第六章-体外标记免疫分析
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体外分析技术
Ag
25
50
100
200
400
800
*Ag
Ab
分离B、F
B1%
B2%
B3%
B4%
B5%
B6%
1
2
3
4
5
6
B%
？
B%
F%
B/F
Calibration Curve
优缺点比较
1、放射免疫分析技术
放射免疫技术是利用放射性核素可探测的灵敏性、精确性与抗原抗体反应的特异性相结合的一类免疫测定技术。 放射免疫分析（radioimmunoassay，RIA）——以标记抗原与反应系统中未标记抗原竞争结合特异性抗体来测定待检样品中抗原量。 免疫放射分析（immunoradiometric assay，IRMA）——以过量标记抗体与抗原非竞争结合，采用固相免疫吸附载体分离游离和结合标记抗体。
不同的肿瘤标记物可能出现在相同的粘蛋白上 在肿瘤细胞株中CA199,CA50和CA242共同表达于 MUC-1和诞腺蛋白中。（Baeckstrom et al, 1992）
肿瘤的发展及诊断期
肿瘤标志物在全球的应用情况
肿瘤标志物的分类（化学特性）
癌胚抗原类标志物 糖类抗原标记物 酶类标志物 激素类标志物 癌基因 其他
肿瘤与肿瘤标记物
相同的肿瘤可能检测出多种不同的肿瘤标记物 相同的肿瘤标记物可能出现在不同的粘蛋白上 CA19-9和CA50已经在不同的粘蛋白核心上得到鉴定: MUC-1,MUC-3。（Baeckstrom et al, 1992和1995） 涎腺蛋白。（Baeckstrom et al,1995） 颌下腺粘蛋白 支气管肺泡粘蛋白
1、放射免疫分析技术
优点：超微量分析技术，具有很高的精密度、灵敏度和准确度 缺点：反应条件要求一般，但该技术所用试剂具有放射性，对人体有一定的危害，实验人员应加强防护。同时试剂存在半衰期，试剂必须在半衰期内用完，否则试剂会作废，这需要科学地做好试剂计划。另外反应过程中抗原的含量低到一定程度时会出现不确定因素，使灵敏度受到限制。
标记免疫分析临床
标记免疫分析临床标记免疫分析（Immunoassay）是一种基于免疫学原理的生物分析方法，广泛应用于临床诊断和研究领域。
通过标记特定抗原或抗体，结合其与靶分子的特异性相互作用，标记免疫分析能够准确检测和定量分析目标分子的存在和浓度。
在标记免疫分析中，通常使用荧光、酶、金颗粒等标记物作为信号发生器。
这些标记物能与目标分子或抗体发生特异性结合，并通过其特性来输出检测结果。
标记免疫分析的灵敏度高、专一性强，且具有高通量性和自动化程度高的优势，因此在临床应用中得到了广泛的应用。
一、标记免疫分析在临床诊断中的应用1. 临床生化指标检测标记免疫分析在临床生化指标检测中具有广泛的应用，如血糖、血脂、肝肾功能、心脏标志物等。
通过检测相关指标的浓度变化，可以快速准确地评估患者的健康状况以及疾病的进展情况，提供临床决策的依据。
2. 肿瘤标志物检测标记免疫分析在肿瘤标志物检测中扮演重要角色。
通过检测特定肿瘤标志物的浓度变化，可以帮助医生判断肿瘤的存在与否、疗效评估及预后预测等。
例如，CA125在卵巢癌的早期筛查和监测中具有重要意义。
3. 传染病诊断标记免疫分析对于传染病的诊断与监测也有着重要的作用。
例如，HIV、乙肝病毒等病原体的抗体检测，用于早期发现感染，以采取相应的预防和治疗措施。
标记免疫分析可以提供高灵敏度和高特异性的检测结果，有助于及早干预和控制传染病的传播。
二、标记免疫分析在疾病研究中的应用1. 免疫相关疾病的研究标记免疫分析在免疫相关疾病的研究中发挥着重要作用。
例如，自身免疫病的发病机制研究、药物治疗的监测和疗效评估等都离不开标记免疫分析。
