实验动物大鼠原代脑微血管内皮细胞
西洛他唑对大鼠脑微血管内皮细胞缺血再灌注损伤的保护作用
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再灌注模型组 （ 灌模型组） 再 ４组 ， 后 ３ 大 鼠建 立 脑 微 血 管 内皮 细 胞 糖 氧 剥 夺 后 复 糖 氧 模 型 ， 拟 “ 血 再 灌 对 组 模 缺 注 ” 程 ， 对 西 洛 他 唑 组 和 溶 剂 对 照 组 在 造 模 同 时 分 别 以 终 浓 度 ｌ １ ｍｍｏ／ 西 洛 他 唑 ［ 甲 基 亚 砜 过 并 × ０ ｌＩ 二
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西 洛 他 唑 对 大 鼠脑 微 血 管 内皮 细 胞 缺 血 再灌 注 损 伤 的保 护 作 用
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大鼠肺微血管内皮细胞使用说明
大鼠肺微血管内皮细胞编号名称规格北京派瑞金GK1001大鼠肺微血管内皮细胞5×105cells/瓶为能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的大鼠肺微血管内皮细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的大鼠肺微血管内皮细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
大鼠肺微血管内皮细胞简介：1、名称：大鼠肺微血管内皮细胞2、组织来源：大鼠肺血管组织3、规格：5×105cells/25cm2培养瓶4、细胞简介：大鼠肺微血管内皮细胞分离自正常大鼠肺血管组织，血管内皮细胞密切参与包括再生、发育、伤口愈合等一系列生理及炎症反应。
细胞呈梭形或多角形,形成单层后呈典型的鹅卵石样或铺路石样排列。
肺微血管内皮细胞构成半选择性屏障，该屏障对于肺气体交换，调节液体和可溶物在血液与肺间质之间的流动具有重要意义。
本公司生产的大鼠肺微血管内皮细胞总量约为5×105cells/瓶，细胞纯度75%~85%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
5、培养基信息：1）培养基类型：1640培养基(GIBCO，添加NaHCO31.5g/L，Sodium Pyruvate0.11g/L) 2）添加因子：优质胎牛血清10%，细胞生长因子等大鼠肺微血管内皮细胞使用方法：收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1.取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。
2.待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
脑微血管内皮细胞条件培养液对体外培养正常神经元的影响
摘
要： 目的 ： 讨 体 外模 拟 脑 缺血 再 灌 注 损伤 条 件 下及 通络 救 脑 注 射 液 干预 下 脑微 血 体外正 常培养神 经元 的影响。 ｃ ｃ — Ｍ） 方法： 先分别进行大鼠大脑微血管 内皮细 胞和神经元 的分 离纯化培养及建立体外模拟脑缺血再灌注损伤模型 ， 然后 用收集的 Ｃ Ｃ — Ｍ ＭＥ ｓ Ｃ １： １ １： 和 ５的浓度作 用于体外培养 的神 经元 ， Ｔ法测 定神 经元的活性 、存 活率 ， ｅ ｅ — ｌｔ ＭＴ ｗ ｓｒ ｂ 检测 ｔｎ ｏ ＮＦ —Ｋ Ｂ的表达 。结果 ： 脑微血管 内皮细胞条件 培养液 可影响神经元生存活性 ， 应用 中药通络救脑 注 射液作 用于脑微血 管内皮细胞后收集的条件培养液可明显提 高神 经元 的生存活性 ，可 以提 高神经元
２９ 第十卷 第四期 ０８
＊Ｖ １０ Ｎ ． ｏ１ ｏ ． ４
２ 坠 ． （ ） 微 血 管 内皮 细 胞 的 培 养 和 其 条 件 液 的 １脑
收集。
体缺血 ， 物干预组造模前预用药 ６ ， 药 ｈ 方法 同正常干 预 组 。 模 时 弃 去完 全 培 养 液 ， Ｄ ＨａｋＳ 造 以 — ｎ ’冲洗 细胞
