免疫层析竞争法原理
胶体金法免疫层析法
胶体金法免疫层析法胶体金法免疫层析法是一种常用于生物分析和生化检测的方法。
它通过将胶体金颗粒与特定抗体结合，实现对特定分子的高灵敏度和高选择性检测。
胶体金是一种具有独特光学性质的材料，其颗粒大小一般在10-100纳米之间。
胶体金颗粒具有良好的稳定性和分散性，能够产生明亮的红色光谱吸收峰。
这些特性使得胶体金成为生物分析中理想的探针。
在胶体金法免疫层析法中，首先需要制备与目标分子相应的抗体。
抗体可以通过动物免疫或基因工程技术获得。
接下来，将胶体金颗粒与抗体进行共价结合，形成胶体金-抗体复合物。
这种复合物能够在目标分子存在的条件下发生聚集，从而改变胶体金颗粒的光学性质。
在实际操作中，通常将待测样品与胶体金-抗体复合物混合。
如果待测样品中含有目标分子，那么目标分子将与复合物竞争结合，导致复合物解离。
这种解离会使得胶体金颗粒发生聚集，进而引起红色光谱吸收峰的变化。
通过测量吸收光谱的变化，可以间接检测到目标分子的存在。
胶体金法免疫层析法具有许多优点。
首先，胶体金颗粒具有较大的比表面积和高度的可调控性，因此可以实现高灵敏度的检测。
其次，胶体金颗粒具有良好的生物相容性和稳定性，不易发生聚集或沉淀。
此外，胶体金法免疫层析法操作简便，结果可视化，无需复杂的仪器设备。
胶体金法免疫层析法在生物医学领域得到广泛应用。
例如，在临床诊断中可以用于检测肿瘤标志物、病原微生物和药物残留等。
此外，胶体金法免疫层析法还用于食品安全监测、环境污染检测和生物学研究等领域。
然而，胶体金法免疫层析法也存在一些限制。
首先，胶体金颗粒的稳定性受到环境pH值、离子强度和温度等因素的影响，因此需要严格控制实验条件。
其次，胶体金法免疫层析法对于复杂样品的处理较为困难，可能存在干扰物质造成的误判。
此外，胶体金法免疫层析法的灵敏度受到胶体金颗粒的大小和抗体的亲和力等因素的影响，需要进行优化和改进。
胶体金法免疫层析法是一种重要的生物分析方法。
它通过胶体金颗粒与特定抗体的结合实现对目标分子的高灵敏度和高选择性检测。
时间分辨荧光免疫层析技术简介
• 测向流层析 • 垂直流层析（渗滤法）
免疫层析技术原理
侧向流层析
• 固定相：固定有检测线和控制线的纤维层析材料（NC膜） • 流动相：测试液 • 移动：毛细作用 • 结合：游离态待测物在固相捕获线处发生特异性免疫反应
图1 典型侧向流免疫层析试纸条构造（来源：Merck Estapor）
时间分辨荧光免疫层析技术简介
主要内容
1
免疫层析技术原理
2
免工疫作问标题记机材解决料方介案绍
3
时间分辨荧光分析法
4
应用实例
免疫层析技术原理
免疫层析技术是建立在层析技术和抗原-抗体特异性免疫反应基础上的一 项新兴免疫检测技术。
发展阶段：
• 初期：定性检测 • 新阶段：半定量、定量检测（信号放大、信号转换）
• 荧光寿命(Fluorescence lifetime)：荧光物质被激发后所产生的荧光衰减到一定程度所用的 时间。
• 荧光猝灭(Fluorescence quenching)：荧光物质在某些理化因素（如紫外线照射、高温、 某些硝基化合物、重氮化合物、重金属、卤素阴离子等）的作用下，激发态分子的电子不能 回复到基态，所吸收的能量无法以荧光的形式发射，从而导致荧光减弱甚至消退的现象。引 起荧光猝灭的物质称为猝灭剂，常用于消除不需要的荧光。
表1 几种常见的荧光物质
荧光物质
最大吸收光谱
异硫氰酸荧光素 (FITC)
490～495nm
四乙基罗丹明 (RB200) 四甲基异硫氰酸罗丹明 (TRITC) 藻红蛋白（PE） 7-氨基-4-甲基香豆素
570～575nm 550nm 490-560nm 354nm
Alexa Fluor、CF Dye等新一代荧光染料系列 多种区段供选
免疫层析法检测原理分类介绍.
