逍遥散提取液对乳腺癌细胞MCF-7细胞周期的影响
卡培他滨维持治疗联合逍遥散治疗晚期三阴性乳腺癌的临床研究
卡培他滨维持治疗联合逍遥散治疗晚期三阴性乳腺癌的临床研究发布时间：2022-12-06T07:06:31.226Z 来源：《健康世界》2022年19期作者：岳明娜[导读] 分析晚期三阴性乳腺癌治疗中联合应用逍遥散与卡培他滨维持治疗的效果。
岳明娜哈尔滨嘉润医院黑龙江哈尔滨150000摘要：目的：分析晚期三阴性乳腺癌治疗中联合应用逍遥散与卡培他滨维持治疗的效果。
方法：晚期三阴性乳腺癌患者取样65例，收治时间2019年12月至2022年03月，随机分为联合组（33例，逍遥散联合卡培他滨维持治疗）和常规组（32例，卡培他滨治疗），对比生存质量、疾病控制率、并发症率。
结果：治疗后，联合组生存质量得分比常规组高，疾病控制率96.97%，比常规组78.13%高，并发症率6.06%比常规组28.13%低，P＜0.05。
结论：晚期三阴性乳腺癌治疗中联合应用逍遥散与卡培他滨维持治疗可优化疾病控制效果，提升治疗安全性，改善患者生存质量。
关键词：晚期三阴性乳腺癌；逍遥散；卡培他滨乳腺癌临床症状以乳头溢乳、腋窝淋巴结肿、乳头肿块、皮肤改变为主，可严重威胁女性心理、生理健康，目前对其的治疗以化疗联合手术为主[1]，而晚期三阴性乳腺癌病人有较高风险发生肿瘤转移或复发情况，单纯给予卡培他滨维持治疗效果有限，为此，本研究取收治时间2019年12月至2022年03月的65例晚期三阴性乳腺癌患者资料，研究观察了逍遥散联合卡培他滨维持治疗的效果。
1.资料与方法1.1一般资料晚期三阴性乳腺癌患者取样65例，收治时间2019年12月至2022年03月，随机分为联合组（33例，逍遥散联合卡培他滨维持治疗）和常规组（32例，卡培他滨治疗）。
纳入标准：KPS＞70 分，无肿瘤远处转移，病理检查、影像学检查确诊，签订同意书的晚期三阴性乳腺癌患者。
排除标准：资料不全，肝、肾、心功能不全者。
联合组1至7年病程，平均（4.14±1.50）年，最高85岁，最低61岁，平均（73.14±3.65）岁，常规组1至7年病程，平均（4.30±1.53）年，最高85岁，最低62岁，平均（73.42±3.60）岁，P＞0.05。
中药对肿瘤细胞周期影响的研究进展
中药对肿瘤细胞周期影响的研究进展孙阳;史默怡;王亚贤【摘要】随着研究技术方法日益先进,中药抗肿瘤的作用机制逐渐被现代医学所揭示.增殖是细胞生命活动的重要特征.细胞的增殖周而复始,构成细胞周期.细胞周期包括G1、S、G2、M期.查阅近年来的相关文献,众多学者应用显微镜、流式细胞术等方法证实抗癌中药阻滞肿瘤细胞于不同的细胞时期.引起细胞阻滞的因素很多,如细胞周期依赖性激酶、细胞周期抑制蛋白和信号通路等.深入研究这些因素,可以探究中药对细胞周期的作用靶点,为更好地在临床上开发、应用中药奠定坚实的基础.%With the advance of technology, the mechanism of action for TCM against tumor has been discovered. Proliferation is an important characteristic of the life, running as cell cycle, which comprises G1 , S, G2 and M phase. Researchers have found that TCM can induce tumor cell to be blocked in certain phase with the help of microscope and flow cytometry. There are many impacting factors for cell block, such as cyclin dependent kinase, cell cycle control protein, signal transduction pathway, etc. The impacting factors of cell block are reviewed and analyzed in this paper. Exploitation of these factors will lay solid foundation for widely clinical application of TCM in curing tumors.【期刊名称】《中医药信息》【年(卷),期】2012(029)006【总页数】3页(P109-111)【关键词】中药;细胞周期;肿瘤【作者】孙阳;史默怡;王亚贤【作者单位】黑龙江中医药大学,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学,黑龙江哈尔滨150040【正文语种】中文【中图分类】R285.5增殖是细胞生命活动的重要特征。
实验报告药物A对癌细胞增殖的抑制作用
