体外放射分析技术
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核医学体外放射分析技术课件
有效地排除非特异性物质对结合反应的干 扰。
二、结合反应动力学规律
• 遵守质量作用定律 • [L]+[B] 适当的实验条件 [LB]
衍生设计出两种方法学
• 1、竞争结合（competitive binding) • 过量的配体与有限量的结合剂发生竞争性
结合反应。 • 2、非竞争结合（non-competitive binding) • 过量的结合剂与有限量的配体，在非竞争
的条件下发生结合反应。
衍生设计出两种方法学
• 1、竞争结合（主要应用：放射免疫分析）
• [L]+ [L*]+[B] [LB] +[L*B]
• 2、非竞争结合
•结合在试管 或包被珠上
• Sp.Ab1+Ag Sp.Ab1.Ag
• Sp.Ab1.Ag +Ab2* Sp.Ab1.Ag.Ab2*+Ab2*
优点
• 慢性淋巴细胞性甲状腺炎： • 早期：T3,T4升高，然后降低，
TSH,TGAB,TPOAB升高。 • 甲状腺肿瘤：TG升高。 • 全身性疾病：心血管疾病、肿瘤等： • T3下降，rT3、TSH升高。
（二）肾上腺疾病
• 皮质醇增多症： • ACTH\COR正常情况下有节律分泌，检测
可以与单纯性肥胖区分。 • 原发性醛固酮增多症：尿游离皮质醇
• 反应误差关系 • 精密度图
• 2、准确度：测的值与其标称值之间的 相符程度。
• 3、灵敏度（sensitivity): • 4、特异性(specificity) • 5、稳定性(stability)
（三）质量评价
• 内部质量控制 • 外部质量控制
三、以配体与受体间结合反应 为基础的分析系统
二、结合反应动力学规律
• 遵守质量作用定律 • [L]+[B] 适当的实验条件 [LB]
衍生设计出两种方法学
• 1、竞争结合（competitive binding) • 过量的配体与有限量的结合剂发生竞争性
结合反应。 • 2、非竞争结合（non-competitive binding) • 过量的结合剂与有限量的配体，在非竞争
的条件下发生结合反应。
衍生设计出两种方法学
• 1、竞争结合（主要应用：放射免疫分析）
• [L]+ [L*]+[B] [LB] +[L*B]
• 2、非竞争结合
•结合在试管 或包被珠上
• Sp.Ab1+Ag Sp.Ab1.Ag
• Sp.Ab1.Ag +Ab2* Sp.Ab1.Ag.Ab2*+Ab2*
优点
• 慢性淋巴细胞性甲状腺炎： • 早期：T3,T4升高，然后降低，
TSH,TGAB,TPOAB升高。 • 甲状腺肿瘤：TG升高。 • 全身性疾病：心血管疾病、肿瘤等： • T3下降，rT3、TSH升高。
（二）肾上腺疾病
• 皮质醇增多症： • ACTH\COR正常情况下有节律分泌，检测
可以与单纯性肥胖区分。 • 原发性醛固酮增多症：尿游离皮质醇
• 反应误差关系 • 精密度图
• 2、准确度：测的值与其标称值之间的 相符程度。
• 3、灵敏度（sensitivity): • 4、特异性(specificity) • 5、稳定性(stability)
（三）质量评价
• 内部质量控制 • 外部质量控制
三、以配体与受体间结合反应 为基础的分析系统
第8章 体外放射分析技术新版
抗体包被分离法
特点：试管包被第二抗体 原理：SP－Ab2－Ab1－*Ag
Ab2
优点：固相包被具有简便、快速、稳定、不需离心等， 有逐渐取代液相法的趋势。
固相吸附分离法
吸附分离剂是固相颗粒，它可以从反应液中吸附游离抗原。活性 炭是常用的吸附剂，多用于小分子游离抗原和抗原－抗体复合物的分 离。具体应用时在活怀炭颗粒的表面涂上一层右旋糖酐或蛋白类化合 物，这样在活性炭的表面形成一定大小的孔洞，在反应液中加入这种 特殊颗粒时，小分子的游离抗原就会被活性炭吸附，从而达到分离B 与F的目的。