免疫层析法检测原理分类介绍作者：佚名文章来源：艾康生物技术（杭州）有限公司点击数：88 更新时间：2005-10-16双抗体夹心·以 hCG试剂为例金标为鼠源性抗β-hCG单克隆抗体与胶体金的复合物，测试线包被羊抗α-hCG多克隆抗体，控制线包被羊抗鼠多克隆抗体。
妇女受孕的“指示剂” hCG是一种肽，包含一条和FSH（促卵泡成熟激素），FLH 具有同源性的α链和一条高度特异的β链。
当待测尿液或血清中含有一定量的hCG时，样本通过层析作用到达金标位置hCG的β链和单抗β-hCG发生免疫反应，再层析到测试线位置，hCG的α链和多抗α-hCG 发生免疫反应，这样就把金标通过hCG桥连到测试线上，达到一定量后，金标显色为肉眼可见的水平，多余的金标继续泳动到控制线位置，由于多抗鼠和鼠源性抗β-hCG 单抗发生免疫反应，从而桥连胶体金显色，这样就得到阳性结果。
当尿液或血清中不含 hCG时，金标和测试线抗体不发生桥连，而控制线则显色，这样就得到了阴性结果。
当测试线和控制线均不显色时，表示试剂盒无效。
该产品检验灵敏度25mIU/ml hCG。
测HbsAg的HbsAg产品的检测原理是双抗体夹心。
竞争反应原理·以 MOP 为例（BSA 为牛血清白蛋白）金标为鼠源性抗体Morphine单抗和胶体金的复合物，T线（为取得较强的免疫应答，故免疫原采用Morphine-BSA 偶联物）包被Morphine-BSA。
C 线包被羊抗鼠抗体。
当待测尿液中含一定量以上的 Morphine时，样本到达金标位置，和单抗Morphine-BSA发生免疫反应并完全饱和之，再层析到T线位置时，由于单抗Morphine-BSA lgG胶体金复合物已无空余的位点和测试线上的Morphine-BSA结合，故T线不显色，C线显色，这样得到的是阳性结果。
当待测尿液中不含 Morphine时，样本与金标不反应，再层析到T线位置时，固定在NC膜上的Morphine-BSA会“捕捉”单抗 Morphine-BSA胶体金复合物，故T线显色，C线也显色，得到阴性结果。
免疫层析各种方法法原理
双抗体夹心法原理以HCG 为例（检测抗原）此方法较常用，主要用于较大分子量的蛋白（抗原）的检测。
要求两株抗体针对一个抗原的不同位点才可以。
也有个别的检测项目（HIV）是双抗原夹心检测抗体的，原理类似。
HCG 金标记αHCG 金-αHCG-HCG 金-αHCG-HCG -βHCG金-αHCG -羊抗鼠IgG(Y3)金-αHCG-HCG羊抗鼠IgG （Y3）显示红色显示红色金标记αHCG不显色显示红色金-αHCG -羊抗鼠IgG阴性反应阳性反应βHCG以吗啡为例（检测抗原）此方法主要用于小分子抗原（毒品、农药、肽链等）的检测。
由于抗原分子量小不能直接固定于NC 膜上，常常用化学方法把小分子偶联到BSA 等大分子物质上再固定于NC 膜上。
此结果与双抗原夹心法相反，阴性CT 两条都是红线，阳性只有C 线一条红线，T 线不显色。
金-吗啡抗体-吗啡吗啡-BSA 金标记吗啡抗体显示红色不显色金-吗啡抗体-吗啡羊抗鼠尿液(含吗啡)显示红色显示红色金标记吗啡抗体金-吗啡抗体-羊抗鼠阴性尿液抗体-吗阴性反应阳性反应金标记吗啡抗体-吗啡-BSA乙肝E 抗体为例金标记e 抗体e 抗原e 抗体金标记e 抗体-e 抗原-e 抗体金标记e 抗体-e 抗原-e 抗体-羊抗鼠不显色显示红色金标记e 抗体e 抗原金标记e 抗体-e 抗原金标记e 抗体-e 抗原-e 抗体显示红色显示红色金标记e 抗体-e 抗原羊抗鼠阳性反应阴性反应间接法原理检测抗体此方法主要用于血清中抗体检测，纯化或者重组的抗原固定于NC 膜上，标记多为蛋白A(ProteinA 或叫SPA，与抗体Fc 端结合而与其它蛋白质不结合)或者鼠抗人（如检测为IgM，则标记为鼠抗人IgM）。
