甲醛对DNA损伤的彗星实验研究
用彗星实验技术检测环境遗传毒性物质
用彗星实验技术检测环境遗传毒性物质
陈颖;王磊;王子健
【期刊名称】《土壤学报》
【年(卷),期】2006(43)4
【摘要】彗星实验(COMET Assay)是近年发展起来的在单细胞水平上定量检测DNA损伤的灵敏方法.经过不断改进和完善,用该方法检验的基因损伤已成为鉴别遗传毒性物质的敏感标记物,在致癌作用机制、环境污染监测以及环境毒理和风险评价等研究中,均发挥了重要作用,国内已有越来越多的研究人员开始采用这项技术.本文对彗星实验技术的发展过程、在环境中的应用以及未来的发展趋势进行综述,以利科研人员更加准确地掌握该技术,合理解释有关数据,来推动其进一步的应用和发展.
【总页数】6页(P673-678)
【作者】陈颖;王磊;王子健
【作者单位】中国科学院生态环境研究中心,北京,100085;中国21世纪议程管理中心,北京,100089;中国科学院生态环境研究中心,北京,100085
【正文语种】中文
【中图分类】X171.5;X131.3
【相关文献】
1.彗星实验检测渤海主要入海河流遗传毒性 [J], 洛昊;梁斌;马明辉;张振冬;张志峰
2.铅、铬胁迫对大弹涂鱼血细胞遗传损伤的彗星实验检测 [J], 梁亚芳;苗亮;李明云;
赵亮;李笑萌;徐玉敏;陈炯
3.检测环境遗传毒性物质的SOS诱导活性的Rec—lac试验 [J], Nunos.,T;周春生
4.SOS／umu测试法检测大气颗粒中致遗传毒性物质的初步试验 [J], 卢纯惠;王中民
5.用彗星实验和微核实验检测地面水污染的遗传毒性效应 [J], 齐宝宁;唐国慧;李劲松;易建华;郭剑锋;苗江丽
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彗星实验方法学的改进用于DNA损伤检测
彗星实验如 Ｏｓｔｌｉｎｇ和 Ｊｏｈａｎｓｏｎ（１９８４）所描述的， 并且代表性地应用于双链 ＤＮＡ断裂的检测［２，３］；而碱性
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｃｌａｓｓｉｃａｌａｎｄｗｉｄｅｌｙ－ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄｃｏｍｅｔａｓｓａｙ（ＴｈｅＳｉｎｇｌｅｃｅｌｌｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓａｓｓａｙ）ａｎｄｍａｋｅ ｉｔｍｏｒｅｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｃｌｉｎｉｃａｌａｎｄｒｅｓｅａｒｃｈｐｕｒｐｏｓｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｂｌｏｏｄｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍ ｆｉｖｅＦａｎｃｏｎｉａｎｅｍｉａｐａｔｉｅｎｔｓｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄａｓｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｓ ａｎｄｃｏｒｄｂｌｏｏｄｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍ３０ｎｅｗｂｏｒｎｂａｂｉｅｓａｓｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｓｔｏｃｏｎｄｕｃｔｃｏｍｅｔａｓｓａｙｓｉｎｏｒｄｅｒｔｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅａｃｃｕｒａｃｙａｎｄｃｏｎｃｏｒｄａｎｃｅｂｅ ｔｗｅｅｎｔｈｅｃｌａｓｓｉｃａｌａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｄｃｏｍｅｔａｓｓａｙｓ．Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎ，１５ｃｌｉｎｉｃａｌｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｔｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅａｃｃｕｒａｃｙａｎｄｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓｏｆｔｈｅ ｃｏｍｅｔｔｅｓｔｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｂｙｉｍｐｒｏｖｅｄａｓｓａｙｗｉｔｈｔｈａｔｃｏｎｄｕｃｔｅｄａｔｔｈｅＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＲａｄｉａｔｉｏｎＭｅｄｉｃｉｎｅｉｎｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｉｍｐｒｏｖｅｄａｓｓａｙｓｈｏｗｅｄｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆ１００％ ｏｆａｃｃｕｒａｃｙａｎｄｃｏｎｃｏｒｄａｎｃｅｗｉｔｈｔｈａｔｏｂｔａｉｎｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｌａｓｓｉｃｃｏｍｅｔａｓｓａｙ．Ｃｏｎ ｃｌｕｓｉｏｎ Ｉｎｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｗｉｔｈｔｈｅｃｌａｓｓｉｃａｌｃｏｍｅｔａｓｓａｙ，ｉｍｐｒｏｖｅｄｃｏｍｅｔａｓｓａｙｉｓｅａｓｉｅｒｔｏｐｅｒｆｏｒｍ ｗｉｔｈｓｈｏｒｔｅｒｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｔｉｍｅ，ａｎｄｃａｎｇｅｎｅｒａｔｅ ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ，ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ，ａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅｔｅｓｔｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｗｉｔｈｃｌｅａｒｅｒａｎｄｍｏｒｅｉｎｆｏｒｍａｔｉｖｅｉｍａｇｅｓ；ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎ，ｉｍｐｒｏｖｅｄａｓｓａｙｉｓｌｏｗｅｒｃｏｓｔ，ｓａｆｅｒｔｏ ｐｅｒｆｏｒｍ，ａｎｄｍｏｒｅｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｌｙｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ．ＩｍｐｒｏｖｅｄｃｏｍｅｔａｓｓａｙｃａｎｂｅｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄａｓａｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌｍｅｔｈｏｄｔｏｄｅｔｅｃｔＤＮＡ ｄａｍａｇｅｆｏｒ ｃｌｉｎｉｃａｌａｎｄｒｅｓｅａｒｃｈｐｕｒｐｏｓｅｓ．
气态甲醛致小鼠脑细胞遗传毒性的研究
气态甲醛致小鼠脑细胞遗传毒性的研究
杨光涛;徐钱;娄小华;吴凯;王黎明;李艳;柯翔鸿;杨旭
【期刊名称】《公共卫生与预防医学》
【年(卷),期】2006(17)1
【摘要】目的检测经不同浓度气态甲醛暴露后所致小鼠脑细胞的遗传损伤。
方法用不同剂量气态甲醛(0.5,1.0和3.0 m g/m3)对小鼠进行连续动态染毒处理72 h,利用单细胞凝胶电泳技术(又称彗星实验)检测脑细胞的DNA损伤。
结果吸入浓度为0.5和1.0 m g/m3的甲醛后,可造成脑细胞DNA的严重断裂,而3.0 m g/m3的甲醛则引起显著的交联作用。
结论气态甲醛可造成脑细胞DNA的断裂和交联。
【总页数】3页(P7-9)
【关键词】气态甲醛;脑细胞;DNA损伤;单细胞凝胶电泳
【作者】杨光涛;徐钱;娄小华;吴凯;王黎明;李艳;柯翔鸿;杨旭
【作者单位】华中师范大学生命科学学院
【正文语种】中文
【中图分类】R994.6;R971.2
【相关文献】
1.气态甲醛致小鼠骨髓细胞DNA-蛋白质交联的研究 [J], 程文文;李兰;胡传禄;魏晨曦;杨旭;丁书茂
2.气态甲醛对卡氏毛园蛛细胞遗传毒性的研究 [J], 徐晓宇;肖国强;刘凤想;彭光银;彭宇;陈建;杨旭
3.气态甲醛对人体颊黏膜细胞遗传毒性的研究 [J], 鲁志松;严彦;乔琰;姚汉超;杨旭
4.气态甲醛吸入对小鼠肺组织毒性损伤的研究 [J], 刘凯华;郝晓宁;吴丹丹;谭月;梅茹洁;户晓雅;刘静静