实验报告药物A对癌细胞增殖的抑制作用实验报告：药物 A 对癌细胞增殖的抑制作用一、实验背景癌症作为全球范围内严重威胁人类健康的疾病之一，其治疗一直是医学研究的重点领域。
癌细胞的异常增殖是癌症发展的关键环节，因此寻找有效的抑制癌细胞增殖的药物具有重要意义。
药物 A 是一种新型化合物，前期的研究显示其可能具有潜在的抗癌活性，但具体作用机制和效果尚不明确。
本实验旨在探究药物 A 对癌细胞增殖的抑制作用，为其进一步的临床应用提供实验依据。
二、实验材料与方法（一）实验材料1、细胞系：选用了人肺癌细胞系（A549）、人乳腺癌细胞系（MCF-7）和人结肠癌细胞系（HCT116）。
2、药物：药物 A 由本实验室合成，纯度大于 98%。
3、试剂：胎牛血清（FBS）、RPMI 1640 培养基、胰蛋白酶、MTT 试剂等。
（二）实验方法1、细胞培养将三种癌细胞系分别培养在含 10% FBS 的 RPMI 1640 培养基中，置于37°C、5% CO2 的培养箱中培养。
待细胞融合度达到80%左右时，进行传代培养。
2、药物处理将处于对数生长期的细胞接种于 96 孔板中，每孔约 5×10³个细胞。
培养 24 小时后，分别加入不同浓度的药物 A（0、1、5、10、20 μM），每个浓度设置 6 个复孔。
继续培养 48 小时。
3、 MTT 法检测细胞增殖培养结束后，每孔加入20 μL MTT 溶液（5 mg/mL），继续培养 4小时。
然后小心吸出上清液，每孔加入150 μL DMSO，振荡 10 分钟，使结晶充分溶解。
使用酶标仪在 490 nm 波长处测定各孔的吸光度值（OD 值）。
4、计算细胞增殖抑制率细胞增殖抑制率＝（对照组 OD 值实验组 OD 值）／对照组 OD值 × 100%三、实验结果（一）药物 A 对不同癌细胞系增殖的影响在三种癌细胞系中，随着药物 A 浓度的增加，细胞增殖抑制率逐渐升高。
布洛芬对人乳腺癌细胞系MCF-的作用及其机制的实验研究
结论：布洛芬可能通过抑制MCF-7细胞的生长和诱导细胞凋亡来发挥其抗肿瘤作用
02
实验方法
细胞培养
细胞系：MCF-7
培养条件：37℃，5% CO2
传代：每2-3天传代一次
培养基：DMEM
细胞状态：细胞形态良好，生长旺盛
细胞鉴定：通过免疫荧光染色进行鉴定
实验结果：布洛芬对MCF-7细胞基因表达有显著影响
具体影响：上调或下调某些基因的表达，如细胞周期相关基因、凋亡相关基因等
机制探讨：布洛芬可能通过调节细胞周期和凋亡相关基因的表达，影响MCF-7细胞的生长和增殖。
04
实验结论
布洛芬对人乳腺癌细胞系MCF-7具有抑制作用
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布洛芬对人乳腺癌细胞系MCF-7的作用及其机制的实验研究
/目录
目录
02
实验方法
01
实验目的
03
实验结果
04
实验结论
01
实验目的
研究布洛芬对人乳腺癌细胞系MCF-7的作用
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实验设计：使用布洛芬处理MCF-7细胞，观察细胞生长、凋亡和细胞周期变化
实验结果：布洛芬处理后，MCF-7细胞生长受到抑制
实验方法：使用布洛芬处理MCF-7细胞，观察细胞生长情况
机制研究：布洛芬可能通过抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡等方式发挥作用
临床意义：布洛芬可能作为乳腺癌治疗的辅助药物，具有潜在的临床应用价值
布洛芬通过诱导细胞凋亡发挥抗肿瘤作用
桃儿七提取物对人乳腺癌MCF
桃儿七提取物对人乳腺癌MCF 【关键词】乳腺癌Effects of Taoerqi extract on proliferation and apoptosis of human breast carcinoma cell line MCF7【Abstract】 AIM: To investigate the effects and related mechanism of Taoerqi on the proliferation inhibition and onset of apoptosis in breast carcinoma cell line MCF7. METHODS: Antiproliferative effect of Taoerqi extract against MCF7 was tested by MTT assay，morphologic changes of MCF7 were observed by inverted microscope，electron microscope and HE staining， and cell apoptosis percentage and cell cycle phase distribution of MCF7 were measured by flow cytometric assay. The expressions of proliferation and