化学发光免疫分析CLIA
化学发光免疫分析
糖尿病
Albumin C-peptide Insulin
唐氏筛查
PAPP-A free βHCG HCG＋β AFP
心肌标志
骨标志
肝纤维
CK-MB
ß-Crosslaps
LN
Digoxin
25-(OH) Vit. D
HA
Digitoxin
Intact PTH
PIIINP
Myoglobin
Intact PTH
试剂有效期长 有效期可长达1年以上，放射免疫分析由
于放射性同位素的衰变，一般有效期只有一 个月，而酶免的底物贮存性差，都无法与化 学发光相比，有效期长可以降低使用成本， 利于推广应用。
梦想——之以恒、真正为实现纳米科技事业的梦想而奋斗！
3 化学发光免疫分析的优越性
➢ 中国免疫诊断现状
中国
国际（欧美为主）
种类
方法
检测原理
酶联免疫
酶与样本反应，依据颜色变化程度确定结果
免疫 化学发光
诊断
将抗原抗体同样本结合，由磁珠捕捉反应物，加入 发光促进剂加大反应发光速度与强度，进而诊断
根据镧系元素螯合物发光特点，用时间分辨技术测 时间分辨荧光
量荧光，检测波长和时间两个参数进行信号分辨
分子 诊断
PCR 基因芯片
DNA高温变成单链，低温互补配对链合成
激发态ν
的中间体。这种激发态中间体，当其回到稳定的基态时，可同时发射出
光子。利用发光信号测量仪器即可测量光量子产额，该光量子产额与样
品中的待测物质的量成正比。由此可以建立标准曲线并计算样品中待测
能量
h.ν
物质的含量。
基态ν0 梦想——之以恒、真正为实现纳米科技事业的梦想而奋斗！
化学发光免疫分析在临床检验中的应用价值探讨
化学发光免疫分析在临床检验中的应用价值探讨
化学发光免疫分析（CLIA）是一种现代化的全自动化、高灵敏度、高特异性、球仪性好、重现性高的生化分析法，主要应用于临床检验中。
该技术是通过荧光素（或荧光素前体）、辐射等物理或化学方法激发标记物素，产生化学发光反应，并通过检测器检测，并
据此计算出待检测物质浓度。
其优点在于操作简单、高通量、成本低、实验结果准确、快
速和可重复及可靠等。
CLIA技术在临床检验中的应用，主要用于检测多种生物分子、激素、病原体蛋白质等。
例如，用于检测肝功能、肾功能、心肌酶谱、甲状腺功能、性激素、孕激素以及过敏原抗
体等相关指标。
具有以下几个方面的应用价值：
1. 提高检测准确性：CLIA能够全面地检测一些复杂的疾病标志物、细胞表面受体和
泌尿生殖系统指标的浓度，通过检测结果进一步提高结果的准确性，减少误检和漏检机
率。
2. 提高诊断效率：CLIA是一种高通量的技术，能够快速处理多数样品，不仅可以大
幅度提高检测速度，而且能够在极短的时间内提供准确的检测结果，从而大大提高诊断效率。
3. 提高检测灵敏度：CLIA的检测灵敏度很高，尤其适用于一些低浓度或微量物质的
检测，可以提高诊断的准确度，为一些需要进行早期诊断的疾病提供了可靠的基础。
4. 适应复杂样品的分析：CLIA技术需要对复杂的生物样本材料提供检测分析支持，
也就是说CLIA技术主要应用于人体样本的分析，同时还可以看到其在环境物质检测和食品安全领域中的应用。
总之，作为现代临床检验技术的一项重要进步，CLIA技术在提高检测准确性和诊断效率、提高检测灵敏度并且适应复杂样品等方面价值得有进一步地探讨。
化学发光微粒子免疫分化法 夹心法
