巨噬细胞中诱导型一氧化氮合酶来源的 N O
PEG 10mRNA 的抑制作用最强,表明靶mRNA 的二级结构对siRNA 的功能有很大影响。
本研究中我们构建针对PEG 10基因的siRNA 真核表达载体,并通过酶切鉴定和测序鉴定,说明我们构建的针对PEG 10的真核表达载体是正确有效的,可以用于后续PEG 10基因功能的研究,以及沉默PEG 10后抑制肝癌细胞生长,诱导肝癌细胞凋亡,从而为肝癌的基因治疗提供理论依据和实验工具。
参考文献:[1] Ryuichi Ono ,Shin K obayashi ,Hirotaka Wagat suma ,et al.Aretrotransposon 2derived gene ,PEG 10,is a novel imprinted gene located on human chromosome 7q 21[J ].Genomics ,2001,73(2):2322237.[2] Noble A ,Towne C ,Chopin L ,et al.Insulin 2like growt h fac 2tor 2Ⅱbound to vitronectin enhances MCF 27breast cancer cellmigration[J ].Endocrinology ,2003,144(6):241722424.[3] Moorehead RA ,Sanchez O H ,Baldwin RM ,et al.Transgenicoverexpression of IGF 2Ⅱindues spontaneous lung tumors :a model for human lung adenocarcinoma [J ].Oncogene ,2003,22(6):8532857.[4] Vella V ,Sciacca L ,Pandini G ,et al.The IGF system in t hy 2roid cancer :new concept s[J ].Mol Pat hol ,2001,54(3):1212124.[5] Tsou AP ,Chuang YC ,Su J Y ,et al.Overexpression of a no 2vel imprinted gene ,PEG 10,in human hepatocellular carcino 2ma and in regenerating mouse livers [J ].J Biomed Sci ,2003,10(6Pt 1):6252635.[6] Hiroshi Okabe ,Seiji Satoh ,Y oichi Furukawa ,et al.Involve 2ment of PEG 10in human hepatocellular carcinogenesis t hrough interaction wit h SIA H 1[J ].Cancer Research ,2003,63(12):304323048.[7] 常莹,陶璐薇,陈孝平,等.肝癌组织中遗传印记基因PEG 10表达的特异性及其意义[J ].世界华人消化杂志,2005,13(12):140821411.[8] Naito Y ,Yamada T ,Ui 2Tei K ,et al.siDirect :highly effec 2tive ,target 2specific siRNA design software for mammalian RNA interference [J ].Nucleic Acids Res ,2004,32:W 1242129.[9] Reynolds A ,Leake D ,Boese Q ,et al.Rational siRNA designfor RNA interference[J ].Nat Biotechnol ,2004,22(3):3262330.[编辑:刘红武]收稿日期:2006202221;修回日期:2006204214基金项目:怀化市科技计划资助项目(0502)作者单位:1.418000湖南怀化医学高等专科学校检验 系;2.