｍｔｈｅｆｏｌｌｏｗｉｎｇｒｅｓｕｌｔ：ｔｈｅｍａｊｏｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｓ（９ｐｒｏｔｅｉｎｓ）ｗｅｒｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｉｏｎ，ｔｈｒｅｅｄｉｆ－ｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｐｒｏｔｅｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｆｕｎｃｔｉｏｎｃｏｎｔｒｏｌ，ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｂｕｎｄａｎｃｅｏｆｔｈｏｓｅ１２ｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｒｅｇｕｌａｒｌｙｗｉｔｈｔｈｅｌｅａｆｐｏｓｉｔｉｏｎｅｌｅｖａｔｉｏｎ；ｔｈｅｏｔｈｅｒｐｒｏｔｅｉｎｓ（２ｐｒｏｔｅｉｎｓ）ｗｅｒｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎａｍｉｎｏａｃｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，ｓｈｏｗｉｎｇａｎｉｒｒｅｇｕｌａｒｌｙｃｈａｎｇｉｎｇｐａｔｔｅｒｎｉｎｌｏｗｅｒｌｅａｆｐｏｓｉｔｉｏｎｓ，ａｎｄａｄｉｓｔｉｎｃｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｂｕｎ－ｄａｎｃｅｉｎｆｌａｇｌｅａｆ．Ｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｉｓｔｈｅｃａｒｒｉｅｒｏｆｃｅｌｌｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄｂｙｔｈｅｖａｒｉａｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｆｕｎｃｔｉｏｎｏｒｉｎ－ｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｔｈｅｒｅａｓｏｎｔｈａｔｃａｕｓｅｄｔｈｅａｂｏｖｅｐｒｏｔｅｉｎｃｈａｎｇｅｓｓｈｏｕｌｄｂｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｌｅａｖｅｓａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅａｆｐｏｓｉｔｉｏｎｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｒｉｃｅ；ｂｏｏｔｉｎｇｓｔａｇｅ；ｌｅａｆｐｏｓｉｔｉｏｎ；ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ；ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｔｅｏｍｅ摘 要：从蛋白质组学角度对杂交水稻汕优６３孕穗期４个叶位功能叶片蛋白质组变化进行了研究，以揭示水稻孕穗期叶片蛋白质组的表达差异。
4种蛋白激发子诱导水稻抗病性及促生长作用的比较研究中期报告
4种蛋白激发子诱导水稻抗病性及促生长作用的比较
研究中期报告
这篇中期报告的研究旨在比较四种蛋白激发子在诱导水稻抗病性和
促进生长方面的效果。
研究分为两个阶段，第一个阶段是在实验室中进
行的激发子处理，第二个阶段是实地试验。
在第一个阶段，我们在水稻中分别使用四种不同类型的蛋白激发子
处理，然后测定了它们对水稻植株的生长和防御反应的影响。
结果显示，四种激发子都可以显著地促进水稻的生长，但它们对水稻抗病性的影响
各不相同。
特别是，激发子C对水稻的抗病性具有显著的促进作用，而
激发子D的效果最差。
在第二个阶段的实地试验中，我们选择了两种具有显著抗病性的激
发子A和C，将它们应用于水稻田间试验中，并与未处理的水稻进行了比较。
结果显示，激发子A对水稻的生长和产量没有明显的影响，而激发
子C对水稻的生长和产量都具有显著促进作用。
另外，在病害防御方面，激发子C也比激发子A表现更好，可以有效地降低水稻的发病率和病害
程度。
综合来看，本研究结果表明，不同类型的蛋白激发子对水稻的生长
和抗病性具有不同的影响，其中激发子C被证明是最有效的。
因此，我
们建议在实际生产中使用激发子C来提高水稻的生产力和病害防御能力。
不同品种水稻颖果发育及其发育过程中生理活性变化的比较-Word文档
不同品种水稻颖果发育及其发育过程中生理活性变化的比较陈娟一、前言水稻（Oryza Sativa）是我国主要粮食作物之一，在粮食生产中占举足轻重的地位。
我国是一个人口大国，对粮食的需求量很大；同时，随着社会的发展和人们生活水平的不断提高，人们对稻米品质的要求也越来越高。
因此，如何提高稻米的产量和品质是水稻栽培和育种家们研究的重点。
水稻籽粒是水稻主要的收获部位，水稻产量主要就是由籽粒重来衡量的。
水稻籽粒由谷壳和颖果组成。
谷壳由内外稃发育而来，一般作为饲料使用。
颖果也叫糙米，由子房发育而来，包括胚、胚乳（包括糊粉层）、果皮和种皮四个组成部分，内含大量的淀粉、蛋白质等贮藏物质，构成了水稻籽粒的主要部分，颖果的发育状况决定着稻米的产量和品质。
因此，研究稻米的产量和品质必须从颖果着手。
研究颖果的发育生理，从颖果发育的角度来阐明稻米产量和品质的形成机理也是提高水稻产量和品质的一个重要途径。