化学发光微粒子免疫分化法夹心法一、引言化学发光微粒子免疫分化法夹心法（CLIA）是一种高灵敏度的免疫分析技术，以其独特的优势在生物医学研究、临床诊断等领域得到广泛应用。
该技术利用微粒子作为固相载体，通过特定的免疫反应来检测目标物质，具有高精度、高灵敏度、低背景噪声等优点。
本文将对CLI A的原理、实验流程、应用领域、优缺点分析及未来展望进行详细阐述。
二、技术原理化学发光微粒子免疫分化法夹心法的核心是利用化学发光反应来检测免疫复合物。
该方法将抗原或抗体结合到微粒子表面，形成固相复合物。
当目标抗体或抗原与固相复合物特异性结合后，会形成夹心状的免疫复合物。
此时，加入化学发光底物，触发化学发光反应，产生光信号。
光信号的强度与目标抗体或抗原的浓度呈正相关，通过光电倍增管等检测设备进行信号的捕捉和测量，可实现对目标抗体或抗原的定量分析。
三、实验流程1.准备微粒子：选择适当的抗原或抗体与微粒子结合，形成固相复合物。
2.样本处理：将待测样本进行适当的预处理，以提取和纯化目标抗体或抗原。
3.免疫反应：将固相复合物与样本中的目标抗体或抗原进行反应，形成夹心状的免疫复合物。
4.洗涤：去除未结合的物质，减少背景噪声。
5.化学发光反应：加入化学发光底物，触发化学发光反应，产生光信号。
6.检测与定量分析：通过光电倍增管等检测设备捕捉光信号，并测量其强度，根据标准曲线进行定量分析。
7.结果解读：根据测量结果，解读目标抗体或抗原的浓度。
四、应用领域化学发光微粒子免疫分化法夹心法在多个领域具有广泛的应用价值。
以下列举几个主要的应用领域：1.临床诊断：CLI A技术可用于各种病毒、细菌、细胞因子等生物标志物的检测，为感染性疾病、肿瘤、自身免疫性疾病等的诊断提供有力支持。
例如，艾滋病病毒（HIV）抗体、甲型肝炎病毒（HAV）抗体、癌胚抗原（CEA）等临床指标的检测。
2.药物研发：CLI A可用于药物筛选和药物代谢研究，监测药物在生物体内的浓度和代谢情况，为新药研发提供重要数据支持。
酶联免疫法和化学发光法
酶联免疫法和化学发光法
酶联免疫法（ELISA）和化学发光法（CLIA）是两种常用的免疫分析技术，用于检测和定量生物分子，如蛋白质、抗体、激素等。
它们在实验室和临床诊断中广泛应用。
酶联免疫法是一种基于酶催化反应的免疫分析方法。
其基本原理是将待测物（抗原或抗体）与固相载体（如微孔板）上的抗体或抗原结合，然后加入酶标记的抗体或抗原，形成三明治复合物。
当加入底物时，酶会催化底物发生反应，产生可检测的信号，通常是颜色变化或荧光强度。
通过测量这些信号，可以定量待测物的浓度。
酶联免疫法具有灵敏度高、特异性好、操作简便等优点，适用于大规模样本的检测。
它可以用于检测多种生物分子，如蛋白质、激素、药物、病原体等。
常见的酶联免疫法包括间接法、夹心法和竞争法等。
化学发光法是一种基于化学发光反应的免疫分析方法。
其基本原理是将待测物与固相载体上的抗体或抗原结合，然后加入标记有发光物质的抗体或抗原，形成三明治复合物。
当加入触发剂时，发光物质会被激发并产生光信号。
通过测量光信号的强度，可以定量待测物的浓度。
化学发光法具有灵敏度高、线性范围宽、快速等优点，适用于微量和痕量分析。
它可以用于检测多种生物分子，如蛋白质、激素、药物、病原体等。
常见的化学发光法包括间接法、夹心法和竞争法等。
总的来说，酶联免疫法和化学发光法都是常用的免疫分析技术，它们各有优缺点，适用于不同的应用场景。