通过检测某些自身抗体或免疫相关因子的变化，可以深入了解疾病的发生和发展过程，为新药研发和治疗提供理论依据。
2. 药物代谢及药物监测在药物研究和临床应用中，标记免疫分析可以用于检测药物及其代谢产物的浓度。
通过测定药物浓度的定量变化，可以评估药物的吸收、分布、代谢和排泄过程，进而调整药物剂量、制定个体化治疗方案，提高疗效、减少副作用。
核医学课件：体外分析技术
标准曲线
目前已普遍采用计算机进行数据处 理，自动绘制标准曲线，自动换算 样品中被测物质的浓度
实验操作基本步骤
1.加样：加样总体积要保持一致，所处的介质环境 也要一致。
2.孵育：根据不同的分析对象孵育的温度和时间 不同，一般是37℃。
3.分离：选择好的分离方法分离游离抗原和 抗原－抗体复合物。 4.测量：测量游离或结合物部分的放射性。 5.数据处理：绘制标准曲线和待测物浓度的计算
* Ag
基本反应式
Ag-Ab
*Ag:标记抗原，Ag 非标记抗原 Ab：抗体 *Ag- Ab 标记抗原抗体复合物 Ag- Ab 非标记抗原抗体复合物
Ag-Ab+Ag
条件：1.*Ag与Ag 免疫活性相同
2. *Ag与Ab 恒量
*Ag-Ab+*Ag
理
*Ag与Ag由于免疫化学性质一致，共同竞争 性与Ab结合，当*Ag和Ab的量保持恒定， *Ag与Ag之和大于Ab时，则*Ag-Ab复合物的 形成受Ag含量的制约，二者之间存在函数关 系 ， 即 Ag 量 越 大 ， *Ag-Ab 量 越 小 ； Ag 量 越 小，*Ag-Ab量越大；测定*Ag-Ab或*Ag量即 可推算出被测Ag量
量B、F的cpm
*Ag
B%=B/(B+F)
Ag 1
2
3
4
5 6？
25 50 100 200 400 800
B%
B% 标准曲线
常 用 的 反 应 参 数 有 B%，B/F，F/B、 F%等这些反应变量都可以用作纵坐标来对 应标准抗原的浓度作标准曲线，选用的反应 变量不同，标准曲线的形状也不同。但是这 些标准曲线都是反映的反应变量对应标准抗 原浓度变化而变化的函数关系。
核医学：体外标记免疫分析的临床应用
（2）非肿瘤垂体组织分泌过多的TSH引起的甲亢， 由垂体增生引起，非功能自主性，溴隐停治疗有 效。
（3）中枢型对甲状腺激素不敏感。为遗传病。
（4）异源性TSH分泌过多引起的甲亢。
（二）抗甲状腺药物（ATD）治疗中甲状腺 功能监测：
• 次序：TT4→ TT3 →FT4→FT3→sTSH
• 判断ATD过量，TT4尤其是FT4是最灵敏可
体检中心专用
体外标记免疫分析的临床应用
1.下丘脑-垂体-甲状腺轴激素测定
甲亢、甲减等甲状 腺疾病诊断、疗效评估 和用药量调整的指标。
T3、T4、sTSH、 FT3、FT4、TRAb、 TG-Ab、TM-Ab、 TPOAb等
30
2.下丘脑-垂体-生殖腺轴激素（性激素）测定 垂体疾病、月经异常、不育不孕、先天性
（一）甲减的诊断 原发性甲减最常见的病因是由慢性淋巴细胞性甲
状腺炎所引起。 次序：sTSH>FT4>TT4>FT3>TT3
1. sTSH↑、FT3↓、TT3↓、FT4↓、TT4↓，
较为严重的甲减。
2. sTSH↑、FT4↓、TT4↓，FT3、TT3正常，
轻度甲减。
3. sTSH↑、FT4、TT4，FT3、TT3正常，亚临床甲 减。亚临床甲减主要是由慢性淋巴细胞性甲状腺 炎引起的。特殊的有：
（1）TSHR基因突变引起的，本病为常染色体隐性 遗传，病儿无甲状腺肿大，体格和智力发育正常。 用甲状腺激素(T4）治疗可使增高在TSH下降。
（2）先天性甲状腺激素有机合成障碍。本病为常染 色体遗传，如碘有机化缺陷，Pendred’s综合征、 碘化罗氨酸偶联障碍、甲状腺球蛋白合成障碍或 结构异常。体格发育正常，有明显的甲状腺肿大， 成年人多数伴有多发性结节。甲状腺素治疗对甲 肿和结节有明显疗效，不宜手术治疗，不恰当的 手术，甲状腺肿很快复发如初。