逐个代入上式，即可求得各样品的含量 X。 优点：操作简单，用计算器也可拟合。
缺点：①由于Log 0无解，拟合时丢掉0剂量点，降低了灵敏度②
如有突出值，整条拟合线会偏离；③在顺序加样法中不是 直线不可用。
2. 四参数Logistic模型 本法从Logit-Log法演化而来，其函数式如下： Y=（a-d）/「1+（X/C）b」+d 式中Y是标记抗原在各实验点的结合率（包括NSB），X 是各点的剂量。a、b、c、d是四个参数。a代表0剂量时
1、系统误差（systematic error）这种误差常表现为检测结果呈 倾向性的偏高或偏低，是一些可以确定的因素导致的。（1）方法 误差，如标准品稀释体积不正确；抗体过浓或过稀，分离效果不 好；不适当的曲线拟合模型等。（2）仪器和试剂误差，如仪器状
态不佳；量器不准；试剂不纯等。（3）操作误差，如不正确的操
作习惯、错加样品等。系统误差是可以通过努力消除的。 2、随机误差（random error）这种误差是由难以确定且无法控
制的原因（偶然因素）引起，误差的出现是随机的，与真值的偏
实验核医学-体外分析技术
实验核医学
Experimental nuclear medicine
体外分析技术
In Vitro Radioassay
主讲人/制作人：
体外分析技术
In Vitro Radioassay
一、体外放射分析技术 二、非放射免疫分析技术 三、临床应用
结束
体外放射分析
一、体外放射分析的概念和分类
二、放射免疫分析（RIA) 1、基本原理 2、必备条件 3、质量控制
放射免疫分析Radioimmunoassay（RIA)
一、基本原理：
放射免疫分析是竞争性体外放射分析原理的代表。 在体外，以放射性核素标记抗原和非标记抗原，同时 与适量的特异性抗体发生的竞争性免疫结合抑制反应。
*Ag + Ab + Ag
*Ag-Ab + *Ag
Ag-Ab十Ag
RIA操作步骤：
1、加样 2、温浴反应 3、分离B/F 4、放射性测量 5、绘制标准曲 线，查找待测物 浓度
b值稳定，r＞0.99。
4．ED25、ED50及ED75 指标准曲线的结合率在25％、50％及75％时对应的抗原浓度值，
它反映标准曲线的稳定性，有助于批间结果的比较。
5．反应误差关系(RER) 是评价RIA整批误差的综合指标，RER应＜0.04。
6．质控图
WHO要求在一次实验中，有下列情 况之一者，其结果应予舍弃：
质量控制包括监测各重要环节的质量、测定误差和结果的 可靠性。
（一）、质量控制
1．最高结合率(B0％) 指不加非标记抗原时标记抗原与抗体的结合率，一般要求在30～50％。
2．非特异性结合率(NSB％) 指不加抗体时标记抗原与非特异性物质的结合率，一般要求＜5～10％。
Experimental nuclear medicine
体外分析技术
In Vitro Radioassay
主讲人/制作人：
体外分析技术
In Vitro Radioassay
一、体外放射分析技术 二、非放射免疫分析技术 三、临床应用
结束
体外放射分析
一、体外放射分析的概念和分类
二、放射免疫分析（RIA) 1、基本原理 2、必备条件 3、质量控制
放射免疫分析Radioimmunoassay（RIA)
一、基本原理：
放射免疫分析是竞争性体外放射分析原理的代表。 在体外，以放射性核素标记抗原和非标记抗原，同时 与适量的特异性抗体发生的竞争性免疫结合抑制反应。
*Ag + Ab + Ag
*Ag-Ab + *Ag
Ag-Ab十Ag
RIA操作步骤：
1、加样 2、温浴反应 3、分离B/F 4、放射性测量 5、绘制标准曲 线，查找待测物 浓度
b值稳定，r＞0.99。
4．ED25、ED50及ED75 指标准曲线的结合率在25％、50％及75％时对应的抗原浓度值，
它反映标准曲线的稳定性，有助于批间结果的比较。
