【CN110124022A】一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗及
(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910318204.2(22)申请日 2019.04.19
(83)生物保藏信息
CGMCC NO：13858 2017.05.26CGMCC NO：13335 2016.11.22CGMCC NO：16802 2018.11.09CGMCC NO：13334 2016.11.22CGMCC NO：13333 2016.11.22
(71)申请人 河南省农业科学院畜牧兽医研究所地址 450000 河南省郑州市金水区花园路
116号(72)发明人 徐引弟 王治方 张青娴 朱文豪
许峰 焦文强 李海利 郎利敏 张立宪 游一 王克领
(74)专利代理机构 郑州明华专利代理事务所
(普通合伙) 41162
代理人 高丽华(51)Int.Cl.
A61K 39/02(2006.01)A61K 39/102(2006.01)A61K 39/09(2006.01)A61P 31/04(2006.01)C12N 1/20(2006.01)C12R 1/35(2006.01)C12R 1/21(2006.01)C12R 1/46(2006.01)C12R 1/01(2006.01)
(54)发明名称
一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗及其应用(57)摘要
本发明涉及兽用生物制品技术领域，具体涉及一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗，包括灭活的猪肺炎支原体菌株HNMhy1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HNHPS1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HN1570血清型抗原、灭活的猪链球菌菌株HNSS1血清型抗原、灭活的胸膜肺炎放线杆菌菌株HNAPP1血清型抗原和免疫佐剂，五种菌株均有良好的免疫原性，可以很好的预防临床猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌、猪链球菌和胸膜肺炎放线杆菌型的感染，安全性好，免疫效果好、免疫期长，同时可以达到一针防多病，
降低成本。
权利要求书2页 说明书18页
序列表8页 附图5页
CN 110124022 A 2019.08.16
C N 110124022
A
权 利 要 求 书1/2页CN 110124022 A
1.一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗，其特征在于：包括灭活的猪肺炎支原体菌株HNMhy1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HNHPS1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HN1570血清型抗原、灭活的猪链球菌菌株HNSS1血清型抗原、灭活的胸膜肺炎放线杆菌菌株HNAPP1血清型抗原。