（3）中枢型对甲状腺激素不敏感。为遗传病。
（4）异源性TSH分泌过多引起的甲亢。
（二）抗甲状腺药物（ATD）治疗中甲状腺 功能监测：
• 次序：TT4→ TT3 →FT4→FT3→sTSH
• 判断ATD过量，TT4尤其是FT4是最灵敏可
体检中心专用
体外标记免疫分析的临床应用
1.下丘脑-垂体-甲状腺轴激素测定
甲亢、甲减等甲状 腺疾病诊断、疗效评估 和用药量调整的指标。
T3、T4、sTSH、 FT3、FT4、TRAb、 TG-Ab、TM-Ab、 TPOAb等
30
2.下丘脑-垂体-生殖腺轴激素（性激素）测定 垂体疾病、月经异常、不育不孕、先天性
（一）甲减的诊断 原发性甲减最常见的病因是由慢性淋巴细胞性甲
状腺炎所引起。 次序：sTSH>FT4>TT4>FT3>TT3
1. sTSH↑、FT3↓、TT3↓、FT4↓、TT4↓，
较为严重的甲减。
2. sTSH↑、FT4↓、TT4↓，FT3、TT3正常，
轻度甲减。
3. sTSH↑、FT4、TT4，FT3、TT3正常，亚临床甲 减。亚临床甲减主要是由慢性淋巴细胞性甲状腺 炎引起的。特殊的有：
（1）TSHR基因突变引起的，本病为常染色体隐性 遗传，病儿无甲状腺肿大，体格和智力发育正常。 用甲状腺激素(T4）治疗可使增高在TSH下降。
（2）先天性甲状腺激素有机合成障碍。本病为常染 色体遗传，如碘有机化缺陷，Pendred’s综合征、 碘化罗氨酸偶联障碍、甲状腺球蛋白合成障碍或 结构异常。体格发育正常，有明显的甲状腺肿大， 成年人多数伴有多发性结节。甲状腺素治疗对甲 肿和结节有明显疗效，不宜手术治疗，不恰当的 手术，甲状腺肿很快复发如初。
第六章、放射免疫分析
其中X是抗原剂量，Y是结合%，a、b、c、d 为四个参数。对RIA来说，a可取实验所得的最大 结合率B0，b可取同一批数据用Logit-Log法作线性 回归所得的斜率，c可取使B0下降一半所需抗原浓 度ED50，d可取实验所得NSB。四参数Logistic模型 的图形如图：
3、其他拟合模型
如四参数单位点作用模型的稳定 性较好，个别标准管出现坏点对拟合 结果的影响较小；还有二次多项式拟 合法、折线拟合法等。应当指出，不 论采用何种数学模型进行曲线拟合， 实验的结果应该是相同的或相近的， 都不能改善实验过程低劣所带来的影 响。
Ag
Ag · Ab1 Ab1 · Ab2 Ag · Ab1 · Ab2
Ab2
Ab1
（三）双抗体-PEG法（double antibody-PEG method） 这种方法是目前被广泛采用的一种方法，它兼 顾了双抗体法和PEG法各自的优点，克服了双抗法 分离时间长和沉淀法非特异性结合高的缺点，并且 使第二抗体和PEG的用量大为减少，在常温加入分 离剂后，无需温育，直接离心，可获得满意的结果。 （四）吸附分离法（adsorptive separation method） 应用经过特殊处理的吸附剂，将游离的小分子 抗原或半抗原吸附，经过离心，随着吸附剂的沉淀 ，将F沉淀下来，而抗原-抗体复合物分子大，不被 吸附，仍保留在溶液中，从而将B与F分离开。常用 的吸附剂有葡聚糖包被的活性炭（DCC），离子交 换树脂等。
在一般RIA中，反应体系PH值多为中性附近， 接近蛋白质的等电点，γ球蛋白所带的电荷很少，形 成水化层的能力较弱，当加入适当浓度的聚乙二醇 或碱金属中性盐如硫酸胺等夺取其周围的水分子， 使它失去水化层，从而将抗体γ球蛋白（B）沉淀下 来，与游离部分的抗原分离。这种分离方法的优点 是操作简便，分离迅速，价格低廉，但是，这种方 法易受环境温度（温度高于30℃时沉淀物容易复 溶） 、pH值、离子强度和蛋白质含量(最终浓度达 250mg/ml以上 )及分子量(蛋白质分子量越大，用以 沉淀的PEG浓度越小)的影响，并且有些抗原也可能 被同时沉淀下来，所以，非特异性结合高。