5．反应误差关系(RER) 是评价RIA整批误差的综合指标，RER应＜0.04。
6．质控图
WHO要求在一次实验中，有下列情 况之一者，其结果应予舍弃：
质量控制包括监测各重要环节的质量、测定误差和结果的 可靠性。
（一）、质量控制
1．最高结合率(B0％) 指不加非标记抗原时标记抗原与抗体的结合率，一般要求在30～50％。
2．非特异性结合率(NSB％) 指不加抗体时标记抗原与非特异性物质的结合率，一般要求＜5～10％。
体外放射性分析
定义：在体外条件下、以放射性核素标记的配体为示踪剂、以结合反应为基础、以放射性测量为定量手段、对微量物质进行定量分析的一类分析方法。
按照方法学设计原理分类竞争性结合分析——竞争性结合反应为基础，结合剂和标记物是限量的。
（放射免疫酶促受体）放射免疫分析（最有代表性）、放射受体分析、蛋白质结合竞争分析、放射酶促分析非竞争性结合分析——结合剂的结合位点是过量的，待测配体全量参加反应，灵敏度高。
免疫放射分析、受体放射分析、酶的放射化学测定、酶的激活剂或者抑制剂测定。
※共同基础为分子识别。
放射免疫分析(RIA)——待测抗原和定量标记抗原与有限量的特异性抗体竞争性结合，以放射性测量为定量手段，获得待测抗原浓度的分析。
条件1、待测Ag和标记具有相同免疫活性。
2、待测Ag和标记Ag*总量必须＞Ab量（只有多了才能竞争）3、Ag*量和Ab量保持恒定。
4、Ab必须有合适的滴度（常以能与50%标记抗原结合的稀释倍数表示）5、降低Ab浓度→提高检测灵敏度，但是缩窄检测范围6、增加Ab浓度→降低检测灵敏度，但是适合较高浓度的抗原检测。
公式：（Ag+Ag*）＋Ab——→Ag·Ab + Ag*·Ab + Ag + Ag*免疫放射分析（IRMA）——过量的标记抗体与待测抗原结合，分离标记抗原抗体复合物和未结合标记抗体，通过反射性测量可求得抗原的含量。
Ag+＋*Ab——→Ag·*Ab + *Ab具体方法：单位点法、双位点法（应用最最多的方法）和标记第三抗体法两种方法异同点相同点：1、均已抗原抗体的免疫反应为基础；2、测定的对象都是物质的抗原不同点：见下表受体放射分析——研究受体数目和性质的分析技术，非竞争性结合分析受体放射分析时标记配体的要求：1、与相应的受体有高亲和力，在一定浓度达到最大结合率，转移性好；2、标记配体比活度高（＞10ci/mmol），纯度高、常用的多为3H标记拮抗剂，某些具有酪氨酸残基的多肽也可以125I标记。
体外放射分析
RIA的基本条件
Specific binding reagent
• 特异性结合剂抗体特异性(specificity)：交 叉反应的程度越小越好 • 亲和力(affinity)：配体与结合剂相互结合 的程度，是反映结合剂质量的主要指标。 可用亲和力常数表示。 • 滴度(titer)：在RIA时，结合50%的标记配 体的结合剂稀释度；IRMA分析要求较高 滴度（过量）。
Competive inhibition curve
• Binding rate（％）
• Concentration of antigen(mol/L)
抗体的工作浓度
• Ag*与Ag的免疫化学性质相同； • Ag*与Ag之和大于Ab，Ag*与Ab的量保持恒定。 Binding rate(%) 50%
体外放射分析
内容提要
• Part one: 体外放射分析技术 •Part two: 非放射免疫分析技术 • Part three: 临床应用
历史
• 1960年美国的Berson和Yalow 将核技 术与免疫学技术相结合建立了放射免疫 分析法，并首先用于测定血浆胰岛素浓 度，由于该法对医学的巨大贡献，1977 年Yalow获得了Nobel奖。
Definition
• 在体外条件下 In vitro 以放射性核素标记的配体为示踪剂Tracer 以结合反应为基础 Base 以放射性测量为定量手段 Means 对微量物质进行定量分析Quantitative analysis 一类分析方法的总称。 General name