2.根据权利要求1所述的一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗，其特征在于：所述菌株HNMhy1为猪肺炎支原体，于2017年5月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO：13858；所述菌株HNHPS1为血清4型副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis），于2016年11月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO：13335；所述菌株HN1570为血清5型副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis），于2018年11月09日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO：16802；所述菌株HNSS1为2型猪链球菌（Streptococcus suis），于2016年11月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，，保藏编号为CGMCC NO：13334；所述菌株HNAPP1为1型胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacilus pleuropneumoniae）, 于2016年11月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO：13333。
3.根据权利要求1所述的一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗，其特征在于：所述灭活的猪肺炎支原体菌株HNMhy1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HNHPS1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HN1570血清型抗原、灭活的猪链球菌菌株HNSS1血清型抗原和灭活的胸膜肺炎放线杆菌菌株HNAPP1血清型抗原的比例为1∶1∶1∶1∶1。
4.一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
增殖：将猪肺炎支原体HNMhy1株、副猪嗜血杆菌4型HNHPS1株、副猪嗜血杆菌5型HN1570株、猪链球菌2型HNSS1株和胸膜肺炎放线杆菌1型HNAPP1株分别繁殖培养，获得猪肺炎支原体HNMhy1株、副猪嗜血杆菌HNHPS1株、副猪嗜血杆菌HN1570株、猪链球菌HNSS1株和胸膜肺炎放线杆菌HNAPP1株菌液，并分别进行活菌计数；
灭活：分别向步骤a中获得的猪肺炎支原体HNMhy1株、副猪嗜血杆菌HNHPS1株、副猪嗜血杆菌HN1570株、猪链球菌HNSS1株和胸膜肺炎放线杆菌HNAPP1株菌液中按照菌液体积的0.2%加入甲醛溶液，于37℃灭活24h；
浓缩：使用超滤装置分别浓缩灭活后检验合格的猪肺炎支原体HNMhy1株、副猪嗜血杆菌HNHPS1株、副猪嗜血杆菌HN1570株、猪链球菌HNSS1株和胸膜肺炎放线杆菌HNAPP1株菌液，根据灭活前的活菌计数，用无菌生理盐水调整浓缩终浓度为1.0×1010 CFU/mL；
制备疫苗：
（1）油相的制备：按体积比取注射用白油92份加入油相罐内，向罐内加入硬脂酸铝1份，边加边搅拌直至完全透明，再加入司本-80 6份，116℃高压灭菌40min，冷却至室温后再加入维生素A和维生素E各0.5份，混合均匀使维生素A和维生素E的浓度均为300IU/Ml，得到油相备用；
（2）水相的制备：将浓缩后获得的猪肺炎支原体HNMhy1株、副猪嗜血杆菌HNHPS1株、HN1570株、猪链球菌HNSS1株和胸膜肺炎放线杆菌HNAPP1株抗原液，按照1∶1∶1∶1∶1的比例
2。
副猪嗜血杆菌和猪传染性胸膜肺炎放线杆菌双重PCR检测方法的建立及应用
（ 西 南 民族 大 学 生 命 科 学 与技 术 学 院 ， 四Ｊ Ｉ ｌ 成都 ６ １ ０ ０ ４ １ ）
摘
