杜氏利什曼原虫
实验诊断
01
病原学检查
02
免疫学诊断法 分子生物学方法
03
04
黑热病诊断
一、病原学诊断
方法
涂片法
特点
骨髓穿刺最为常用，又以髂骨穿刺简便安全，原虫检出率为80%90%。淋巴结穿刺多选表浅、肿大的淋巴结，检出率低。
培养法
将上述穿刺物接种于NNN培养基中，置22~25℃温箱内。经一周后若 培养物中查见运动活泼的前鞭毛体，则判为阳性结果。
前鞭毛体
二分裂繁殖
白蛉：一类体小多毛的吸血昆虫 一周后 聚集在口腔和喙
生活史
二、在人体内发育
前鞭毛体 皮下组织 吞噬消灭
巨噬细胞
巨噬细胞破裂
游离的无鞭毛体
生活史
二、在人体内发育
侵入巨噬细胞的机制： 首先黏附于巨噬细胞，再进入该细胞。 黏附的途径： 1. 配体-受体途径； 2. 前鞭毛体吸附的抗体和补体与巨噬细胞表面的Fc或C3b受 体结合途径。 在调整或封闭这些受体后，可大大减少前鞭毛体与巨噬细胞的 结合。
把穿刺物接种于易感动物（如金黄地鼠），1~2月后取肝、脾作印 片或涂片，瑞氏染液染色镜检。 在皮肤结节处用消毒针头刺破皮肤，取少许组织液，或用手术刀刮 取少许组织作涂片，染色镜检。
动物接种法
皮肤活组织检查
二、免疫诊断法
酶联免疫吸附试验（ELISA），间接血凝试验（IHA），对流免疫电泳 抗体检测 （CIE），间接荧光试验（IF）均可采用。斑点-ELISA阳性检出率高，
杜氏利什曼原虫 生活史&实验诊断
生活史
杜氏利什曼原虫需要两个宿主：白蛉和人或者哺乳动物。
犬是其重要的保虫宿主。
感染阶段：前鞭毛虫体寄生在白蛉胃里，是杜氏利什曼原虫的 感染阶段。
致病阶段：无鞭毛体寄生在人或者哺乳动物的巨噬细胞内
感染方式：白蛉钉刺吸血
生活史
一、在白蛉体内发育
24h后 无鞭毛体 白蛉胃里 早期前鞭毛体 48h后
但常出现交叉反应，且抗体短期不宜消失，不宜用于疗效考核。
单克隆抗体抗原斑点试验（McAb-AST）检测血内循环抗原诊断黑热
循环抗原检测
病，阳性率高达97.3%，假阳性率仅0.2%，敏感性、特异性、重复性
均较好，需血清量少（2μl）。也可用于定量测定，还可用于现行感染， 疗效考核。
三、分子生物学方法
2
3
免疫学检查出抗原，或其他方法检测阳性 骨髓穿刺涂片检测查见利氏曼原虫无鞭毛体， 或穿刺物培养出前鞭毛体
4
PCR方法：聚合酶链反应（PCR）及DNA探针技术
01
检测黑热病取得较好的效果，敏感性、特异性高；特 别适合于合并HIV感染的黑热病
快速试纸法：利用重组抗原rk39制备dipstick试纸条，
02
阳性率100%，简便易行，携带方便，2-3分钟可得到
结果
：
1曾于Biblioteka 蛉活动季节（5~9月）到过流行区； 临床表现呈起病缓慢，反复不规则发热，中 毒症状相对较轻，肝、脾肿大；
杜氏利什曼原虫
2、淋巴结型黑热病：几十例
无病史、局部淋巴结肿大、表浅、 无压痛、无红肿、嗜酸性粒细胞 增多。 上述两型均可在组织内查到无鞭毛体
四、免疫
无先天免疫力, 故多发于婴儿及儿童 黑热病愈后, 可获得较强抗再感染能力 细胞免疫为主，抗体参与应答
五、虫体在巨噬细胞内存活机理
1、GP63和LPG（虫源）与宿主血中C3结合，再与 Mф C3受体结合，Mф不发生呼吸暴发
• 皮肤型：硕大、热带、埃塞俄比
亚、墨西哥、秘鲁 利什曼原虫
• 皮肤粘膜型：巴西利什曼 • 内脏型：杜氏利什曼原虫
（我国主要为此种）
我国：杜氏利什曼原虫引起发热、肝
