蛋白质的沉淀及变性实验
蛋白质沉淀反应实验
蛋白质沉淀反应实验集团企业公司编码：（LL3698-KKI1269-TM2483-LUI12689-ITT289-蛋白质的沉淀反应一、目的和要求1、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识2、掌握几种沉淀蛋白质的方法3、了解蛋白质变性与沉淀的关系二、沉淀反应（一）原理在水溶液中，蛋白质分子的表面上由于有水化层和同性电荷的作用，所以成为稳定的胶体颗粒。
但这种稳定的状态是有条件的。
在某些理化因素的作用下，蛋白质分子表面带电性质发生变化、脱水甚至变性，则会以固态形式从溶液中析出，这个过程就称为蛋白质的沉淀反应。
蛋白质的沉淀反应可分为以下两种类型：1、可逆沉淀反应沉淀反应发生后，蛋白质分子内部结构并没有发生大的或者显着变化。
在沉淀因素去除后，又可恢复其亲水性，这种沉淀反应就是可逆沉淀反应，也叫做不变性沉淀反应。
属于这类沉淀反应的有盐析作用、等电点沉淀以及在低温下短时间的有机溶剂沉淀法等。
2、不可逆沉淀反应蛋白质在沉淀的同时，其空间结构发生大的改变，许多副键发生断裂，即使除去沉淀因素，蛋白质也不会恢复其亲水性，并丧失生物活性，这种沉淀反应就是不可逆沉淀反应。
重金属盐、生物碱试剂、强酸、强碱、加热、强烈震荡、有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。
（二）盐析1、材料与试剂（1）10%的卵清蛋白溶液（要求新鲜配制）、浓蛋白溶液（2）饱和硫酸铵溶液（3）固体硫酸铵（4）滤纸、玻棒2、操作方法（1）取试管一支，加入浓蛋白溶液2ml，再加等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置10分钟将出现沉淀。
此沉淀物为球蛋白。
（2）取上清液于另一支试管。
（3）向上清液液中加入硫酸铵粉末，边加边用玻棒搅拌，直至粉末不再溶解为止。
静置数分钟后，沉淀析出的是清蛋白。
（4）向两支试管中分别加水，观察其沉淀是否溶解。
（三）重金属盐沉淀重金属离子如Pb2+、Cu2+、Hg2+、Ag2+等可与蛋白质分子上的羟基结合生成不溶性金属盐而沉淀：重金属盐类沉淀蛋白质的反应通常很完全，特别是在碱金属盐类存在时。
实验一蛋白质变性凝固及沉淀(WT)
蛋白质的变性、凝固及沉淀
生物化学与分子生物学教研室
精品课件
实验目的
能够说出蛋白质变性、凝固反应的原理及实验方法 能够说出蛋白质沉淀反应的原理及实验方法 能够运用盐析法及重金属沉淀法
精品课件
主要实验内容
蛋白质的加热变性凝固 蛋白质沉淀反应
蛋白质盐析 重金属盐沉淀蛋白质 生物碱试剂沉淀蛋白质
变性实质：
高浓度尿素、盐酸胍等
破坏了空间结构，一级结构不受影响（分子组成、
分子量不变）。
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变性的可逆性
可逆变性：除去变性因素，蛋白质空间结构可 以恢复原状。
不可逆变性：除去变性因素，蛋白质空间结构 不能恢复原状。
利的保存 保护体内蛋白质
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蛋白质的胶体性质及沉淀:
不同蛋白质盐析时所需的盐浓度不同，可以通过 不同浓度盐溶液分离不同蛋白质，就是分段盐析。
大部分蛋白质都可用饱和(NH4)2SO4溶液盐析出来。 某些蛋白质在半饱和(NH4)2SO4溶液中析出。 盐析是一个可逆沉淀反应。
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实验内容
① 取一只小玻璃试管，加入2mL蛋白质溶液；
② 加入等体积饱和(NH4)2SO4溶液，混匀后静置3min。
观察现象（
）
③ 对该溶液进行过滤，将滤液收集于一只干净试管中， 取部分转入另一只试管中；
④ 向一只试管中加入结晶(NH4)2SO4粉末，直到粉末不 再溶解（成为饱和(NH4)2SO4溶液）；
⑤ 比较两只试管现象（
）