体外标记免疫分析(讲义)
体外分析技术一、概论体外标记免疫分析是当今先进的超微量检测技术，它的测量值可精确到毫微克（ng）—微微克（pg），甚至达毫微微克级（fg），它的基础是先进的放射性或非放射性标记技术和先进的抗原—抗体结合的免疫技术。
它主要被用于检测人体的各种激素和各种肿瘤标志物。
是当前的重要检测技术之一。
体外标记免疫分析技术起始于1959年，由美国的Berson和Yalow共同建立了放射免疫分析法（RIA），由于RIA具有灵敏度高、特异性强、重复性好、测量简便、成本低等优点。
在生物学和医学中对机体超微量活性物质的分析取得重要突破而获得飞速的发展，故Yalow在1977年获得诺贝尔奖。
但因RIA法必须使用放射性物质，所以在发展中受到一定限制。
自70年代起科学家们曾先后研究并建立了多种非放射性物质的标记免疫分析，如酶标记免疫分析（EIA）、时间分辨荧光分析（TRFIA)、酶放大发光分析（CLEIA）、化学放光（CLIA）、电化学发光（ECLRA）等，并且可进行仪器的全自动化测定和全自动的数据分析。
各种测定方法主要是标记技术、标记品的不同而采用的测量方法不同，各具特点和优点，其基本原理还是标记免疫技术，其中最基本的还是放射免疫分析和免疫放射分析。
二、放射免疫分析的基本原理放射免疫分析法（Radioimmunoassay,RIA）是建立在放射性分析的高度灵敏性与免疫反应高度特异性基础之上的超微量分析技术。
通过测定放射性标记抗原—抗体复合物的量来计算出待测抗原（样品）的量。
20世纪50年代末Berson和Yalow在研究胰岛素抗体时，首先了建立放射免疫分析法定量测定胰岛素含量，从而开创了生物活性物质微量测定分析的新时代，从此放射免疫分析技术以其灵敏度高、特异性强、重复性好、准确度高等优点而独树一帜。
目前应用放射免疫分析技术能测定生物活性物质达300余种，被广泛应用于生物学医学各个领域。
放射免疫分析法的基本原理是竞争性抑制反应。
体外配体结合分析
放射免疫分析
一、原理 Ag+Ab + *Ag
AgAb+Ag
*Ag+*AgAb
二、必备条件
（一）抗体(结合剂）：高亲和力、高特异性、高滴度 （二）标记抗原
125I,放化纯，长半衰期，标记后不改变抗原活性。 （三）标准品
与被测物为同一物质，定量精确，放化纯高 （四）B与F 分离技术 （五）放射性测量仪
特点：
1 属于非竞争性抗原、抗体结合反应 2 抗原-抗体复合物的量与所加非标记抗
原的量呈正相关 3 在低剂量区不会有不确定因素 4 免疫放射分析法的非特异结合对低剂
量区结合影响大，对分离条件的要求 非常严格
二、基本方法
（一）双抗体夹心法 （二）标记第三抗体法 （三）其他方法
三、RIA与IRMA的比较
体外配体结合分析
概述
20世纪60年代,Berson和yalow,放射免疫分析(RIA),诺贝尔奖. 20世纪70年代,Engvall和Wecman,酶标记免疫分析(EIA) 80年代时间分辨荧光免役分析(TRFIA) 化学发光免役分析(CLIA) 电化学发光免役分析(ECLIA) 微粒体发光免役分析(MLEIA)
摇均匀后，放置待其竞争结合反应达平衡后
2ml 2ml
2ml
2ml
2ml
测总射线（可以测2-3管求均值）
去除上清液测B；也可求出F 画出标准曲线
从标准曲线查出待测品的Ag含量
2ml
2ml
1. 配制一系列已知浓度的标准抗 原Ag的反应管，并标明浓度；
2.分别向反应管中加入固定量的 *Ag、Ab；
3.经过一定时间的温育竞争结合 反应；