apoptosisassociated proteins were determined by immunocytochemical method. RESULTS: A timedependent and dosedependent proliferation inhibition was demonstrated in Taoerqi extract. With the Taoerqi extract treatment of 1， 2 and 3 mg/L for 72 h， the inhibitory rate was 43.0%， 54.9%， 78.5% respectively. The characteristic morphological changes of apoptosis were observed in cells after treated by 2 mg/L of Taoerqi， and many multinucleate giant cells were also found. Taoerqi induced a G2/M cell cycle arrest and the apoptosis was time and dosedependent. With the treatment of 2 mg/L Taoerqi for 48 h， the protein expressions of PCNA and Bcl2 decreased from (154.78±0.16) and (85.56±0.09) to (78.46±0.15) and (40.43±0.07) (P<0.01)，while p21WAF1/CIP1 and cMyc increased from (92.32±0.12) and (114.48±0.14) to (125.54±0.09) and (156.52±0.08) (P<0.01). CONCLUSION: The timedependent and dosedependent proliferation inhibitory effect of Taoerqi extract on breast cancer cells appears to be caused by the upregulation of p21WAF1/CIP1 expression， downregulation of PCNA expression， and the apoptosis is related to the downregulation of antiapoptotic protein Bcl2 and the upregulation of cMyc protein. G2/M arrest is also associated with apoptosis.【Keywords】 Taoerqi; breast neoplasm; human breast carcinomacell lines MCF7; apoptosis【摘要】目的:研究桃儿七对人乳腺癌MCF7细胞增殖抑制和促进凋亡的作用，探讨其抗癌作用的机制. 方法:应用MTT法检测桃儿七提取物对人乳腺癌MCF7细胞的生长抑制作用，倒置显微镜、HE染色及电镜观察细胞形态学改变，FCM 分析细胞周期及凋亡率，免疫细胞化学法检测细胞增殖凋亡调控相关蛋白的表达.结果:桃儿七提取物可明显抑制MCF7细胞的增殖，1，2，3 mg/L桃儿七作用72 h 后，细胞生长抑制率分别为43.0%，54.9%，78.5%，抑制作用呈时间及浓度依赖性.形态学观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征，伴有多核细胞形成.FCM分析发现桃儿七阻断MCF7细胞生长于细胞周期的G2/M期，凋亡诱导作用呈时间及浓度依赖性.免疫细胞化学结果显示，2 mg/L桃儿七作用48 h后，PCNA，Bcl2蛋白表达分别由154.78±0.16，85.56±0.09降至78.46±0.15，40.43±0.07，P<0.01；而p21WAF1/CIP1和cMyc蛋白由92.32±0.12，114.48±0.14增至125.54±0.09，156.52±0.08，P<0.01. 结论:桃儿七提取物对人乳腺癌MCF7细胞的生长有明显的呈时间及浓度依赖性的抑制作用，G2/M期阻滞并诱导凋亡. 该作用与p21WAF1/CIP1表达增加及PCNA表达降低有关，通过下调Bcl2和上调cMyc表达诱导乳腺癌细胞凋亡.【关键词】桃儿七;乳腺癌;人乳腺癌细胞系MCF7;凋亡0引言藏药桃儿七又名小叶莲，藏药音译奥色塞，习用果实. 宗玉英等［1］发现桃儿七果实900 mL/L乙醇提取物对肿瘤细胞抑制率为75%，目前对于其抗肿瘤作用机制仍不很清楚. 我们对桃儿七根900 mL/L乙醇提取物抑制乳腺癌细胞增殖及其诱导凋亡的作用机制进行研究如下.1材料和方法1.1材料乳癌细胞MCF7由第四军医大学分子生物学室惠赠. 