要： 针对 副猪 嗜血杆 菌（ Ｈｐ ｓ ） １ ６ Ｓ ｒ Ｒ ＮＡ序 列和猪 传 染性 胸膜放 线杆 菌 （ Ａｐ ｐ ） Ａｐ ｘ ｌ Ｖ Ａ 基 因序 列各设
１ 材 料 与 方法
１ ． １ 材料
热、 咳嗽 、 呼吸 困难 、 消瘦 、 跛行 、 共济 失调 和被 毛粗 乱 等， 剖 检病理 变化 表 现 为 胸膜 炎 、 肺炎、 心包 炎 、 腹 膜 炎、 关 节炎 和脑 膜炎等 ； 主要危 害 ２ 周 龄～８ 周 龄 的仔 猪， 发病 率 一 般 为 １ ０ ～１ ５ ， 病死率可达 ５ Ｏ 以 上＿ Ｉ ］ 。猪胸 膜 肺 炎 放 线杆 菌 （ Ａｃ ｔ ｉ ｎ ｏ ｂ ａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ ｐ ｌ ｅ ｕ ｒ ｏ － ｐ ｎ ｅ ｕ ｍ ｏ ｎ ｉ ａ ｅ ， Ａ ｐ ｐ ） 是 猪传 染 性 胸 膜 肺 炎 （Ｐ ｏ ｒ ｃ ｉ ｎ ｅ ｉ ｎ ～
该 方法对参 考菌株和 临床 分 离株 全部检 出 ， ３ ６份 临床 样 本 中检 出 Ｈｐ ｓ １ ８份 ， Ａ ｐ ｐ为 阴性 ， 与 单项 Ｐ Ｃ Ｒ检 测结
果 一致 ， 人 工感染组 织样 本也均能检 出。表 明该方 法适 用于 Ｈｐ ｓ 和Ａ ｐ ｐ的临床 快速检测 。 关键词 ： 副猪 嗜血杆 菌 ； 猪传 染性胸 膜放 线杆 菌； 双重 Ｐ Ｃ Ｒ方 法
（ ＨＳ Ｌ Ｏ ７ ７ ） 、 １ ２型 （ ＨＳ Ｌ Ｏ ７ ５ ） 、 １ ３型 （ ＨＳ Ｌ Ｏ ７ ９ ） 、 １ ４ 型
（ ＨＳ １ ０ ８ ０ ） 、 １ ５型 （ ＨＳ Ｌ Ｏ ８ １ ） 、 １ ０ ｏ株 Ｈｐ ｓ 临 床 分 离 株
猪链球菌和副猪嗜血杆菌的区别
猪链球菌和副猪嗜血杆菌的区别链球菌导致的关节炎不一定是对称的，关节肿大，摸上有热感，前期硬，后期变软，积液浑浊，败血症比较明显，因为是血液病变，发作较快时会有异味，剖检发现组织器官广泛出血。
对一般抗生素较为敏感，早期用头孢加磺胺，早发现早治疗，效果很好，一旦发展到后期或脑炎，治愈率就比较低或者预后不良。
副猪导致的关节炎，多为对称，单侧或双侧行走不便，关节无热感，积液澄清，断奶仔猪腹泻导致抵抗力下降，之后就可能引发副猪嗜血杆菌发作，这个时期多为呼吸道症状，剖检发现腹膜炎或心包炎。
一般为散发，有很多变种，血清种类多，若是用不对血清，也会耽误治疗，一旦发病，以提高免疫力，抗菌消炎为主。
通过以上的描述想必大家对于猪链球菌和副猪嗜血杆菌的区别都了解了吧！让能给大家带来助力。
猪支原体肺炎
猪支原体肺炎猪支原体肺炎(Mycoplasmal pneumonia of swine),又称猪气喘病、猪地方流行性肺炎(Swine enzootic pneumoniae,SEP)、猪霉形体肺炎（Mycoplasma Hyopneumoniae, Mhp）。
猪支原体肺炎是由猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae或M.suipneumoniae)引起猪的一种慢性呼吸道传染病。
主要症状为咳嗽和气喘，病变的特征是融合性支气管肺炎。
基本信息•中文名：猪支原体肺炎•英文名：Mycoplasmal pneumonia of swine•别名：猪地方流行性肺炎、猪气喘病•病原学：猪肺炎支原体•传染病：是•传播途径：咳嗽、气喘和喷嚏排出，形成飞沫浮游于空气中被健康猪吸人，经呼吸道传染。
•潜伏期：11～16天左右•临床表现：咳嗽和气喘、精神不振，张口喘气，呈腹式呼吸或犬坐姿势•并发症：体温升高、不食、腹泻，全身情况恶化•疫苗预防：是•预防措施：圈保持清洁、干燥、通风，勤打扫，防寒保暖，避免过于拥挤，自然和人工感染的康复猪能产生免疫力，表明可通过注射疫苗预防猪支原体肺炎，病猪不能留作种用，宜淘汰相关搜索猪传染性胸膜肺炎猪副嗜血杆菌病猪气喘病猪副伤寒疾病概述猪支原体肺炎(Mycoplasmal pneumonia of swine) 是由猪肺炎支原体引起的一种慢性、接触性、呼吸道传染病，又称猪地方流行性肺炎，我国俗称猪气喘病，主要临诊症状是咳嗽和气喘。