Main methods
• 半对数坐标系制图法制图方法简便，但 易导致主观误差。 B/F (%) Log X
• 特异性抗体：亲和力大，滴度高，特异性强 • 标记抗原：纯度高；较高的比活度；放化纯度 >95%;保持免疫活性;标记稳定性好,无核素脱落 • 标准品:与被测物属同一种物质,具有相等的活 性,高度纯化;定量要精确(国家标准;药盒标准; 质控标准) • B与F分离技术:完全又快速,非特异性结合低;不 易受外界因素的干扰;价廉,操作简便,重复性好 (双抗法,沉淀法,双抗+PEG法,固相分离法,SPA 法,微孔滤膜法) • 放射性测量仪器: 计数器
核医学课件：体外分析技术
标准曲线
目前已普遍采用计算机进行数据处 理，自动绘制标准曲线，自动换算 样品中被测物质的浓度
实验操作基本步骤
1.加样：加样总体积要保持一致，所处的介质环境 也要一致。
2.孵育：根据不同的分析对象孵育的温度和时间 不同，一般是37℃。
3.分离：选择好的分离方法分离游离抗原和 抗原－抗体复合物。 4.测量：测量游离或结合物部分的放射性。 5.数据处理：绘制标准曲线和待测物浓度的计算
* Ag
基本反应式
Ag-Ab
*Ag:标记抗原，Ag 非标记抗原 Ab：抗体 *Ag- Ab 标记抗原抗体复合物 Ag- Ab 非标记抗原抗体复合物
Ag-Ab+Ag
条件：1.*Ag与Ag 免疫活性相同
2. *Ag与Ab 恒量
*Ag-Ab+*Ag
理
*Ag与Ag由于免疫化学性质一致，共同竞争 性与Ab结合，当*Ag和Ab的量保持恒定， *Ag与Ag之和大于Ab时，则*Ag-Ab复合物的 形成受Ag含量的制约，二者之间存在函数关 系 ， 即 Ag 量 越 大 ， *Ag-Ab 量 越 小 ； Ag 量 越 小，*Ag-Ab量越大；测定*Ag-Ab或*Ag量即 可推算出被测Ag量
量B、F的cpm
*Ag
B%=B/(B+F)
Ag 1
2
3
4
5 6？
25 50 100 200 400 800
B%
B% 标准曲线
常 用 的 反 应 参 数 有 B%，B/F，F/B、 F%等这些反应变量都可以用作纵坐标来对 应标准抗原的浓度作标准曲线，选用的反应 变量不同，标准曲线的形状也不同。但是这 些标准曲线都是反映的反应变量对应标准抗 原浓度变化而变化的函数关系。
核医学体外放射分析
不同批实验中这些值应大体接近。
临床有效性：阳性率与临床诊断的符合率。
与正常值的确定有关。
上述几种指标间的关系；靶图。
若某点的CV%大于10%应做为坏点剔除。
反应精密度的几个指标（1、2、3）： 1、平均批变异系数（ABCV）：指一批实验数据的CV平均值： ∑SD ABCV%=------------------------------×100% ∑X 2、反应误差关系（RER）：指一批实验各复管的SD与其X之间的函数关系。SD为CPM的误差。它是反应实验复管平行性好坏的综合指标，不是剂量的误差。 RER的计算公式见P85，4—23 RER≤0.04 优秀 0.12<RER>0.04<0 良好 RER>0.12 差
5、四参数单位点质量作用定律模式： 按质量作用定律导出的模式 优点：①质量作用定律，稳健回归拟合； ②适于平衡和非平衡系统； ③个别坏点对曲线影响小。 模型的选择（拟合优度法来选） 问题： 一组数据可用多种模型去处理，如何选用？ ① 线性拟合用最小二乘法，选残差平方和最小的模型。 ② 非线性拟合用百分比偏差DEV% DEV%=（X’—X）/X 100% DEV%<10%即可使用。
特异分离法： 双抗法 固相分离法 葡萄球菌A蛋白（SPA） 补充：对分离方法的基本要求 1、使结合部分与游离部分尽可能完全分开 2、分离的成份便于放射性测量 3、分离效果不受外界干扰因素的影响 4、操作简便、分离迅速、重复性好 5、与游离标记物的非特异结合尽可能小 6、试剂来源广泛，经济价廉