小牛血清，RPMI 1640培养基（Gibco公司）;噻唑蓝（MTT，上海生工生物制品公司）;二甲基亚砜（DMSO）;p21WAF1/CIP1，cMyc，Bcl2，PCNA鼠抗mAb，SABC及DAB试剂盒（博士德公司）. 酶标仪（奥地利Tecan）;相差倒置显微镜（Olympus CK4032RPC）;流式细胞仪（美国Coulter Elite Esp型）;投射电镜（JEM2000EX 日本）. 取桃儿七根粗粉100 g，以石油醚（30~60℃）浸提至无色，药渣再以900 mL/L乙醇浸提至无色，乙醇回收溶剂，减压蒸馏获得浸膏，真空低温干燥，制得样品.样品先以少量DMSO溶解，然后用双重蒸馏水稀释配制为20 mg/mL的原液，用0.22 μm孔径滤膜过滤除菌后-20℃避光保存，临用前再以RPMI 1640完全培养基稀释配成不同药物浓度，DMSO在溶液中最大浓度小于0.05%.1.2方法1.2.1细胞生长状态取对数生长期细胞常规消化接种于96孔培养板（3×103个/孔），每孔200 μL，培养24 h后弃去培养液，随机分为5组(每组n=8)，实验组加入含不同浓度桃儿七根乙醇提取物的RPMI 1640完全培养基200μL，终浓度为（1，2，3 mg/L）；阴性对照组加等量RPMI 1640培养液；阳性对照组为顺铂（PDD） 3 mg/L.分别于加药后24，48和72 h加入MTT (5 g/L) 20μL继续培养4 h，弃培养液，每孔加150 μL DMSO，设置空白对照，振荡混匀10 min，上酶标仪检测A值，检测波长490 nm，参考波长640 nm.抑制率(%)=（1-实验组A/对照组A）×100. 倒置显微镜动态观察细胞形态变化.取对数生长期细胞，调整细胞密度接种于置有载玻片的6孔板培养皿，细胞贴壁后弃上清，用药组加入含2 mg/L桃儿七的RPMI 1640的培养液共孵育，同时设对照组，48 h后行常规HE 检查.再将6×105经2 mg/L桃儿七作用后24 h及48 h的MCF7细胞浸入4℃冰冷的40 g/L戊二醛固定2 h，用探针剥离细胞团块，移入小瓶，常规电镜脱水，包埋，双铅染色，制备超薄切片，电子染色，透射电镜观察细胞超微结构.1.2.2细胞周期及凋亡取对数生长期细胞，调整细胞密度接种于50 mL培养瓶(3×105个/瓶)，24 h后实验组加入含不同浓度桃儿七根乙醇提取物的培养液，对照组以等量RPMI 1640代替样品，常规培养，分别于加药后24，48 h常规消化，10 mmol/L PBS洗涤离心两次，取1×106个细胞，70 mL/L冷乙醇固定过夜，再用PBS洗去固定液，加碘化丙啶(PI)染色液1 mL(含0.25 g/L RNase A，20 mg/L PI)，置于4℃冰箱30 min后上流式细胞仪检测DNA含量，每组共测1×104个细胞.同时取1×106个细胞重悬于预冷的结合缓冲液，调整细胞数为1×109/L，加入5 μL Annexin VFITC和5 μL PI到490 μL细胞悬液中，4℃避光孵育10 min，流式细胞仪检测荧光强度，每组共测1×104个细胞.1.2.3免疫组化取对数生长期细胞，调整细胞密度接种于置有载玻片24孔板的培养皿，实验组加入含2 mg/L浓度桃儿七根90 mL/L乙醇提取物，对照组加等量1640培养液，常规培养，于加药后48 h终止培养，取出爬有细胞的玻片，10 mmol/L PBS冲洗3次，950 mL/L乙醇固定15 min，染色步骤严格按SABC，DAB 试剂盒说明书操作，以PBS代替一抗作阴性对照，检测Bcl2，cMyc，PCNA及p21WAF1/CIP1蛋白表达.染色结果判断：MCF7细胞核或(和)胞质呈棕褐色为阳性，高倍视野下随机计数5个视野细胞总数，计数其中的阳性细胞，算出阳性率，并用病理图像分析软件对蛋白表达进行半定量分析.统计学方法：计量资料用x±s表示，计数资料用％表示，采用SPSS 10.0统计软件包作数据处理，分别采用秩相关分析，方差分析，t检验.P<0.05表示差异有统计学意义.2结果2.1桃儿七对MCF7细胞生长的抑制作用对照组MCF7细胞体外生长活跃，桃儿七对MCF7细胞有明显的抑制作用，1 mg/L 48 h出现细胞生长抑制，与对照组比较有统计学意义(P<0.01)，而2和3 mg/L 24 h出现极显著的差异（P<0.01），并且随着作用时间的延长，细胞存活率逐渐下降，并呈时间、浓度依赖性，经秩相关分析γs=0.75，P<0.05. 1，2，3 mg/L桃儿七作用72 h后，细胞生长抑制率分别为43.0%，54.9%，78.5%，阳性对照组PDD 3 mg/L为58.6%（Tab 1）.表1桃儿七对MCF7细胞的影响（略）2.2肿瘤细胞形态学变化加桃儿七后细胞膜皱缩，细胞先变圆，原来贴壁生长的细胞脱离生长面，呈悬浮状态，且随药物浓度增大及时间延长，细胞悬浮增多.HE染色后光镜下凋亡细胞核呈致密深蓝色，核浓缩，核染色质固缩致密或断裂（Fig 1），另有部分细胞体积变大，出现较多多核细胞，并有多级分裂出现.