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蛋白质沉淀反应
重金属盐沉淀蛋白质
在碱性条件下，重金属离子与蛋白质结合成不溶 性蛋白盐而沉淀。
1. 向1号管中加入：pH4.8缓冲液10d 。混匀，于酒精灯
生化实验蛋白质的变性凝固及沉淀反应性质
注意事项
逐滴加入，仔细观察 酒精灯使用前注意酒精量的多少，加热时试管
口不可对人，不用时熄灭 酒精灯加热时，要进行晃动,避免局部高温,引起
试管炸裂 用过的枪头、滤纸放于污物缸 苦味酸属危险试剂 用过的试管仔细清洗
老年痴呆者脑血管中产生大量难溶性蛋白的诱因
蛋白质变性、沉淀和凝固可在细胞、组织的哪 些生命过程中出现？试举例与哪些疾病（或病 变）的发生相关？
验证关于蛋白质的相关理论 学会分析蛋白质的基本实验方法 讨论蛋白质分析在科研和临床工作中的意义
在某些物理和化学因素作用下，蛋白质 理化性质的改变和生物学活性的丧失。
引起蛋白质变性的理化因素
加热 乙醇等有机溶剂 强酸、强碱 重金属盐 生物碱试剂
学习蛋白质变性的意义
消灭病原微生物
蛋白质制剂的保存 保护体内蛋白质
结构和性质都发生变化
沉淀不再溶解于水
变性蛋白易于沉淀 沉淀蛋白不一定变性
接近于等电点附近的蛋白质溶液加热， 可使蛋白质发生凝固
不可逆变性状态
加热醋酸法 水/无机盐/尿素 水/无机盐/尿素/蛋白质 蛋白质变性凝固
变性、沉淀、凝固之间关系
变性属于蛋白质本质的变化，沉淀和凝固属于 一种现象
变性不一定沉淀，变性蛋白质只在等电点附近才沉 淀，沉淀的变性蛋白质也不一定凝固
变性的可逆性 可逆变性：除去变性因素，蛋白质空间结构
可以恢复原状。 不可逆变性：除去变性因素，蛋白质空间结构 不能恢复原状。
一般轻度变性是可逆，过度变性是不可逆。
颗粒表面水化膜 胶粒表面同种电荷
疏水领域
破坏蛋白质的水化层和 电荷，使蛋白质从溶液 中ห้องสมุดไป่ตู้出的现象
蛋白质沉淀是一种现象
结构和性质都不变 适当条件下可重新溶解 是分离和纯化的基本方法
实验一 蛋白质的沉淀及变性
实验一蛋白质的沉淀及变性发布时间：2010-12-23 浏览次数：850一、实验目的1．熟悉蛋白质的沉淀反应。
2．进一步掌握蛋白质的有关性质。
二、实验原理蛋白质因受某些物理或化学因素的影响，分子的空间构象被破坏，从而导致其理化性质发生改变并失去原有的生物学活性的现象称为蛋白质的变性作用。
变性作用并不引起蛋白质一级结构的破坏，而是二级结构以上的高级结构的破坏，变性后的蛋白质称为变性蛋白。
引起蛋白质变性的因素很多，物理因素有高温、紫外线、X-射线、超声波、高压、剧烈的搅拌、震荡等。
化学因素有强酸、强碱、尿素、胍盐、去污剂、重金属盐（如Hg2+、Ag+、Pb2+等）三氯乙酸，浓乙醇等。
不同蛋白质对各种因素的敏感程度不同。
用大量中性盐使蛋白质从溶液中析出的过程称为蛋白质的盐析作用。
蛋白质是亲水胶体，在高浓度的中性盐影响下脱去水化层，同时，蛋白质分子所带的电荷被中和，结果蛋白质的胶体稳定性遭到破坏而沉淀析出。
经透析或用水稀释时又可溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。
盐析不同的蛋白质所需中性盐浓度与蛋白质种类及pH 有关。
分子量大的蛋白质(如球蛋白)比分子量小的(如白蛋白)易于析出。
改变盐浓度，使不同分子量的蛋白质分别析出。
三、实验材料1．新鲜蛋清或血清，蛋白质溶液。
2．固体硫酸铵及饱和硫酸铵溶液。
3．95％乙醇，1％CuSO4，饱和苦味酸，0.1mol/LHAC，NaCl,4．试管，三角漏斗、玻棒，滤纸，试管架酒精灯，移液管。
四、操作方法1．卵清蛋白的分离(1)、取卵清约2 ml于试管中，加等体积的饱和硫酸铵溶液，搅拌均匀，蛋白质析出，静置，用滤纸过滤致滤液澄清，沉淀为卵球蛋白，将此沉淀用2 ml半饱和硫酸铵洗涤一次。
(2)、将析出卵清球蛋白后的滤液放人试管中，再加人固体硫酸铵使之达饱和，观察有无沉淀产生，若有沉淀，则过滤之，滤出的沉淀却为卵清白蛋白。
