第三章 消毒与灭菌

化学物质指示带(卡):灭菌前后颜色变化
2.生物指示剂：真实反映是否杀死芽孢
自含式高压蒸汽灭菌生物指示剂
芽孢菌片生物指示剂
1.化学指示剂结果判断 （1）化学指示管 灭菌前后形状有变化或熔化，判符合要求； 没变化，不符合要求。 安替比林 （110~112℃） 碘仿（115℃） 升华硫（117℃） 苯甲酸（121~133℃） 上述化学试剂的熔点 与灭菌所需温度相同
溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培 养基。使用前呈紫色。
二、确定灭菌参数

基准被灭菌物品 装载方式（达满载要求） 生物指示剂放置数量和方式 灭菌参数（灭菌温度、压力、时间）
三、验证步骤
按方 案装 载物 品 按要求 放置灭 菌指示 剂 经一 个灭 菌周 期 取出 灭菌 指示 剂 化学指 示剂: 直接判 断结果 生物指 示剂:培 养后判 断结果
三、影响消毒剂作用的因素
种类 消毒剂 浓度 微生物 菌龄
种类 环 境
酸碱度
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湿度 有机物 温度
四、化学消毒剂在药品生产中的应用
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（一）气态消毒剂
种类 浓度
适用于密闭空间
使用 适用范围 方法 环氧乙烷 环氧乙 洁净车间空气、设施、设备 烷:CO2(或 消毒及医疗器械灭菌 易燃、易 氮气)=2:8 爆、有毒 甲醛溶液 36%甲醛按 熏蒸 洁净车间及无菌室的空气、 30ml/m3 设施、设备、管道内表面等
第四节 高压蒸汽灭菌法的灭菌 效能验证
采用灭菌指示剂法测定在设 定的灭菌参数下经过一个灭菌周 期，灭菌对象是否达到无菌要求， 以此评价其灭菌效能是否符合规
定。
一、试验器材
（一）基准被灭菌物品
灭菌标准包或准备灭菌的物品，要有代表性 （二）灭菌指示剂 1.化学指示剂：不能反映真实效果
化学物质指示管:灭菌前后物理性状变化
烘烤箱
（二）湿热灭菌法
方法 条件 效果 适用范围 煮沸法 100℃5～10min 消毒 饮水、餐具、刀、剪等 流通蒸 100℃5～45min 消毒 汽法 餐具、口服液、小容量 不耐高温的注射剂、输 送管道等 不耐高温的物品、营养 液、培养基的灭菌 牛奶、酒类、糖浆、果 汁等不耐高温的食品， 注射用水储藏
有毒
臭氧
臭氧发生 器
洁净车间及无菌室空气、设 施、设备、无菌室、水 无菌室、传递窗一些较小空 间
气态过氧 过氧化氢蒸 汽发生器 化氢
总进 风道 洁净 车间等 室温25℃ 鼓风持续3h
蒸汽夹层 压力锅
10ml/m3, 37%甲醛溶液
通入洁 净空气 送氨气 15min
密闭熏蒸 12-24h
25%氨水 加热
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甲醛溶液加热熏蒸法
（二）生产场所、设备、设施的消毒剂
种类浓度 2%戊二醛 0.2～0.5%过氧乙酸 喷雾 浸泡 0.1%新洁尔灭 擦拭 5%石炭酸 使用 方法 适用范围
2%来苏尔(煤酚皂) 0.5%84消毒液
洁净车间和无菌室 的(地面、天花、 门窗、墙壁、空气、 内部设备表面)、 洁净区的水池、洁 具
15～30min
条件
高压 蒸汽 灭菌
高压蒸汽灭菌法适用范围
微生物实验 药品生产 医疗用品
普通培养基、 生理盐水、 玻璃器皿、 金属、陶瓷 制品