脾肿大、贫血、鼻衄等
印度：常出现皮肝色素沉着，又有发
热，故称Kala-azar，意为黑 热，即黑热病。 此病如不即时治疗，死亡率高达90% 钟惠澜教授1939年证实犬黑热病病原 体可感染人
体前鞭毛 一根
无
寄生部位 白蛉消化道 人巨噬细胞内
发育温度 22-28℃
37℃
活动性
有、鞭毛运动 无
血红素 有
无
(二)前鞭毛体侵入巨噬细胞分子基础
• 粘附
前鞭毛体表膜蛋白（PSP）—GP63的RGD （精-甘-天冬）序列与人Μф的受体结合 （配体-受体途径）
虫表膜磷酸脂多糖（LPG）吸附抗体，激活 补体，使C3bi粘附于虫表膜，与ΜфC3bi受 体结合（抗体-补体-受体途径）； LPG占表 膜25%，具免疫原性
杜氏利什曼原虫
（Leishmania donovani（Laveran & Mesnil，1903）Ross，1903）
动基体目、锥虫科、利什曼属.7个种 Leishman（1903）和Donovan（1903） 同时在印度病人体内找到无鞭毛体 Ross定名 ，我国1904年在一德国士兵 体内查获病原体。
杜氏利什曼原虫
六、防治
1. 治疗病人 首选葡萄糖酸锑钠。 2. 杀灭病犬。 3. 消灭白蛉和加强个人防护。
肝肿大→肝功能损害→白蛋白合成
减少。 肾功能损害（Ⅲ型变态反应所致） →使部分白蛋白从尿中排出。 浆细胞增生 →球蛋白增加，结果导 至血浆白蛋白/球蛋白比例倒置。
临床表现
长期不规则发热（黑热病）， 肝、脾、淋巴结肿大，贫血，血浆 白蛋白/球蛋白比例倒置，患者常有 出血倾向（鼻衄和齿龈出血），消 瘦等症状。儿童还可引起发育迟 缓。 蛋白尿与血尿：Ⅲ型变态反应 导致肾功能损害。
2. 免疫学检查
(1)检测血清循环抗原：用单克隆抗体抗原斑点试验(McAb-AST)来诊断黑热病， 其阳性率可达97.03%，假阳性0.2%。敏感 性、特异性、重复性均较好。 (2)检测血清抗体：如 ELISA, IHA, IFA, dot-ELISA等。
(3)利什曼素皮内试验（LDT）：用于
疗效考核和流行病学调查。
鞭毛体（油镜）
杜氏利什曼原虫生活史
二、生活史
需要两个宿主即白蛉（♀）和人或其 它哺乳动物。 1. 在白蛉体内发育 利杜体 →早期前鞭毛体 →成熟前鞭 毛体。 2. 在人体内的发育 成熟前鞭毛体→利杜体。
生活史要点
1. 致病期 利杜体（无鞭毛 体）寄生于宿主的巨噬细胞内 。 2. 感染期 前鞭毛体（在媒 介昆虫白蛉的喙部） 。 3. 感染方式 自然情况下为 经媒介昆虫传播；输血也能感染 其感染期为利杜体。
在我国只有杜氏利什曼 原虫引起的内脏利什曼病， 即黑热病流行，主要流行地 区为黄河以北的广大地区。
一、形态
各种利什曼原虫的形态和结 构无明显差别，有无鞭毛体和前 鞭毛体二个阶段。 1.无鞭毛体 又称利杜体，寄 生于哺乳动物（包括人）的巨噬 细胞内，如肝、脾、骨髓和淋巴 结等处的巨噬细胞。
黑热病名词解释
黑热病名词解释
黑热病又称内脏利什曼病，是杜氏利什曼原虫（黑热病原虫）所引起的慢性地方性传染病。
传染源是患者和病犬（癞皮狗），通过白蛉传播。
每年5～8月为白蛉活动季节，白蛉吸吮患者的血液时，原虫便进入白蛉体内，发育繁殖成鞭毛体，7天后白蛉再次叮咬人体时，将鞭毛体注入，即可引起感染。
原虫主要寄生在患者的血液、肝、脾、骨髓和淋巴结中。
主要临床表现是发热，可伴随盗汗、食欲不振、疲乏无力、头晕目眩、肝脾和淋巴结肿大、贫血和营养不良等表现；病程晚期，病人可表现出精神不振、心悸、面色萎黄、浮肿和皮肤粗糙，皮肤颜色变深，故称黑热病。