此方法要求胶体金过量（待测样品往往含有大量多种抗体，所检测抗体所占份额很小），一般来说样品再加入前需要稀释或者加极少量后再加样品缓冲液。
一般斑点免疫渗滤法使用也是间接法。
显示红色显示红色金标记SPA 目的抗体杂抗体阳性反应抗原杂抗体金标记SPA 抗原不显色显示红色阴性反应。
胶体金免疫层析竞争法
胶体金免疫层析竞争法1. 背景介绍胶体金免疫层析竞争法（Colloidal Gold Immunochromatographic Assay）是一种常见的免疫层析快速检测方法。
该方法基于免疫学原理，利用胶体金颗粒与样品中的目标分子相互作用，通过色素沉淀形成可见的测试结果。
这种检测方法具有检测快速、操作简单、结果直观等优点，在临床诊断、食品安全监测、环境污染监测等领域得到广泛应用。
2. 原理介绍2.1 免疫学原理免疫学原理是胶体金免疫层析竞争法的基础。
免疫层析法是一种通过抗原-抗体反应实现分离和检测的技术。
在该方法中，通过将抗原（目标分子）与抗体（特异性与抗原结合的蛋白质）结合，形成免疫复合物，从而实现目标分子的检测。
2.2 胶体金颗粒胶体金颗粒是胶体金免疫层析法的关键试剂。
胶体金颗粒具有良好的生物相容性、稳定性和可见性，广泛应用于免疫学和生物医学领域。
胶体金颗粒的颜色通常为红色或紫色，直径一般在10-100纳米之间。
在光学显微镜下观察，胶体金颗粒呈现明显的表面等离子共振吸收峰，即表现为红色。
2.3 竞争反应胶体金免疫层析竞争法通过竞争反应实现目标分子的检测。
竞争反应分为两个步骤：竞争体系构建和检测结果显示。
2.3.1 竞争体系构建竞争体系构建是胶体金免疫层析竞争法的关键步骤。
在这一步骤中，将胶体金颗粒与目标分子结合。
首先，将目标分子与胶体金颗粒中的抗体结合，形成免疫复合物。
然后，将样品中的目标分子与胶体金颗粒中的抗体竞争结合。
当样品中的目标分子存在时，会与胶体金颗粒中的抗体竞争结合，导致免疫复合物的形成减少。
而当样品中的目标分子不存在时，胶体金颗粒中的抗体能与胶体金颗粒自身上的抗原结合，免疫复合物形成量较多。
2.3.2 检测结果显示检测结果显示是胶体金免疫层析竞争法的关键步骤。
在这一步骤中，利用胶体金颗粒的可见性进行结果显示。
当竞争体系构建完成后，将样品滴在测试纸上，胶体金颗粒会经由纸质的吸收作用，沿纸张上升。
胶体金免疫层析法原理
胶体金免疫层析法原理
胶体金免疫层析法是一种常用于生物分析和临床诊断的技术。
它基于抗原-抗体反应原理，利用胶体金粒子和抗体之间的相互作用来实现分离和检测目标分子。
胶体金是一种纳米级粒子，其表面具有特定的化学官能团，可以与抗体分子发生化学结合。
在胶体金免疫层析法中，首先将目标分子与抗体反应，形成抗原-抗体复合物。
然后将这个复合物与含有胶体金粒子的试剂混合，使胶体金粒子与抗原-抗体复合物结合。
混合物经过一段时间后，被加入到一根特定宽度和长度的试纸条上，试纸条上通常具有特定的孔洞或线条，用于控制混合物的流动。