2．乙醇沉淀蛋白质（乙醇为脱水剂，能破坏蛋白质胶体质的水化层而使其沉淀析出）。
蛋白的沉淀实验报告
一、实验目的1. 了解蛋白质的沉淀原理及其应用；2. 掌握常用蛋白质沉淀方法，如盐析、酸沉、有机溶剂沉淀等；3. 学习蛋白质沉淀实验的操作步骤及注意事项。
二、实验原理蛋白质在溶液中处于溶解状态，当受到某些物理或化学因素的影响时，其溶解度会降低，从而导致蛋白质从溶液中析出。
这种现象称为蛋白质的沉淀。
蛋白质沉淀的方法有很多种，常见的有盐析、酸沉、有机溶剂沉淀等。
盐析：在一定浓度的盐溶液中，蛋白质的溶解度降低，从而使蛋白质从溶液中析出。
盐析过程中，盐的浓度越高，蛋白质的沉淀效果越好。
酸沉：在酸性条件下，蛋白质的溶解度降低，从而使蛋白质从溶液中析出。
酸沉过程中，pH值越低，蛋白质的沉淀效果越好。
有机溶剂沉淀：有机溶剂能破坏蛋白质的氢键、疏水作用等，使蛋白质的溶解度降低，从而使其从溶液中析出。
有机溶剂沉淀过程中，溶剂的浓度越高，蛋白质的沉淀效果越好。
三、实验材料1. 蛋白质溶液：牛血清白蛋白（BSA）溶液；2. 盐析试剂：饱和硫酸铵溶液；3. 酸沉试剂：0.1mol/L HCl溶液；4. 有机溶剂沉淀试剂：无水乙醇；5. 实验器材：试管、移液管、量筒、磁力搅拌器、离心机等。
四、实验步骤1. 取5支试管，分别编号为1-5；2. 在1-5号试管中分别加入2ml牛血清白蛋白溶液；3. 在1号试管中加入1ml饱和硫酸铵溶液，充分振荡后静置观察；4. 在2号试管中加入2滴0.1mol/L HCl溶液，充分振荡后静置观察；5. 在3号试管中加入1ml无水乙醇，充分振荡后静置观察；6. 在4号试管中加入1ml饱和硫酸铵溶液，再加入2滴0.1mol/L HCl溶液，充分振荡后静置观察；7. 在5号试管中加入1ml饱和硫酸铵溶液，再加入1ml无水乙醇，充分振荡后静置观察；8. 将所有试管在室温下静置30分钟；9. 观察各试管中蛋白质的沉淀情况，记录实验结果；10. 将沉淀后的溶液进行离心，取上清液进行分析。
五、实验结果与分析1. 盐析：在1号试管中加入饱和硫酸铵溶液后，蛋白质从溶液中析出，形成白色沉淀；2. 酸沉：在2号试管中加入HCl溶液后，蛋白质从溶液中析出，形成白色沉淀；3. 有机溶剂沉淀：在3号试管中加入无水乙醇后，蛋白质从溶液中析出，形成白色沉淀；4. 盐析+酸沉：在4号试管中加入饱和硫酸铵溶液和HCl溶液后，蛋白质的沉淀效果更好；5. 盐析+有机溶剂沉淀：在5号试管中加入饱和硫酸铵溶液和无水乙醇后，蛋白质的沉淀效果更好。
蛋白质加热沉淀实训报告
一、实验目的1. 了解蛋白质加热沉淀的原理和过程；2. 掌握蛋白质加热沉淀实验的操作方法；3. 分析实验结果，加深对蛋白质加热沉淀现象的理解。
二、实验原理蛋白质加热沉淀是一种常见的蛋白质分离方法，其原理是利用蛋白质在高温下的不稳定性，使其发生变性并沉淀下来。
蛋白质在加热过程中，其空间结构被破坏，分子内部结构松散，导致蛋白质颗粒失去水膜，进而引起分子间相互碰撞而聚集沉淀。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：蛋白质溶液、1%醋酸溶液、10%醋酸溶液、10%氢氧化钠溶液、饱和氯化钠溶液、蒸馏水；2. 实验仪器：试管、移液管、酒精灯、沸水浴装置、磁力搅拌器、电子天平。
四、实验步骤1. 准备实验材料，分别配制蛋白质溶液、1%醋酸溶液、10%醋酸溶液、10%氢氧化钠溶液、饱和氯化钠溶液；2. 取4支试管，分别编号为1、2、3、4；3. 在试管1中加入1.0ml蛋白质溶液，滴加1滴1%醋酸溶液；4. 在试管2中加入1.0ml蛋白质溶液，滴加10滴10%醋酸溶液；5. 在试管3中加入1.0ml蛋白质溶液，滴加10滴10%氢氧化钠溶液；6. 在试管4中加入1.0ml蛋白质溶液，滴加10滴蒸馏水；7. 混匀各试管溶液，观察溶液状态；8. 将各试管放入沸水浴中加热10分钟；9. 观察各试管溶液在加热过程中的变化，记录沉淀现象；10. 取出试管，冷却至室温，观察沉淀情况。