中国科学院生物物理研究所结构与分子生物学研究 中心作者简介:张申(1955-),男,学士,教授,主要从事自由 基生物学研究巨噬细胞中诱导型一氧化氮合酶来源的NO 对共培养HL 60细胞凋亡的影响张 申1,尹利华1,卫涛涛2E ffects of Inducible Nitric Oxide Synthase Derived Nitric Oxide on Apoptosis of H L 60Cells Co 2cultured with RAW 264.7MacrophagesZHAN G Shen 1,YIN Li 2hua 1,WEI Tao 2tao 21.De partment of L aboratory Medicine ,H uai hua Medical College ,H uai hua 418000,China;2.Center f or S t ructural and Molecular B iology ,I nstitute of B iophysics ,Chinese A cadem y of SciencesAbstract :Objective To study effects of inducible nitric oxide synthase (iNOS )2derived nitric oxide (NO )on apoptosis of HL 60cells co 2cultured with RAW 264.7macrophages.Methods Upon stimulation withlipopolysaccharide (L PS )and interferon 2γ(IFN 2γ),inducible nitric oxide synthase gene was expressed in RAW 264.7macrophages ,which caused the consequent generation of nitric oxide.Effects of nitric oxide on HL 60cells viability ,expression of bcl 22and bax protein ,activity of Caspase 23and cell apoptosis were evaluated with M T T assay ,Western blot analysis ,fluorescence analysis ,flow cytometry (FCM ),trans 2mission electron microscopy (TEM )and DNA agarose gel electrophoresis.R esults The results showed that iNOS 2derived nitric oxide caused oxidative damage of HL 60cells co 2cultured with RAW 264.7mac 2rophages ,and decreased cell viability ,and evidently reduced expression of bcl 22and increased expression of bax ,and induced activity of caspase 23and DNA f ragmentation.Conclusion The results suggested im 2portant effect of iNOS 2derived nitric oxide on apoptosis of cells in RAW 264.7macrophages.K eyw ords :Induciblenitricoxidesynthase ;Nitric oxide ;Apoptosis ;Mac 2rophage摘 要:目的 研究巨噬细胞中诱导型一氧化氮合酶(iN 2OS )来源的一氧化氮(NO )对共培养HL 60细胞凋亡的影响。
方法 以脂多糖(L PS )和γ2干扰素(IN F 2γ)诱导RAW 264.7巨噬细胞iNOS 基因的表达产生过量NO 为实验模型,通过噻唑蓝(M T T)试验、蛋白质印迹分析、荧光分析、流式细胞术(FCM)、透射电镜和DNA琼脂糖凝胶电泳等分析技术,观察NO对共培养的HL60细胞存活率、bcl22和bax蛋白表达、Caspase23活性和细胞凋亡的影响。