剖检变化为肺的尖叶、心叶和膈叶(主叶)的对称性实变。
病多呈慢性经过，常有其他病菌继发感染。
据我国部分省市规模化养猪场血清学检验，阳性率30％～50％。
本病广泛分布于世界各地，在我国许多地区的猪场都有发生。
由于带菌病猪的存在和分布面较广，除直接发生死亡外，病猪生长发育缓慢，生长率降低15％左右，饲料利用率降低20％，造成饲料和人力的浪费。
有的成为僵猪或继发感染死亡。
猪肺炎支原体和副猪嗜血杆菌混合感染的诊治技巧
猪肺炎支原体和副猪嗜血杆菌混合感染的临床表现为，猪的咳喘、体温升高、精神不振、食欲减退，并且副猪嗜血杆菌还会引起青年猪和幼猪的多发性浆膜炎、关节炎、脑膜炎，该病的发病率和死亡率都很高。
1混合感染的常见临床症状患有该病的猪临床主要临床症状表现为，精神不振、逐渐消瘦、体表发白、背毛粗乱无光泽，同时还会伴有咳嗽，严重时还会出现咳嗽痉挛，此症状在清晨活动时最为明显；病猪的呼吸通常比较急促，严重时会呈现腹式呼吸，眼结膜会因充血而变红，个别病猪还会出现关节肿大，四肢和耳朵出现青紫现象，臀部和腹部皮肤会呈现紫红色的淤血斑；患病初期粪便出现干结，后期会出现腹泻并伴有黄尿。
通常若病猪无明显呼吸道症状体温一般在40℃以下，病猪有呼吸道症状体温通常在40.5~41.5℃。
2混合感染的解剖检验对病死的猪进行解剖检验可以发现，淋巴结出现明显的水肿，切面较为湿润，比较严重的猪肺部淋巴结会出现充血和出血，肺部的病变部位与正常部位有明显差异，能从外观进行直观判断，病变部位成浅灰色半透明胶冻性状。
切面湿润平滑，肺泡的界限不清晰，呈现出肉变。
病情严重的病变部位会呈现出深紫红色、灰白色、灰红色，半透明状不明显且韧性增加，形成胰变。
因高烧或急性死亡的病猪肺脏还会呈现出纤维素性肺炎和间质性肺炎的变化，使肺部组织变硬，造成肺叶不同程度的充血，形成肝变，并且病变部位的渗出物还会使肺部组织与胸膜发生粘连。
发病初期的病猪心包液比较清澈透明，成淡黄色，发病时间较长的后期由于心包膜增厚，心包腔有纤维素性物质渗出，心脏表面会出现大量绒毛将其包裹；对病猪心脏进行解剖检验可以发现心脏内部并无明显变化。
3混合感染实验室诊断将病死猪的心包腔、胸腔、关节腔等部位的渗出液涂于载玻片，对淋巴结、肺脏、脾脏取样放于触片，采取格兰氏染色镜检的方式对其进行检验，可见格兰氏染色阴性小杆菌，多数细菌形态呈链状，少数会呈现球状或较长的弯曲丝状，细菌体形态表现较为多样化。
将肺部、心血、肝脏、脾脏、胸腔渗出物进行取样并分别培养，在37℃的恒温环境中培养24h后，肉汤培养基和麦康凯培养基中并未见细菌生长，48h后血琼脂培养基表面可见出现很多细菌，将其涂于载玻片进行格兰氏染色镜检，会得到上述同样的镜检结果。
猪副嗜血杆菌和支原体肺炎混合感染的诊治
腹式呼吸或犬坐姿势。随着病情发展，咳嗽喘气加剧。呼 吸急促，严重时张口呼吸，有的鼻孔流出脓性分泌物。部 分病猪出现多处关节肿痛、跛行、不愿站立甚至瘫痪。有 的病猪皮肤潮红而后紫蓝、耳尖或边缘发绀、叠堆昏睡。 母猪发病多流产，眼睑肿胀，有分泌物；体温升高， 达 ４０．２～４１．６℃，偶见脑膜炎，出现神经症状，病程较 短，很快死亡，临死前侧卧或四肢呈划水样 ［２］。 ３ 病理变化
根据临床症状、病理变化、实验室检查结合本 场的猪病史，确诊为猪支原体肺炎继发感染猪副嗜 血杆菌病。 ６ 防治措施 ６．１ 紧急隔离。病死猪无害化处理；把表现症状的猪 与健康猪隔离，加强饲养管理，同时积极治疗。 ６．２ 严格消毒。彻底清扫猪舍及周围， 再用 ０．３％ 消毒威、０．２％抗毒净水溶液对猪舍地面、墙 壁、周围环境每天一次交替喷洒消毒，连续 １５ ｄ［６］。 ６．３ 对症治疗。 ６．３．１ 对全群猪用支原净加 ＶＣ 粉让猪自由饮水 １５ ｄ；氟苯尼考拌料 １０ ｍｇ／ｋｇ·ｂｗ，每天一次，以增强机 体抵抗力，减少应激反应。 ６．３．２ 病猪 １） ３０％替米考星注射液，按 ０．２ ｍＬ／ｋｇ·ｂｗ