胶体金粒子在试纸条上移动的速度受到复合物的大小和电荷的影响。
当复合物较大且带有负电荷时，胶体金粒子与复合物结合，导致复合物无法通过试纸孔洞或线条，停留在原位置。
这样，通过观察试纸条上形成的颜色条带的位置，可以确定是否存在目标分子。
通常，出现颜色条带表示目标分子的存在，而无颜色条带表示目标分子的缺失。
胶体金免疫层析法具有快速、便携和易于操作的特点，可以在不需要复杂设备和实验室条件的情况下进行分析。
因此，它广泛应用于临床诊断、食品安全检测、环境监测等领域。
免疫层析法
免疫层析法免疫层析法（ImmunoaffinityChromatography，简称IAC）是一种采用抗体作为固定相来分离和纯化物质的一种技术。
它与传统的柱层析法、离子交换法和硅胶凝胶法等技术具有很大的不同。
IAC技术在当今生物及药学领域有着极其重要的地位，它可以分离出细胞中的高度结构化的蛋白质和复杂的大分子共组合结构，以及像核酸等非蛋白质物质。
IAC技术的基本原理是利用免疫结合作用，将一种特定的蛋白质物质与一种有特定立体结构的抗体结合起来，达到目的分离蛋白质。
其中，特定的蛋白质物质和抗体之间的结合是由抗原抗体反应过程来控制的，即抗体会识别和结合其特定的靶蛋白，当该抗体被投入一定浓度的溶液中时，可以使蛋白与抗体结合，之后采用某种方法将蛋白质物质从抗体上分离出来，从而实现蛋白质物质的分离和纯化。
IAC技术也被称为免疫吸附结合技术，是指采用抗体与受体物质的特异性结合，使受体物质与抗体反应，在受体物质溶液中人工合成出固定抗体分子，在这些固定抗体分子上进行分离和纯化，使用抗体为固定相，以抗体为中间体吸附和纯化介质。
IAC技术有许多优点，主要包括：（1）其特异性高，结合要求比较严格，抗体和受体物质的完整性和特异性结合，可以有效地分离和纯化目标物质。
（2）可以简便快捷地分离和纯化物质，筛选过程可以很快完成，而且简单而又能产生高效率的分离和纯化效果。
（3）它可以抑制干扰物，有效地消除其他细末颗粒物质的干扰，使分离效果更佳。
（4）分离结果可以通过某种方法得出，可以很快地检测出结果。
（5）免疫层析法与离子交换、硅胶凝胶等其他技术的最大不同在于，它使用的特定的抗体可以分离出大分子量的物质，而这些物质在其它技术中是难以分离出来的，可以大大地提高分离效率，节省研究时间。
虽然IAC技术有许多优点，但由于抗体本身具有极高的分子量，在抗体抗原反应过程中可能会产生许多杂质，从而影响分离和纯化效果，使抗体抗原反应过程耗时，效率低。
免疫层析法
免疫层析法免疫层析法是一种采用生物反应来检测物理或化学物质的功能。
它通过将检测物质结合到活性蛋白质分子上，再借助特定的生物反应来识别出特定的蛋白质，从而辨认出检测物。
免疫层析法可分为几个类别，其中包括酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫发泡法（IF）、抗原检测（AgT）、免疫衰减检测（IC）和免疫结构检测（IS）等。
酶联免疫吸附测定（ELISA）是最常用的免疫层析法，它能够准确、高效地测定特定抗原或抗体的浓度。
ELISA使用被称为抗原或抗体的抗物质进行测定，抗物质可以结合到可检测的物质上，形成抗原抗体复合物（Ag-Ab），并利用酶的酶促反应（EPR）作为标志物，通过测定抗原抗体复合物的比例来评估特定抗原或抗体的浓度。