结果 RAW264.7巨噬细胞中iNOS来源的NO对共培养HL60细胞能造成氧化损伤,降低细胞的存活率;bcl22表达明显下降,而bax表达增加;激活Caspase23和促进DNA的降解。
结论 巨噬细胞中iNOS来源的NO在诱导细胞凋亡中发挥重要的作用。
关键词:诱导型一氧化氮合酶;一氧化氮;细胞凋亡;巨噬细胞中图分类号:Q786 文献标识码:A 文章编号:10002 8578(2007)01200882050 引言巨噬细胞是一种参与机体非特异性免疫防御的重要免疫细胞。
1988年Hibbs首先证明哺乳动物的巨噬细胞能产生NO[1],现已证实,NO是一种具有重要生理、病理功能的内源性生物信息分子,在生物体内,NO由三种不同的一氧化氮合酶(Nit ric ox2 ide synt hase,NOS)催化L2精氨酸而生成,其中可诱导型一氧化氮合酶(Inducible nit ric oxide synt hase, iNOS)是在诱导因素作用下,由巨噬细胞、中性粒细胞、胶质细胞等产生,其活性不受Ca2+浓度的影响,生成NO量大,主要作用是参与炎症反应和免疫细胞对病原体的防御。
但过量的NO可与超氧阴离子(O2・-)迅速反应,生成具有强氧化性的过氧化亚硝基阴离子(ONOO-)[2],ONOO-引起的氧化损伤是NO具有细胞毒性的重要原因之一[3,4]。
本研究以脂多糖(L PS)和γ2干扰素(IN F2γ)诱导RA W264.7细胞iNOS基因的表达产生过量NO为模型,通过M T T试验、蛋白质印迹分析、荧光分析、透射电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳等分析技术,观察NO对共培养的HL60细胞存活率、bcl22和bax蛋白表达、Caspase23活性和细胞凋亡的影响。
诱导型一氧化氮合酶
诱导型一氧化氮合酶(iNOS)与寄生虫感染转载自中国科技信息网一氧化氮(NO)在体内由L－精氨酸在一氧化氮合成酶(NOS)的催化下生成。
它是一种重要的信使分子, 参与血管、气道平滑肌的调节,神经递质的传递,细胞杀伤, 肿瘤细胞的溶解及内分泌激素的释放过程, 与许多疾病的发生、发展密切相关; 既在机体多个系统多种细胞中具有广泛的生理功能，又可能参与多种疾病的发生过程。
NOS是合成NO的唯一限速酶，寄生虫感染时，动物机体内由其诱发产生各种细胞因子，细胞因子激发一氧化氮合酶基因,其转录产生iNOS (inducible nitricoxide synthase)mRNA,由iNOSmRNA指导一氧化氮合酶生成。
本文就NOS的类型和iNOS的表达及NO的生成和NO对寄生虫的作用以及影响NO抗寄生虫感染的因素做一简要综述。
1 NOS的类型和iNOS的表达及NO的生成许多研究表明,NO 是一种重要的细胞内信使和新的神经递质, 又是效应分子[1]。
它介导并调节多种生理机制, 在呼吸系统、神经系统、炎症和免疫反应中起着重要的作用, 但也导致病理生理状态。
由于NO 可在数种哺乳动物细胞内产生, 在体内又具有广泛的生理作用, 因而这种化学结构如此简单的小分子被美国《Science》杂志评为1992 年年度分子[2]。
NOS 根据所在组织类型，在细胞中的分布，效应方式，组织表达，对Ca 2＋/钙调蛋白的依赖性及对不同激动剂的反应，可分为以下3种类型[3]: I型:神经型NOS （ncNOS )，首先于脑组织中发现，所产生的NO为神经递质，也可能作为神经和血管之间的间介物。
为结构表达。
Ⅱ型:可诱导型NOS (iNOS)，主要存在于单核/巨噬细胞系统、肝脏、平滑肌、神经胶质细胞中，另外在内皮细胞、神经元中也有分布。
为非结构表达。
Ⅲ型:上皮型NOS(ecNOS)，存在于血管内皮细胞，与ncNOS类似，为结构表达，对Ca2＋/钙调蛋白依赖，分布于胞浆中。
抗病毒蛋白
抗病毒蛋白（12种）(Antiviral protein)摘要：病毒进入机体后，能刺激人体的巨噬细胞、淋巴细胞以及体细胞产生干扰素。
干扰素具有广谱抗病毒作用，是抗病毒免疫中重要的蛋白质，它能诱生抗病毒白蛋白来阻止新病毒的产生。
但在机体内还存在着其它很多种具有抗病毒作用的的蛋白质，在抗病毒免疫中发挥重要的作用。
本文就主要介绍了其它种类的抗病毒蛋白。