5.液态甲醛致金鱼脑细胞遗传毒性的研究 [J], 李中振;李玲;王黎明;丁书茂;杨旭因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
甲醛对大鼠脑组织超氧化物歧化酶和脑细胞DNA损伤影响的研究【文库论文】
甲醛对大鼠脑组织超氧化物歧化酶和脑细胞DNA损伤影响的研究======================================================================作者：于雪飞王震王娇高萌贺梦雅冯丹赵冬梅【摘要】目的研究甲醛染毒对大鼠脑组织超氧化物歧化酶( SOD)和脑细胞DNA损伤的影响。
方法采用腹腔注射方式给大鼠染毒，15只大鼠随机均分为对照组(生理盐水)、低剂量甲醛组0.2 mg /kg(1/ 2000 LD50)、高剂量甲醛组20.0 mg/kg(1/ 20 LD50);每天1次，染毒7 d。
染毒结束后，检测大鼠脑组织SOD的含量，利用单细胞凝胶电泳技术(彗星实验)检测脑细胞DNA损伤。
结果高剂量染毒组大鼠脑组织的SOD 的活力[(12.89±2.12)U/mg Pro]低于对照组[(16.34±2.68)U/mg Pro] (P<0.05) ;腹腔注射甲醛可导致脑细胞DNA片段断裂，高剂量甲醛组彗星尾巴明显长于对照组。
结论甲醛可使脑组织SOD 活力下降，造成脑细胞DNA 的断裂;甲醛对大鼠中枢神经系统具有一定的毒性作用。
【关键词】甲醛;超氧化物歧化酶;DNA;单细胞凝胶电泳【Abstract】 Objective To study the effect of formaldehyde on superoxide dismutase(SOD) in the cerebral tissues and DNA damage of brain cells of rats.Methods The rats in control group were exposed to 0.9 % NaCl at 0.1 ml/ 10 g,the rats in low and high dose groups were exposed to formaldehyde with 0.2 and 20.0 mg/kg,once per day for seven days.Then SOD in the cerebral tissues were tested, and single cell gel electrophoresis technique (comet assay) was used to test the DNA damage of the brain cells.Results The activity of SOD in high dose group [(12.89±2.12)U/mg Pro] showed a significant decrease compared with cont rol group [(16.34±2.68)U/mgPro](P<0.05).Formaldehyde could significantly cause the break up of the DNA strands.The tail of comet in high dose group was longer than that in control group.Conclusion Formaldehyde can decrease theactivity of SOD in cerebral tissues, and cause break up of DNA strands.Formaldehyde has obvious toxic effects on central nervous system in rats.【Key words】 formaldehyde，superoxide dismutase，DNA，singlecell gel electrophoresis technique甲醛存在于多种工业及民用产品中，是一种重要的环境污染物。
比较碱性彗星试验与γH2AX法评价甲醛诱导的DNA交联
1 材料与方法ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