选择哪种方法取决于待测物的特性、检测要求以及实验室的设备和技术水平。
化学发光免疫分析与其他方法对比
化学发光免疫分析与其他方法对比化学发光免疫分析（Chemiluminescent Immunoassay，简称CLIA）是一种基于化学发光原理的免疫分析方法。
与其他传统的免疫分析方法相比，CLIA具有许多优点，使其成为当前广泛应用于生物医学领域的重要技术之一首先，CLIA具有极高的灵敏度。
由于化学发光反应产生的光信号非常强烈，因此能够检测到非常低浓度的分析物。
这使得CLIA在检测罕见疾病或者低浓度生物标志物时非常有优势。
其次，CLIA具有广泛的线性范围。
由于化学发光反应的信号强度与分析物的浓度呈线性关系，因此CLIA能够在广泛的浓度范围内准确测定分析物的浓度。
这使得CLIA成为临床实验室中常用的定量分析方法。
此外，CLIA还具有较高的特异性。
由于CLIA是基于免疫反应进行的，只有与特定抗原结合的抗体才能产生化学发光反应。
因此，CLIA能够准确地鉴定和测定特定抗原或抗体，避免了其他非特异性反应的干扰。
另一个优点是CLIA的操作简便和高效。
相对于传统的放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）或酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）等方法，CLIA无需使用放射性物质或底物染色等复杂步骤，操作简单、快速，并且能够实现自动化操作，提高检测效率。
此外，CLIA还具有较长的稳定性。
由于化学发光反应所需的试剂通常具有较长的保存期限，且反应条件可控，因此CLIA的试剂稳定性较高，能够长期保存并保持较好的性能。
然而，CLIA也存在一些限制。
首先，CLIA的成本较高。
由于所需试剂和设备较为昂贵，因此CLIA在一些资源匮乏的地区可能不太适用。
其次，CLIA对样本处理的要求较高。
由于CLIA的灵敏度非常高，对样品中可能存在的干扰物敏感，因此需要对样品进行特定的前处理步骤，以确保准确的分析结果。
总体而言，化学发光免疫分析是一种灵敏、特异、简便和高效的免疫分析方法，具有许多优点，使其在生物医学领域得到广泛应用。
化学发光免疫分析的类型-临床医学检验考试
化学发光免疫分析的类型-临床医学检验考试化学发光反应参与的免疫测定分为以下几种类型：（一）化学发光酶免疫测定化学发光酶免疫测定（CLEIA）是采用化学发光剂作为酶反应底物的酶标记免疫测定。
经过酶和发光两级放大，具有很高的灵敏度。
以过氧化物酶为标记酶、以鲁米诺为发光底物、并加入发光增强剂以提高敏感度和发光稳定性。
应用的标记酶也可以为碱性磷酸酶，发光底物为dioxetane磷酸酯，固相载体为磁性微粒。
（二）化学发光免疫测定化学发光免疫测定（CLIA），是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的一类免疫测定方法。
吖啶酯是较为理想的发光底物，在碱性环境中即可被过氧化氢氧化而发光。
用作标记的化学发光剂应符合以下几个条件：1.能参与化学发光反应医学`教育网搜集整理。
2.与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物试剂。
3.偶联后仍保留高的量子效应和反应动力。
4.应不改变或极少改变被标记物的理化特性，特别是免疫活性。
鲁米诺类和吖啶酯类发光剂等均是常用的标记发光剂。