关键字：抗病毒蛋白;作用机制Abstract: After the virus enters the body, wich can stimulate macrophages, lymphocytes and cells to produce interferon.which is the important proteins that can induce an antiviral albumin to prevent the generation of new viruses with broad-spectrum antiviral activity. However, in vivo there is a w variety of other proteins that having antiviral activity and play an important role in anti-viral immunity.This article introduces the other types of anti-viral proteins.Key Word: antiviral protein; mechanism of action一、干扰素（Interferon,IFN）1、干扰素的分类病毒进入机体后，能刺激人体的巨噬细胞、淋巴细胞以及体细胞产生干扰素。
干扰素具有广谱抗病毒作用。
根据干扰素产生的来源和结构不同，分为I型干扰素（IFN-α和IFN-β）和II型干扰素（IFN-γ）。
白芍总苷对巨噬细胞一氧化氮和诱导型一氧化氮合酶生成的影响及其机制研究
［ ｂｔ ｃ］ Ｏ ｊｃ ｖ ：ｏ ｎｅｉａ ｅｅｅｔ ｏｔ ａｇ ｃｓ ｅ ａｏｙ（Ｇ ）ｏ ｉｉｏｉ ｒ ｕｔｎ（ Ｏ ｎ ｐｅｓｎｏ Ａ ｓ ａｔ ｒ ｂｅｔ ｅＴ ｖｓｇｔ ｔ ｆ ｃ ｆｏ ｌ ｌ ｏｉ ｓ ｆ ｅｎ Ｔ Ｐ ｎｎｔｃ ｘ ｅｐ ｄｃｏ Ｎ ）ａｄｅ ｒ ｉ ｉ ｉ ｔ ｅｈ ｓ ｔ ｕ ｄ ｏ ｐ ｒ ｄ ｏ ｉ ｘ ｓｏ ｆ ｉｄｃ ｌ ｎ ｒ ｘ ｅｓｎ ａ ｉＯ ）ｉ ｍ ｃ ｐａｅ ｃｖｔ ｙｌ ｏｏ ｓ ｃａｄｓ（Ｐ ）ａｄｔｅｍ ｈｎｓ ｎｏｖｄ Ｍｅ ｏｓ Ｒ ｔ ｎｕｉｅｉ ｉ ｏ ｄ ｔ ｓ Ｎ Ｓ ｎ ａｒ ｈｇｓａｔ ａ ｄｂ ｐｐｌ ａ ｈｒ ｅ Ｌ Ｓ ｎ ｅ ａｉ ｉ ｌ ． ｔ ｄ ： ａ ｂ ｔｃ ｉ ｙｈ ｅ（ ｏ ｉ ｅ ｉ ｙｃ ｉ ｈ ｃ ｍ ｖ ｅ ｈ
ｗ ｓｐｅａｅ ｒ ｅｄｔｍ ｎｔ ｎｏ Ｏ ｒ ｕｌ ｃ ｒｏ （ Ｆｔ ）ｉ ｉｔ ｙｔ （ｘ ）ｂ ｓห้องสมุดไป่ตู้ｍ ｌ ｎｌ ｉ．ｕｔｅ， Ｎ ｉｄ ｇ ａ ｒ ｒ ｆ ｅ ｒｉａｏ ｉ Ｓｏ ｎｃ ａ ｆ ｔ －Ｂ Ｎ －Ｂ ｎ ｂｏ Ｂ Ｉ ｐ ｄｏｔ ｈ ｅ ｉ ｆＮ ｅ ａ ｏｒ ｒ ｃ ｈ ｉｒ ｃ Ｂ ｙＷｅｅ ｂ ｔ ａ ｓ Ｆｒ ｒＤ Ａ ｂ ｉ ｔ ｏａ ｙｓ ｈ ｎｎ
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ｔ ｓ ｒ ｄ ｃ ｉ ｎ ｉ ａ ｒ ｐ ａ ｅ ｎ ｔ ｅ ｈ ｎ ｓ ｈａ ｅ ｐ ｏ ｕ ｔｏ ｎ ｍ ｃ ｏ ｈ ｇ ｓ ａ ｄ ｉ ｍ ｃ ａ ｍ ｓ ｉ Ｃ Ｅ ａｇ， Ｕ ｉ ｉ Ｄ Ｎ ｉ — ｏ ， Ｉ ｈｎ － ｉ Ｊ Ｇ Ｊ —ｉ Ｒ ｓ ｒ ｅｔ Ｈ Ｎ Ｇ ｎ Ｇ Ｏ Ｌ— ａ， Ｅ Ｇ Ｘａ Ｈ ｎ ＹＮ Ｚ ｏ Ｙ ，Ｉ ｉ Ｊ Ｘ ｏ ｇ ｇ Ｎ ａ ａ． ｅ ａｃ Ｃ ｎ ｒ ｆＭｅｉ ｌ ｈｍｉｒ ｎ ｅ ｈ ｅ ｏ ｄ ａ ｅ ｓｙａｄ ｃ Ｃ ｔ
诱导型一氧化氮合酶的调控机制及其抑制剂的进展
p42ERK2 双重特异性磷酸化 ERK，激活 iNOS 并在各种组织中
广泛表达。JNK/应激活化蛋白激酶（SAPK）信号通路可被应
激激酶、生长因子（EGF）、细胞因子（如 TNF-α、IL-1）及某些 G
的神经型一氧化氮合酶（nNOS）和病理状态下表达于多种细
胞（如巨噬细胞、小神经胶质细胞、角质化细胞、肝细胞、星形
细胞及血管内皮上皮细胞）的 iNOS[1]。近年来，线粒体一氧化
氮合酶（mtNOS）与炎症的作用也是研究热点 [2]。哺乳动物的
NOS 为内源性生物合成酶，包含 N 末端的氧化酶区和 C 末端
[3]
[4]
[5]
[6]
中国中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草（第 2
册）[M].上海：
