血清载脂蛋白B检测操作规程
大鼠载脂蛋白BapoBELISA试剂盒使用说明书
大鼠载脂蛋白B(apo-B)ELISA试剂盒使用说明书南京森贝伽现货供应，质量保证，价格优惠，试剂盒首选森贝伽。
本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中大鼠载脂蛋白B(apo-B)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠载脂蛋白B(apo-B)水平。
用纯化的大鼠载脂蛋白B(apo-B)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入载脂蛋白B(apo-B)，再与HRP标记的载脂蛋白B(apo-B)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的载脂蛋白B(apo-B)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠载脂蛋白B(apo-B)的含量。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
血清载脂蛋白B免疫透射比浊法测定法
血清载脂蛋白B免疫透射比浊法测定法1. 实验原理免疫透射比浊终点测定法。
使用抗Apo B抗体和样品中的Apo B进行抗原－抗体反应。
反应完成后，用透射比浊法检测吸光度的变化反映Apo B浓度。
2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。
2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆。
3. 标本存放：稳定性：15～25℃保存可稳定5天；2～8℃保存可稳定2周；-20℃保存可稳定3个月；标本不可反复冻融。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂申能APO B测定试剂盒（货号：251 7110210 1 试剂1 5×25ml；试剂2 1×25ml）6.1.1 试剂组成试剂1（R1）：Tris缓冲液pH 7.5 100mmol/L聚乙二醇（PEG）表面活性剂，稳定剂适量试剂2（R2）：Tris缓冲液pH 7.5 100mmol/L羊抗人Apo B抗体（含稳定剂）适量6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95 g/L）为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂6.2 校准品：建议使用DiaSys公司提供的TruCal Apo B校准品对自动分析仪进行校准，校准稳定期：4周。
具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
7. 仪器：贝克曼AU680生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见AU680生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤：参见AU680生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
载脂蛋白标准操作规程
前言为使临床检查操作规范化，指引检查人员严格按规程进行对旳旳常规操作，保证检查质量，特制定本操作规程。
本规程旳编写遵循了ISO 15189《医学实验室——有关质量和能力旳特殊规定》及WS/T 227-《临床检查操作规程编写规定》旳有关规定并结合产品实际状况制定，作为本产品旳原则操作程序。
本规程从5月2日起实行，每2年复审1次。
本规程由浙江伊利康生物技术有限公司编制。
本规程起草单位：伊利康生物技术有限公司技术部。
本规程重要起草人：蒙凯、蔡其浩。
本规程初次起草。
目录1 检查申请 (3)2 标本采集与解决 (3)3 试剂及成分 (4)4措施原理 (4)5 仪器 (4)6 校准液及校准模式 (4)7质控品与室内质控规则 (4)8标本检测环节 (5)9 成果计算 (5)10 操作性能 (5)11试剂使用旳注意事项 (5)12参照范畴及医学决定水平 (5)13检查成果旳报告及范畴 (5)14临床意义 (6)15成果审核分析以及有关项目旳联系 (6)16威胁生命旳“紧急值”及报告规定. (6)17有关引用程序与文献 (6)18参照文献附录A XXX型全自动生化分析仪参数载脂蛋白B测定原则操作规程1.检查申请单独检查项目申请：血清载脂蛋白B（Apolipoprotein B；,缩写ApoB）测定；组合项目申请：血脂测定，血清载脂蛋白测定。
临床医生根据需要提出检查申请。
2.标本采集与解决2.1 受检者旳准备：采血前2周保持平时旳饮食习惯，3d内避免高脂饮食，24h内不饮酒，空腹12h后采集标本。
体检对象抽血前应有两周旳正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目旳药物。