（三）微粒子化学发光免疫分析该免疫分析技术有两种方法：一是小分子抗原物质的测定采用竞争法；医学|教育网搜集整理二是大分子的抗原物质测定采用双抗体夹心法。
该仪器所用固相磁粉颗粒极微小，其直径仅1.0μm，这样大大增加了包被表面积，增加抗原或抗体的吸附量，使反应速度加快，也使清洗和分离更简便。
其反应基本过程：（1）竞争反应：用过量包被磁颗粒的抗体，与待测的抗原和定量的标记吖啶酯抗原同时加入反应杯温育，其免疫反应的结合形式有两种，一是标记抗原与抗体结合成复合物；二是测定抗原与抗体的结合形式。
（2）双抗体夹心法：标记抗体与被测抗原同时与包被抗体结合成一种反应形式，即包被抗体-测定抗原-发光抗体的复合物。
（四）电化学发光免疫测定电化学发光免疫测定（ECLI）是一种在电极表面由电化学引发的特异性发光反应，包括电化学和化学发光两个部分。
分析中应用的标记物为电化学发光的底物三联吡啶钌或其衍生N-羟基琥珀酰胺（NHS）酯，可通过化学反应与抗体或不同化学结构抗原分子结合，制成标记的抗体或抗原。
化学发光免疫分析技术
化学发光免疫分析技术化学发光免疫分析技术（Chemiluminescence Immunoassay，简称CLIA）是一种用于检测物质浓度的生化分析技术。
该技术利用免疫反应，在荧光底物的作用下产生可见光发射，从而实现对物质的检测和定量分析。
化学发光免疫分析技术的基本原理是将待测物与对应的抗原或抗体结合，形成免疫复合物。
然后，将荧光标记的抗体或抗原加入到体系中，与免疫复合物结合。
接下来，加入荧光底物，在适当的条件下，底物被激活，产生化学反应，释放出能量，从而形成荧光。
荧光信号可以通过荧光仪进行检测和定量分析。
荧光仪通过光电倍增管等装置将荧光信号转化为电信号，经过控制和处理，最终得到物质的浓度。
化学发光免疫分析技术的优势在于其灵敏度高。
由于发光底物的特殊性质，即使在低浓度下，也能产生明显的发光信号。
此外，化学发光免疫分析技术的特异性强，能够准确识别目标物质，避免误判。
另外，与其他传统的免疫分析方法相比，化学发光免疫分析技术反应速度快，可以在较短的时间内得到结果。
此外，操作简单，无需复杂的设备和技术，具有很高的实用性。
化学发光免疫分析技术在医学诊断中有着广泛的应用。
比如，可以用于检测血清中肿瘤标志物的浓度，从而实现早期诊断和预测疾病进展的风险。
此外，化学发光免疫分析技术还可以应用于感染性疾病的快速诊断，如艾滋病、结核病等。
此外，化学发光免疫分析技术还被广泛应用于生物制药工业中的药物分析。
在食品安全领域，也可以利用化学发光免疫分析技术检测食品中的有害物质，从而保障食品的质量安全。
总之，化学发光免疫分析技术是一种灵敏、特异、操作简单的生化分析技术。
在医学诊断、药物检测、食品安全检测等领域有着广泛的应用前景。
随着技术的不断发展和创新，化学发光免疫分析技术将进一步完善，并在更多的领域发挥重要的作用。
clia化学发光免疫法
clia化学发光免疫法作为一种常见的免疫分析技术，clia化学发光免疫法在医学诊断、药物研发和生物学研究等领域被广泛应用。
本文将从简单到深入的方式，探讨clia化学发光免疫法的原理、应用和前景，并分享个人理解和观点。
让我们从clia化学发光免疫法的原理开始介绍。
clia是化学发光免疫酶联免疫吸附测定法（chemiluminescent immunoassay）的缩写。