上海科学技术出版社，
1999：
671-678.
黄诗前.何首乌醇提物的分离纯化及活性研究[J].中国药
房，
2009，
20（30）：2 352.
汤国安，杨 昕.ArcGIS 地理信息系统空间分析实验教
程[M].北京：
中国药房
2011 年第 22 卷第 39 期
NF-κB 在转录及转录后水平调控 iNOS，在哺乳动物中发
现 5 个 NF-κB/Rel 家族成员，包括 NF-κB1（p50/p105）、NF-κB2
（p52/p100）、RelA（p65）、RelB 和 c-Rel，形成同源二聚体或异源
二聚体。细胞因子（如 TNF、IL-1 等）与其特异性跨膜受体结
经末梢调节剂[3]等。并且，少量的 NO 可通过抗氧化作用而发
精氨酸酶Ⅰ及诱生性一氧化氮合酶在巨噬细胞中的分子表达调控
ｉ ，Ｐ ）刺 激 时 即被诱 导 合成 ， 而 催 化合 成 非生 ｄ ＬＳ ｅ 进
理浓 度 的大量 Ｎ 产 生 一 系 列病 理／ Ｏ， 应激 反 应 。在
小 鼠 中 ，Ｐ 、Ｆ 一 、 －￣ Ｉ 、 Ｎ －、Ｌ２ Ｇ Ｃ Ｆ Ｌ Ｓ ＩＮ Ｉ Ｉ 、 Ｌ ｂ６ Ｔ Ｆａ Ｉ－ 、 Ｍ． Ｓ 、
细 胞 存在 不 同类 型 的 Ｎ Ｓ 通过 不 同 的信 号转 导 机 Ｏ，
成熟 的 巨 噬 细 胞 ， 建 立 起 机 体 单 核 吞 噬 细 胞 系 并
统＿ 。根据周围环境细胞因子的不 同， １ Ｊ 单核细胞可 被诱 导分 化为具 有不 同表 型 、 同功 能 的巨噬 细胞 。 不 经 Ｔｌ ｈ 细胞因子 （ Ｉ ．） 如 Ｆ ７ 激活的巨噬细胞被称为 Ｎ
朱琳楠 侯玉柱 赵 勇 （ 中国科 学院 动物研 究所 生物膜 与膜 生物 工程 国家 重点实验 室移植 生物 学研 究组 ， 北京 １００） ０ １１
中国图书分类号 ０９ ２１ 文献 标 识 码 Ａ 文 章 编 号 １０－８Ｘ（０ ００．７８０ ００４４ ２ １ ）８０４ ． ６
巨噬细胞作 为先天免疫系统 的重要组成部分 ， 在清 除衰 老和感 染 细 胞 、 体 损 伤后 的组 织重 塑 中 机
作者简介 ： 朱琳 楠 （９ ６年 一）女 ， １８ ， 在读硕士 ， 主要从事 巨噬细胞免 疫耐受机制研究 ； 通讯作者及指导教师 ： 赵 勇 （９４年 一） 男 ， １６ ， 医学博 士， 研究员 ， 博 士生导师 ， 主要从事移植免疫耐受及免疫应答
起 重要作 用 。巨 噬细 胞 起 源 于 骨髓 的单 核母 细 胞 ， 经分 化形成 血液 的单 核 细胞 ， 最终 迁 移 至 组织 成 为
[综述]一氧化氮的生理病理作用及其检测方法
![[综述]一氧化氮的生理病理作用及其检测方法](https://360docs-1393072327.cos.ap-beijing.myqcloud.com/838f1ace6037ee06eff9aef8941ea76e58fa4ad9.webp)
[综述]一氧化氮的生理病理作用及其检测方法［摘要］一氧化氮(Nitrico某ide,NO)是一种由内皮细胞释放的血管活性物质,在生物体内具有广泛而多样的生物学效应。
近年来,人们对其进行了许多广泛而深入的研究,发现其与多个系统疾病都存在着密切的关系。
并阐述了血清NO的各种测定方法。
［关键词］NO;生理功能；疾病；检测NO作为2次获得诺贝尔奖的明星分子,长期以来一直得到科学家的广泛关注。
而自从[1]1992年NO被《Science》杂志评为该年度的“明星分子”以来,关于NO文章就层出不穷,现今许多国家投入大量的人力物力研究NO的生理作用。
在国外每月约有50篇关于NO在各种生理途径中的论文发表,其所涉及的领域很广,从药物、生理到生化各个领域,因此可以说NO已成为生命科学界研究的热点之一。
一氧化氮(Nitrico某ide,NO)是一种由内皮细胞释放的血管活性物质,可介导血管的舒张反应,在生物体内具有广泛而多样的生物学效应。
体内血管内皮细胞、血小板、中性粒细胞、巨噬细胞、神经组织在一定刺激下均可产生NO。
近年来,人们对NO进行了许多研究,本文就NO在人体多个系统疾病发病过程中的作用机制进行分析。
1NO的合成及代谢NO是一种亲脂性的小分子化合物,分子量为30,难溶于水,因此NO在细胞内产生后,可以透过生物膜自由扩散进入周围的靶细胞,进而执行信号分子的功能。
在生物体内左旋精氨酸(L-Arg)在NO合酶(NOS)作用下与O2结合生成左旋胍氨酸(L-Cit)及NO。