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少 明确提 出药物通过 何种 环节和方式 发挥作 用 ， 探
讨脑微 血管 内皮 细胞对神经元 的调控作用 ，可为 寻 找 中药尤其是不能透过血脑屏障 中药发挥脑保护作 用 的靶 点 和 机制 开 辟 新 的视 野 。
EPO衍生肽对大鼠缺血再灌注损伤脑微血管内皮细胞的保护作用
〔２０１９￣１０￣１１ 修回〕
( 编辑 滕欣航)
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新生大鼠心脏微血管内皮细胞原代培养
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人脑微血管内皮细胞外泌体对糖尿病大鼠缺血性脑卒中保护作用的研究
人脑微血管内皮细胞外泌体对糖尿病大鼠缺血性脑卒中保护作用的研究【摘要】目的研究人脑微血管内皮细胞外泌体对糖尿病大鼠缺血性脑卒中的保护作用。
方法将45只成年雄性SD大鼠随机分成3组，每组15 只，分别为：对照组，糖尿病+缺血性脑卒中组（DM+MCAO）和外泌体组（EX）。
对照组进行尾静脉注射PBS处理；DM+MCAO组需先构建糖尿病模型和MCAO缺血2h再灌注模型，并尾静脉注射PBS；EX组即在构建DM和MCAO缺血2h再灌注模型后，并尾静脉注射人脑微血管内皮细胞外泌体。
在术后24h进行神经功能评估（5分法），并进行数据分析。
利用TTC染色实验评估各组脑梗死情况。
结果 EX组大鼠的神经功能较DM+MCAO组和对照组明显改善，差异具有统计学意义（P<0.05）。
糖尿病大鼠建立缺血性脑卒中模型再灌注24 h后得到的脑梗死范围结果显示，DM+MCAO组的梗死面积显著大于对照组（P<0.05），模型构建成功。
EX组梗死范围显著小于DM+MCAO组，差异具有统计学意义（P<0.05）。
结论人脑微血管内皮细胞外泌体可以减少糖尿病大鼠缺血性脑卒中的梗死面积，提高大鼠的神经功能预后情况。
【关键词】缺血性脑卒中；糖尿病；人脑微血管内皮细胞；外泌体；大鼠缺血性脑卒中是一种由于脑部血管阻塞，造成血液不能正常流入大脑而引起脑组织损伤的病症[1]。
它在临床上被发现具有发病率高、死亡率高和致残率高的“三高”特点[2]。
糖尿病是一组以高血糖为特征，慢性的终身代谢性疾病[3]。
由于长期存在的高血糖，导致各种组织，尤其是眼、肾、心脑血管和神经的慢性损害和功能障碍。
糖尿病引起了许多中枢神经系统并发症，也就是所谓的糖尿病性脑病，脑卒中就是其中主要的并发症之一[4]。
外泌体是一种直径在30至150 nm之间的小脂质微囊，它可以促进细胞间的信息通讯和物质交换，也可以保护其细胞原本的生物活性物质[5]。
研究发现，静脉内给药的外泌体可提供有效治疗成果，从而规避掉基于细胞疗法的各种治疗局限性。
Akt信号通路及神经血管单元的影响的开题报告
缺氧对大鼠脑微血管内皮细胞PI3K/Akt信号通路及神经血管单元的影响的开题报告
一、研究背景
脑缺氧是一种常见的神经系统紊乱现象，可以引起大鼠脑血管内皮细胞（brain microvascular endothelial cells, BMECs）功能的改变，从而影响大鼠神经血管单元的结构和功能。
PI3K/Akt信号通路是BMECs的重要信号通路之一，可以参与细胞增殖、存活和代谢等过程，但目前缺乏针对缺氧对BMECs PI3K/Akt信号通路及神经血管单元的影响的研究。
二、研究目的
本研究旨在探讨缺氧对大鼠BMECs PI3K/Akt信号通路及神经血管单元的影响，为进一步研究脑缺氧的病理生理机制提供理论基础。
三、研究内容
本研究将大鼠随机分为对照组和缺氧组，对缺氧组进行缺氧处理，采用Western blotting和免疫荧光染色法检测BMECs PI3K/Akt信号通路关键蛋白的表达及分布情况，并采用电子显微镜观察神经血管单元的超微结构变化。
四、研究意义
本研究对于深入探究脑缺氧的病理生理机制具有重要的理论和实践意义，可以为脑缺氧的诊断、治疗和预防提供理论依据。
体外血脑屏障的建立