二、前人的研究1、颖果的发育根据颖果发育的内部变化和颖壳色泽的变化，将颖果的发育大致分为四个阶段[1]：（1）乳熟期（也称灌浆期），米粒内有白色浊液，米粒背部为青色。
（2）蜡熟期（也称黄熟期），米粒结硬，背部纵沟青色渐退去。
（3）完熟期，米粒硬实，不易破碎。
（4）枯熟期，壳色退淡，米粒透明。
各期所需时间受品种、气温以及籽粒着生部位差异的影响很大，籼稻生育期短，各期时间也较短。
2、水稻的胚水稻的胚是由受精卵发育而来的。
水稻的胚是水稻新个体的原始体，因此也是水稻中最重要的部位。
徐是雄[2]曾用扫描电镜详细的观察了稻胚的形成过程（原有图），并提出了胚是由两大部分构成的，一是胚轴系统（embryouic axis），包括胚芽、胚轴、胚根及根冠；二是胚套（embryonic envelope），由盾片、左右复鳞、外胚叶及胚根鞘连成的套状体，胚轴系统被包裹在胚套中，它长在盾片上，盾片的维管束与胚轴系统的维管束相连，胚套的主要功能在于保护胚轴系统以及贮藏和吸收营养物质。
水稻谷蛋白的一个新基因克隆及表达分析
G @*)7(). DPEEIK，\(*).-8；D ;!()9-9 :’*[94^ ,‘ :.+(’85"8+*5 C’(9)’9-，T9(7(). PEEEQP； B)-"("8"9 ,‘ ;+,# C’(9)’9-， ;!()9-9 :’*[94^ ,‘ :.+(’85"8+*5 C’(9)’9-，
作物学报
水稻谷蛋白的一个新基因克隆及表达分析
牛洪斌P 覃怀德P 王益华P 翟虎渠D
G， "# 万建民P，
D G （P 南京农业大学作物遗传与特异种质创新教育部重点实验室，江苏南京 DPEEIK； 中国农业科学院，北京 PEEEQP； 中国农业科学院作物科学
研究所， 北京 PEEEQP）
摘
要：与其他禾本科作物以醇溶蛋白为主不同， 水稻种子含有醇溶蛋白和谷蛋白两种主要蛋白质贮藏形式。其中， 谷
禾谷类种子贮藏蛋白主要包含于胚乳中， 按其 溶解性差异分为球蛋白、 清蛋白、 谷蛋白和醇溶蛋 白。与小麦、 玉米和大麦等谷物以醇溶蛋白为主不 同， 水稻种子主要含有谷蛋白， 约占胚乳蛋白总量的 醇 溶 蛋 白 次 之， 含 量 在 GD E =CD 之 BCD E FCD ， ［=］ 间 ， 这些胚乳蛋白以蛋白体 （ 9!0($") 208-，HI） 形式 ［>］ 贮于胚乳中 。 =JFC 年， @+)+K+ 等从水稻成熟胚乳 （ 9!0($") 208-， 中分离出两种蛋白体， 即蛋白体 ! HIL ［=LM］ 和蛋白体 " （ HIL" ） 。其中， HIL! 由 =C、 =M、 !） 和 的多肽构成， 主要含有 、 、 =B GN K4 HI" >> >B MN、 MF 和 MJ K4 的多肽组分。分步分离进一步证实， HIL! 以醇溶蛋白为主， 并含有微量的球蛋白。 HIL" 则由 不同分子量的成熟谷蛋白构成， 并可分为 >> K4 和 ［O］ 两种类型 。然而， 水稻体内并不存在直 MN E MJ K4 因为谷蛋 接编码 >> K4 和 MN E MJ K4 多肽的转录本， 白基因原始翻译产物是一类氨基酸残基数目在 OJG E ［OLG］ 分子量约为 GN K4 的前驱体 。这些前 GCC 之间， 驱体经过穿膜、 剪切和酶解等一系列目前还不甚清 楚的复杂过程最终形成成熟谷蛋白亚基并贮存于蛋 ［BLJ］ 。 白体中 水稻谷蛋白基因属于多基因家族。自从 =JFB 年 @+K+"7+ 首次克隆到一个谷蛋白基因以来， 迄今至 （或 #456） ， 其中包含 > 个 少已克隆 J 个谷蛋白基因 ［=CL=O］ 假基因 （ !"#’%( 和 !"#$%) ） 。根据序列相似性可 将其分为 !"#’ 和 !"#$ 两个亚家族， 亚族内成员间 氨基酸序列相似性达到 FCD 以上， 亚族间在 BCD 左 ［NLF， ==］ 右 ， 每 个 亚 族 成 员 各 含 有 G E F 个 基 因 拷 贝。 然而， 谷蛋白合成途径的具体过程还不清楚， 众多未 知谷蛋白基因的存在更增加了上述研究的难度。尽 可能地克隆到所有谷蛋白基因将是解决上述难题的 有效为谷蛋白的深入研 究作出了有益的探索。
水稻B-box锌指蛋白基因OsBBX26的克隆及表达分析
水稻B-box锌指蛋白基因OsBBX26的克隆及表达分析作者：邓军罗正良朱菲莹陈希方勇任鄄胜任光俊高方远来源：《南方农业学报》2020年第07期摘要：【目的】克隆水稻B-box锌指蛋白基因（OsBBX26），并分析其在非生物胁迫下的表达模式，为探究水稻B-box蛋白的非生物胁迫响应机制提供理论依据。
【方法】以水稻模式品种日本晴为材料，采用RT-PCR克隆OsBBX26基因，对其进行生物信息学分析，并通过构建pBA-OsBBX26-YFP植物表达载体进行亚细胞定位。
同时，采用实时荧光定量PCR检测分析OsBBX26基因的组织特异性及非生物胁迫（干旱、ABA、低温和高盐）下的表达模式。
【结果】克隆获得的OsBBX26基因（LOC_Os08g42440）cDNA全长序列为1467 bp，编码488个氨基酸，其编码蛋白分子量为51.86 kD，理论等电点（pI）为6.63，包含1个B-box锌指结构域和1个CCT结构域，其中B-box结构域位于第13～60位氨基酸，CCT结构域位于第435～478位氨基酸，该蛋白定位于细胞核中。
OsBBX26基因位于8号染色体上，启动子区域除了含有TATA-Box和CAAT-Box等基本转录元件外，还含有与逆境相关的顺式作用元件，包括低温响应元件LTR、脱落酸响应元件ABRE、水杨酸响应元件TCA-element、厌氧响应元件ARE、茉莉酸甲酯响应元件CGTCA-motif和TGACG-motif，以及MYB转录因子结合位点。