江苏省阜宁县阜城镇某养猪场饲养的生猪选 用自配料，按正常程序免疫，常规消毒。２０１３ 年 ３ 月 ２ 日部分生猪体温升高，精神不振，咳嗽，猪场兽医 用 ＳＭＤ、左旋咪唑等治疗几天效果不明显，有死亡。 笔者接到疫情报告后，通过临床症状等综合分析， 确诊为猪支原体肺炎继发感染猪副嗜血杆菌病，采 取综合性防治措施，收到较好效果，将经济损失降 至较底。现将有关情况报告如下： １ 发病情况
参考文献：
［１］ 宣长和．猪病学．北京： 中国农业出版社． ２００３－４： １７２－１７５． ［２］ 刘茂军等． 副猪嗜血杆菌抗体间接血凝试验 ［Ｊ］． 猪业科学，
猪肺疫与副猪嗜血杆菌病混合感染的诊治
养不善 、 圈舍潮湿拥挤 、 受寒感 冒、 长途运输及气候 突变使猪抵抗力下降 ， 易引起发病 。正常猪咽喉 的带 菌率 达 ３ ０ ％， 易发 生 内源性 感 染 。传 播 途径 主要 是 易 感 动 物直 接 接 触病 猪 和 病猪 的污 染 物 ， 通过 呼 吸道 、 损伤皮肤或黏膜而感染发病 。
眄 兽 医 临 床
／
猪 肺 疫 与 副 猪 嗜 血 杆 菌 病 混 合 感 染 的 诊 治
胡喜斌 杨玉 平 （ 黑龙江生物科技职业学院 哈尔滨 １ ５ ０ ０ ２ ５ ）
猪肺疫又称猪巴氏杆菌病 ，是 由多杀性 巴氏杆 急性型除上述变化外 ，特征病变是纤维素性胸膜肺 炎。肺有紫红 色或灰黄色的肝变 ，并伴有水肿和气
肿 。病程 长 的肺肝 变 区内常见 大 小不 等坏 死灶 ， 肺 小
菌引起的急性、 热性传染病 。最急性呈败血症变化 ， 咽喉 部 急性 肿胀 ， 呼 吸极度 困难 ， 又称 “ 锁 喉风 ”； 急
性 型呈 纤 维 素性 胸 膜肺 炎 ；慢 性 型 主 要 表现 慢 性 肺 炎 或慢 性 胃肠炎 为 主 要特 征 。 副猪 嗜 血 杆 菌病 又 称 为 多发 性 浆 膜 炎与 关 节 炎 ，本 菌 是 猪 上 呼 吸道 的常 在 菌 ，在 转 群 、断奶 后失 去 母源抗 体 保 护 时 容 易发
神沉郁 ， 不食 不饮 ， 咳嗽 ， 呼吸 困难 ， 心跳加快 ， 有的 伴 随关 节 炎 症 状 ， 常 突 然死 亡 。病 程 稍 长 的 ， 体 温 持 续升高 至 ４ １ — ４ ２ ％， 食 欲废绝 ， 卧地不 起 ， 咽 喉 部 发
热、 红肿 、 坚硬 ， 吸极 困难 ， 犬 坐喘鸣 ， 口鼻 流 出泡 沫 样液体 ， 可 视黏 膜发 绀 。耳 根 、 颈部 、 下 腹部 等处 皮 肤 出现 紫 红色 或蓝 紫 色斑 点 。发病 ５ ～ ８天 ， 耐过 的转 为
猪三种呼吸道病原微生物传染病的诊断与综合防治
出液.肺脏出血、水肿与实变.
与防治工作,从 而 阻 断 支 原 体、副 猪 嗜 血 杆 菌 和 传
染性胸膜肺炎放线杆菌在猪群的传染与危害.
１ 流行病学概况
猪支 原 体、副 猪 嗜 血 杆 菌、猪 传 染 性 胸 膜 肺 炎
放线杆菌可 感 染 不 同 年 龄、品 种 的 猪,怀 孕 母 猪 和
合征,死亡率增大.
氧菌,其生长需要血中的生长因子,特 别 是 V 因 子.
根据细菌荚膜多糖及细菌脂多糖(
LPS)进行血清定
型,本菌有 １５ 个血清型,其中 ５ 型又分为 ２ 个亚型.
猪肺炎支原体无细 胞 壁,是 一 种 较 小 的,呈 球 状、点
状、杆状和 多 形 态 的 微 生 物. 本 菌 不 易 着 色,革 兰
重时皮肤发红、耳朵发绀.
染色阴 性,着 色 不 佳,用 姬 姆 萨 和 瑞 特 染 色 良 好.