用药24 h后，透射显微镜下可见凋亡细胞膜表面微绒毛减少或消失，核染色质边集及凝聚，核形态不规则，线粒体结构基本清晰，有些内质网空泡变形，另有许多多核细胞（Fig 2），48 h后，部分胞核染色质固缩沿核膜分布，有的核膜部分消失，另见坏死细胞.2.3细胞周期分布桃儿七作用24 h后MCF7细胞明显阻滞在G2/M期，并呈浓度依赖性，而G0/G1， S期明显减少（Tab 2）；2 mg/L桃儿七作用细胞48 h，S期细胞逐渐增多，增殖渐趋活跃，G2/M期细胞仍高，G0/G1期仍低.表2桃儿七作用24 h后FCM检测细胞周期（略）2.4细胞凋亡桃儿七有诱导细胞凋亡作用. 药物作用24 h后，Annexin V+细胞及Annexin V/PI双阳细胞逐渐增加.48 h后对照组Annexin V+细胞为0.2%，Annexin V/PI双阳细胞为1.0%，2 mg/L桃儿七组Annexin V+细胞为23.1%，Annexin V/PI双阳细胞为15.3%，说明随着药物浓度增高及作用时间的延长，早期凋亡细胞及继发性坏死细胞均增加（Tab 3）.表3桃儿七作用24 h Annexin V/PI双染色结果（略）2.5免疫组化MCF7细胞中PCNA，p21WAF1/CIP1，cMyc蛋白表达定位于胞核，Bcl2蛋白表达定位于细胞质，细胞均100%阳性表达. 2 mg/L桃儿七作用于细胞48 h后，PCNA（Fig 3）， Bcl2表达下降，cMyc，p21WAF1/CIP1蛋白表达增加（Tab 4），与对照组相比，有统计学意义(P<0.01).表4桃儿七对PCNA，p21WAF1/CIP1，cMyc，Bcl2蛋白表达影响（略）3讨论桃儿七果实乙醇提取物对多种肿瘤细胞具杀伤作用［1］，但其抗肿瘤机制不明. 本结果表明，桃儿七对MCF7细胞有明显的抑制作用，并呈时间、浓度依赖性. 桃儿七还有G2/M期阻滞作用及凋亡诱导作用. 许多研究显示G2M期阻滞与凋亡有关［2］. 桃儿七可引起细胞出现凋亡，肿瘤主要分子机制是细胞周期紊乱导致细胞增殖过多和凋亡过少［3］. Bcl2是公认的抗凋亡基因，多种肿瘤高表达Bcl2，并通过Bcl2发挥抗凋亡作用［4］. cmyc基因表达产物具有双向性，其引起的细胞凋亡可被Bcl2的过表达所抑制.ICC结果显示，2 mg/L桃儿七作用于细胞48 h后，Bcl2蛋白表达下调，cMyc蛋白表达上调，说明下调Bcl2蛋白表达及上调cMyc蛋白表达可能为桃儿七诱导MCF7细胞凋亡的机制之一. PCNA不仅参与DNA 的合成，而且与cyclin，CDK，p21形成四聚体，调控周期和增殖，其表达高低可作为细胞增殖的指标［5］.p21WAF1/CIP1是p53下游的调节基因，最近研究表明G2/M节点的改变也与p21WAF1/CIP1的表达有关［6］.ICC结果显示，2 mg/L桃儿七作用于细胞48 h后，与对照组相比，PCNA蛋白表达下调，p21WAF1/CIP1蛋白表达上调，这可能为桃儿七抑制MCF7细胞增殖抑制的机制之一. 本实验对桃儿七抗肿瘤作用机制及其开发利用提供了一定的理论依据.【参考文献】［1］刘海军，徐艳，苏国庆，等. 桃儿七的研究进展［J］. 中草药，2004; 35(1): 98-100.Liu HJ， Xu Y， Su GQ， et al. Progresses in the study of Sinopodofhyllum emodi Ying［J］. Chin Tradit Herb Drugs， 2004; 35(1): 98-100.［2］ DiPaola RS. To arrest or not to G2M cell cycle arrest ［J］. Clin Cancer Res， 2002; 8(11):3311-3314.［3］ Hoeijmakers JH. Genome maintenance mechanisms for preventing cancer ［J］. Nature， 2001; 411(6835): 366-374.［4］丁磊，袁建林，武国军，等.Bcl2及Bag1基因产物在肾癌组织中的表达及意义［J］. 第四军医大学学报，2002；23（14）：1303-1305.Ding L， Yuan JL， Wu GJ， et al. Expression and significance of Bcl2 and Bag1 in renal cell carcinoma ［J］. J Fourth Mil Med Univ，2002; 23（14）：1303-1305.［5］郑建勇，李开宗，王为忠. p27kip2与肝癌细胞增殖和凋亡的关系［J］. 第四军医大学学报，2003；24（15）：1359-1361.Zheng JY， Li KZ， Wang WZ. Relationship between p27kip2 and cellular proliferation and apoptosis in hepatocellular carcinoma ［J］. J Fourth Mil Med Univ， 2003; 24(15): 1359-1361.［6］ Ha MW， Hou KZ， Liu YP， et al. Effect of staurosporine on cycle of human gastric cancer cells ［J］. World J Gastroenterol，2004; 10(2): 161-166.。