它是一种基于化学发光反应原理的免疫分析技术。
该方法利用化学发光反应中产生的光信号来检测目标分子的含量。
具体而言，该方法首先将目标分子与特异性抗体结合，形成免疫复合物。
通过添加化学发光底物和酶催化作用，在反应中产生发光信号。
通过光信号的测定，可以确定目标分子的含量。
接下来，我们来探讨clia化学发光免疫法的应用。
该技术在临床诊断中具有广泛的应用前景。
它可以用来检测感染性疾病、肿瘤标志物、药物浓度等生物分子的含量。
与传统的酶联免疫吸附测定法相比，clia 化学发光免疫法具有更高的敏感性和特异性，可以更准确地检测低浓度的目标分子。
它还具有检测速度快、简便操作和高通量分析等优点，使其成为临床实验室和药物研发领域的重要工具。
让我们来展望一下clia化学发光免疫法的未来。
随着生物技术和化学技术的不断发展，clia化学发光免疫法在诊断和研究领域的应用前景将会更加广阔。
随着纳米技术的进步，可以利用纳米颗粒作为发光底物，提高检测灵敏度和信号稳定性。
结合人工智能和大数据分析等技术，可以将clia化学发光免疫法与其他分析方法相结合，实现更高效、准确和个性化的诊断和治疗。
总结回顾性地看，clia化学发光免疫法是一种重要的免疫分析技术，通过化学发光反应实现目标分子的检测。
它广泛应用于医学诊断、药物研发和生物学研究等领域。
该方法具有高敏感性、高特异性、快速、简便和高通量分析等优点。
未来，随着技术的进步，clia化学发光免疫法的应用前景将会更加广阔。
我个人认为，该技术的不断发展将为疾病的诊断和治疗提供更准确、快速和个性化的方法，有助于推动医学进步和健康事业的发展。
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抗原的概念
基 本 定 义
抗原（antigen,Ag)：是一类能刺激机体免
疫系统发生免疫应答，并能与相应免疫应 答产物（抗体和致敏淋巴细胞)在体内外发 生特异性结合的物质。 抗原的两种特性：免疫原性和抗原性 免疫原性（immunogenicity),能刺激机体 发生免疫应答，产生抗体和致敏淋巴细胞 的能力。 抗原性（antigenicity),能与相应抗体或 致敏淋巴细胞发生特异性结合的能力。
RIA基本试剂
2、标准抗原（标准品）
是已知含量并呈梯度浓度的系列 标准抗原，作标准曲线用。 要求： 保证与被测物具有相同的免疫活 性和相同介质。
RIA基本试剂
3、抗体
RIA使用：多克隆抗体 单克隆抗体
衡量抗体质量的指标是：
亲和力:抗体结合的强度
特异性:不受交叉反应物质影响的程度 滴度:抗体的效价——抗体实际应用时
到平衡，然后分离并分别测定结合的抗原 抗体复合物放射性（B）和游离抗原放射性 （F）来计算出非标记抗原含量的一种超微 量分析技术。
♣ ♣♣ ♣♣ ♣
RIA基本试剂
1、标记抗原
125I 3H
多数 γ闪 价廉 少数 液闪 费用高
*Ag的质量要求：
标记后不改变原有抗原的生物活性； 标记的放射性核素的t1/2不能太短； 比活度和放化纯度足够高，保证分析 的灵敏度。
基 本 定 义
半抗原---分子量小于5000的肽类，
需与载体蛋白结合才能引起免疫应 答. 抗体（Antibody,Ab）是由B细胞识 别抗原后增殖分化为浆细胞所产生 的一类能和相应抗原特异性结合的 具有免疫功能的球蛋白。
Байду номын сангаас
主 要 内 容
一 . 二 .