RIA
IRMA
标记物 原理 抗体量 标准曲线 达到平衡的速度 可测范围 应用对象
核医学体外分析技术
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
抗CGMP抗体的交叉反应图
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
（3）高滴度的抗体：
抗体滴度(Titer)指抗体实际应用时的稀释倍数。
稀释倍数越大，抗体的滴度越高，滴度一般要求在1/1000以 上为好。
滴度曲线的目的：确定抗体稀释度；找出抗原和抗体 的最适比例（B/T为50%时的抗体稀释度）。
1Bq=1/S
1Ci=3.7
10¹ºBq
2)保持标记抗原的免疫活性：
每个蛋白质分子上标记1-2个碘原子。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
3)便于放射性测量：
125I标记的抗原有r射线能直接测量
4)放射化学纯度高： 放射化学纯度: 是指具有免疫活性的标记抗原占总 放射性的百分数。 放化纯度要求大于90%以上
❖ 诺贝尔医学奖获得者－ Yalow博士。
❖ 1959年 Yalow和 Berson两位博士在研究胰岛素的抗 体时发展起来的。最早建立的是INS的RIA法。
❖ RIA法是一种高特异性、
❖ 高灵敏度的微量检测技术。
American physicist and medical researcher Rosalyn Yalow, corecipient of the 1977 Nobel Prize in physiology or medicine, "for the development of radioimmunoassays of peptide hormones."
❖ 目的：利用标准曲线来推算出病人样品（Ag）的含量。
❖ 配制一系列的标准品浓度：（0、20、40、80、160和320ng/L）
1B。 2
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体外标记免疫分析
鼻祖:
(Yalow,July 19, 1921 –)
美国科学家Yalow和Berson。 于1956年创建的放射免疫分析(RIA)，测定人血浆胰岛素 获得成功。树立了超微量物质体外标记免疫分析的里程碑。 1968年，Miles和Hales建立了免疫放射分析(IRMA)。
体外标记免疫分析
电化学发光免疫(ECLIA)反应模式图
电化学发光免疫分析测定示意图
第四节 体外标记免疫分析的质量控制
质量控制的目的
近期目的：
通过对测定结果的分析，对本次测定的质量作 出评价，并按照预定的要求决定结果的取舍。
远期目的：
通过对不同批测定结果的比较，发现造成成误 差的原因，从而改进实验条件或设计，以提高 质量。
固相分离法 微孔滤膜法 双抗体法
分离方法
盐析法
活性炭吸附法
磁化颗粒法
第三节 体外标记免疫分析的类型
体外标记免疫分析的类型
体外标记免疫分析
放射性核素标记 免疫分析
(RIA、 IRMA)
酶标记 免疫分析
时间分辩荧光 免疫分析
发光标记 免疫分析
(化学发光标记免疫分析 化学发光酶免疫分析 电化学发光免疫分析)
RIA ＆ IRMA 的区别
方法
1.标记 2.免疫反应式 3.Ab 4.竞争 5.测量复合物
RIA
*Ag
IRMA
*Ab
Ag+*Ag+Ab *Ag-Ab+Ag 限量 竞争
*Ag-Ab
Ag+*Ab Ag-*Ab+*Ab 过量 非竞争 Ag-*Ab
6.测量物计数值与标本含量
7.标准曲线形态 8.灵敏度 9.测量范围
核医学
核医学
第六章 体外标记免疫分析