几种中药材对MCF-7体外增殖活性的影响
第４ ３卷第 ２ ０期
２ ０ １ ５年 １ ０月
广
州
化
工
Ｖｏ １ ． ４３ Ｎｏ ． ２０ ０ｃ ｔ ． ２ ０１ ５
Ｇｕ ａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ Ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｃ ａ ｌ Ｉ ｎ ｄ ｕ ｓ ｔ ｒ ｙ
几 种 中药材 对 ＭＣ Ｆ 一 ７体 外 增 殖 活 性 的 影 响 水
马小彦 ， 汤 霞 ，朱红怡 ，余万祥 ，陈福荣
５ ５ ０ ０ ０ ３ ） （ 贵 州Ｘ － Ｙ － － 学院制 药 工程 学院 ，贵 州 贵阳
《2024年新型砷代谢产物联合隐丹参酮对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用研究》范文
《新型砷代谢产物联合隐丹参酮对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用研究》篇一一、引言乳腺癌作为全球女性最常见的恶性肿瘤之一，其治疗手段和预后一直是医学界研究的热点。
近年来，随着药物研究的深入，越来越多的研究关注于天然药物及其活性成分在抗肿瘤领域的应用。
其中，砷代谢产物和隐丹参酮因其独特的药理作用和较低的毒副作用，备受关注。
本研究旨在探讨新型砷代谢产物与隐丹参酮联合作用对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响，以期为乳腺癌的治疗提供新的思路和方法。
二、材料与方法1. 材料本研究所用材料包括新型砷代谢产物、隐丹参酮以及人乳腺癌MCF-7细胞株。
所有试剂均为高纯度，并经过严格的质量控制。
2. 方法（1）细胞培养：采用标准细胞培养技术，将MCF-7细胞培养于含有适当营养物质的细胞培养基中。
（2）药物处理：将新型砷代谢产物与隐丹参酮分别以不同浓度处理MCF-7细胞，并设置对照组。
（3）细胞凋亡检测：采用流式细胞术、Western blot等方法检测细胞凋亡情况。
（4）数据分析：对实验数据进行统计分析，绘制图表。
三、实验结果1. 细胞生长抑制实验结果显示，新型砷代谢产物与隐丹参酮联合处理MCF-7细胞后，细胞生长受到明显抑制，且随着药物浓度的增加，抑制作用逐渐增强。
2. 细胞凋亡诱导流式细胞术检测结果显示，新型砷代谢产物与隐丹参酮联合处理MCF-7细胞后，细胞凋亡率显著增加。
Western blot结果显示，凋亡相关蛋白的表达也发生了明显变化。
3. 联合作用效果实验发现，新型砷代谢产物与隐丹参酮联合作用时，对MCF-7细胞的抑制和促凋亡作用较单独使用其中一种药物更为显著。
这表明两者在抗肿瘤方面具有协同作用。
四、讨论本研究结果表明，新型砷代谢产物与隐丹参酮联合作用能够显著抑制人乳腺癌MCF-7细胞的生长并诱导其凋亡。
这一发现为乳腺癌的治疗提供了新的思路和方法。
在讨论部分，我们首先分析了新型砷代谢产物的抗肿瘤机制，包括对细胞周期、凋亡途径的影响等。
银杏叶提取物对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响
表１ 两组 方法检测后支 架置 入术有效率比较 例（ ％）
显示 狭 窄部 位 ，而且 扫描 速度 快 ，分 辨 率高 及扫 描层 面 较多 ，
况 吲。本研究 表明 ，通过对 肾动脉狭窄 的 ７ ０例患者分别应用 ６ ４ 排螺旋 Ｃ Ｔ和肾动脉血管造影检查后 进行手术治疗 ，比较 两组患
细胞周 期。结果 ：银 杏叶提取物对 Ｍ Ｃ Ｆ 一 ７ 细胞 的体外 增殖存在 抑制作用 ，与对照组 比较 ，差异具 有统计学 意义 （ Ｐ ＜ Ｏ ． ０ １ ） 。经流式 细胞仪检测表 明 ， Ｇ ２ ～ Ｍ期 和 ｓ 期逐渐减 少 ，银杏叶提取物能使 ＭＣ Ｆ 一 ７细胞 Ｇ ０ 一 Ｇ ｌ 期逐渐增加 ，随着 剂量 的增加 ，Ｍ Ｃ Ｆ 一 ７ 细胞凋亡率 明显增加 ＜ ０ ． ０ ５ ） 。结论 ：银杏 叶提取 物能诱 导 Ｍ Ｃ Ｆ 一 ７ 细胞凋亡 ，抑制肿瘤 细胞增 殖。
者术 后有效 率情 况 ，明确 ６ ４排螺 旋 Ｃ Ｔ和 肾动脉血 管造影 通过 检查 肾动 脉狭 窄患者 狭窄 出现部位 和范 围，对 手术成 功进 行均
８ ８ ． ５ ７ ％。治疗组 与对 照组 比较 ，差 异无 统计 学意义 ｆ Ｐ ＞ ０ ． ０ ５ ） 。具 可顺 利模拟 出肾动脉狭 窄形态 ，准确显 示狭窄 部位具 体病变 情
１ 材料与方法 １ ． １ 药物与试剂 本研 究应用 的银杏 叶提取 物 由德 国威玛舒 培博 士药 厂生产