病人及病犬为主要传染源，以白蛉叮咬传播为主，部分可经过口腔粘膜、破损皮肤、胎盘及输血等传播，人群普遍易感，病后可获得较长期的免疫。
以上信息仅供参考。
人体寄生虫学杜氏利什曼原虫
杜氏利什曼原虫概述俗称黑热病原虫主要病变在内脏引起内脏利什曼病皮肤上常有暗的色素沉着，并伴有发热俗称“黑热病”黑热病是我国五大寄生虫病之一形态无鞭毛体/利杜体前鞭毛体/鞭毛体寄生于人或脊椎动物巨噬细胞内大小：2-5μm寄生于白蛉消化道内卵圆形有一较大圆形细胞核动基体基体发出一条根丝体结构细胞质-淡蓝色细胞核-红色或淡紫色位于核对端细小、杆状或点状动基体-紫红色位于动基体前方光镜下不可见基体和根丝体成熟的虫体呈梭形长10-20μm结构细胞核位于虫体中部基体位于动基体之前由此发出一根鞭毛，游离于虫体外吉姆萨染色着色特征与无鞭毛体相同吉姆萨染色培养基内常以虫体前端聚集成团呈“菊花状”生活史需在白蛉和人体2个宿主内发育完成生活史白蛉体内雌性白蛉叮刺病人→无鞭毛体进入其消化道，发育为前鞭毛体，进行二分裂繁殖第7d具有感染力的前鞭毛体大量聚集在白蛉口腔和喙人体内感染雌性白蛉叮刺健康人→虫体随白蛉唾液进入人体→→部分被多形核白细胞吞噬消灭→一部分进入巨噬细胞，向无鞭毛体转化无鞭毛体在巨噬细胞内可存活，进行分裂繁殖，最终巨噬细胞破裂游离的无鞭毛体侵入新的巨噬细胞，重复上述增殖过程要点过程寄生部位巨噬细胞内感染阶段前鞭毛体传播途径主要-白蛉叮刺传播偶可经口腔粘膜、破损皮肤、胎盘或输血传播传播媒介白蛉保虫宿主狗诊断阶段无鞭毛体致病致病机制无鞭毛体在巨噬细胞内繁殖，使巨噬细胞大量破坏和增生巨噬细胞增生主要见于脾、肝、淋巴结、骨髓等器官浆细胞大量增生细胞增生是器官肿大基本原因临床表现脾肿大贫血黑热病主要体征是黑热病重要症状之一全血象减少：即血液中红细胞、白细胞、血小板都减少原因脾功能亢进，血细胞在其内被大量破坏免疫溶血、骨髓造血功能被抑制白蛋白与球蛋白比例倒置肝细胞合成白蛋白明显↓浆细胞增生→球蛋白↑尿蛋白、尿血可能与患者发生肾小球淀粉样变性以及肾小球内有免疫复合物的沉积相关我国黑热病特殊类型皮肤型黑热病多数为结节型呈大小不等的肉芽肿，或暗色丘疹状常见于面部和颈部淋巴结型黑热病无黑热病病史局部淋巴结肿大，大小不一较表浅，无压痛和红肿诊断病原检查检查出病原体即可确诊方法检出率为80%-90%最常用-骨髓穿刺涂片法淋巴结穿刺法检出率约46%-87%应选取浅表的肿大淋巴结DNA诊断敏感性高、特异性强可确定虫种流行对黑热病诊断应综合考虑于白蛉活动季节（5-9月）到达过流行区临床表现为起病缓慢，反复不规则发热，肝脾肿大全血细胞减少，球蛋白试验阳性，免疫学检出抗原或DNA阳性主要流行于印度和地中海沿岸国家流行环节传染源病人、病犬、某些野生动物传播途径主要为白蛉叮刺中华白蛉是我国黑热病主要媒介易感人群普遍易感病后免疫力持久防治预防治疗首选葡萄糖酸锑钠（斯锑黑克）锑剂无效则用戊烷脒疗效达97.4%杀灭病犬和白蛉个人防护，防治叮咬有效治疗后终生免疫。
杜氏利什曼原虫
一、形态
（一）无鞭毛体
寄生于人和多种脊椎动物
单核巨噬细胞内
呈卵圆形
有一大而圆的核
动基体位于核前，旁有一
基体
6
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（二）前鞭毛体
寄生于白蛉消化道内
呈梭形