体外标记在核医学中的地位
体内诊断：脏器显像
功能测定
诊断 体外诊断：放射分析 临床核医学 治疗：131I治疗甲亢 核医学 实验核医学：利用核技术探索生命现象的本质和物
质变化规律
体外标记免疫分析
体外标记免疫分析是一门综合性学科，也是一 门边缘学科。是集基础医学、实验医学及临床应用 于一体的学科。在当前的各种免疫诊断技术中，标 记免疫分析是最活跃、发展最快的一个领域。
Ag
待测抗原
+ *Ag + Ab
*AgAb + *Ag
(标记抗原) (特异性抗体) (标记抗原抗体复合物) (游离的标记抗原)
AgAb + Ag
抗原抗体复合物
标记抗原(*Ag)和非标记原(Ag)与限量抗体(Ab)竞争结合。 *Ag和Ag具有相同的与 Ab结合的能力
RIA(竞争结合反应)原理示意图
１. *Ag:定量、足量
特点：
1 2 分析范围宽 灵敏度高
专一度高 3
稳定性强 4
发光标记免疫分析
化学发光标记免疫分析 （CLIA）
分类
化学发光酶免疫分析(CLEIA)
电化学发光免疫分析(ECLIA)
化学发光标记免疫分析 （CLIA）
化学发光免疫技术：化学发光分析是根据化学反应产 生的辐射光的强度来确定物质含量的分析方法。化学发光 免疫分析是将化学发光系统与免疫反应相结合，用化学发
基本原理:
体 外 标 记 免 疫 分 析
竞争性(标记抗原) RIA
非竞争性(标记抗体) IRMA
放射免疫分析（RIA）原理
放射免疫技术是标记抗原与未标抗原竞争有限量 的抗体，然后通过测定标记抗原抗体复合物中放 射性强度的改变，测定出未标记抗原量。
放射免疫分析（RIA）原理 放射免疫分析（RIA）原理
优缺点： 自1959年Yalow和Berson创建的放射免疫分析（RIA）具 有灵敏度高、特异性强、简便实用、成本低廉等优点。为生 物医学的微量物质分析开创了新的领域。发展到目前为止由 此衍生出了各种各样的标记免疫分析技术。 虽然RIA仍有较广泛的使用市场和价值，但其方法学上 固有的弱点使发展受到一定限制。如必须使用放射性同位素 作为标记物，存在人为的因素影响较大、辐射防护及防止污 染的问题，试剂盒使用时间短，可测量范围相对较窄，难以 实现操作及测量的自动化等。
酶标记免疫分析（EIA）
概念： 是应用酶标记抗体（抗原）与抗原（抗体） 产生特异性反应，根据酶对底物的显色反应而定 量分析待测抗原或抗体含量。 分类: 均相EIA：酶增强免疫分析（EMIT） 非均相EIA:酶联免疫吸附分析法（ELASA）
时间分辨荧光免疫分析(TrFIA)
概念：
是应用镧系元素标记抗 原或抗体，利用紫外线或激 光使其发射荧光，结合波长 和时间两种分辨技术的微量 分析方法。 常用镧系元素： 铕、铽、钐、镝
获奖:
在1977年Yalow和Berson因创建了放射免疫
分析，使微量物质的测定成为可能，而荣获诺贝
尔生物医学奖 。
体外标记免疫分析
贡献: 随着基础医学和相关技术的发展，在RIA标记 抗原竞争性抑制结合、IRMA标记抗体非竞争性结 合的理论基础上，相继派生出许多其它的标记免 疫分析方法，如酶标记免疫分析、时间分辨荧光 免疫分析、化学发光免疫分析、电化学发光免疫 分析等多种形式、多种反应模式的综合性标记免 疫分析体系，并广泛应用于基础医学、临床医学 、教学及科研诸多领域，有力地推动了医学科学 的发展。
体外标记免疫分析
概念： 是利用放射分析方法或其派生的相关 非放射分析技术测定生物样品中微量生物 活性物质含量的一类分析方法。
体外标记免疫分析
特点：
利用抗原－抗体结合反应的特异性，加上 各种标记物（标记抗原或抗体）的可测量性来 达到方便敏感地检测各种体内微量生物活性物 质，包括内分泌激素、蛋白质、多肽、核酸、 神经递质、受体、细胞因子、细胞表面抗原、 肿瘤标志物、血药浓度等。