①胜利油 田滨南 医院 山东 滨州 ２ ５ ６ ６ ０ ６
取 ＭＣ Ｆ 一 ７细胞 制成 ２×１ ０ ７ ／ ｍ ｌ 细胞悬液 ，每孔 １ ０ ０ ｌ 培养 ２ ４ ｈ ，于 ９ ６孔培养板 中接种 ，同时设对 照孔 和调零孔 ，然 后加
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逍遥散提取液对乳腺癌细胞MCF-7细胞周期的影响张虹季有波1（长春医学高等专科学校，吉林长春130031）〔关键词〕逍遥散；乳腺癌；细胞周期〔中图分类号〕R737.9〔文献标识码〕A〔文章编号〕1005-9202（2012）24-5611-02；doi ：10.3969/j.issn.1005-9202.2012.24.1381吉林大学第二医院通讯作者：季有波（1976-），男，主治医师，讲师，主要从事慢性疼痛性疾病研究。
第一作者：张虹（1977-），女，讲师，硕士，主要从事方剂学研究。
中医认为乳腺癌或癌前病变属于“乳岩”、“乳癖”范畴，乃由情志不畅、肝郁气滞、血瘀、脾气消沮等所致。
而逍遥散行气疏肝，调畅神志，具有抗焦虑、抗抑郁作用，从而影响癌症的发生发展〔1〕。
本课题组在前期研究中证实了逍遥散提取液对乳腺癌细胞MCF-7有显著的生长抑制作用〔2〕。
本实验进一步探讨逍遥散提取液对细胞周期的影响，为古方新用及乳腺癌的防治进一步提供实验依据。
1材料与试剂1.1试剂DMEM 培养基（Invitrogen ）、RNase 、PI 购自Sigma 公司；胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料研究所。
1.2药物逍遥散的药物组成及用量为：柴胡、当归、白术、茯苓、芍药各30g ，炙甘草15g ，煨姜、薄荷各1g ，购自市售药店，并经过严格鉴定。
按上述组方和单品药当归取生药，加蒸馏水回流提取3次，每次分别为60、30、30min ，浓缩药液，再加入DMEM 培养液稀释，配成浓度为1g /ml 药液，过滤除菌，4ħ保存备用。
1.3细胞培养人乳腺癌细胞系（MCF-7）购自吉林省肿瘤研究所，置于含10%胎牛血清的DMEM 培养基中，在37ħ、5%CO 2空气及饱和湿度条件下培养。
以每5ˑ104细胞/瓶接种，24h 换液1次并加入相应浓度的逍遥散提取液。
1.4FCM 检测细胞检测细胞周期取对数生长期细胞用于实验，随机分5组：对照组、逍遥散提取液低剂量组（2mg /ml ）、中剂量组（5mg /ml ）、高剂量组（10mg /ml ）、当归组（5mg /ml ）。
按照常规方法用PI 染色，流式细胞仪检测细胞周期〔3〕。
经低、中、高剂量的逍遥散提取液和当归分别作用48h ，收集MCF-7细胞，用PBS 冲洗两次，70%冷乙醇固定过夜。
PBS 冲洗2次，加RNase ，37ħ水浴30min 降解RNA ；再用PBS 洗2次后，加PI 染液，4ħ避光反应30min ，经PBS 洗涤后上机检测。
用FACScan 流式细胞仪Cellfit 软件收取细胞测定DNA 含量的变化，每个样品收集细胞数为1ˑ104个。
1.5统计学分析所有数据均采用SAS 统计软件进行检测，数据用x ʃs 表示，两组间比较采用t 检验。
2结果经流式细胞仪检测，不同剂量的逍遥散提取液和当归提取液对乳腺癌细胞MCF-7作用48h 后，各周期细胞比例见表1。
表1逍遥散提取液对乳腺癌细胞MCF-7细胞周期的影响（x ʃs ，%）组别G 0/G 1SG 2/M逍遥散低剂量组63.813ʃ0.78335.828ʃ0.9551）0.480ʃ0.1231）中剂量组55.615ʃ1.4532）28.258ʃ3.7201）0.207ʃ0.1001）高剂量组54.463ʃ2.6962）25.430ʃ4.2461）0.190ʃ0.1471）对照组64.763ʃ2.20236.238ʃ1.1100.597ʃ0.076当归组68.250ʃ3.99031.500ʃ4.2100.250ʃ0.250与对照组比较：1）P ＜0.05，2）P ＜0.013讨论细胞周期是指细胞从第一次分裂结束产生新细胞到第二次分裂结束所经历的全过程，分为间期与分裂期（M 期）两个阶段。
分裂间期是物质准备和积累阶段，分裂期则是细胞增殖的实施过程。
间期又分为休眠期（G 0期）、DNA 合成前期（G 1期）、DNA 合成期（S 期）与DNA 合成后期（G 2期），在此期间主要完成染色质中的DNA 复制和相关蛋白质的合成。
M 期为细胞分裂期，在此期间进行细胞物质的平均分配，一个细胞经过分裂形成两个新的细胞。
在细胞周期中，S 期是细胞增殖的关键，其最主要的特征是DNA 的合成，DNA 分子的复制就是在这个时期进行的。
通常只要DNA 的合成一开始，细胞增殖活动就会进行下去，直到分裂成两个子细胞。
因此通过某种因素进行干扰、破坏或抑制DNA 合成，就可以抑制癌细胞增殖，从而达到治疗癌症的目的。
例如，放射线能破坏癌细胞DNA 的结构与合成，治疗某些肿瘤〔4〕；药物秋水仙碱等则可阻止纺锤体的形成，从而抑制癌细胞的分裂〔5〕。