生物体内许多细胞是通过此途径来合成NO的,如中枢神经元、内皮细胞、巨噬细胞、成纤维细胞、血小板、肝细胞及肿瘤细胞等。
催化此反应的NOS有三种同功酶:主要存在于内皮细胞中的eNOS(endothelialnitrico某ideyn2thae),存在于神经细胞中的nNOS(neuronalnitrico某ideyn2thae),以及存在于巨噬细胞、胶质细胞中的iNOS(induciblenitrico某ideynthae)eNOS和nNOS均为构成型酶,统称为cNOS(contitutivenitrico某ideynthae)前2种催化生成的NO量较少,仅在10-12mol/L水平,主要调节细胞的信息[2]传递;iNOS催化生成的NO约在10-6mol/L水平,具有细胞毒素或细胞防护功能此外,临床上应用的硝基扩血管物质(如硝酸甘油)进入机体后,也可以通过一系列生化反应释[3]放NO,是局部产生NO的化合物生成的NO在生物体液中的半衰期很短,很快就转变为硝酸盐/亚硝酸盐的代谢产物。
巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶的表达调节机制
Ｓ １６ ５
免 疫 学 杂 志
第１ ８卷
第 ３期 ２ Ｏ ６月 Ｏ２年
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ｌ ｍ血 ０ ａ ｌ ｎ
氧化氮 （ｉｃｏ ｄ ． Ｏ 是第一个 与经典 信 ｎｒ ｘ ｅ Ｎ ） ｔ ｉ ｉ 号介质定义不同的信号分子 ． 其广泛的生物学功 能 包括 ： 舒张血管 ． 抑制血小板凝聚， 作为神经介质 ， 杀 伤肿瘤和教生物 、 免疫调节等 。它的作用十分迅速 ， 半衰 期在 ０．～３ 之 间 ， ５ ０ｓ 因此 尽管许 多 学者致 力于 Ｎ Ｏ的研究 ， 们 对 它 的认 识 仍较 局 限 。催 化 Ｎ 我 Ｊ Ｏ 生物合成 的酶 称为一氧化氮合 酶 （ｉ ｃｏ ｄ ｙ． ｎｒ ｘ ｅｓ ｔ ｉ ｉ ｎ ｔ ｓ， Ｏ ）Ｎ Ｓ以 Ｌ精氨酸和分子氧为底物 ， ｈ ｅ Ｎ Ｓ．Ｏ ａ 催化 隋 氨酸的 ２ 个等价胍基氮之一经 ５电子氧化反应 生成 Ｎ Ｏ和 Ｌ胍氨 酸 。 目前已经确定的 Ｎ Ｓ Ｏ 亚型有 ３ ， 种 基于原型酶 的细胞 、 组织来源及表达方式的描述性命 名分别称 之为神 经元 型 一 氧化 氮 合 酶 （ ｌ Ⅻ ｎｒ ｘ ｅ ｉｉ ｏｉ ｔｃ ｄ ｓ ｔ ｓ， Ｎ Ｓ 、 ｙ ｈ ｅ ｎ Ｏ ）诱导型一氧化氮合酶（ ｄｃ ｌ ｎ ｎａ ｉ ｕｉｅ ｉ ｎ ｂ — ｔｃ ｘ ｅ ｙｔ ｓ，Ｎ ｓ和内皮型一氧化氮合酶 （ｎ ｒ ｉ ｎ ａ ｉｏ ） ｉｏｄ ｓ ｈ ｅ ｅ—
一氧化氮及诱导型一氧化氮合酶的研究进展
关键 词 ： 一氧化氮； 诱导型一氧化氮合酶
中图分类号 ：２ ５ ５ Ｒ ８ ．
文献标 识码 ： Ｂ
Байду номын сангаас
文章 编号 ：０ ８Ｉ Ｏ （ ０ ７ ｏ －９ ＯＩ １０ －８ ５ ２ ０ ）４Ｉ ８ －２ ） ） ）
１８ ９０年 Ｆ ｈｏ ￣ ｇＲ等 … 发 现 血 管 内 皮 细胞 能合 成 和 分 泌 血 管 确知会释放 出不 同浓度的 Ｎ 且浓度 的变化与机 体生理 机能 紧 Ｏ， 内皮舒张因子（ Ｄ Ｆ ，９ ７年 ＰｌＩ 等 证实 Ｅ Ｒ Ｅ Ｒ ） １８ ａＴｒ Ｉ ｅ Ｄ Ｆ的化学本 密相关。免疫功能 、 血流量 、 小板凝集 反应 、 血 神经传递和记忆等 质为 Ｎ Ｏ。大量研究 表明， Ｏ在心血管 、 Ｎ 免疫 、 神经 、 消化等 系统 内环境稳定作用都普遍伴随有低水平的 Ｎ 。而过多 的 Ｎ Ｏ Ｏ通常 中具有重要的调节作用 。一 氧化氮合 酶 （ Ｏ ） Ｎ Ｎ Ｓ 是 Ｏ合成 的催 伴随有炎症 和免疫紊 乱 、 疼痛 、 神经 疾病 、 动脉粥 样硬 化 和癌症 化酶 ， 由于 Ｎ Ｏ具有 广泛 而重要 的生理 和病 理学 功能 ， 得 Ｎ 等 。不同类型 Ｎ Ｓ 使 Ｏ， Ｏ 催化合成 的 Ｎ Ｏ也会产生 不同 的生 理病理 Ｎ Ｓ的研究已经成为现今生命科学研究的热 点之一 。 