化学原料、植物原 手术器械、 料、辅料、注射剂、 敷料、手 容器、工作服、制、 术衣等 储水设备、管道
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高压蒸汽灭菌法
第一部分 微生物基础知识 第三章 消毒与灭菌
第一节 概述
第二节 物理方法
第三节 化学方法
第四节 高压蒸汽灭菌法的灭菌效能验 小结
第一节 概述
消毒灭菌有关概念
概念 灭菌 消毒 防腐 相同点 用理化方法 不 微生物 敏感菌 所有 病原性 同 范围 防止或抑制 程度 杀死 杀死 点 生长繁殖
无菌：在物体上或容器内没有活的
水层：薄水层
微波
微 产热及失水 波 炉
灭 食品、药品 菌
紫外消毒注意事项：
辐照剂量：
距离：1.5～2m
紫外线水体消毒器
湿度：40%～60% 温度：20～40℃ 杂质：无尘灰、杂质 使用寿命：1000h 注意防护：护眼镜、
防护服
紫外线防护眼镜
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辐射灭菌 装毒素、维生素、生 物制品、输液、抗生素（如粉针剂类） 水 空气
棉花、 玻璃 纤维 或石 棉
滤 膜
中空 纤维 超滤 设备
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四、其它物理方法
低温抑菌法：抑制生长繁殖。 超声波：裂解细胞，可用于容器清洗、提取 细胞内容物。 干燥：脱水和盐类浓度升高导致微生物死亡。 高渗作用：质壁分离导致微生物死亡。
第三节 化学方法 利用化学药物破坏微生物的化学 组成、物理结构和生理活动，达到 防腐灭菌目的。 种类：酚、醇、醛、酸碱、氧化剂、
重金属盐、表面活性剂、脂溶
剂、卤素等
一、化学消毒作用原理 1.促进菌体蛋白质变性凝固
（酚、醇、醛、酸碱类等）
2.干扰细菌酶系统和代谢（氧化 剂、重金属盐类等）
3.损伤细菌细胞膜，增加其通透

灭菌前 灭菌后
（2）灭菌用化学指示剂卡(带)
灭菌前后指示卡或指示带颜色变化均匀，
判符合要求；没变化或变化不均匀，不
符合要求。
高压蒸汽灭菌化学指示卡、带
2.生物指示剂培养与结果判断
灭菌后芽孢片
溴甲酚紫葡萄糖蛋 白胨液体培养基 56℃培养 48h至5d 紫色→无菌长,符合 黄色→有菌长,不符合 自带培养基，培养后黄色， 有菌长,说明灭菌不彻底
微生物存在。 无菌操作：防止微生物进入机体或对
象的方法，称无菌操作。
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热力法
物理 方法 消毒灭 菌方法 化学 方法 辐射杀菌法
过滤除菌法
其他
醛类、醇类、酚类、 含氯消毒剂、过氧化 物、环氧乙烷等
第二节 物理方法 一、热力灭菌法
原理： 使微生物蛋白质变性凝固，酶失活 核糖体解体
性（表面活性剂、脂溶剂等）
二、常用的消毒剂
类 型
名称及使用方法
作用原理
应用范围
醇 70%～75%乙醇 类
醛 0.5%～10%甲醛 类 2%戊二醛(pH=8) 酚 3%～5%石炭酸(苯酚) 类 2%(煤酚皂)来苏儿 3%～5%来苏儿 氧 3%过氧化氢 化 0.2%～0.5%过氧乙酸 剂 0.1%高锰酸钾
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脱水、蛋 皮肤、器皿、设备 白质变性
蛋白质变 房间、物品消毒 （不适合食品厂） 性
精密器械消毒灭菌