因为单味当归可能有促进妇女乳腺癌细胞增生的作用〔6〕，因此本实验采用当归提取液组作对照。
本实验观察结果表明，逍遥散提取液3个不同浓度组对乳腺癌细胞MCF-7作用48h 后，S 期细胞比例降低，且随着药物浓度的增加，细胞比例降低更明显。
提示逍遥散提取液可通过阻断乳腺癌细胞MCF-7DNA 合成的方式，抑制乳腺癌细胞体外增殖；而单味当归亦无促进DNA 合成作用。
4参考文献1吴在德.外科学〔M 〕.第5版.北京：人民卫生出版社，2001：1.2王迪，张虹，付士波，等.逍遥散对乳腺癌细胞抑制作用实验研究〔J 〕.中医药学刊，2006；（4）：643-4.3苏旭，张迎春.胸腺细胞体外培养对细胞凋亡和细胞周期进程的影响〔J 〕.白求恩医科大学学报，1995；15（21）：447.4鞠桂芝，付士波，刘建香，等.X 射线照射对EL-4淋巴瘤细胞周期进程及细胞倍增时间的影响〔J 〕.辐射研究与辐射工艺学报，1998；18（16）：157-60.5高沛永，王琼.秋水仙碱引起CHL 细胞有丝分裂纺锤体损伤的观察〔J 〕.军事医学科学院院刊，1993；13（4）：259-61.6戴军.人参当归可能诱发乳腺癌专业人士建议妇女慎用〔J 〕.保健时报，2004；20（4）：1.〔2012-04-05收稿2012-06-25修回〕（编辑曲莉)自拟逍遥汤加减联合FOLFOX 方案治疗老年晚期原发性肝癌19例袁华墅肖晓洪童玲黄海（泰和县人民医院肿瘤科，江西泰和343700）〔关键词〕原发性肝癌；中药；化学治疗；奥沙利铂；氟尿嘧啶〔中图分类号〕R735〔文献标识码〕A〔文章编号〕1005-9202（2012）24-5612-02；doi ：10.3969/j.issn.1005-9202.2012.24.139第一作者：袁华墅（1972-），男，主治医师，主要从事肿瘤学研究。
原发性肝癌预后极差，发病与死亡比例为1：0.98。
由于肝癌发病隐匿，进展快，老年患者发现时多已达中晚期，失去手术机会；其他局部治疗如射频消融、无水酒精注射、经导管肝动脉化疗栓塞（TACE ）等虽对控制局部病情较好，但因适应证少而临床应用受限。
全身治疗如化疗、中医中药治疗目前在临床探索中。
本文拟分析自拟逍遥汤加减联合FOLFOX 方案治疗老年晚期原发性肝癌患者的效果。
1资料与方法1.1临床资料2006年1月至2009年1月我科住院的老年晚期原发性肝癌患者38例。
符合以下条件之一：手术后复发转移；无手术、介入治疗；介入治疗失败；不愿接受介入治疗。
其中男32例，女6例；年龄60 85〔平均（65ʃ3.8）〕岁；肝功能Child-pugh A 级36例，B 级2例，分为自拟逍遥汤加减联合FOLFOX 方案组（治疗组）和单纯行FOLFOX 方案治疗组（对照组）各19例。
两组性别、病情、病程、临床分期、肝功能Child-pugh 分级等差异不显著（P ＞0.05）。
1.2治疗方法治疗组以自拟逍遥汤为基本方案（柴胡10g 、郁金10g 、茯苓10g 、当归10g 、白芍15g 、白术10g 、败酱草20g 、鳖甲15g 、半枝莲30g 、白花蛇舌草30g 、黄芪15g 、甘草6g ），随症加减，如眼肤黄疸，小便黄赤，大便干结或溏便不爽加菌陈、栀子、大黄、田基黄等。
从开始入组起服用，每日一剂，化疗初加强和胃止呕处理，化疗间歇期加强健脾益气、护肝养阴治疗。
采用FOLFOX 方案化疗，即奥沙利铂100mg /m 2静脉滴注2h 、第1天，亚叶酸钙300mg /m 2静脉滴注2h ，第1天，氟尿嘧啶400mg /m 2静脉推注、之后2400mg /m 246h 静脉泵注，每2周重复，4w 为1个周期，治疗至疾病进展或出现不能耐受的毒性，持续至多6个周期。
对照组行单纯FOLFOX 方案化疗。
化疗每周期前常规作三大常规、肝肾功能、血甲胎蛋白（AFP ）定量、心电图，两疗程评价疗效，随访2年，如果有乙型肝炎病毒复制标志，可使用抗乙型肝炎病毒药。
患者疾病进展后都给予最佳支持治疗。
1.3客观疗效评价按照RECIST1.0版标准评价，分为完全缓解（CR ）、部分缓解（PR ）、稳定（SD ）、进展（PD ），以CR +PR 计算有效率（RR ），以CR +PR +SD 计算疾病控制率（DCR ）。
生活质量评定，依据KPS 评分，治疗前计分增加≥10分为改善，降低≥10分为下降，变化＜10分为稳定。
以血AFP 定量、胸部X 线片、腹部增强CT 评价疗效，统计总生存时间（OS ）、肿瘤进展时间（TTP ）、生活质量（QOL ）及毒性反应。
毒性反应按照美国NCICTC 标准评价，分为0 4级。
1.4统计学分析采用SPSS13.0软件进行统计学分析，计数资料组间比较采用χ2检验。
2结果2.1两组近期疗效比较治疗组疾病控制率（78.9%，CR 2例，PR 7例，SD 6例，PD 4例）明显高于对照组（47.4%，PR 4例，SD 5例，PD 11例）（P ＜0.01）。
2.2两组生活质量比较治疗组改善率63.2%、稳定率·2165·中国老年学杂志2012年12月第32卷。