4章1节 金葡菌检验加生化试验

7.淀粉水解试验（在紫外诱变中做） 淀粉水解试验（在紫外诱变中做） 淀粉水解试验
–
8.柠檬酸盐利用试验 柠檬酸盐利用试验
–
柠檬酸盐培养基系一综合性培养基，其中柠 柠檬酸盐培养基系一综合性培养基，其中柠 檬酸钠为碳的唯一来源。 檬酸钠为碳的唯一来源。而磷酸二氢铵是氮 的唯一来源。有的细菌如产气杆菌， 的唯一来源。有的细菌如产气杆菌，能利用 柠檬酸钠为碳源， 柠檬酸钠为碳源，因此能在柠檬酸盐培养基 上生长， 分解柠檬酸盐后产生碳酸盐， 上生长，并分解柠檬酸盐后产生碳酸盐，使 培养基变为碱性。此时培养基中的溴麝香草 培养基变为碱性。此时培养基中的溴麝香草 酚蓝指示剂由绿色变为深蓝色。 酚蓝指示剂由绿色变为深蓝色。不能利用柠 檬酸盐为碳源的细菌，在该培养基上不生长， 檬酸盐为碳源的细菌，在该培养基上不生长， 培养基不变色。 培养基不变色。
1 糖(醇)类发酵试验 醇 类发酵试验
不同的细菌含有发酵不同糖(醇 的酶 的酶， 不同的细菌含有发酵不同糖 醇)的酶， 因而发酵糖(醇 的能力各不相同 的能力各不相同。 因而发酵糖 醇)的能力各不相同。其 产生的代谢产物亦不相同， 产生的代谢产物亦不相同，如有的产 酸产气，有的产酸不产气。 酸产气，有的产酸不产气。酸的产生 可利用指示剂来判定。 可利用指示剂来判定。在配制培养基 时预先加入溴甲酚紫 溴甲酚紫[pH5．2(黄色 黄色) 时预先加入溴甲酚紫 ． 黄色 紫色)]，当发酵产酸时， 一6．8(紫色 ，当发酵产酸时，可使 ． 紫色 培养基由紫色变为黄色。 培养基由紫色变为黄色。气体产生可 由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气 泡来证明。 泡来证五群，26型 噬菌体分型：已分Ⅰ--Ⅴ五群，26型。 血清分型：有30多种 血清分型： 30多种 抗生素分型： 抗生素分型：流行病学追踪 质粒分型： 质粒分型：我国没应用
/ vrsa/staph/
3)培养特性
(1)营养要求:不高 营养要求: 耐盐性强：在含100 150g 100－ 氯化钠培养基中能生长 培养基中能生长. (2)耐盐性强：在含100－150g／L的氯化钠培养基中能生长. (3)产 毒 素:在含有20％-30％二氧化碳的环境中培养，可产 在含有20 的环境中培养， 产 在含有20％ 30％二氧化碳的环境中培养 生大量的毒素。 生大量的毒素。 在肉汤培养基中生长迅速，37℃ 24h培养后，呈均匀混 (4)在肉汤培养基中生长迅速，37℃，24h培养后，呈均匀混 浊生长，延长培养时间，管底出现少量沉淀，轻 浊生长，延长培养时间，管底出现少量沉淀， 少量沉淀 轻振摇，沉淀物上升，旋即消散，培养2 轻振摇，沉淀物上升，旋即消散，培养2-3 d后可 菌环， 粘稠沉淀。 形成很薄的菌环 在管底则形成多量粘稠沉淀 形成很薄的菌环，在管底则形成多量粘稠沉淀。
1.概述 1.概述

致人类疾病的葡萄球菌：主要是金黄色葡萄球菌 致人类疾病的葡萄球菌：主要是金黄色葡萄球菌 金黄 菌体分布：致病性金黄色葡萄球菌在自然界广泛分布 菌体分布：致病性金黄色葡萄球菌在自然界广泛分布 动物和人， 源自感染的动物和人 抵抗力强而存活。 源自感染的动物和人，抵抗力强而存活。 菌体存在或污染食物，产生毒素引起食物中毒。 菌体存在或污染食物，产生毒素引起食物中毒。 引起食物中毒的最主要菌种之一。 世界上广泛存在的引起食物中毒的最主要菌种之一 是世界上广泛存在的引起食物中毒的最主要菌种之一。
–
某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解， 某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解，失去凝固能 胶原酶 呈现液体状态，是为阳性。 力，呈现液体状态，是为阳性。 细菌对大分子的淀粉不能直接利用， 细菌对大分子的淀粉不能直接利用，须靠产生的胞 外酶(淀粉酶 淀粉酶)将淀粉水解为小分子糊精或进一步水 外酶 淀粉酶 将淀粉水解为小分子糊精或进一步水 解为葡萄糖(或麦芽糖 再被细菌吸收利用， 或麦芽糖)， 解为葡萄糖 或麦芽糖 ，再被细菌吸收利用，细菌 水解淀粉的过程可通过底物的变化来证明， 水解淀粉的过程可通过底物的变化来证明，即用碘 测定不再产生蓝色。 测定不再产生蓝色。
美国、 美国、加拿大
/baby/ BB_take_care/image/209bc-c0101.jpg
近年来，美国疾病控制中心（CDC， 近年来，美国疾病控制中心（CDC，Centers for Disease Control and Prevention ）报告，由金黄 报告， 色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。 色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。 金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题， 金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国 由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌 性食物中毒的33% 加拿大则更多， 45%。 33%， 性食物中毒的33%，加拿大则更多，占45%。
第四章 致病性球菌检验
第一节 金黄色葡萄球菌检验 第二节 溶血性链球菌检验
/includes/S.aureus.gif
第一节 金黄色葡萄球菌检验
/foodsafety/images/uploaded/animstaph.gif
3.靛基质 吲哚 试验 靛基质(吲哚 靛基质 吲哚)试验
–
某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中 某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中 蛋白质 色氨酸，产生靛基质(吲哚 吲哚)， 的色氨酸，产生靛基质 吲哚 ，靛基质与对 二甲基氨基苯甲醛结合， 二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基 质(红色化合物 。 红色化合物)。 红色化合物
细菌生化实验 细菌生化实验
定义： 定义： －用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作 用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌 用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌 生化反应。 的生化反应。 原理： 原理： 各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分 酶系统不尽相同 －各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分 解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别， 解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别， 也不一样 代谢产物或多或少地各有区别 在指示剂作用下出现可见变化，可供鉴别细菌之用。 在指示剂作用下出现可见变化，可供鉴别细菌之用。
2、事例
/xf/200410/ xf000003801200410150...