Ｏ 作用 ， 构成型 Ｎ Ｓ产生小量 的 Ｎ 皮摩尔级 ） 参与信号传递 ， Ｏ Ｏ（ ， 产 １ Ｎ Ｏ的 产 生及 生 物 特 性 生生理效应 ， 而细 胞因子 或 内毒 素 刺激 细 胞释 放 的大 量 的 Ｎ Ｏ Ｎ Ｏ是一种气 体 自由基 ， 分子 中有 一未配对 电子 ， 可形成 自 （ 纳摩 尔级 ） 是 由诱 导亚 型的 Ｎ Ｓ合成 的 ， ， Ｏ 介导免疫 系统 的细胞 由基 ， 和其它分子如氧分子 、 超氧 自由基 ， 或过 渡金属 （ 如与 ｈｅ 毒和细胞生 长抑制 。尽管 Ｎ ａ— Ｏ维 持黏膜 的血 管舒 张和血 管通透 ｍ ｐ ｔｉ 血红蛋白结合 的铁 ） ｏ ｍｅｎ ｓ 反应 。在 体 内极 不稳定 ， Ｊ 是一 性 ， 是过 多 的 Ｎ 但 Ｏ也 可 直 接 引 起 细 胞 毒 性 作 用 ， 过 氧 化 物 一 与 短 寿 分 子 ， 衰 期 仅 为 ３－ 。Ｎ 半 ５ｓ Ｏ具 有 脂 溶 性 ， 以快 速 透 过 生 起 导致 过 氧 化 ， 而 引 起 组织 损伤 】 可 从 。 物膜扩散 ， 在体内迅 速被血红蛋 白、 自由基或氢醌等灭活。 氧 ３ Ｎ Ｎ Ｓ作 用机 制 Ｏ。 Ｏ Ｎ Ｏ由一氧化氮合酶 （ Ｏ ） Ｎ Ｓ 催化 Ｌ一精氨酸 与氧分子经多步 Ｎ Ｏ在体 内主 要参 与 以下 ３个反 应 【 ： 激 活鸟苷 酸 环化 ７ ① ］ 氧化还原反应生成 。不同类型 的细胞 中， 在不 同类 型的 Ｎ Ｓ 酶 ， 存 Ｏ， 发挥信号传导功能。Ｎ － ＭＰ信 号通路 广泛存在 于人类 和 Ｏ ＣＧ 通过不 同的信号转导机制产生 Ｎ 。Ｎ Ｓ是 Ｎ Ｏ Ｏ Ｏ合成过程 中的关 动物的多种组织和细胞中 ， 它代表 一种新 的细胞 间信 息传递 和细 键酶 ， 由于 Ｎ Ｏ性质活泼 ， 半衰期短 ， 因此许 多关 于 Ｎ Ｏ的研 究都 胞功能 调 节 的信 号 传 导 系 统 。Ｎ 可 激 活 ｓ Ｃ， 细 胞 内 Ｏ Ｇ 使 集 中在 Ｎ Ｓ的研 究 上 。 现 已 知 Ｎ Ｓ有 ３种 类 型 ， 以 广 义 的 将 ｃ ＭＰ增 加 ， 动一 系 列 蛋 白磷 酸 化 反 应 ， 而 发 挥 不 同 的 生 理 Ｏ Ｏ 可 Ｇ 启 从 其分为两种 ， 即构成型一氧化 氮合酶 （Ｎ Ｓ 和细 胞因子诱 导型 功能。②与红细胞中的血 红蛋 白结 合生成亚 硝酸血红 蛋 白而 失 ｃＯ ） （ Ｎ Ｓ Ｎ ｓ ） Ｎ Ｓ包括 内皮组织 （Ｎ Ｓ或 Ｎ Ｓ ） ｉ Ｏ 或 Ｏ ２ 。ｃ Ｏ ｅＯ Ｏ ３ 和神经 去活性 。扩散对于 Ｎ Ｏ的局部调节作 用非 常重要 ， 而且是其生 物 系统 （ Ｎ Ｓ或 Ｎ Ｓ ） ｎＯ Ｏ １ 。它 们 在 组 织 分 布 、 调节 方 式 、 物 活 性 和 半 衰期 的决 定 因素 ， Ｏ极 易 与 血 管 腔 中红 细胞 的 氧 合 血 红 蛋 白 生 Ｎ Ｎ Ｏ产生量方面都有 区别 。ｃ Ｏ Ｎ Ｓ主要分布在内皮组织 （ Ｎ Ｓ 和 结合 而被灭活 ， ｅＯ ） 使其在血管腔 中形成 一个 极陡 的扩散梯 度 ， 挥 发 神经 系统 （ Ｎ Ｓ ， ． Ｏ ） 主要 负责基 础 Ｎ 的合 成 ， Ｏ 调节 各种生 理功 局 部 调节 作 用 。③ 与 超 氧 阴 离 子 反 应 ， 生 毒 性 很 强 的 过 氧 产 能。它们依赖 ｃ ２ ａ 的存 在 ， 当细 胞 内 Ｃ ２ ａ 浓度 升高 时被激 活。 化亚硝酸。Ｎ Ｏ极易 与 Ｏ ；反应 不可逆 地生成 Ｏ Ｏ 一病 理条 件 Ｎ Ｏ， ｃ Ｏ 合 成小量 的 、 期的 Ｎ 引起 Ｎ Ｎ Ｓ 短 Ｏ， Ｏ浓 度的快 速增 加 ， 当 而 下Ｎ Ｏ是 体 内产 生 的唯 一 能 与 Ｓ Ｄ 竞 争 Ｏ Ｏ ｉ的 生 物 分 子 ， 细 胞 当 Ｃ２ ａ 浓度减小时 ， Ｏ量迅速 下降 ， 成一 个博动性 的 Ｎ Ｎ 形 Ｏ释放 ， 同 时 产 生 大 量 的 Ｎ 和 时 ， 成 有 毒 的强 氧 化 剂 — — ０ Ｏ 。 Ｏ 生 Ｎ Ｏ一 这 是生 理 调 节所 必须 的 Ｎ 。 ｅ Ｏ Ｏ Ｎ Ｓ是 膜结 合 型 的 ， 血管 紧张 度 在 Ｏｏ ’ Ｎ Ｎ ｏ 是 Ｏ的 主要 毒 性 作 用 形 式 】 。 控制和血小板凝 集 中有 一定 的作用 ， Ｎ ｓ是 细胞溶 质 的， ｎＯ 发挥 三 种 亚 型 的 Ｎ Ｓ都 是二 聚 体 型 的 ， 个 硫 醇 盐 协 调 的亚 铁 Ｏ 一 神经 递 质 作 用 ， 人 的 骨 骼 肌 里 已经 发 现 了 它 的 ｍＲ Ａ。