概述 放射免疫分析（RIA）
基本试剂 操作过程 质量控制 基本原理 分离技术
三．免疫放射分析（IRMA） 四. 非放射性标记免疫分析技术
酶免疫分析（EIA） 化学发光免疫分析（CLIA） 时间分辨荧光免疫分析（TrFIA）
概
述
1.历史回顾
1959年Berson、Yalow开创了放射免疫分析。 于1977年荣获诺贝尔生物医学奖。
1960年Ekins建立了竞争蛋白结合分析法。 1968年Miles和Hales建立了免疫放射分析。 近年来化学发光、电子化学发光、荧光时间 分辨等非放射性标记免疫分析自动化技术先 后问世，检测灵敏度提高到了10–15g。
概
述
2.类型：（据特异性结合试剂的不同分类）
放射免疫分析（RIA） 1959 竞争性蛋白结合分析（CPBA） 1963 免疫放射分析（IRMA） 1968 放射受体分析（RRA ） 70年代 放射酶学分析 70年代 放射微生物分析
概
述
酶免疫分析（EIA）
其他非放射性标记免疫分析：
的稀释倍数，滴度越高，所需的抗血清量越 少，血清的稀释倍数越高，抗血清中杂质干 扰也少。一般滴度高到1：1000以上，血清 中干扰物质影响就很小。
RIA基本原理
最具代表性的一类检测技术，是建立在抗原抗 体结合的高度特异性和放射性测量的高度灵敏性的 基础上的。 Ag ＋ Ab AgAb ＋ *Ag *AgAb 动态平衡体系中，*Ag与Ag具有同样的免疫活性和结 合反应能力，当*Ag和Ab的量恒定，且Ag+ *Ag的分 子数〉抗体的分子数 ，*Ag与Ag相互竞争同Ab结合， 彼此抑制，待测Ag与*AgAb呈负相关函数关系。
1.
2. 3.
样品或标准品 标记物 分离剂 抗血清
混匀 温浴
混匀 立即
1. 加样
2. 加分离剂
3. 离心
4. 去上清分离 5. 测量
RIA分离技术
目的：将游离*Ag 和*AgAb有效分离。 小分子
活性炭吸附法
大分子
沉淀法
Ab
固相法
聚乙二醇
体外放射分析
山西医科医科大学第一医院核医学科
基 本 定 义
定义：全称体外放射配体结合分 析---指在体外条件下，以放射性核素
标记的配体为示踪剂，以结合反应为基 础，以放射性测量为定量手段，对微量 活性物质进行定量分析的一类检测技术 的总称。
配体---能与结构上某一部位起互补结
合的分子或化合物，如抗体、抗原，受 体、蛋白激素
125I的特性：
碘元素共有 29 种同位素，其中 23 种放 射性核素，125I最为常用，优点：
半衰期适中（60天），易于商品化和储存， 也利于废物处理； 只发射28keV χ线和35keV γ射线（无β）， 容易测量，辐射自分解少，标记物足够稳定； 化学性质活泼，标记容易，可得到多种标记 物而广泛应用。
待测Ag与*AgAb呈负相关函数关系
RIA操作过程
配制已知浓度系列标准抗原（Ag）---现
多由厂家提供已配置好的标准品
加待测抗原（Ag）和抗体（Ab）--温育 加标记抗原（*Ag）和抗体（Ab）--温育 分离复合物*AgAb（B）和游离*Ag（F） 用γ计数器测量放射性计数 根据标准曲线或计算机直接算出
酶免疫分析（EIA） 化学发光免疫分析（CLIA） 时间分辨荧光免疫分析（TrFIA）
放射免疫分析（RIA)
（Radioimmunoassay RIA）
RIA主要内容
基本试剂 基本原理 操作过程 分离技术 质量控制
♣ ♣♣ ♣♣ ♣
RIA定义
是利用标记抗原和非标记抗原竞争结合
其特异抗体，给予充分的时间，使反应达
Ag
*Ag
Ab
Bound
Free
B
0.67
F
0.33
B/F
2
0.50
0.50
1
0.33
0.67
0.5
0.17
0.83
0.2
竞争放射分析原理示意图
B/F
B/B0% 100
2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 0 5 10 15 20 0 0 5 10 15 50
剂量-标准抗原浓度
剂量-标准抗原浓度
化学发光免疫分析（CLIA）
荧光免疫分析（FIA） 时间分辨荧光免疫分析（TrFIA） 颗粒计数免疫分析（PACIA） ……
主 要 内 容
一 . 二 .
概述 放射免疫分析（RIA）
基本试剂 操作过程 质量控制 基本原理 分离技术
三．免疫放射分析（IRMA） 四. 非放射性标记免疫分析技术