分离支原体的培养 基 除 基 础 营 养 物 质 外,还 需 乳 清
蛋白水解物、酵母 浸 出 物 及 猪 血 清. 病 原 学 检 测 基
础上,可用 间 接 红 细 胞 凝 集 试 验、微 量 补 体 结 合 试
放线杆菌 混 合 感 染. 若 此 类 细 菌 与 繁 殖 与 呼 吸 综
菌等细菌 性 呼 吸 道 传 染 性 疫 病 较 常 见. 此 类 细 菌
合征病毒、圆 环 病 毒、流 感 病 毒、伪 狂 犬 病 毒、猪 瘟
性病原能单独感染,也 可 能 两 种 或 两 种 以 上 病 原 混
病毒混合 感 染 时 则 出 现 猪 呼 吸 道 病 综 合 征,喉 头、
验、
ELI
SA 等方法诊断,并 采 用 PCR 技 术 检 测 病 原
副猪嗜血杆菌 １６SrRNA、外膜蛋白 P２ 或 P５ 基因、
猪细菌和支原体混合感染的诊治
Ａｎ ｉ ｍｄ Ｈｕ ｓ ｂ ａ ｎ ｄ ｒ ｙ ａ ｎ ｄ Ｆ ｅ ｅ ｄ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ
猪细菌和支原体混合感染的诊治
张
（ １ ． 安 徽 省 濉 溪 县动 物 卫 生监 督 所 ， 安徽 濉溪
清 ． 王兴祥
濉溪 ２ ３ ５ １ ０ ０ ）
① 取肿大关 节 内的脓性分 泌物 、 肺浆膜化 脓性分
泌 物接种 于 ｐ Ｈ值 ７ ． ４的 改 良链 球 菌 培 养 基 （ 每 １ ０ ０ ｍ Ｌ含 ５ ％犊 牛 血 清 和 ０ ． １ ％结 晶 紫 溶 液 ０ ． ２ ｍ Ｌ ） ． ３ ７℃ 培养 ４ ８ ｈ后 ， 可见有 紫色 、 圆形 、 中央隆起 、 表 面 光 滑
２ ３ ５ １ ０ ０ ； ２ ． 安 徽 省 濉溪 县 动 物疫 病 预 防 与控 制 中 心 ， 安徽
摘要 ： 通 过 对 发 病 猪 临床 症 状 及 剖 检 病 变的 观 察 ， 并进 行 实验 室诊 断 ， 确 定 为猪 链 球 菌 、 胸 膜 肺 炎放 线 杆 菌 、 副 猪 嗜 血 杆 菌及 支原 体 混 合 感 染 ， 同 时采 取 了相 应 的 防 治措 施 ， 收 到 了较 好 的 疗 效 。
关键词 ： 细菌 ； 支原体 ； 混合感染 ； 诊断 ； 防治 ； 猪
中图 分 类 号 ： ￥ ８ ５ ８ ． ２ ８ ５ ． １ 文 献标 识 码 ： Ｂ 文章 顺 序 编 号 ： １ ６ ７ ２ — ５ １ ９ ０ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ５ — ０ ｌ １ ７ — ０ １
使用氟苯尼考 、 青霉 素 、 链霉素治疗一 段时间后 ， 未获 得理想效果 。 笔者 通过对病猪临床症状及剖检病 变的
观察 ， 并进行实验室诊 断 ， 确 定 为猪 链 球 菌 、 胸 膜 肺 炎 放线 杆菌 、 副猪 嗜血杆 菌及 支原体混 合感染 ， 最 后 总 结 了相 应 的 防治 措 施 ． 以 期 为 养 殖 者 及 兽 医 人 员 提 供 参考 。 ｌ 临 床 症 状 及 剖 检 病 变 发 病初期 ， 病猪体温 升高到 ４ Ｏ ． ５ — ４ ２ ． ０ ｃ Ｃ ｌ ， 精 神 沉 郁。 食欲不振 ， 心 跳加快 ， 听 诊 时 可 听 到 心 包 与 心 脏 的
一起传染性胸膜肺炎与副猪嗜血杆菌病混合感染的诊治报告
经有３ 死亡 。 头 ２ 流 行 病 学 本 病 是 一 种 寄 生 在 呼 吸 道 的 细
白 渗 出物 ， 其 是 腕 关 节 和 跗 关 节 。 尤
组 织 学 检 查 。炎 症 部 位 可 见 嗜 中 性
白 细 胞 和 少 量 巨 嗜 细 胞 浸 润 ．渗 出
物 中 可见 纤 维 蛋 白。 脑 膜充 血 、 出
育肥 阶段 猪 发 生 本病 较 多 。而 在 应 激
血 ． 巴结 肿 大 。 淋
５ 诊 断
５ １ 比较 特 征 性 的 临 床 症 状 及 病 理 ．