溶媒对照（ddH2O）使用本中心 MilliQ-A10 超纯水机 生产的超纯水，121 ℃、15 min 高压灭菌，4 ℃ 冰箱保存； DNA 断裂阳性剂 H2O2 和 DNA 交联阳性剂甲醛购自国 药集团化学试剂北京有限公司；RPMI 1640 培养基、1% 青 链霉素混合液、0.25% 胰蛋白酶-EDTA 和胎牛血清均购自 美国 Gibco 公司；溴化乙锭购自上海阿拉丁生化科技股份 有限公司，用 ddH2O 配成 1 μg/ml 溶液，避光保存；小牛 胸腺 DNA 购自北京索莱宝科技有限公司，用 Tris-EDTA 缓冲液（10 mmol/L Tris、1 mmol/L EDTA）配成 1 mg/ml 和 3 mg/ml 溶液，4 ℃ 保存；perm/wash buffer（554723）和 Alexa Fluor® 647 Mouse anti-H2AX（pS139）（560447）购自 碧迪医疗器械（上海）有限公司；Comet Assay® Kit 彗星检 测试剂盒购自美国 Trevigen 公司；Hoechst 33342 购自美 国 Invitrogen 公司。
基 金 项 目 ： 国 家 十 三 五 “ 重 大 新 药 创 制 ” 科 技 重 大 专 项 （ 2018ZX 09201017） 作者单位：100176 北京，中国食品药品检定研究院国家药物安全评价 监测中心/药物非临床安全评价研究北京市重点实验室（文海若、任璐、 姜华、耿兴超、李波、王雪）；510006 广州，中山大学药学院（任璐、 黄芝瑛）；100015 北京，珀金埃尔默企业管理（上海）有限公司（王瑜、 李艳秋） 通 信 作 者 ： 王 雪 ， Email ： xue_wang@ ； 黄 芝 瑛 ， Email ： hzhiying@ 收稿日期：2018-08-30 *同为第一作者
彗星实验技术在不同细胞DNA损伤检测中的应用
彗星实验技术在不同细胞DNA损伤检测中的应用作者：陈果李晔来源：《中国高新技术企业》2016年第06期摘要：文章对彗星实验在不同真核生物细胞DNA损伤中的应用进行了总结，并介绍了基于彗星实验对植物、动物、人体细胞损伤的研究成果，同时也对彗星实验的应用范围、发展趋势和前景做出了展望。
关键词：彗星实验技术；DNA损伤；真核细胞；损伤检测；遗传毒理问题文献标识码：A中图分类号：Q523 文章编号：1009-2374（2016）06-0055-03 DOI：10.13535/ki.11-4406/n.2016.06.028随着经济的快速发展、城市化进程加快，环境问题成为人们日益关注的热点问题。
工业三废、电离辐射、化学农药等有毒有害物质对生物界造成了极大的危害，它们不但影响生物的生命活动，而且会影响下一代的遗传性状。
因此，研究DNA损伤等遗传毒理问题对于环境安全评价具有重要的意义。
目前，DNA损伤的检测方法可以分为间接检测DNA损伤和直接检测DNA损伤。
彗星实验是直接检测DNA损伤的一种方法，也称单细胞凝胶电泳，1984年由Ostling建立，经Singh 等改进。
该检测方法具有灵敏度高、所需样品量少、应用范围广、材料消耗少、技术简单、时间短、可进行单细胞水平的原位检测等特点，被广泛地应用于真核细胞的DNA损伤与修复、遗传毒理、环境监测以及氧化应激和细胞凋亡等相关研究中。
目前关于彗星实验技术的应用进展大多从其应用领域、范围着手，一定意义上限制了彗星实验在细胞层面上的科学意义以及更宽泛的应用前景。
文章从细胞角度切入，归纳总结近些年真核细胞作为彗星实验在应用发展过程中所存在的问题，并就其发展提出发展畅想。
1 彗星实验彗星实验原理是细胞经过实验中裂解、DNA解链等过程后，电泳时损伤的DNA从核中溢出，朝阳极方向泳动，产生一个尾状带，未损伤的DNA部分保持球形，二者共同形成“彗星”。
在一定范围内，“彗星”的长度（代表DNA迁移距离）和经荧光染色后“彗星”荧光强度与DNA损伤程度相关，这样就可以定量检测单个细胞中的DNA损伤。
甲醛和苯致DNA、RNA损伤的基因毒性研究
甲醚釉苯致ＤＮＡ、ＲＮＡ损伤的基因毒性研究篇一郴分阴性对照ｘ４００ＦＡｌ５０Ｉ＿ｔｍｏｌ／Ｌ２ｈｘ４００ＦＡ６００Ｉｔｍｏｌ／Ｌ２ｈｘ４００ＦＡ７５Ｉ，ｔｍｏｌ／Ｌ２ｈｘ４００ＦＡ３００ｐｍｏｌ／Ｌ２ｈｘ４００ＦＡｌ２００印ｍｌ／Ｌ２ｈｘ４００图１＿３不阔浓度甲醛体外染毒２ｈ借对、，７９细胞ＤＮＡ影响阴性对照ｘ４００ｕｖ照射４ｍｉｎｘ４００ＵＶ照射１６ｍｉｎｘ４００ｕｖ照射２ｍｉｎ×４００ＵＶ照射８ｒａｉｎｘ４００图卜４１５Ｗ紫外光灯４０ｅｍ下照射不同时间后致Ｖ７９细胞ＤＮＡ损伤甲醚鞠苯致ＤＮＡ，ＲＮＡ攫伤静熬瓣毒｛生磺窕第一部努ＵＦＡ０ｕｍｏｌ／Ｌ２ｈ＋ＵＶｘ４００ＡＦＡ７５肚ｍｏｌ／Ｌ２ｈ十ＵＶｘ４００ＢＦＡｌ５０弘ｍｏｌ／Ｌ２ｈ＋ｕＶ×４００ＣＦＡ３００蚌ｍｏｌ／Ｌ２ｈ＋ＵＶｘ４００ＤＦＡ６００斗ｍｏｌ／Ｌ２ｈ＋ＵＶｘ４００ＥＦＡｌ２００Ｉ＿ｔｍｏｌ／Ｌ２ｈ＋ＵＶｘ４００稿性对照×４００图１－５不Ｉ司浓殿甲醛体外染毒Ｖ７９细胞２ｈ＋ＵＶ后致ＤＮＡ交联作用甲醛和苯致ＤＮＡ、ＲＮＡ损伤的基因毒性研究第一部分ＦＡ０ｐ．