OsBBX26蛋白与粳稻B-box蛋白亲缘关系最近，其次与籼稻B-box蛋白亲缘关系较近，与其他植物B-box蛋白也存在较高的相似性，其中与小米、大麦、高粱、玉米和短柄草B-box 蛋白的氨基酸序列相似性分别达72%、72%、71%、69%和68%。
OsBBX26基因在幼叶中的表达量最高，其次是在成熟叶片中，在幼根、成熟根、茎和幼穗中的表达量均极低，表明该基因表达具有明显的组织表达特异性。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
河北农业大学硕士学位论文水稻U-Box蛋白质在不同发育时期的表达分析姓名：陈浩申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：刘国振;李莉云2009-06-05摘要背景：真核生物基因组中广泛存在U-Box基因，其编码蛋白质大部分是泛素系统中决定底物特异性识别的E3蛋白质，其构象与RING-finger极其相似。
U-Box蛋白质能促进底物蛋白质泛素化降解，对细胞内异常蛋白质的降解及质量控制方面发挥着重要的作用。
水稻基因组中有77个U-Box蛋白质，系统了解他们的表达可为功能研究提供数据。
研究目的：制备针对水稻U-Box蛋白质的抗体，了解水稻中U-Box蛋白质在不同发育时期的表达信息，为功能研究积累数据。
材料与方法：选取5个水稻U-Box蛋白质，其共同结构特点为U-Box结构在N 端，C端有ARM结构重复。
用计算机软件预测抗原决定簇，细菌体系体外表达、纯化U-Box蛋白质的片段，免疫动物制备多克隆抗体，用Western blotting检测U-Box 蛋白质在水稻品种93-11苗期地上部和地下部、分蘖期根和茎、孕穗期剑叶和幼穗、开花期剑叶和穗子、成熟期剑叶和种子中的表达，并与EST数据库中公布的U-Box 基因EST数据进行了比较分析。
结果：体外克隆表达后，获得了纯化的蛋白质，制备的抗体特异性强，Western blotting 检测可见一条明显的主带，其中Os06g01304和Os12g38210两个蛋白质的表观分子量与预测分子量相符，Os01g66130、Os02g49950和Os08g01900三个蛋白质的表观分子量低于预测分子量。
5个U-Box蛋白质在水稻生长发育的不同时期或部位基本上是组成型表达，且表达量接近。
对NCBI上公布的来自274个文库的100万条以上的EST进行分析，可以看出5个U-Box蛋白质EST的数量分布大致均匀，与Western blotting结果揭示的组成型表达平行，与ATPase、HSP81-3、EGF-1 alpha和RuBisCo 等对照基因相比，U-Box基因的EST数目相对很少，说明它们属于低丰度转录的基因。
结论：选取5个水稻U-Box蛋白质，通过抗原决定簇预测，表达片段蛋白质，制备了特异性抗体，证明了这一技术路线的可行性。
利用抗体对水稻不同发育时期材料进行蛋白质表达谱研究，发现这些U-Box蛋白质呈组成型表达，与EST数据揭示的结果具有平行性。
所制备的抗体也为相关功能研究，如免疫共沉淀、ChIP-on-chip、Pull-down以及在抗病、抗逆反应中U-Box蛋白质的表达等积累了资源。
关键词: 水稻；U-Box；蛋白质表达；Western blottingExpression Analysis of Rice U-Box Protein at Different Developmental StagesAuthor: CHEN-HaoMajor: Biochemistry and Molecular BiologySupervisor: LIU Guo-zhenLI Li-yunAbstractBackground: The U-Box domain proteins, with similar configuration to RING finger proteins, are highly conserved among eukaryotic organisms and most of them belong to the ubiquitin/proteasome system as E3 ubiquitin protein ligases, U-Box containing proteins play a key role in the recognition and selection of abnormal proteins targeted for ubiquitination and subsequent degradation, a process for the maintenances and quality control of proteins exist in living cells. There are 77 U-Box genes in rice genome and the systematic investigation of their expression will provide basic information for the functional analysis.Aim: The generation of specific antibodies against rice U-Box proteins to investigate the expression profile of U-Box proteins at different developmental stages and accumulate