五、实验结果与分析1. 实验结果：试管1：溶液中出现白色沉淀；试管2：溶液中出现大量白色沉淀；试管3：溶液中出现白色沉淀；试管4：溶液中无明显变化。
2. 实验分析：试管1和3中溶液出现白色沉淀，说明在加热条件下，蛋白质发生变性并沉淀。
试管1中滴加1滴1%醋酸溶液，使溶液接近于蛋白质等电点，导致蛋白质不稳定，加热后容易沉淀。
试管3中滴加10滴10%氢氧化钠溶液，使溶液呈碱性，蛋白质在碱性条件下加热后也容易沉淀。
试管2中滴加10滴10%醋酸溶液，溶液呈酸性，蛋白质在酸性条件下加热后也容易沉淀。
蛋白质的沉淀反应实验报告
蛋白质的沉淀反应实验报告
实验目的，通过对蛋白质的沉淀反应进行实验，掌握蛋白质的沉淀方法和技巧，了解蛋白质的性质和特点。
实验原理，蛋白质的沉淀反应是利用蛋白质与醋酸和酒精混合后在酸性条件下
沉淀出来的特性进行实验。
醋酸和酒精可以使蛋白质变性并沉淀出来，酸性条件有利于蛋白质的沉淀。
实验步骤：
1. 取少量蛋白质溶液放入试管中；
2. 加入少量醋酸，并充分混合；
3. 加入适量酒精，再次充分混合；
4. 观察蛋白质的沉淀情况。
实验结果，经过以上步骤，观察到蛋白质在酸性条件下与醋酸和酒精混合后发
生了沉淀反应，沉淀物呈现白色。
实验分析，蛋白质的沉淀反应是由于醋酸和酒精的作用下，蛋白质发生变性并
沉淀出来。
酸性条件有利于蛋白质的沉淀，而酒精可以加速蛋白质的沉淀过程。
因此，通过本实验可以初步了解蛋白质的性质和特点。
实验结论，蛋白质的沉淀反应是一种常见的实验方法，通过本实验可以掌握蛋
白质的沉淀技巧，并了解蛋白质的性质和特点。
在实际应用中，蛋白质的沉淀反应可以用于蛋白质的提取和分离，具有一定的应用价值。
实验注意事项：
1. 实验操作要注意安全，避免醋酸和酒精的接触；
2. 实验过程中要注意观察蛋白质的沉淀情况，及时记录实验结果；
3. 实验结束后要及时清理实验器材，保持实验环境整洁。
通过本实验，我对蛋白质的沉淀反应有了更深入的了解，掌握了蛋白质的沉淀
方法和技巧，对蛋白质的性质和特点有了更清晰的认识。
希望通过今后的实验实践，能够进一步提高自己的实验技能，为科学研究和实际应用做出更多的贡献。
蛋白质的沉淀与变性实验报告
蛋白质的沉淀与变性实验报告蛋白质的沉淀与变性实验报告蛋白质是生物体内非常重要的一类有机化合物，它们在细胞的结构、功能和代谢中发挥着关键的作用。
为了研究蛋白质的性质和功能，科学家们经常进行各种实验。
本实验旨在探究蛋白质的沉淀与变性过程。
实验首先进行的是蛋白质的沉淀实验。
我们选取了鸡蛋清作为实验样品，因为鸡蛋清中含有丰富的蛋白质。
我们将鸡蛋清倒入试管中，并加入适量的乙醇。
乙醇可以与蛋白质发生相互作用，使其沉淀下来。
实验中我们使用了不同浓度的乙醇溶液，观察其对蛋白质沉淀的影响。
实验结果显示，随着乙醇浓度的增加，蛋白质的沉淀量逐渐增加。
这是因为乙醇能够与蛋白质中的水分子发生氢键作用，导致蛋白质分子间的相互作用力增强，从而使蛋白质变得不溶于水而沉淀下来。
当乙醇浓度达到一定程度时，蛋白质的沉淀量达到最大值，此后再增加乙醇浓度并不会引起更多的蛋白质沉淀。
这是因为乙醇的浓度过高会导致蛋白质分子间的相互作用力过强，使其聚集成大块而不是沉淀下来。
在进行蛋白质的变性实验时，我们选取了鸡蛋清中的卵清蛋白作为实验样品。
卵清蛋白是一种具有稳定的三维结构的蛋白质，通过变性处理可以使其失去原有的结构和功能。
我们采用了两种方法对卵清蛋白进行变性处理：热变性和酸变性。
首先进行的是热变性实验。
我们将卵清蛋白溶液加热至80摄氏度，并保持一段时间。
实验结果显示，随着加热时间的增加，卵清蛋白的结构逐渐破坏，失去了原有的透明度，变得浑浊。
这是因为高温可以破坏蛋白质分子内部的氢键、疏水作用力和范德华力等相互作用，使蛋白质分子失去稳定的三维结构。
接下来进行的是酸变性实验。
我们将卵清蛋白溶液加入适量的盐酸，使其呈酸性。
实验结果显示，随着酸性溶液的加入，卵清蛋白的结构发生了明显的改变，透明的溶液变得浑浊。
这是因为酸性条件下，蛋白质分子中的氨基酸残基带正电荷，导致蛋白质分子间的相互排斥增强，结构发生变化。
通过这两个实验，我们可以看到蛋白质在不同条件下的沉淀和变性过程。