此外，对于体检者，采血旳季节都应做有关记录，由于样本中各项目旳含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检查。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2标本采集2.2.1除非是卧床旳病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外旳分布，会影响测试项目旳浓度。
血清载脂蛋白A1.B免疫透射比浊测定标准操作程序
血清载脂蛋白A1.B免疫透射比浊测定标准操作程序1.摘要本试剂盒适用于体外临床检验，用于测定人血清中载脂蛋白A1.B的含量。
2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中载脂蛋白A1.B的含量。
3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定载脂蛋白A1.B的含量的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的血清载脂蛋白A1.B试剂盒采用的是免疫比浊法。
5.原理样本中的ApoA1、ApoB在液相中与相应的抗体相遇，立即形成抗原抗体免疫复合物，在特定的缓冲环境中形成浊度，其浊度在合适的抗体浓度存在时与抗原含量成正比，与相同操作的校准品比较，即可求出样本中载脂蛋白的含量。
6.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：Tris缓冲液，PEG-6000,Tween-20,NaN3,羊抗人ApoA1抗血清7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。
试剂不可冰冻。
7.4试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
8.3质控数据管理：按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。
载脂蛋白A1-B试剂盒企业标准
医疗器械产品企业标准（建议稿）载脂蛋白A1/B试剂盒APOLIPOPROTEIN A1/B REAGENT KIT免疫透射比浊测定法IMMUNOTURBIDIMETRIC METHOD2005-02-27发布2005-02-28实施深圳市德朝电子技术有限公司发布前言载脂蛋白A1/B试剂盒目前无国家标准和行业标准，本公司制定本标准作为组织生产、质量检定和营销活动的依据。
本标准的编写格式按照GB/T1.1-2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》、GB/T1.2-2002《标准化工作导则第2部分：标准中规范性技术要素内容的确定方法》。
本标准自2005年2月28日起实施本标准由深圳市德朝电子技术有限公司质量部提出并起草。
本标准起草单位：深圳市德朝电子技术有限公司。
本标准主要起草人：载脂蛋白A1/B试剂盒1、范围本标准规定了载脂蛋白A1/B试剂盒的要求、试验方法、检验规则、标志、标签、使用说明书、包装、运输及贮存等要求。
本标准适用于体外定量检测人血清中载脂蛋白A1/B的浓度。
本产品适用于各种类型的半自动、全自动临床生化分析仪。
2、规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB 191-2000 包装储运图示标志GB 9969.1-1998 工业产品使用说明书总则3、试剂组成4、方法原理样本中载脂蛋白A1或载脂蛋白B与其相应抗体在液相中结合，形成抗原抗体复合物，产生浊度。
浊度的高低与样本中载脂蛋白A1或B的含量成正比。
在340 nm处测定吸光度的变化值，即可计算出样本中载脂蛋白A1或B的含量。
5、技术要求5.1、外观液体试剂为无色或微黄色澄清液体。
5.2、空白吸光度值载脂蛋白试剂A1和试剂B在37℃、测定波长为340nm、比色光径为1.0cm时，空白吸光度值A应≤0.200。
载脂蛋白B测定试剂盒(免疫比浊法)产品技术要求新创源
载脂蛋白B测定试剂盒（免疫比浊法）适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中载脂蛋白B的含量。
1.1 规格具体产品规格见下表:1.2 组成成分1.2.1 试剂的组成试剂1：PEG-6000 ≥4%磷酸缓冲液≥0.01mol/L 试剂2：羊抗人ApoB抗血清≥50ml/L1.2.2 校准品的组成（选配）载脂蛋白B (1.50～2.60)g/L该校准品为血清基质冻干校准品1.2.3 质控品的组成（选配）水平2：载脂蛋白B (0.40～1.40)g/L该质控品为血清基质冻干质控品水平3：载脂蛋白B (1.41～2.20)g/L该质控品为血清基质冻干质控品校准品、质控品有批特异性，具体靶值见靶值表。
2.1 外观2.1.1 外包装完整无破损；2.1.2 试剂1：无色澄清液体；2.1.3 试剂2：无色或乳白色微浊液体；2.1.4 校准品：白色或浅黄色冻干粉，复溶后为浅黄色溶液，无不溶物；2.1.5 质控品：白色或浅黄色冻干粉，复溶后为浅黄色溶液，无不溶物。