ｍｏｌ／Ｌ２ｈ＋ＵＶｘ４００ＦＡ３００肛ｍｏｌ／Ｌ２ｈ＋ＵＶｘ４００图１－６３００ｐｍｏｌ／Ｌ甲醛体外染毒Ｖ７９细胞１、７０６０５０乍显４０罱３０辅２０１０ＯＦＡ３００肛ｍｏｌ／Ｌｌｈ＋ＵＶｘ４００ＦＡ３００肛ｍｏｌ／Ｌ４ｈ＋ＵＶｘ４００２、４ｈ＋ＵＶ致ＤＮＡ交联作用２００４００６００８００１０００１２００１４００甲醛浓度（ｕｍｏｌ／Ｌ）＋ＵＶ图１．７不同浓度甲醛不同时间染毒诱导Ｖ７９细胞ＤＮＡ交联作用甲醛和苯簸ＤＮＡ、ＲＮＡ攒伤的基因毒性辑究第二部分阴性对照×４００ＢＨＱ３００＾ｍａｏｌ／Ｌｘ４００ＡＨＱｌ５０｝．ｔｍｏｌ／Ｌ）（４００ＣＨＱ６００１ｍ０１／Ｌｘ４００ＤＨＱｌ２００Ｍｍｏｌ／Ｌｘ４００ＥＨＱ２４００ｔ．ｔｍｏｌ／Ｌｘ４００图２－１不同浓度ＨＱ染毒Ｖ７９细胞２ｈ后致ＤＮＡ损伤情况荦醛弱荤羲ＤＮＡ、ＲＮＡ撰接翦蓥嚣毒磐辑究茹＝部癸阴性对照组ｘ４００腹腔注射苯１００ｍｇ／ｋｇｘ４００腹腔注射苯２００ｍｇ＆ｇｘ４００酸脏注射苯４００ｍｇ／ｋｇｘ４００阳性对照一４０ｙ“Ｃｏｙ射线×４００辫性ｊｌ尊照ｑ嘶６。
暴露在高甲醛环境中对DNA损伤的作用研究
暴露在高甲醛环境中对DNA损伤的作用研究
甲醛是一种常见的有机化合物，常用于制造各种产业用品。
但它也是一种有毒物质，并且在高浓度下对人体健康产生不利影响。
最近的研究表明，暴露在高甲醛环境中会对人体DNA造成损伤，进而引起严重的健康问题。
DNA是构成基因的一条双螺旋的分子链，而甲醛能够与DNA发生化学反应并损伤其结构。
当DNA受到损伤时，会引起细胞的死亡和基因突变等严重的影响。
研究表明，高浓度甲醛暴露的人群患癌症的风险会增加。
甲醛与DNA反应的主要产物是脱氨基基团酸（dG）和氨基甲酰化基团酸（M1dG），而这些产物可以通过尿液或血液来检测。
此外，在动物实验中，含有高浓度甲醛的水会导致小鼠出现肾脏肿瘤。
实验表明，与未暴露于甲醛环境的小鼠相比，暴露在甲醛环境中的小鼠DNA发生了多项结构损伤。
这些发现表明，暴露在高甲醛环境中可能会导致DNA损伤并可能增加患癌症的风险。
此外，甲醛还有可能包括神经系统疾病、过敏和气喘等其他健康问题。
因此，为了保护我们的健康，有必要采取适当的措施来减少暴露在高浓度甲醛环境中的风险。
首先，我们应该选择低甲醛含量的产品，尤其是那些石膏板、人造板等建材中甲醛含量较高的产品。
其次，加强室内通风，让空气流动，以最大限度地降低室内甲醛含量。
此外，也可以使用一些甲醛吸附剂，帮助吸收室内的甲醛。
总之，暴露在高甲醛环境中会对DNA产生不利影响，损害健康。
因此，我们要采取适当的措施来降低甲醛风险，并保护我们的健康。
彗星实验评价牛大力对^(60)Coγ射线致小鼠DNA损伤的防护
彗星实验评价牛大力对^(60)Coγ射线致小鼠DNA损伤的防护陈晓白;王晓平;赵仕花【期刊名称】《时珍国医国药》【年(卷),期】2013(0)1【摘要】目的探讨牛大力对小鼠辐射损伤的防护作用。
方法 40只小鼠随机分为阴性对照组、辐射模型组、牛大力低(5g.kg-1.d-1)、中(10g.kg-1.d-1)、高(20g.kg-1.d-1)剂量组。
用5Gy60Coγ射线对除阴性对照组外的各组小鼠进行一次性全身均匀照射,制成放射损伤动物模型。
牛大力剂量组小鼠在照射前4 d及照射后10 d,以相应剂量的牛大力煎煮液连续灌胃14 d,最后一次灌胃24 h后处死小鼠,取肝、肾、肺、睾丸、脾组织进行彗星实验。
结果小鼠在接受60Coγ射线照射后,牛大力剂量组各组织细胞尾部DNA百分率(Tail DNA%)和尾矩(Tail Moment)与辐射模型组相比,明显降低(P<0.01),并随着牛大力的浓度增加,Tail DNA%和Tail Moment逐步减少,呈明显的量效关系。
结论在一定剂量下,中药牛大力对60Coγ射线诱导的小鼠DNA损伤有不同程度的保护和修复作用。