核位于虫体中部
动基体在核前，动基体前 有一基体，发出一鞭毛游
离于虫体外
7
7
二、生活史
(一)生活史模式图
8
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（二）生活史过程
病原生物学与免疫学
第十九章 寄生于脉管或组织的原虫
第一节 杜氏利什曼原虫
一、形态 二、生活史 三、致病 四、实验室诊断
3
五、流行与防治
3
学习目标
了解 杜氏利什曼原虫的形态、生活史、致病、实 验室诊断、流行与防治。
4
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第一节 杜氏利什曼原虫
寄生于人体的利什曼原虫 杜氏利什曼原虫：内脏利什曼病（黑热病） 巴西利什曼原虫：黏膜皮肤利什曼病 热带利什曼原虫：皮肤利什曼病 墨西哥利什曼原虫：皮5肤利什曼病
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（二）临床表现
2. 淋巴结型利什曼病 全身多处淋巴结肿大，淋巴结活检可查见
无鞭毛体 3. 皮肤型利什曼病 常发生皮肤溃疡，多在肘、膝、腕关节等处
12
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四、实验室诊断
（一）病原学检查 1.骨髓、淋巴结穿刺检查
直接涂片法查无鞭毛体 接种NNN培养基培养，查前鞭毛体 动物接种，查无鞭毛1体3 2. 皮肤结节或淋巴结活检
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四、实验室诊断
（二）血清学检查 可用于黑热病的辅助诊断 血清抗体检测 循环抗原检测
（三）分子生物学检查 14 PCR、DNA探针技术检测原虫核酸，已用于临 床黑热病的诊断。
杜氏利什曼原虫
第一节杜氏利什曼原虫利什曼原虫（Leishmania spp.）的生活史有前鞭毛体（promastigote）和无鞭毛体（amastigote）两个时期。
前者寄生于节肢动物（白蛉）的消化道内，后者寄生于哺乳动物或爬行动物的细胞内，通过白蛉传播。
对人和哺乳动物致病的利什曼原虫有：引起人体内脏利什曼病的为杜氏利什曼原虫[Leishmania donovani（Laveran et Mesnil，1903）]，引起皮肤利什曼病的为热带利什曼原虫[L．tropica（Wright，1903）Lühe，1906]和墨西哥利什曼原虫[L．mexicana(Biagi，1953)Garnham，1962]，引起粘膜皮肤利什曼病的为巴西利什曼原虫（L．araziliensis Vianna，1911）等。
我国的黑热病是由杜氏利什曼原虫引起的。
杜氏利什曼原虫的无鞭毛体主要寄生在肝、脾、骨髓、淋巴结等器官的巨噬细胞内，常引起全身症状，如发热、肝脾肿大、贫血、鼻衄等。
在印度，患者皮肤上常有暗的色素沉着，并有发热，故又称Kala-azar，即黑热的意思。
因其致病力较强很少能够自愈，如不治疗常因并发病而死亡。
形态寄生于人和其它哺乳动物单核吞噬细胞内的无鞭毛体又称利什曼型（Leishmania form）或利杜体（Leishman－Donovan body），虫体很小，卵圆形虫体大小为2.9～5.7×1.8～4.0µm；圆形虫体直径为2.4～5.2µm，常见于巨噬细胞内。
经瑞氏染液染色后原虫细胞质呈淡蓝色或深蓝色，内有一个较大的圆形核，呈红色或淡紫色。