2.2 净含量净含量不低于标示值。
2.3 试剂空白吸光度在主波长340nm、副波长700nm、37℃条件下，试剂空白吸光度不大于0.5。
2.4 线性2.4.1 线性范围[0.40，2.00]g/L，相关系数r≥0.990。
2.4.2 线性偏差[0.40，2.00]g/L线性范围内，相对偏差不超过±10%。
2.5 分析灵敏度检测浓度为1.00g/L的样本时，吸光度变化不小于0.15。
2.6 重复性2.6.1 试剂重复性测试浓度(1.00±0.50)g/L的人血清或质控品，重复测试10次，CV≤3%；2.6.2 校准品重复性用试剂测定1瓶校准品，重复测定10次，CV≤3%；2.6.3 质控品重复性用试剂测定1瓶质控品，重复测定10次，CV≤3%。
2.7 批间差用三个不同批号的试剂测试(1.00±0.50)g/L的同一样本，重复测试3次,相对极差R≤10%。
载脂蛋白BAPO-B测定标准操作程序SOP文件
9.5血清标本出现溶血、脂血或黄疸的干扰情况参见抗干扰能力。
9.6换算公式：mg/dl×0.01 = g/l
10抗干扰能力
10.1标准：回收率在90％－110％之间。
10.2黄疸：黄胆指数达到60时不会有明显干扰。（直接和间接胆红素浓度约为60mg/dl）
10.3溶血：溶血指数达到1000时不会有明显干扰。（血红素浓度约为1000mg/dl）
准备:直接使用。
定标频率：A试剂批号更换
B由质控结果决定
4.3质控物
来源：Precinorm Protein (罗氏蛋白类正常值质控)
Precipath Protein (罗氏蛋白类病理值质控)
其它适合的质控品
贮存条件：置2-8℃冰箱至有效期。
准备：应预先进行1+20倍稀释后再使用。
质控间隔时间及限制：应视不同地区及各自实验室情况而定。质控结果应在限定的范围之内，如果超出范围，实验室应根据情况采取措施。
POINT(4) [ 0 ]
SPAN POINT [ 6 ]
WAVELENGTH(PRIMARY) [ 340 ]
DUPLICATE LIMIT(%) [ 10 ]
SECONDARY [ 700 ]
DUPLICATE LIMIT(ABS) [ 30 ]
S.VOLUME(NORMAL) [10/12/200]
SD LIMIT [ 100 ]
S.VOLUME(DECREASE) [10/12/200]
SENSITIVITY LIMIT(LOW) [ 500 ]
S.VOLUME(INCREASE) [20/12/200]
SENSITIVITY LIMIT(HIGH) [ 1100 ]
检验科血脂检验操作规程
检验科血脂检验操作规程标本采集与处理1．受检者抽血前二周应保持平衡的饮食习惯，近期体重稳定无外伤，手术等意外情况。
并注意如有使用降糖、降脂、降压、避孕药，β-受体阻滞剂，免疫抑制剂，激素药物等，则应根据所用药物特性停药数天或数周后再作血液脂类检测。
2．空腹抽血，TG，脂蛋白，载脂蛋白测定应至少禁食12小时（仅作胆固醇测定不必强求空腹）24小时内不作剧烈运动。
抽血前不要久站立。
至少应静坐5分钟。
抽血时止血带使用不可超过1分钟。
3．标本用血清，也可用肝素或EDTA.Na2抗凝之血浆。
EDTA.Na2浓度不宜太高。
4．血标本室温放置不得超过3h，放置30~45分钟后应即时分离出血清（浆）盖封於4℃冰箱中可稳定至少4天，如需长期保存，应於-70℃中冰冻存放，不可反复冻融。
血清总胆固醇（TC）测定酶法（CHOD~PAP法）【试剂】市售现成试剂。
【操作】按试剂及仪器使用说明书要求设定程序，输入参数用自动或半自动生化分析仪测定（速率法）终点法可手工操作，用普通分光光度计比色测定。
波长500nm或520nm。
【标本】血清（浆）参看本节的标本采集与处理。
【附注】本法为中华医学会检验学会推荐的TC测定常规方法（中华医学检验杂志，1995、18：185）。
胆固醇标准液以定值参考血清为宜，而不宜用Chol的水溶液作标准。
Chol定值质控血清亦不应用作标准液。
主要技术指标：终点法批内CV＜1.5%、批间CV≤2.5%。
灵敏度：显色剂用酚时，TC5.2mmo1/L(200mg/dl)时的吸光度（A500nm）约0.30~0.35，故A500nm=0.005时TC浓度约为0.08mmo1/L(3mg/dL)。
测定范围：当血清与试剂用量之比为1:100时其测定的上界为13mmo1/L(500ng/dL)。
血清甘油三酯（TG）测定酶法（GPO~PAP法）【试剂】市售现成试剂。
有两种。
一步酶法单一试剂，二步酶法双试剂。
标准液（参考物）一步酶法之用三油酸甘油酯水溶液，也可用甘油，但甘油不适用於二步酶法。
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血清载脂蛋白B检测操作规程
1. 检测原理
APO A-1与特异的抗血清反应形成不溶性的复合物，可在340nm测定该不溶性复合物的浊度。
通过测定标准品，建立一个吸光度对APO A-1浓度的标准曲线就可以测定出样品中的APO A-1浓度。