*1999年在全国城运会发生51名运动员金黄色葡 1999年在全国城运会发生51名运动员金黄色葡 1999年在全国城运会发生51 萄球菌毒素食物中毒事件。 萄球菌毒素食物中毒事件。 *陕西临潼区散装鲜牛奶喝倒44人 ，是一头感染金黄色葡 陕西临潼区散装鲜牛奶喝倒44人 44 萄球菌所致乳腺炎的奶牛是“罪魁祸首” 萄球菌所致乳腺炎的奶牛是“罪魁祸首” *2004年 22日 端午节）南昌市部分地区发生因食用” *2004年6月22日（端午节）南昌市部分地区发生因食用” 卤鸭翅产品引起群体性食物中毒事件，造成至少159 产品引起群体性食物中毒事件 159人 卤鸭翅产品引起群体性食物中毒事件，造成至少159人 入院救治 经卫生部门检验确定， 致病性金黄色葡萄球菌所致 所致， 经卫生部门检验确定，是致病性金黄色葡萄球菌所致， 病菌来源于煌上煌。煌上煌集团销售公司7 病菌来源于煌上煌。煌上煌集团销售公司7日公开销毁 了引发“ 22 22” 了引发“6·22”群体性食物中毒后封存的上千公斤卤制 品。
1、概述 2、事件 3、菌体生物学特性
/ mrsa.htm
菌体形态学特征、分类、培养特性、抵抗力和致病性） （菌体形态学特征、分类、培养特性、抵抗力和致病性）
4、培养基和试剂 5、 检验程序 6、原理 快速检测技术（国内外成熟新的快速检测技术） 7、快速检测技术（国内外成熟新的快速检测技术）
3、菌体生物学特性
（形态学与染色、分类、培养特性、抵抗力和致病性）
1）形态与染色 形态大小：典型的葡萄球菌呈球形，直径0.4 1.2μm 0.4μm， 形态大小：典型的葡萄球菌呈球形，直径0.4-1.2μm， 无鞭毛及芽胞， 无鞭毛及芽胞，少有荚膜 排列：固体培养物： 排列：固体培养物：葡萄串状排列 液体培养物： 液体培养物：双球或短链状排列 染色： 染色： G＋ 当衰老、 当衰老、死亡或对青霉素 有抗药性的菌株也为G 有抗药性的菌株也为G－ 。
2)分类
葡萄球菌种类繁多
*早期依菌落色素分类： 早期依菌落色素分类： 菌落色素分类 金黄色葡萄球菌 白色葡萄球菌 www.vietnamnet.vn/.../ images260549_khang.jpg 柠檬色葡萄球菌 还有其他染色 伯杰氏鉴定细菌学手册》 第八版)按葡萄球菌的生理 *《伯杰氏鉴定细菌学手册》(第八版)按葡萄球菌的生理 化学组成分： 化学组成分： 金黄色葡萄球菌：多为致病性菌. *金黄色葡萄球菌：多为致病性菌. 表皮葡萄球菌： 表皮葡萄球菌：偶尔致病 腐生葡萄球菌： 腐生葡萄球菌：非致病菌
不同菌种、酶有无、 不同菌种、酶有无、分解糖种 指示剂pH5.2 变黄色 、产 类、指示剂 酸产气否
C
+
_
2.甲基红 甲基红(Methylred)试验(简称 试验 简称MR试验 甲基红 试验 简称 试验)
–
很多细菌， 很多细菌，如大肠杆菌等分解葡萄糖产 生丙酮酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、 生丙酮酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、 乙酸、乳酸等小分子有机酸， 乙酸、乳酸等小分子有机酸，使培养基 降低到4． 以下 这时若加甲基红 以下， 的pH降低到 ．2以下，这时若加甲基红 降低到 指示剂呈现红色。 指示剂呈现红色。因甲基红指示剂变色 范围是pH4．4(红色 ～pH6．2 (黄色 。 红色)～ 黄色)。 范围是 ． 红色 ． 黄色 若某些细菌如产气杆菌， 若某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产 生丙酮酸，但很快将丙酮酸脱羧， 生丙酮酸，但很快将丙酮酸脱羧，转化 成醇等物，则培养基的pH仍在 仍在6． 以上 以上， 成醇等物，则培养基的 仍在 ．2以上， 故此时加入甲基红指示剂，呈现黄色。 故此时加入甲基红指示剂，呈现黄色 *细菌 分解葡萄糖 多种小分子有机酸 细菌--分解葡萄糖 多种小分子有机酸 细菌 分解葡萄糖--多种小分子有机酸-使培养基的pH降低到 以下--这时若加 降低到4.2以下 使培养基的 降低到 以下 这时若加 甲基红指示剂[pH4.4(红色 ～pH6.2 (黄 红色)～ 甲基红指示剂 红色 黄 呈现红色。 色)]呈现红色。 呈现红色 + _