basic information for functional studies.Materials and methods: Five rice U-Box genes were chosen as their U-Box domains were located at the N-terminal and posses ARM repeats at C-terminal. Epitopes prediction were carried out by computer software and the target protein fragments were expressed and the purified in E. coli. system. Polyclonal antibodies were generated by rabbit immunization. Western blotting analysis were carried out for rice material collected at different developmental stages including shoot and root at seedling stage, root and stem at tilling stage, flag leaf and young panicle at heading stage, flag leaf and panicle at flowering stage, flag leaf and seed at filling stage. Comparison analysis was carried out with EST sequencing data.Results: The U-Box genes were cloned. Specific antibodies were obtained by rabbit immunization of recombinant proteins expressed in E. coli. One major band were observed for Western blotting detection of rice U-Box proteins, the apparent molecular weight of two U-Box proteins (Os06g01304 and Os12g38210) were consistent with predicted size, while the other three proteins (Os01g66130, Os02g49950and Os08g01900) with apparent molecular weight smaller than that of predicted. Western blotting results indicated that the U-Box proteins were constitutively expressed with close abundance in tested tissues. EST analysis based on 1 million ESTs derived from 274 libraries from NCBI EST database revealed closed numbers of U-Box gene transcription, which is parallel with the results of constitutively expression of proteins. However, compared with the expression of ATPase,HSP81-3, EGF-1 alpha and RuBisCo, the number of ESTs for U-Box proteins were much lower, suggest the low abundance transcription of U-Box genes.Conclusions: Five rice U-Box proteins were chosen for the generation of specific antibodies via the expression of predicted epitope fragments, demonstrated the feasibility of the process. Western blotting analysis indicated that four U-Box proteins were constitutively expressed among tested rice tissues at different developmental stages, which is parallel with EST sequencing data. The antibodies will provide resources for functional studies, such as co-immunoprecipitation, ChIP-on-chip, Pull-down and stress response etc.Key words: Rice, U-Box, protein expression, Western blotting独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。