体外血脑屏障的建立李联平;蒋莹【摘要】目的：利用大鼠脑微血管内皮细胞和星型胶质细胞于体外建立血脑屏障。
方法分别取10只出生7～10 d、2只出生1～3 d的SD大鼠，断头处死后取脑组织，分别分离培养脑微血管内皮细胞和星型胶质细胞，采用免疫细胞染色方法鉴定脑微血管内皮细胞，以脑微血管內皮细胞因子Ⅷ作为标记抗原，以神经胶质原纤维酸性蛋白（ GFAP）作为标记抗原鉴定星型胶质细胞。
以非接触方式共培养脑微血管内皮细胞和星型胶质细胞的方法建立体外血脑屏障。
接种12 d将电极插入待测Transwell小室（培养模型）、细胞培养液、空白Transwell小室（细胞培养液为媒介）。
测定跨膜电阻、测算荧光素钠渗透系数（ Pe），衡量模型完整性。
结果接种12 d时，模型、细胞培养液、空白Transwell小室的电阻值分别为180、64、112Ω／cm2。
接种12 d时模型Pe为（4．67±0．4）×10－6 cm／s。
结论成功建立体外血脑屏障，屏障效应较好、完整性较高。
【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2016(056)027【总页数】3页(P28-29,30)【关键词】血脑屏障;细胞屏障;动物实验;大脑;脑微血管内皮细胞;星型胶质细胞【作者】李联平;蒋莹【作者单位】海军总医院，北京100048;北京市肛肠医院【正文语种】中文【中图分类】R741血脑屏障是血液与脑组织间的一种特殊屏障，由微血管内皮、基膜和星型胶质细胞等构成，其中内皮细胞是血脑屏障的主要结构。
血脑屏障具有保证脑的内环境高度稳定、保护中枢神经系统的活动机能、阻止微生物和毒素等异物侵入脑组织的功能。
以往在体血脑屏障动物实验存在动物脑组织内药物浓度较低无法准确测量、动物体内影响因素较多等缺点。
血脑屏障模型的研究主要经历了脑血管碎段模型、脑微血管内皮细胞模型的构建、星型胶质细胞和血管内皮细胞共同模型的培养等3个阶段[1]。
但目前尚无统一模型鉴定标准[2，3]。
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实验动物（大鼠）原代脑微血管内皮细胞
产品编号：RAT-iCELL-n001
产品规格：>5×105细胞数
产品价格：3750
包装规格：T-25培养瓶
细胞详述：
脑微血管内皮细胞是血脑屏障的主要组成成分，能够限制可溶性物质和细胞等从血液进入大脑。
大脑微血管内皮细胞与外周内皮细胞相比具有一些相同特性。
脑微血管内皮细胞存在许多细胞间紧密连接，产生很高的跨内皮阻抗，延迟细胞旁的通量；脑微血管的内皮细胞间衔接得十分紧密，不象其他组织的血管内皮细胞那样有较大的缝隙脑微血管内皮细胞缺乏内皮细胞的窗孔结构，其液相物质胞饮水平较低；脑微血管内皮细胞具有不对称定位酶和载体介导转运系统，从而产生“两极分化”的表现型。
与外周内皮细胞相同，大脑微血管内皮细胞表面表达细胞粘附分子，调控白细胞进入大脑。
由于微血管内皮细胞的器官特异性，内皮细胞通常取源于疾病研究的相关组织。
细胞特性:
1)组织来源于实验动物的脑动脉组织。
2)细胞鉴定：血管假性血友病因子（vWF）免疫荧光染色为阳性。
3)经鉴定细胞纯度高于90%。
4)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
5)细胞生长方式：铺路石状细胞，不规则细胞，贴壁培养。
产品的运输和保存：
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进
行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生
长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
推荐培养基：
我们推荐使用iCell原代内皮细胞培养体系（产品编号：PriMed-iCELL-002）作为体外培养原代脑动脉血管内皮细胞的培养基。
产品使用：
1)本产品仅能用于科研
2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核
3)本产品未通过用于活体诊断的审核。