变化 特 点 ， 可做 出初 诊 。 ５２ 无 菌 采 取 支 气 管 或 鼻 腔 分 泌 物 － 和肺 部 病 变 组 织 ，接 种 于鲜 血 营养 琼 脂 ，用 不 溶 血 大 肠 杆 菌 或葡 萄球 菌作 为 保 姆 与 病 料 作 交 叉 划 线 。７ 培 养 ３℃ ２ ，可 见 在 保 姆 株 周 围出 现 有 典 型 ４ｈ 溶血 的小菌落 ， 落呈 圆形 、 滑 、 菌 光 边 缘 整 齐 、 血 ， 检 为革 兰 氏 阳性 且 两 溶 镜 极 着 色 的杆 菌 。 ５３ 副 猪 嗜 血 杆 菌 病 可 以 根 据 病 ． 史 、 行 病 学 、 型 临 床 症 状 和 病 理 流 典
文章 编 号 ：０ ８０ １（０ ０ ９０ ８－ １ １０ — ４４２ １） － ０ １ ０ ０－ 减少 应 激 ， 强 营 养 ， 猪 场 严格 加 对 消 毒 ，改 善 通 风 ，及 时 清 理 粪便 等 污 物 ．尽 量 减 少 有 害 气 体 对 呼 吸 道 的刺 激 和病 原 菌 的扩 散 ．发 现 病 猪及 时 隔
Байду номын сангаас
维 蛋 白渗 出 物 。 膜 、 包 、 膜 或 腹 心 胸
猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌和副猪嗜血杆菌多重PCR检测方法的建立和应用
猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌和副猪嗜血杆菌多重PCR检测方法的建立和应用孙学飞;倪艳秀;茅爱华;何孔旺【期刊名称】《江苏农业学报》【年(卷),期】2016(032)005【摘要】根据已发表的猪呼吸道疾病主要致病菌猪链球菌（SS）、胸膜肺炎放线杆菌（APP）和副猪嗜血杆菌（ HPS）基因序列合成3对特异性引物，通过单一PCR和三重PCR体系及条件优化，建立这3种致病菌的三重PCR检测方法，并对200份临床表观健康猪鼻拭子样品用三重PCR方法进行检测。
结果显示：建立的三重PCR方法能对同一样品中的SS、APP、HPS 3种病原菌的DNA模板进行扩增，无交叉反应；对猪体内常见的猪多杀性巴氏杆菌、猪大肠杆菌、猪放线杆菌、猪葡萄球菌、猪丹毒杆菌、猪沙门氏菌进行扩增，并无任何扩增产物；对SS、APP、HPS细菌纯培养物的检测敏感性分别为1×104 CFU／ml、1×103 CFU／ml、1×103 CFU／ml；对人工模拟SS、APP、HPS感染组织样品的敏感性均为1×104 CFU／ml。
三重PCR方法对200份临床表观健康猪鼻拭子样品的检测结果显示：SS阳性160份，阳性率80�0％；APP阳性3份，阳性1�5％；HPS阳性45份，阳性22�5％。
分别用细菌分离法和三重PCR法对30份临床病料进行检测，两者检测结果的符合率达到93％。
建立的三重PCR可在4�5 h左右得到检测结果。
【总页数】6页(P1094-1099)【作者】孙学飞;倪艳秀;茅爱华;何孔旺【作者单位】安徽农业大学动物科技学院，安徽合肥 230000; 江苏省农业科学院兽医研究所，江苏南京 210014;江苏省农业科学院兽医研究所，江苏南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所，江苏南京 210014;安徽农业大学动物科技学院，安徽合肥 230000; 江苏省农业科学院兽医研究所，江苏南京 210014【正文语种】中文【中图分类】S858.282.61【相关文献】1.复合PCR鉴定胸膜肺炎放线杆菌和副猪嗜血杆菌方法的建立及初步应用 [J], 贺英;赵萍;储岳峰;高鹏程;逯忠新;赵海燕2.副猪嗜血杆菌和猪传染性胸膜肺炎放线杆菌双重 PCR 检测方法的建立及应用[J], 余远迪;曾泽;岳华;张斌3.猪的胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌复合PCR检测方法的建立 [J], 米丰泉;陈小玲;王翠敏;赵玉军;王凤强4.猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌复合PCR检测方法的建立 [J], 朱吕昌;陈义平;李明义;郭玉广;马爽;周洁5.猪胸膜肺炎放线杆菌、猪多杀性巴氏杆菌、副猪嗜血杆菌复合PCR检测方法的建立 [J], 米丰泉;陈小玲;赵玉军;王翠敏;王凤强;张彦因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。