线模型分类
曲线模型分类 1、针对剂量反应的实际曲线模型： 如多项式函数，光滑样条函数，线性内插模型 2、直线化模型：（logit —log模型） 常用：将标准曲线横坐标各点取对数lgX而纵坐标用logit Bx/B0, logit Bx/B0=lg Bx/B0—Bx 该直线法标准曲线的零点丢失（零无对数）造成灵敏度降低
临床有效性：阳性率与临床诊断的符合率。
与正常值的确定有关。
上述几种指标间的关系；靶图。
若某点的CV%大于10%应做为坏点剔除。
反应精密度的几个指标（1、2、3）： 1、平均批变异系数（ABCV）：指一批实验数据的CV平均值： ∑SD ABCV%=------------------------------×100% ∑X 2、反应误差关系（RER）：指一批实验各复管的SD与其X之间的函数关系。SD为CPM的误差。它是反应实验复管平行性好坏的综合指标，不是剂量的误差。 RER的计算公式见P85，4—23 RER≤0.04 优秀 0.12<RER>0.04<0 良好 RER>0.12 差
5、四参数单位点质量作用定律模式： 按质量作用定律导出的模式 优点：①质量作用定律，稳健回归拟合； ②适于平衡和非平衡系统； ③个别坏点对曲线影响小。 模型的选择（拟合优度法来选） 问题： 一组数据可用多种模型去处理，如何选用？ ① 线性拟合用最小二乘法，选残差平方和最小的模型。 ② 非线性拟合用百分比偏差DEV% DEV%=（X’—X）/X 100% DEV%<10%即可使用。
特异分离法： 双抗法 固相分离法 葡萄球菌A蛋白（SPA） 补充：对分离方法的基本要求 1、使结合部分与游离部分尽可能完全分开 2、分离的成份便于放射性测量 3、分离效果不受外界干扰因素的影响 4、操作简便、分离迅速、重复性好 5、与游离标记物的非特异结合尽可能小 6、试剂来源广泛，经济价廉
线模型分类
曲线模型分类 1、针对剂量反应的实际曲线模型： 如多项式函数，光滑样条函数，线性内插模型 2、直线化模型：（logit —log模型） 常用：将标准曲线横坐标各点取对数lgX而纵坐标用logit Bx/B0, logit Bx/B0=lg Bx/B0—Bx 该直线法标准曲线的零点丢失（零无对数）造成灵敏度降低
检验核医学放射免疫分析和免疫放射分析
3 标记Ag 常用125I和3H标记化合物 要求： (1)适当高的放射性比活度 影响方法的灵敏度和 精密度，标记Ag化学量≤被测Ag的最小量 (2)放射化学纯度>95% 影响方法的灵敏度 (3)免疫活性与未标记Ag基本保持一致 (4)稳定性好，在一定条件下，稳定期1-3月
标记Ag与Ab的用量对 测定的影响
实验室内部质量控制方法
1对实验数据进行审核剔除“坏点” 2剂量反应曲线拟合及质量审核 3精密度评价 (1)反应误差关系RER
从多批实验资料求出直线方程式 SDR = a + bR
a反映分离误差 b反映加样误差
(2)精密度图(P-P图) (用剂量反应曲线)
通过RER将SDR转换SDD(CVD%) 作SDD (CVD%) - lgD曲线 CVD%≤10%
[Q0]
1
[Q0]
B2 – B (1 + ——— + ——— ) + ——— = 0 (4)
[P0] K [P0]
[P0]
将B = 1 - F代入(3)
[Q0]
1
1
F2 – F (1 - ——— - ——— ) + ——— = 0 (5)
[P0]
K [P0] K [P0]
定义R = B / F，由B + F = 1得B = R / (1+R)代入(3)
偏差分析 2实验室外部质量控制(1)对某种分析方法的试剂
或试剂盒进行综合评价 (2)对不同实验室的分析工作
质量进行比较
质量控制样品 质控的“标准系统”－质控血清(QC) 要求：1 QC样品与待测样品性质相同