【总页数】3页(P76-78)【关键词】牛大力;彗星实验;60Coγ射线;DNA损伤【作者】陈晓白;王晓平;赵仕花【作者单位】玉林师范学院生命科学与技术学院【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.牛大力对60Coγ射线致小鼠造血系统损伤的保护作用 [J], 陈晓白;王晓平;赵仕花;韦舒婷2.黄花倒水莲（Polygala fallax Hemsl.）对60Coγ射线辐射损伤小鼠组织DNA的防护作用 [J], 黄翔;王晓平3.氮氧自由基化合物对60COγ射线致BALB/c小鼠辐射损伤的防护作用 [J], 林艳云;王峰;王海波;蒋大鹏;高鹏;任正华;吴涛;郎海洋;曾丽华4.益气解毒方对2.0 Gy 60Coγ射线致小鼠睾丸急性损伤的防护效应 [J], 卢曦;李盼飞;王安;王磊;王艳;石中玉;高誉珊;胡素敏5.益气解毒中药复方对2 Gy^60Coγ射线致小鼠急性辐射损伤的防护效应研究 [J], 王安;王艳;石中玉;王磊;高誉珊;于雪;徐文慧;傅骞;李伟;胡素敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
甲醛对DNA损伤的彗星实验研究
彗星实验主要参照Ｒ０ｊａｓ等ｌｑ和Ｋａｙａ等的方法门，
同１．２．３。 １．３实验数据的统计分析
对每一浓度的５０个细胞的迁移率进行分析。 细胞由ＣＣＤ拍摄，在电脑上用ＣＡＳＰ彗星图像分 析软件（从ｗｗｗ．ｃａｓｐ．ｏｆ．ｐｌ下载）自动分析。分析指 标为国际公认的Ｔａｉｌ Ｍｏｍｅｎｔ（尾矩）和Ｔａｉｌ ＤＮＡ％（彗尾ＤＮＡ百分含量）。其中Ｔａｉｌ ＤＮＡ％为 单一的彗尾强度指标。Ｔａｉｌ Ｍｏｍｅｎｔ为复合指标，定 义为彗尾ＤＮＡ百分含量和彗尾长度的乘积。彗星 实验指南中指出，在用复合指标进行评价时，必须 同时给出一项单一指标【８ｊ。将实验测得的指标数值
本文２００３年１１月１２日收到。２００４年４月２０日接受。 ’国家“十五”科技攻关课题（２００１ＢＡ７０４８０１）经费资助。 “通讯联系人， Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｒｙ粕ｇｘｕ＠ｐｕｂｌｉｃ．ｗｈ．ｈｂ．ｃｎ
万方数据
４期
甲醛对ＤＮＡ损伤的彗星实验研究
２６３
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本实验以甲醛遗传毒性作用的靶细胞一人类
颊黏膜细胞作为实验材料，运用彗星实验作为研究 手段，对甲醛的遗传毒性，特别是甲醛使ＤＮＡ断裂 的作用作了研究，现报道如下：
１ 材料和方法
１．１主要试剂和仪器 分析纯甲醛（３６％一３８％水溶液）；吖啶橙（Ａ．Ｏ）；
正常熔点琼脂糖（ＮＭＡ）；低熔点琼脂糖（ＬＭＡ）；生 理盐水（０．９％ＮａＣｌ溶液）。ＤＹＹ一１１Ｂ型三恒电泳仪
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单细胞凝胶电泳后呈现因ＤＮＡ分子损伤而形成的 彗星图形，在荧光显微镜下可见浓集闪亮的头部和 分散暗淡的尾部（ａ）。该图形经ＣＡＳＰ彗星图像分析
蛋白酶Ｋ，３７℃下孵育２ ｈ。将载玻片取出，在０．４
软件后，由于荧光强度的不同而显示出彗头和彗尾
ｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）中浸泡３ ｍｉｎ，晾干。将新配制的 电泳缓冲液倒入电泳槽中，约覆过载玻片０．２５ ｃｍ，
将细胞悬液分装于４只１．５ ｍ１的离心管中，依 次加入终浓度为５¨ｍ０１／Ｌ，１０斗ｍｏｌ／Ｌ，１５斗ｍｏｌ／Ｌ的 甲醛溶液，同时设一阴性对照组。４只离心管均置于
升高为３０¨ｍｏｌ／Ｌ和５０“ｍｏｌ／Ｌ时，可见Ｔａｉｌ Ｍｏ— ｍｅｎｔ和Ｔａｉｌ ＤＮＡ％显著地降低。这说明甲醛在 １０卜Ｌｍｏｌ／Ｌ时可引起ＤＮＡ分子的断裂，随着浓度的 升高，甲醛又导致了ＤＮＡ—ＤＮＡ、ＤＮＡ．蛋白质分子 之间的交联。但由断裂作用到交联作用的拐点浓度 即峰值浓度却无法判定。
ａ．Ｔｈｅ ｃｏｍｅｔ ６９ｕｒｅ ｏｆ ｂｕｃｃａｌ ｃｅｌｌ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｌｏｗ—ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ； ｈ．Ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｗｉｔｈ ＣＡＳＰ ｏｎ ｔｈｅ ｆｉｇｕｒｅ ａｂｏｖｅ，ｉｎ ｗｈｉｃｈ Ａ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ｔｈｅ ｕｎｄａｍａｇｅｄ ＤＮＡ ａｎｄ Ｂ，ｔｈｅ ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ．
将细胞悬液分装于４只１．５ ｍｌ的离心管中，依 次加入终浓度为５斗ｍｏｌ／Ｌ，７．５卜Ｌｍ０１／Ｌ，１０斗ｍｏｌ／Ｌ的 甲醛溶液，同时设一阴性对照组。４只离心管均置于 ３７ｃｃ下孵育３０ ｍｉｎ。彗星实验操作步骤和电泳条件