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二
原理
• 在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成
水化层和同性电荷而成为稳定的亲水胶
体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋
白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。
蛋白质胶体稳定的因素
• 水化膜 • 颗粒表面电荷
水化膜 + + + + + + +
带正电荷的蛋白质
酸
碱
－ －
－
－ －
－－ －
在等电点的蛋白质
带负电荷的蛋白质
四、结果处理
如实记录结果，并作出合理解释
The
end
蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。加热引起的
蛋白质沉淀与凝固，蛋白质与重金属离子或某些有机酸的 反应都属于此类。 蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在 (如电荷)，并不析出。如强酸，强碱。 因此变性蛋白质并不一定部表现为沉淀，而沉淀的蛋白质 也未必都已变性。
三 操作
1. 盐析
蛋白质的沉淀及变性
一 目的
1 加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识； 2 了解沉淀蛋白质的几种方法； 3 了解蛋白质变性与沉淀的关系。
• 蛋白质的沉淀
分散在溶液中的蛋白质分子发生凝聚，并从溶液 中沉淀、析出的现象
•Байду номын сангаас蛋白质的变性
在某些因素作用下，蛋白质的空间结构受到破坏 ，生物学活性丧失，理化性质发生改变
• 取10ml离心管一支，加入5%卵清蛋白溶液 2.0mL，加2.0mL的饱和硫酸铵溶液，观察 是否有沉淀产生？ • 4000rpm离心5分钟，丢弃上清，在沉淀中 加入2.0mL的清水，观察沉淀是否溶解。
2. 重金属盐沉淀蛋白质
取1支试管，加入蛋白质溶液1mL，再加入 3%硝酸银溶液2滴。振荡试管，有沉淀产 生。放置片刻，向沉淀中加入1mL的水，沉 淀是否溶解？为什么？
5. 乙醇引起的变性及沉淀：
试剂 1 5%卵清蛋白溶液 pH 4.7缓冲液 0.1 mol/L NaOH 0.1 mol/L盐酸 1.0 1.0 1.0 管号 2 1.0 3 1.0
1.0
观察实验现象
95%乙醇
1.0
1.0
1.0
观察现象。向第1管内加水8mL；向第2、3号管 中各加1滴甲基红，再分别用0.1 mol/L醋酸溶液 及0.05 mol/L碳酸钠溶液中和之。观察各管颜色 的变化和沉淀的生成。
3．某些有机酸沉淀蛋白质 取1支试管，加入蛋白质溶液1mL，加入5% 三氯乙酸溶液3-5滴，振荡试管，观察沉淀的 生成。放置片刻，向沉淀中加入1mL的水， 观察沉淀是否溶解。
4. 有机溶剂沉淀蛋白质 取1支试管，加入蛋白质溶液1mL，再加入 1mL 95%乙醇。混匀，观察沉淀的生成。 放置片刻，向沉淀中加入1mL的水，观察 沉淀是否溶解。
+ + + + + + +
+ +
+
+
+
+ +
• 可逆的沉淀反应：此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变 化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原 来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性。
如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇(或丙酮)短
时间作用于蛋白质。提纯蛋白质时，常利用此类反应。
不可逆沉淀反应：此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，