2 QC样品与待测样品中待测物相同，免疫活性一致 3 QC样品中待测物量已知，分高、中、低三档浓度 4足量制备，分装，低温存放，分批使用 制备方法：1按三档浓度收集多余病人血清，测定标示值
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（2）亲合力：在放射免疫分析中，亲合力是 指抗体与抗原间的结合强度。
（3）滴度：反映该种特异性抗体在血清中的 含量，以滴度大的抗血清为好。
二、抗原
最常用的标记核素是125I，其半衰期适中（约60天），既易 于商品化与贮存，又有利于废物的处理；125I只发射低能的 γ射线（28keV和35keV），容易测量 ；
体外放射分析技术
是指在体外实验条件下，以特异性结合反 应为共同的生物学基础，以结合反应动力 学为规律为共同的方法学基础，并以放射 测量技术为共同的定量手段，对生物活性 物质进行超微量定量分析的总称。具有灵 敏度高、特异行强、精密度密度好、应用 面广、方法简便等突出优点，是核医学中 重要技术之一。
公式
Ag + *Ab
Ag·*Ab + *Ab
以已知含量的抗原参与结合反应制作一条 标准曲线 ，通过该标准曲线可以刻度待测 抗原的含量，这条标准曲线反映剂量与标 记抗体抗原复合物结合率为正相关关系， 即复合物的结合率随着待测抗原的含量增 加而增加。
免疫放射分析特点
非竞争性结合分析 结合部分放射性活度与待测抗原浓度呈正
结 合 率 0.8
0.6 0.4
0.2
10 20
100
1000
标准曲线浓度
特点：
竞争性结合分析 采用标记抗原 结合部分放射性活度与待测抗原浓度呈负
相关
主要试剂
一、抗体： 关键试剂，它直接关系到分 析系统的质量和成败。评价抗体质量的指 标有：
（1）特异性：指抗体不受交叉反应物质影响 的程度。通常由交叉反应率的大小来定量评价。 交叉反应率越少，抗体的特异性越好。
受体放射分析（RBA）
是目前研究受体亲和力和受体数量最基本、最 主要的方法。它是应用放射性核素标记配体与 特异的受体结合，测定受体的亲和力和数量， 也可用作研究受体亚型的方法。
受体放射分析具有灵敏度高，特异性强，专一 性好等特点 。
非放射标记免疫分析
化学发光免疫分析 时间分辨荧光免疫分析
放射免疫分析（RIA）
原理:利用放射性核素标记抗原和非标记待测 抗原竞争性结合其相应的特异性抗体。
反应条件
标记抗原与非标记抗原具有相同的免疫活 性；
特异抗体与标记抗原是恒量； Ag+＊Ag﹥Ab
公式：Ag+Ab +
＊Ag
Ag•Ab+Ag
＊Ag •Ab+ ＊ Ag
如果在不同试管中分别加入已知系列浓度 的标准抗原(Ag)在同样条件参与反应，获 得各标准浓度管的*Ag·Ab量，并以已知标 准抗原的浓度为横坐标，以*Ag·Ab复合物 的结合率为纵坐标，可绘制出剂量反应曲 线，即为标准曲线或竞争性抑制曲线 。
相关 反应达到平衡较快 误差几率小
两种分析方法的比较
标记物在RIA中核素标记抗原，在IRMA中核素标记抗体。 反应速率反应速度与反应物的浓度呈正比，IRMA不存在竞
争性结合复杂的反应，所以反应速度较RIA快。 反应模式RIA为竞争抑制，测得放射性的量与受检抗原呈反
比。IRMA为非竞争结合，剂量反应曲线为正相关的直线关 系。 分析误差RIA中加入的抗体和标记抗原都是定量的，加样误 差可严重影响测定结果。IRMA中标记和固相抗体在反应中 都是过量的，只有受检标本的加样误差才会影响分析结果。 因此，IRMA的批内和批间变异均比较小。
免疫活性相同； 标记后不改变抗原生物活性； 比活度、放射化学纯度高。 Nhomakorabea、标准品
质：与待测物有相同的生物特性； 量：其浓度必须准确。
分离方法
分离抗原抗体复合物（大分子）与游离抗 原（小分子）。
免疫放射分析（IRMA）