动基体（kinetoplast）位于核旁，着色较深，细小，杆状（图11－1）。
在1000倍的镜下有时可见虫体从前端颗粒状的基体（basal body）发现一条根丝体（rhizoplast）。
基体靠近动基体，在光镜下不易区分开。
在透射电镜下，虫体由内外两层表膜包被。
人卫版人体寄生虫学之杜氏利什曼原虫教学护理课件
心理支持
给予患者心理支持，帮助他们克服恐 惧和焦虑情绪。
健康教育
向患者及家属宣传防治知识，提高他 们的自我保护意识。
05
杜氏利什曼原虫的预防 与控制
预防措施
避免与患者血液和体液接触
医护人员和患者应避免直接接触患者的血液和体液，使用防护手 套、口罩等个人防护用品。
避免昆虫叮咬
采取防蚊措施，如使用蚊帐、驱蚊液等，以减少昆虫叮咬传播的风 险。
免疫学检测
利用特异性抗体检测患者血清中的 杜氏利什曼原虫抗原，有助于快速 诊断和鉴别。
鉴别诊断
其他热带病
其他寄生虫感染
杜氏利什曼原虫感染常与其他热带病 混淆，如疟疾、黑热病等，需通过病 原学和免疫学检测进行鉴别。
杜氏利什曼原虫感染需与其他寄生虫 感染进行鉴别，如弓形虫病、肺吸虫 病等。
免疫缺陷相关疾病
免疫缺陷患者易感染杜氏利什曼原虫 ，需与免疫缺陷相关的其他疾病进行 鉴别。
误诊与漏诊的预防
提高认识
加强对杜氏利什曼原虫感染的认 识，熟悉其临床表现和诊断方法
，提高诊断准确性。
综合分析
结合患者临床表现、病原学和免 疫学检测结果进行综合分析，避 免单一方法导致的误诊和漏诊。
动态观察
对疑似病例进行动态观察，及时 调整诊断和治疗方案，减少误诊
症状表现
01
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发热
杜氏利什曼原虫感染后，患者 可能会出现不规则的发热，持 续时间较长，可能伴随寒战。
疲乏无力
患者感到极度疲乏，四肢无力 ，精神萎靡，无法正常工作或
进行日常活动。
肝脾肿大
肝脏和脾脏肿大，质地坚硬， 有压痛。
淋巴结肿大
全身淋巴结肿大，质地柔软， 无压痛。
杜氏利什曼原虫
粒细胞增多。
诊断
• 病原学检查
– 组织穿刺涂片镜检无鞭毛体
• 骨髓穿刺：安全、常用，检出率85% • 淋巴结穿刺：常用于疗效考核 • 肝穿、脾穿：检出率高，但危险性大
– 穿刺物培养：常用N.N.N培养基 – 皮肤结节刮片：用于检查皮肤型黑热病
• 免疫学检查：检测血清抗体、血清循环抗原、皮试 • 分子生物学方法：PCR、DNA探针技术
利什曼原虫
• 生物学地位
– 属动鞭纲动基体目（Kinetoplastida)、锥虫科 （Trypansomatidae)、利什曼属（Leishmania)
• 人体寄生的常见种类
–杜氏利什曼原虫（L.donovani)——内脏型 –热带利什曼原虫（L.tropica)——皮肤型 –巴西利什曼原虫（L.brasiliensis)——皮肤粘膜型 –墨西哥利什曼原虫（L.mexicana)——颜面溃疡型
流行
• 世界三大流行区
– 中国、印度、地中海盆地
• 中国流行区的划分及流行现状
– 平原型：人源型，病犬少见，媒介为家栖性中华白
蛉
– 山区丘陵型：动物源型，多儿童感染，病犬多, 野
栖性中华白蛉为媒介
– 荒漠型：传染源不清楚（野生动物源型？）媒介为
吴氏白蛉、亚历山大白蛉
防治
• 消灭传染源
– 捕杀病犬 – 及早治疗病人：葡萄糖酸锑钠，治愈率97.4%，对锑 剂抗药者可选用喷他脒、司替巴脒等