破坏细胞 地面、器具 膜、蛋白 皮肤 质变性 地面、器具
氧化蛋白质 活性基团， 酶失活
皮肤、物品表面 水果、蔬菜、塑料 皮肤、水果、蔬菜
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常用的消毒防腐剂及其应用
类型 名称及使用方法 作用原理 应用范围
1.用饱和水蒸汽,灭菌条件需要验证 2.湿热灭菌法中效果最好的方法 3.高压蒸汽灭菌器 （1）种类：手提式、立式、卧式
手提式
立式
卧式:单、双层
（2）高压蒸汽灭菌注意点：
检查压力表是否灵敏，压力与温度是否对应； 灭菌初期先排净锅内冷空气； 灭菌时间计算：达到规定压力和温度开始计； 锅内水分要充足； 灭菌物品装量不宜太满，不超85％容积为宜； 灭菌结束需缓慢减压； 灭菌结束，趁热取出物品。
原理
效 适用范 果 围 不耐热 的药品、 食品、 医疗器 械、塑 料制品
X射线 使其它物质氧化 灭 发生器 或产生自由基， 菌 破坏和改变生物 钴-60 大分子的结构， 铯-137 尤其是DNA,从而 抑制或杀死微生 物
三、过滤除菌法
1.物理阻留方法：除菌除尘 2.过滤材质 液体：微孔滤膜，孔径0.22～0.45μm；砂滤 棒、垂熔玻璃、纤维状或颗粒状滤材 空气：纤维状或颗粒状滤材 3.适用范围：具流动性物品
尼泊金、乙醇等防腐、滴眼剂中可加苯扎氯
（或溴）铵
4.生物制品用防腐剂 苯酚、甲酚、三氯叔丁醇、硫柳汞等 不得加防腐剂的药物： 一次注射量大于15ml的注射剂 眼科手术用药 静脉输液（大容量） 脑池内、硬膜外、椎管内用的注射液
药品中添加防腐剂示例
药品名称 安神补脑液 四逆汤、 小青龙合剂 消咳喘糖浆 小儿腹泻宁糖浆 牛黄蛇胆川贝液 防腐剂 苯甲酸、 苯甲酸钠 苯甲酸钠 药品名称 防腐剂 盐 酸 卡 替 洛 尔 苯扎氯铵 滴眼液 伤寒疫苗 苯酚
山梨酸钾 百 白 破 联 合 疫 硫柳汞 苗 山梨酸 森 林 脑 灭 活 疫 硫柳汞 苗 尼泊金乙 破 伤 风 抗 毒 素 、 硫柳汞或 酯 冻 干 白 喉 抗 毒 甲酚 素、抗银环蛇 毒血清
生物学方法
1.抗生素：抑制细菌细胞壁合 成、改变其通透性、抑制菌 体蛋白合成和抑制核酸合成。 2.噬菌体：裂解细菌。
间歇蒸 汽灭菌 法 巴氏消 毒法
100℃蒸汽15～ 灭菌 30min，连续3 次
63℃30min 或72℃15s
消毒
巴氏消毒法
（二）湿热灭菌法
方法 效果 适用范围 121.3℃ 0.1MPa 灭菌 耐高温不怕湿的物品： 15～30min 包括微生物实验材料、 药品生产、医疗用品等 115℃ 0.069MPa 灭菌 含糖培养基
两种指示剂均符合要求，
按相应的参数灭菌 主要参数： 装量、装载方式、温 度、压力、时间等
任一不符合要求，重新
设定灭菌参数
小结
消毒灭 菌方法
灼烧 种类 适用范围
物理 方法
接种环、剪刀、金属镊 子、试管口、锥形瓶口 烘烤（160～170℃2h） 玻璃、金属、陶瓷制品 耐热忌湿的药粉、油类 热力灭 煮沸法（100℃5～10min） 餐具、饮水、刀具、剪 菌法 刀等 流 通 蒸 汽 消 毒 口服液、小容量注射剂 （100℃30～45min） 高 压 蒸 汽 灭 菌 耐高温、耐湿物品，培 （121℃15～30min） 养基、生理盐水、管道 输液、工作服 巴氏消毒法（63℃30min 奶制品、糖浆、酒类、 或72℃15s） 果汁 滤 过 除 滤材：颗粒性、纤维状、 空气、水体、不耐热药 菌法 微孔滤膜 液