原理：将放射性核素标记在抗体上，然后 以过量的标记抗体与待测抗原结合，将标 记的抗体抗原复合物（Ag·*Ab）与未结合 的标记抗体分离，通过放射测量可求得待 测抗原的含量。免疫放射分析标记的是过 量抗体，反应系统是非竞争性的全量结合 反应 。
（3）滴度：反映该种特异性抗体在血清中的 含量，以滴度大的抗血清为好。
二、抗原
最常用的标记核素是125I，其半衰期适中（约60天），既易 于商品化与贮存，又有利于废物的处理；125I只发射低能的 γ射线（28keV和35keV），容易测量 ；
体外放射分析技术
是指在体外实验条件下，以特异性结合反 应为共同的生物学基础，以结合反应动力 学为规律为共同的方法学基础，并以放射 测量技术为共同的定量手段，对生物活性 物质进行超微量定量分析的总称。具有灵 敏度高、特异行强、精密度密度好、应用 面广、方法简便等突出优点，是核医学中 重要技术之一。
公式
Ag + *Ab
Ag·*Ab + *Ab
以已知含量的抗原参与结合反应制作一条 标准曲线 ，通过该标准曲线可以刻度待测 抗原的含量，这条标准曲线反映剂量与标 记抗体抗原复合物结合率为正相关关系， 即复合物的结合率随着待测抗原的含量增 加而增加。
免疫放射分析特点
非竞争性结合分析 结合部分放射性活度与待测抗原浓度呈正
结 合 率 0.8
0.6 0.4
0.2
10 20
100
1000
标准曲线浓度
特点：
竞争性结合分析 采用标记抗原 结合部分放射性活度与待测抗原浓度呈负
相关
主要试剂
一、抗体： 关键试剂，它直接关系到分 析系统的质量和成败。评价抗体质量的指 标有：
（1）特异性：指抗体不受交叉反应物质影响 的程度。通常由交叉反应率的大小来定量评价。 交叉反应率越少，抗体的特异性越好。
受体放射分析（RBA）
是目前研究受体亲和力和受体数量最基本、最 主要的方法。它是应用放射性核素标记配体与 特异的受体结合，测定受体的亲和力和数量， 也可用作研究受体亚型的方法。
受体放射分析具有灵敏度高，特异性强，专一 性好等特点 。
非放射标记免疫分析
化学发光免疫分析 时间分辨荧光免疫分析
放射免疫分析（RIA）
原理:利用放射性核素标记抗原和非标记待测 抗原竞争性结合其相应的特异性抗体。
反应条件
标记抗原与非标记抗原具有相同的免疫活 性；
特异抗体与标记抗原是恒量； Ag+＊Ag﹥Ab
公式：Ag+Ab +
＊Ag
Ag•Ab+Ag
＊Ag •Ab+ ＊ Ag
如果在不同试管中分别加入已知系列浓度 的标准抗原(Ag)在同样条件参与反应，获 得各标准浓度管的*Ag·Ab量，并以已知标 准抗原的浓度为横坐标，以*Ag·Ab复合物 的结合率为纵坐标，可绘制出剂量反应曲 线，即为标准曲线或竞争性抑制曲线 。
相关 反应达到平衡较快 误差几率小
两种分析方法的比较
标记物在RIA中核素标记抗原，在IRMA中核素标记抗体。 反应速率反应速度与反应物的浓度呈正比，IRMA不存在竞
争性结合复杂的反应，所以反应速度较RIA快。 反应模式RIA为竞争抑制，测得放射性的量与受检抗原呈反
比。IRMA为非竞争结合，剂量反应曲线为正相关的直线关 系。 分析误差RIA中加入的抗体和标记抗原都是定量的，加样误 差可严重影响测定结果。IRMA中标记和固相抗体在反应中 都是过量的，只有受检标本的加样误差才会影响分析结果。 因此，IRMA的批内和批间变异均比较小。
免疫活性相同； 标记后不改变抗原生物活性； 比活度、放射化学纯度高。 Nhomakorabea、标准品
质：与待测物有相同的生物特性； 量：其浓度必须准确。
分离方法
分离抗原抗体复合物（大分子）与游离抗 原（小分子）。
免疫放射分析（IRMA）
原理：将放射性核素标记在抗体上，然后 以过量的标记抗体与待测抗原结合，将标 记的抗体抗原复合物（Ag·*Ab）与未结合 的标记抗体分离，通过放射测量可求得待 测抗原的含量。免疫放射分析标记的是过 量抗体，反应系统是非竞争性的全量结合 反应 。