者为一健康成年男子。每次取细胞前，先用清水漱 口３次，然后用软毛牙刷轻刷口腔两侧颊部黏膜， 接着用１０ ｍｌ生理盐水漱口，收集漱口水。将漱口水 倒人离心管，６ ０００ ｒｐｍ离心２ ｍｉｎ。去掉上清液，将 离心管底部细胞重悬浮为约１ ｍｌ。 １．２．２ ＤＮＡ断裂作用的初步检测
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｌＯ斗ｍｏＬ／Ｌ，３０斗ｍｏｌ／Ｌ，５０斗ｍｏＬ／Ｌ，ｓｅｐａｒａｔｅｌｙ． ｂ．Ｔａｉｌ ＤＮＡ％ｃｈａｎｇｅｓ ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ ｉｎ ｂｕｃｃａｌ ｃｅＵｓ ａｆｔｅｒ
ｂｅｉｎｇ ｔＩｅ出ｅｄ ｆｂｒ ３０ ｍｉｎｕｔｅｓ ｗｉｔｈ ｆｂＨｎａｌｄｅｈｖｃｋ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ａｔ ｔｈｅ
将细胞悬液分装于４只１．５ ｍｌ的离心管中，依 次加入终浓度为１０¨ｍｏｌ／Ｌ，３０斗ｍｏｌ／Ｌ，５０斗ｍｏｌ／Ｌ的 甲醛溶液，同时设一阴性对照组。４只离心管均置于 ３７℃下孵育３０ ｍｉｎ。
彗星实验主要参照Ｒ０ｊａｓ等ｌｑ和Ｋａｙａ等的方法门，
同１．２．３。 １．３实验数据的统计分析
对每一浓度的５０个细胞的迁移率进行分析。 细胞由ＣＣＤ拍摄，在电脑上用ＣＡＳＰ彗星图像分 析软件（从ｗｗｗ．ｃａｓｐ．ｏｆ．ｐｌ下载）自动分析。分析指 标为国际公认的Ｔａｉｌ Ｍｏｍｅｎｔ（尾矩）和Ｔａｉｌ ＤＮＡ％（彗尾ＤＮＡ百分含量）。其中Ｔａｉｌ ＤＮＡ％为 单一的彗尾强度指标。Ｔａｉｌ Ｍｏｍｅｎｔ为复合指标，定 义为彗尾ＤＮＡ百分含量和彗尾长度的乘积。彗星 实验指南中指出，在用复合指标进行评价时，必须 同时给出一项单一指标【８ｊ。将实验测得的指标数值
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ０ｆ １０斗ｍｏｌ／Ｌ，３０岬。儿，５０¨ｍｏＬ／Ｌ，ｓｅｐａｒａｔｅｌｙ．
２．３ ＤＮＡ断裂作用的浓度范围 为了推断峰值浓度范围，我们又采用了０斗ｍｏｌ／
Ｌ，５斗ｍｏｌ／Ｌ，１０¨ｍ０１／Ｌ，１５斗ｍｏｌ／Ｌ这四个浓度进行 实验，结果如图３所示。
彗星实验，也称单细胞凝胶电泳技术（Ｓｉｎｇｌｅ Ｃｅｌｌ Ｇｅｌ Ｅｌｅｃｔｍｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＳＣＧＥ），是２０世纪８０年代 兴起的一种在单个细胞水平检验ＤＮＡ分子的断 裂，损伤和修复的方法【５】。在该实验中，裂解液破坏 细胞膜结构，使胞内成分扩散到其中，而ＤＮＡ由于 相对质量较大留在凝胶中。碱性条件下，ＤＮＡ解螺 旋，其断链释放出来，在电场中朝同一方向移动， ＤＮＡ损伤越严重断链迁移率越大，从而形成彗星状 影像。近年来，它也被广泛地应用于ＤＮＡ—ＤＮＡ、 ＤＮＡ一蛋白质分子交联的检测。其原理是，通过交联 作用使ＤＮＡ的分子碎片附着在一起，从而使之在 电场的作用下迁移率减小。该方法较传统的交联检 测方法更快捷，更灵敏。
２．１ 实验结果及软件分析 利用１．３中所述的ＣＡＳＰ彗星图像分析软件对
实验所得的彗星图像进行了数据分析，见图ｌ。 如图１所示，低浓度甲醛处理的颊黏膜细胞经
氨酸钠，１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ一１００，１０％ＤＭＳ０）中，４℃下裂 解２ ｈ。然后放入蒸馏水中漂洗３ ｍｉｎ，待凝胶略干 时，向每一凝胶上滴加１２０¨ｌ配置为１０ ｍｇ／ｍｌ的
如图２所示，当甲醛溶液浓度为１０“ｍｏｌ／Ｌ 时，Ｔａｉｌ Ｍｏｍｅｎｔ和Ｔａｉｌ ＤＮＡ％都有增加，且与阴性
冲液（ｐＨ７．５）中，浸洗３０ ｍｉｎ。用２０斗ｇ／Ｌ的吖啶橙
对照组之间有极显著差异（＿『）＜０．０１）。而当溶液浓度
染色５ ｍｉｎ，用双蒸水洗掉表面的染料，２４ ｈ内在荧 光显微镜下观察。 １．２．３ ＤＮＡ断裂作用浓度范围的检测
万方数据
４期
甲醛对ＤＮＡ损伤的彗星实验研究 Nhomakorabeaａ ｅ
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图２ 甲醛致ＤＮＡ断裂作用的初步检测 ａ． 颊黏膜细胞经１０斗ｍｏｌ／Ｌ，３０斗ｍｏｌ／Ｌ，５０斗ｍｏＬ／Ｌ甲醛 溶液染毒３０ ｍｉｎ后Ｔａｉｌ Ｍｏｍｅｎｔ变化。 ｈ． 颊黏膜细胞经１０斗ｍｏｌ／Ｌ，３０斗ｍｏｌ／Ｌ，５０¨ｍｏｌ／Ｌ甲醛 溶液染毒３０ ｍｉｎ后Ｔａｉｌ ＤＮＡ％变化。