2．标本采集与处理
2.1 受检者的准备：
病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或中哺乳后3个月检验才能反应其基本血脂水平。
注意有无应用影响血脂的药物，如降血脂药、避孕药等。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为血脂水平有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验，应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血：
除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：
血浆使用EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。
2.4 标本处理：
血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。
3．试剂
3.1 试剂：
本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司APOA1试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：
3.2：校准血清
使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。
校准频次：
空白定标：每日需做试剂空白定标。
全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。
3.3 试剂与校准血清的稳定性：
原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。
试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天。
试剂储存在18-22℃稳定28天，试剂应避免污染。
试剂R1颜色为无色，试剂R2颜色为无色至浅黄色，当试剂变色，按照试剂失效处理。
项血脂类标准液或APOA/B标准液在2-8℃储存至标签所示失效日期，复溶后-20℃保存，可稳定一个月，2-8℃储存可稳定一周，参见校准血清说明书。
4．仪器
KONELAB 30型号仪器。
性能：波长340nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。
5．操作
样品为血清。
本法为终点法。
参数见后附，附录A。
试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。
6．计算
△A测定
C = ————×C0
△A标准
式中：c——测定血清载脂蛋白A1浓度，g/L；
△A测定——标本管吸光度；
△A标准——标准管吸光度；
C O——校准血清中载脂蛋白浓度，g /L；
△A ＝A2－A1
7．操作性能
7.1 精密度：
批内CV< 1.78，批间CV< 3.65。
7.2 准确度：
检测结果的相对不准确度≤±10%。
7.3 灵敏度：
载脂蛋白A1浓度为：1.1g/L时，浊度吸光度A340nm约1.151~1.256。
7.4 可报告范围：
血清与试剂用量之比为2:260:65时，测定上限为2.4g/L。
7.5 特异性：
测量值在给定值的90%-110％范围内。
7.6 干扰：
内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸300mg/ml对测试结果无明显影响。
8．参考值
1.2-1.8 g/L
9．临床意义
载脂蛋白A1 测定试剂盒用于定量测定血清中载脂蛋白A1的含量。
ApoA可分为ApoAⅠ，AⅡ, AⅣ。
ApoAⅠ和AⅡ大部分分布在HDL中，是HDL的主要载脂蛋白。
ApoAⅠ主要存在于HDL中，在HDL3中ApoAⅠ占载脂蛋白的65％，在HDL2中ApoAⅠ占载脂蛋白的62％，在CM、VLDL和LDL中也有少量存在。
血浆中呈现β迁移率的一种β-HDL，其内80％为Apo AⅠ。
ApoAⅠ的生理功能有：①组成载脂蛋白并维持其结构的稳定性与完整性。
实验表明，纯化的ApoAⅠ在水溶液中可以自发地和脂类结合。
用CNBr法将ApoAⅠ裂解成四个肽段，发现仅有羧基末端的肽段可自发和磷脂结合。
后来进一步确认这一段是ApoAⅠ224-242段，这一段既可维持双性螺旋的结构，又可以维持和脂质结合所具备的疏水性。
②ApoAⅠ可以激活卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）的活性。
已经证实，ApoAⅠ是通过激活LCAT，再催化胆固醇酯化。
ApoAⅠ肽段Ⅲ（肽段116-151）是激活作用的中心。
③A poAⅠ可作为HDL受体的配体，含ApoAⅠ脂蛋白可以和转铁蛋白及铜蓝蛋白形成大分子复合物以运输铁和铜离子。
载脂蛋白A1是抗动脉搏粥样硬化的指标，检测血清中载脂蛋白的主要用于诊断冠心病。
附录A: 参数。