故又称“黑热病后皮肤利什曼病”
• 结节型（瘤麻风型）：肉芽瘤性结节，不痛不痒 不溃烂，局部不麻木，结节内可找到无鞭毛体 • 丘疹、褪色斑型：皮肤上出现暗红色含虫丘疹，
或大小不等的褪色斑疹
医学原虫杜氏利什曼原虫其他
免疫诊断 ID、IFA、IHA 、CIEP、ELISA等
流行
分布：长江以北16省、市、自治区 传染源：病人及保虫宿主 具自然疫源性
防治
治疗病人、捕杀病犬 治疗药物：葡萄糖酸锑剂、戊烷脒 消灭传播媒介 加强防护，防止白蛉叮咬
第三节 蓝氏贾第鞭毛虫 Giardia lamblia
引起贾第虫病. 多见于儿童和旅游者,又称“旅游者腹 泻”
形态：滋养体
核 吸盘
鞭毛
中体
轴柱
大小:9～21×5～15 μm
形态：包囊
大小:10～14×7～9 μm 鞭毛 核 轴柱 中心体
囊壁与虫体间有明显间隙
生活史
生活史小结
感染阶段:成熟包囊 感染方式:口 寄生部位: 十二指肠上部和胆道 滋养体随未成型的粪便排出. 保虫宿主：家畜、野生动物
防治
• 治疗病人或带虫者
常用药物：Metronidazole甲硝唑（灭滴灵）
• 管理粪便及水源 • 注意饮食和饮水卫生
第四节 阴道毛滴虫 Trichomonas vaginalis
引起滴虫病 滴虫性阴道炎 尿道炎
STD
形态：滋养体
鞭毛 (波动膜)
核 长轴柱)
大小: 7 ～ 32× 10 ～ 15μm
百蛉
致病
发病机理:
无鞭毛体寄生并破坏巨噬细胞，使全身组织（除脑、脊髓）受累，以
肝、脾、骨髓、淋巴结为重
临床表现：
1. 不规则发热；
2. 全身性贫血 3. 肝、脾、淋巴结肿大 4. 鼻衄、齿龈出血
贫血机制： ➢脾功能亢进；➢来自髓造血功能障碍；➢免疫溶血
本病免疫特点？
寄生虫-杜氏利什曼原虫
消瘦、贫血，以及出血现象（鼻衄、齿龈出血）等
皮肤型黑热病：皮肤肉芽肿结节，暗红色丘疹等
L. donovani – Hepatosplenomegaly
L. donovani - Splenomegaly
在我国黑热病有下列特殊临床表现： 1. 皮肤型黑热病：少数为褪色型外，多数为结节型。 结节呈大小不等的肉芽肿，或呈暗色丘疹状，常见 于面部及颈部，在结节内可查到无鞭毛体。
内脏利什曼病的流行形势严重，对流行区婴幼儿的身体健康
和生命安全构成重要威胁。随着贫穷、营养不良和无免疫新 生儿的增多，婴幼儿内脏利什曼病有扩散趋势，亟需引起重 视并采取有效的防治措施。
防治原则
查治病人：注射低毒高效的葡萄糖酸锑纳，疗效可达97.4％； 抗锑病人采用戊脘脒、二脒替、羟眯替；经多种药物治疗无
（2）犬源型：多见于西北、华北和东北的丘陵山区，分布
在甘肃、青海、宁夏、川北、陕北、冀东北、辽宁和 北京市郊各县，传染源以病犬为主，儿童、婴儿病人
为主，传播媒介为近野栖或野栖型中华白蛉。
（3）自然疫源型：分布在新疆和内蒙古的某些荒漠地区， 亦称荒漠型，2岁以下儿童患者为主，传播媒介为野栖
蛉种，主要是吴氏白蛉，亚历山大白蛉次之。
2. 淋巴结型黑热病：特征是无黑热病病史，局部淋
巴结肿大，大小不一，位较表浅，无压痛，无红肿，
嗜酸性粒细胞增多。淋巴结活检可在类上皮细胞内
查见无鞭毛体。
病原学检查
1、穿刺检查 （1）涂片法以骨髓、淋巴结或脾穿刺物作涂片、染色、镜检。
①骼骨穿刺，简便安全，原虫检出率80％～90％，最常用。
②淋巴结穿刺，检出率46％～87％。也可作淋巴结活检。穿