第３７卷第４期 ２００４年８月
实验生物学报
Ａｃｔａ Ｂｉ０１０９ｉａｅ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｉｓ Ｓｉｎｉｃａ
Ｖ０１．３７．Ｎｏ．４ Ａｕｇｌ】ｓｔ ２０１０４
甲醛对ＤＮＡ损伤的彗星实验研究水
李 睿鲁志松乔琰姚汉超 于非非 杨 旭” （华中师范大学生命科学学院，武汉４３００７９）
摘要 甲醛是一种遗传毒性物质。国内外学者的大量研究证实，甲醛可以引起ＤＮＡ—ＤＮＡ、ＤＮＡ一蛋 白质分子交联，但对于甲醛是否能够引起ＤＮＡ分子的断裂，学界却存在分歧。本实验以颊黏膜细胞 作为实验材料，通过彗星实验对甲醛的遗传毒性——尤其是ＤＮＡ分子断裂作用进行了系统的研 究。结果显示甲醛在较低浓度（５斗ｍｏｌ／Ｌ，７．５斗ｍｏｌ／Ｌ，１０斗ｍｏｌ／Ｌ）时具有断裂作用，在较高浓度 （１５仙ｍｏｌ／Ｌ，３０¨ｍｏｌ／Ｌ，５０斗ｍｏｌ／Ｌ）时则具有交联作用。根据本实验的结果，本文还首次论证了甲醛 断裂作用的断裂峰值（７．５斗ｍｏｌ／Ｌ）。
本文２００３年１１月１２日收到。２００４年４月２０日接受。 ’国家“十五”科技攻关课题（２００１ＢＡ７０４８０１）经费资助。 “通讯联系人， Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｒｙ粕ｇｘｕ＠ｐｕｂｌｉｃ．ｗｈ．ｈｂ．ｃｎ
万方数据
４期
甲醛对ＤＮＡ损伤的彗星实验研究
２６３
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并略加改进。在完全磨毛的载玻片（７５ｍｍ×２５ｍｍ）上
输入ＳｉｇｍａＰｌｏｔ２００１统计分析软件，进行双尾ｔ检
铺第一层为１５０斗ｌ质县分数为１％的正常熔点琼脂 糖（ＮＭＡ），待其固化后铺第二层为５０斗ｌ质量分数 为０．８％的低熔点琼脂糖（ＬＭＡ）和３０斗ｌ的细胞悬液
验，并作图。
２结 果
的ｔ昆合液，第二层固化后铺第三层为８５“ｌ质量分数 为０．５％的ＬＭＡ。固化条件均为４℃，１０ ｍｉｎ。将制好 的凝胶放人冷的裂解液（２．５ ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ，１００ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎａ２ＥＤＴＡ，４０ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ，１％十二烷基肌
的清晰轮廓（ｂ）。软件分析的数据结果见２．２—２．４。 ２．２ ＤＮＡ断裂作用的初步判断
盖上盖子，高ｐＨ电泳缓冲液（１ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎａ２ＥＤＴＡ， ３００ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎａ０Ｈ）中放置２０ ｍｉｎ以便双链ＤＮＡ
根据我们的初步检测发现，低浓度水平时，甲 醛确实能够引起ＤＮＡ断裂，见图２。
解螺旋。室温下调节缓冲液液面高低，置２２ Ｖ，３００ ｍＡ下电泳２０ ｍｉｎ。将凝胶浸入０．４ ｍｏｌ／Ｌ‘蹦ｓ缓
万方数据
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李睿鲁志松乔琰姚汉超于非非杨旭
３７卷
图１ 实验所得彗星图形及ＣＡＳＰ软件分析所得图像 ａ．低浓度甲醛处理的颊黏膜细胞形成彗星图形；ｂ．ｃＡｓＰ彗星图像分析软件对ａ中彗星图形的处理结果，其中Ａ显示未 被破坏的ＤＮＡ部分（即彗头），Ｂ显示ＤＮＡ断片所形成的拖尾部分（即彗尾）。
Ｆｉｇ．１ Ｔｈｅ ｃｏｍｅｔ ｆｉｇｌｌｒｅ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ蛐ｄ ｔｌｌｅ ａｎａｌｙｓｉｓ稍ｔｈ ＣＡＳＰ ｏｎ ｔｈｅ ｎｇｕｒｅ
（北京市六一仪器厂）；ＤＹＹ—ＩＩＩ型电泳槽（北京市六 一仪器厂）；低温冷冻离心机（ＳＩＧＭＡ）；ＢＨ一２型荧光 显微镜（０Ｉ■ＭＰＵＳ）；１／４英寸ＣＣＤ １５０万相素
（ＳＯＮＹ）。 １．２实验方法 １．２．１细胞的收集和处理
主要参照Ｒｏ诅ｓ等的方法㈣，并略加改进。受试
３７℃下孵育３０ ｍｉｎ。彗星实验操作步骤同１．２．２，但 将电泳条件降为２１ Ｖ，２４０ ｍＡ。 １．２．４ ＤＮＡ断裂作用断裂峰值的检测
ｎ昏２ ＰｒｉｌＩｌａｒｙ ｄｅｔｅｃ廿蚰０ｆ ＤＮＡ ｓ岫岫ｄ ｂ瑚ｌ‘ｓ翰Ｉｌｓｅｄ ｂｙ