ｉ Ｏ 在 Ｎ Ｓ Ｎ 血红素环 ， 一个四氢生 物喋呤（ 辅 助因子和 一个 Ｌ一精氨酸 Ｈ Ｂ） 在多种细胞 中均有表达 ， Ｏ ｉ Ｓ不仅在免 疫反应 细胞如 巨噬细胞 Ｎ Ｌ— ｒ） Ｎ一羟 精 氨 酸 底 物 结 合 部 位 组 成 Ｎ Ｓ的 催 化 中心 。 ｇ Ｏ 和中性粒细胞中表达 ， 而且在多种 哺乳动 物细胞 ， 括成纤维细 （ Ａ ； ／ 包 Ｎ Ｓ二 聚 体 的 每 一个 亚 基 均 包 含 两 个 区域 ： 个 结 合 Ｆ Ｏ 一 ＭＮ，Ａ ＦＤ 胞、 角质化细胞 、 内皮 和血管平滑肌 细胞 ， 以及非哺 乳动物 ， 包括 Ａ Ｐ 昆虫 和植物 中均有表达 。ｉＯ Ｊ Ｎ Ｓ是非 ｃ “依赖型 ， ａ 其激活不需 和 Ｎ Ｄ Ｈ的还原区和～个含 有亚铁 血红 素和 四氢生 物 喋呤的 氧化区。电子从还原 区转移到氧化区是酶 活性所 必需 的 ， 由钙 一 要 ｃ “浓度升高。ｉＯ ａ Ｎ Ｓ在静息 细胞 内是不 表达的 ， 当细胞受到 钙调蛋 白复合物调节 。当钙一 钙调蛋 白复 合物存 在时 ， 电子从一 细胞因子或免疫 微生物 刺激 ， 革兰 氏 阴性杆 菌的脂 多糖 Ｌ Ｓ 如 Ｐ ＡＰ ＭＮ 和 Ｆ Ｄ 传 递 到 另 一 个 亚 基 的 氧 Ａ 强 烈诱 导， Ｏ ｉ Ｓ催化合成非 生理 浓度的 大量 Ｎ 产生 一系列病 个 亚 基 的 Ｎ Ｄ Ｈ 通 过 Ｆ Ｎ Ｏ，
S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉安对巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶的影响
论
著 ・
ｓ 一亚硝基 一 Ｎ一乙酰 一 现 一青霉胺对 巨噬细胞诱 导型一氧化 氮合酶 的影 响
胡 旭 堂 胡 海 英 王 志 禄
１ ． 兰州 大学 第 ． 兰 州大 学 第一 医院 心 内科 ， 兰州 ７ ３ ０ ０ ０ ０
Ｔｈｅ ｉ ｎｆ ｌ ｕｅ ｎｃ ｅ ｏ ｆ Ｓ－ｎ ｉ ｔ ｒ ｏ ｓ ｏ－Ｎ －ａ ｃ ｅ ｔ ｙ ｌ —ＤＬ －ｐｅ ｎｉ ｃ ｉ ｌ ｌ ａ ｍｉ ｎ ｅ ｏ ｎ ｍａ ｃ ｒ ｏ ｐｈａ ｇ ｅ
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二、一氧化氮(NO) - 陕西师范大学网络教育学院首页
二、一氧化氮（NO）一氧化氮（NO）是一种简单的气体分子，可在哺乳类神经细胞内经一氧化氮合酶（NOS）作用产生。
它兼有第二信使和神经递质的功能，是一种新的细胞间信息传递的重要载体，广泛参与了生理的调节，并在中枢与周围神经系统中发挥神经传导作用。
NO 是一种极不稳定的生物自由基，分子小，结构简单，常温下为气体，微溶于水，具有脂溶性，可快速透过生物膜扩散，生物半衰期只有3－5s，其生成依赖于一氧化氮合成酶（nitric oxide synthase, NOS ）。
前体：L-精氨酸合成：在NOS的作用下，精氨酸首先水解，再氧化生成瓜氨酸和NO。
瓜氨酸再通过精氨酸代琥珀酸重新合成精氨酸。
失活：NO在体内可被氧自由基、血红蛋白、氢醌迅速灭活，极易与氧反应生成NO2 ，在中性体液中转化为NO3-而丧失生物活性。
（一）、NOS有两型3种：一型为依赖于 Ca2+ 和钙调蛋白（CAM）的结构型NOS（cNOS），包括神经元型NOS （nNOS ）和内皮细胞型NOS（eNOS ）；二型是不依赖于Ca2+和CAM的诱导型NOS （iNOS ）。
通过定量PCR测定，证实了大鼠 NOS mRNA广泛分布于中枢和外周组织中，其中以小脑的含量为最高；在外周组织中，以肾脏含量为最高，其次为心脏和肺。
（二）、NOS抑制剂：L-Nω-硝基精氨酸甲酯（L-NAME）NG-甲基-L-精氨酸（L-NMMA）N-硝基-L-精氨酸（L-NNA ）氨基胍（AG）选择性抑制 iNOS硝基吲唑（7-NI）选择性抑制 nNOS非对称性二甲基精氨酸（ADMA）和L-单甲基精氨酸（L-MMA）选择性抑制内源性NOS 作用方式：一是通过扩散进入靶细胞，与细胞内特殊的靶分子相互作用，当NO与鸟甘酸环化酶（GC）作用而激活后者，产生环磷酸鸟苷（cGMP），随着细胞内cGMP水平的升高而激活一系列生理和生化过程。
另一个途径是激活二磷酸腺苷（ADP），促进ADP-核糖基直接与受体分子结合。