细胞生物学实验手册

细胞生物学实验手册

授课教师:毛晓霞

(一)成绩

1、实验占期末总成绩30%,即30分;取七个实验的平均成绩为实验最终成绩

2、分组名单:分AB两班,每班5组,每组6人

3、请假:辅导员签字的假条+提前一天电话请假

(二)实验要点

实验一光学显微镜使用及显微摄影技术

一、实验目的

1、了解光学显微镜结构原理并熟练掌握其操作方法;

2、掌握显微摄影技术操作流程

3、了解部分细胞生物学中所使用的大型仪器设备的操作流程及用途。

二、实验原理

显微镜的放大效能就是由其照明系统所使用光的波长与透镜系统的数值孔径决定,缩短使用的光波长或增加数值孔径可以提高分辨率。

可见光的光波振幅较窄,因此使用较短波长的紫外光作为光源系统,可以提高分辨率。

三、实验内容

1、双目显微镜的操作规范:

2、NIKON80i显微摄影系统的操作流程

3、胶片放大洗印技术流程

4、部分大型仪器设备介绍

荧光显微镜Fluorescence microscope

暗视野显微镜dark field microscope

相差显微镜

微分干涉差显微镜

倒置显微镜inverse microscope

显微操作仪

透射电子显微镜TEM

四、作业

1、双目显微镜操作流程规范

五、思考题

1、暗视野显微镜的定义与应用

2、相差显微镜的定义与应用

实验二血涂片的制备及细胞大小的测量

一、实验目的:

1、掌握血涂片的制备技术

2、认识血液中红细胞与各类白细胞的形态

3、掌握目镜测微尺的使用方法

二、实验原理:

将血液样品制成单层细胞的涂片标本,经瑞氏－吉姆萨染液染色后,不同白细

胞中的颗粒可以呈现不同的颜色。碱性粒细胞的颗粒呈蓝紫色,酸性粒细胞的颗粒呈7橘红色,中性粒细胞的颗粒呈粉红色。根据细胞中颗粒的颜色、大小及多少,再结合细胞的大小及细胞核的形态,就可以将白细胞进行分类计数。

三、实验步骤

(一)血涂片的制备

1、消毒与取血

消毒

先按摩取血部位,使血流通畅;再用酒精消毒采血针与取血部位(如指尖)、

取血

待酒精干后,刺破皮肤,使血自然流出,勿挤、

2、推片

取一块边缘光滑的载片做推片、将其一端置于血滴前方,向后移动到接触血滴,使血液均匀分散在推片与载片的接触处、然后使推片与载片呈30°～40°角,向另一端平稳地推出,迅速在空气中摇,使之自然干燥、

3、染色

加瑞氏－吉姆萨A染液1－2滴,染色1分钟,再将瑞氏－吉姆萨B染液滴加于A液上面(滴加之量为A液的2－3倍),染色5－10分钟。最后用蒸馏水把染液冲掉,用吸水纸吸干,自然干燥后,即可镜检观察

4、观察、

四、注意事项

玻片的清洗:

使用玻片时只能手持玻片边缘,切勿触及玻片表面,以保持玻片清洁,干燥,中性,无油腻、

细胞染色对氢离子浓度十分敏感,在染色过程中玻片必须化学清洁,配制瑞氏染液必须用优质甲醇,稀释染液必须用缓冲液,冲洗用水应近中性, 否则各种细胞染色反应异常,致使细胞的识别困难,甚至造成错误、

染色时间与染液浓度,室温高低,细胞多少有关、染液越淡,室温越低, 细胞越多,所需染色时间越长或应适当增加染液量,因此染色时间应视具体情况而定、特别就是更换新染料时必须经试染,摸索最佳染色条件、

染液不可过少,以防蒸发干燥染料沉着于血片上难冲洗干净、冲洗时应用流水将染液冲去,不能先倒掉染液,以免染料沉着于血片上、

测微尺的使用

显微测微尺就是用来测量细胞在显微镜下长度的工具,由目镜测微尺与镜台测微尺组成,两尺配合使用、

计算细胞、细胞核体积的公式:

圆形V=4/3πr 3(r为半径)

椭圆形V=4/3πab2(a、b为长、短半径)

核质比N／D=Vn／(Vc—Vn)(Vn为核的体积,Vc就是细胞质的体积)

五、作业题

❖1、制备一张血涂片,观察并描述其中各类血细胞的形态特征

❖2、任选20个红细胞,测量其直径,并计算出平均值

六、思考题

从外观来判断,一张好的血涂片有哪些特征？

实验三细胞凝集反应及细胞膜的渗透性

一、实验目的

了解细胞膜的表面结构;

了解细胞膜的渗透性及各种物质进入细胞膜的速度

二、实验的原理

1、细胞凝集反应

细胞质膜就是由蛋白质不同程度镶嵌在脂双层中所形成的动态流动结构,蛋白质与脂类分子又与寡糖链结合为糖蛋白与糖脂分子,糖蛋白与糖脂分子伸至细胞表面的分枝状寡糖链在质膜表面形成细胞外被(又称为糖萼)。

凝集素(1ectin)就是一类含糖的(少数凝集素例外)并能与糖进行专一性结合的蛋白质,它具有凝集细胞与刺激细胞分裂的作用。凝集素促使细胞凝集主要就是由于它能与细胞外被的糖分子相连接、在细胞间形成“桥”的结果,且加入与凝集素互补的糖分子可以抑制细胞间的凝集反应。

2、细胞膜的渗透性

细胞膜(cell membrane):又称质膜、细胞表面的一层薄膜、厚度通常为7～8nm,由脂类与蛋白质组成,还有一类碳水化合物,我们知道糖类物质也属于碳水化合物的范围。细胞膜把细胞包裹起来,使细胞能够保持相对的稳定性,维持正常的生命活动、它最重要的特性就是半透性,或称选择渗透性,对进出入细胞的物质有很强的选择透过性,它可以选择性的让某些分子进入或排出细胞。这就是细胞膜最基本的一种功能、如果细胞丧失了这种功能,细胞就会死亡、

三、作业题

(1).绘制简图,表示血细胞的凝集过程;

(2).图示血细胞凝集的原理。