光相关的物质标记抗体或抗原，与待测的抗原或抗体反应
后，经过分离游离态的化学发光标记物，加入化学发光系 统的其它相关物产生化学发光，进行抗原或抗体的定量或 定性检测。
--- 夹心法
磁微粒 抗体
+
被测抗原
+
带吖啶酯 标记物抗 体
（1） 加入H2O2 （pH<10）
（2） 加入碱 （pH>10）
发光
冲洗后
稳定性
指实验批间的重复性 常用最大结合率（B0%） 非特异性结合率（NSB%） 标准曲线直线回归参数（a、b、r） 标准曲线结合率（ED）等指标评价
质量控制评价系统
实验室内部质量控制(IQC) 实验室室间质量控制(EQC)
免疫放射分析(IRMA)原理
单位点： Ag + *Ab (Ag-*Ab) + *Ab
抗原（待测） 标记抗体 抗原标记抗体复合物
双位点： Ad-Ag + *Ab Ad-Ag-*Ab
固体抗体-抗原（待测） 标记抗体 固体抗体-抗原-标记抗体复合物
IRMA(非竟争结合)反应原理
IRMA(非竟争结合)剂量反应曲线
分析误差
* 系统误差
标准品误差 加样误差 测量误差
* 随机误差
样品的采集与制备
质量控制指标
１.精密度 ２.准确度 ３.灵敏度 ４.特异性 ５.稳定性
精密度
用同一实验方法多次检测 同一样品所得结果的一致 性，又称重复性。 常表示测量结果中的随机 误差大小。 常用变异系数、标准差值 等表示。
放射性核素标记免疫分析
概念： 一种将放射性核素测量的高灵敏性、高精确 性和抗原抗体反应的高特异性相结合的体外测定 超微量（10-9～10-15g）物质的新技术。
放射性核素标记免疫分析
分类:
放 射 性 核 素 标 记
竞争性(标记抗原,抗体限量) RIA
非竞争性(标记抗体,抗体过量) IRMA
放射性核素标记免疫分析
２. Ab:限量、特异 ３. *Ag和Ag具有相同的免疫活性
Ag
Ag*
Ab
C
FAg*
B
F
B/F
４. Ag+ *Ag>Ab的有效结合位点
５. *Ag和Ag通过竞争的方式与Ab 结合，随着Ag增加， *Ag与Ab结合 形成的*AgAb复合物的量减少
放射免疫分析（RIA）
实验操作步骤： 加样（Ag，*Ag，Ab) →混匀，温育（反应达到平 衡）→分离→测量→数据处理，质量控制
呈反比
╲ 较低 较窄
呈正比
╱ 高 较宽
第二节 体外标记免疫分析的基本试剂和 基本技术
基本试剂和基本技术
１. ２. ３. ４.
标准品、质控品 特异性抗体 示踪剂(标记品) 分离技术
１. 标准品 (1)化学结构: 应与待测物具有相同的化学结构 (2)化学纯度：高度纯化 (3)化学度量： 准确 (4)稳定性：不易变质、不易降解
电化学发光免疫分析(ECLIA)的标记物
[Ru(bpy)3]2+为标记物 三联吡啶钌为水溶性、高稳定性的小分子，可以 确保电化学发光的高稳定性，并且无噪音干扰。 三联吡啶钌结构简单,分子量小，所以，易于标记 到任何物质（如抗原、抗体、核酸，等）上，并 且对原物质的生物活性及免疫活性影响小。 TPA是ECL中的电子供体，氧化后生成的中间产物 是形成激发态[Ru(bpy)3]2+化学能来源。
进的化学发光免疫测定系统。
电化学发光免疫分析(ECLIA)
原理： 以电化学发光剂三联吡 啶钌标记抗体（抗原），与 待测标本中抗原（抗体）产 生免疫反应形成复合物以三 丙胺(TPA)为电子供体，在 电场中因电子转移而发生特 异性化学发光反应，它包括 电化学发光和化学发光反应 两个过程。
均相测量 多元检测
化学发光标记免疫分析 （CLIA）
概念： 利用化学反应中释放大 量自由能产生激发态中间 体，当其退激到基态时， 发射出光子，对这些光子 量进行测量从而进行定量 分析抗原含量。 常用发光剂： 鲁米诺类、吖啶酯类