免疫发泡法（IF）是一种细胞免疫技术，“发泡”指的是表皮细胞上发生的结合反应，发泡的原因是细胞膜上抗原特异性抗体和抗原结合后，中心细胞受到结合能量而膨胀而发生变形。
IF技术常用于疾病诊断，以及免疫药物、细胞生物学研究，如细胞凋亡、细胞因子等。
抗原检测（AgT）技术是一种免疫检测技术，用于检测特定抗原的存在与否及其浓度，其原理是抗原结合特异性的抗体，抗原抗体复合物的形成，以及抗原抗体复合物的检测等。
AgT技术具有灵敏度高，执行简单等优点，也可用于测定血清中抗原的含量，如肿瘤标志物。
免疫衰减检测（IC）是一种检测特定分子的生物技术，它利用抗体把分子特异性地捕获，然后测定抗体把捕获物体与敏感免疫浆料的相对衰减程度，来获得特定分子的结构信息。
IC技术可以用于研究新药、分子生物学及临床疾病等领域。
免疫结构检测（IS）是一种检测特定分子的生物技术，它将抗原特异性抗体与特定分子结合，并通过特定的抗原抗体复合物来测定特定分子的结构特性，如形状、大小和结构等。
IS技术常用于研究药物、分子生物学及临床疾病等领域，能够有效、准确地测定特定分子的结构特征，以评估药物作用机制及对疾病的诊断和治疗。
综上所述，免疫层析法是一种广泛应用于疾病诊断、实验室生物检测、药物发现和药物机理研究、分子生物学及临床疾病等的技术。
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免疫层析竞争法原理
免疫层析竞争法（Immunoassay）是一种用于检测分子物质的定量分
析方法，广泛应用于生物医学研究、临床诊断和环境监测等领域。
该方法
利用抗体与特定抗原结合的特异性来进行定量检测，其原理基于免疫学和
化学分析的原理。
免疫层析竞争法基于竞争反应，通过竞争两种结合线的物质来检测分
析目标物质的浓度。
其原理是通过将要测定的分析物与标记物相似的具有
特异性的抗体结合，形成免疫复合物。
在检测过程中，该免疫复合物与标
记物大量存在，处于充分结合状态。
此时，将混合物通过固定在固体基质上的亲和层析剂（如抗体等）上，通过重力、吸力等力驱动，免疫复合物会与固相上的抗体结合，形成抗原
-抗体-固相三维复合物。
此时，随着混合物的流过，复合物会沿着固相基
质方向移动。
如果所测物质的浓度比较高，那么抗原与抗体的结合会受到影响，使
免疫复合物的形成减少。
因此，该免疫复合物与固相上的抗体的竞争逐渐
增加。
当浓度低到一定程度时，免疫复合物的形成减少，而固相上的抗体
与抗原的结合增加，最终形成更多的抗原-抗体-固相复合物。
此时，可以通过一种检测系统，根据测定特定标志物的剩余量，间接
测定该分析物的浓度。
一般情况下，这种检测系统是由荧光素、酶、放射
性核素等标记的小分子物质组成。
免疫层析竞争法的优点在于：具有高度特异性和敏感性，可以用于低
浓度物质的检测；可以同时检测多个目标物质；操作简便、快速，可以在
实验室和临床现场进行；具有一定程度上的自动化和高通量分析能力；不
需要专门的仪器设备。
然而，免疫层析竞争法也存在一些缺点，例如可能会遇到干扰物或交
叉反应的问题，无法准确确定未知样品中的浓度，需要在实验室中进行复
杂的样品准备和处理。
总的来说，免疫层析竞争法是一种基于抗原-抗体相互作用的定量分
析方法，通过竞争反应来检测分析物质的浓度。
其原理是利用免疫学和化
学分析的原理，在实验室和临床现场进行快速、简便的检测。
然而，仍需
要不断改进和优化这种方法，以提高其特异性和准确性，扩大其应用范围。