第四章_药典中常见定量分析方法概述
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第四章 药物定量分析与分析方法验证
1、含卤素有机药物
含卤素有机药物是指分子结构中所含卤素直接与芳环
如果测得理论板数低于规定的最小理论板数， 应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色 谱柱填充的优劣等），使理论板数达到要求。
(2)分离度(R)
在定量分析时，要求定量峰与其他峰 或内标峰之间有较好的分离度。除另有规定 外，分离度应大于1.5。
分离度（R）的计算公式见下式：
R 2 t R2 t R1
含量（CX）= f
AX AS / CS
式中，AX为供试品峰面积或峰高；CX为供
试品的浓度 。
丙酸睾酮含量测定采用高效液相法：取本品 对照品适量，精密称定，加甲醇定量稀释成 每lmL中约含1mg的溶液。精密量取该溶液 和内标溶液（1．6mg/ml苯丙酸诺龙甲醇溶 液）各5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至 刻度，摇匀，取10μl注入液相色谱仪，记录
例
取盐酸麻黄碱0.1532g，精密称定， 加冰醋酸10ml溶解后，加醋酸汞试液 2ml与结晶紫指示液1滴，用HClO4滴 定至绿色，用去0.1022mol/L的高氯 酸滴定液7.50m1，空白试验消耗高氯 酸滴定液0.08ml。已知每1ml高氯酸 滴定液（0.1mol/L）当于20.17mg的 C10H15ON·HCl。试计算盐酸麻黄碱 的百分含量？（99.80％）
1.分离原理
吸附色谱 分配色谱 离子交换色谱 排阻色谱
吸附色谱
根据填充剂吸附活性 对样品的吸收系数不 同而分离
充填剂：硅胶
分配色谱
根据固定相与流动相的极性不同而分为 正相分配色谱和反相分配色谱 两者的区别如下图所示：
固定相
流动相
正相分配
极性
药物分析课件第4章药物定量分析与分析方法验证
○ A．做空白试验 B．做对照实验 ○ C．做回收试验 D．增加平行测定次数 ○ E．选用多种测定方法
[B型题]
HPLC。
按分离方法分为：PC；TLC；柱色谱；GC；
（一）HPLC法
1. 对HPLC仪器一般要求 色谱柱、流动相按品种项下要求。
色谱柱的理论板数：n = 5.54(tR /Wh/2)2
2. 系统性试验 于1.5
分离度：R = 2（tR1 – tR2)/(W1 + W2); 要大
拖尾因子：T = W /2d 应在0.9 ～
1. 原料药 可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准 确
度的另一方法测定的结果进行比较。 2. 制剂 要考察辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入 原
料对照品的方法作回收率试验，然后计算RSD。 具体做法：测定高、中、低三个浓度，n=3, 共9个数据来评价
回收率的RSD＜2%；用UV和HPLC发时，一般
三．含量测定 常用的方法对照品比较
法:Ci = (Ri-Rib)/(Rr-Rrb) ×Cr
Ch.P收载地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片。
二．荧光分析仪 有二个单
色光器—激发单色光器与
发射单色光
器；且激发光源、样品池和检测器成直 角。
三、色谱分析法
按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色 谱
方法分类
2. 用硫酸水解后测定法 例如：硬脂酸镁的含量测定
Mg(C17H35COO)2 + H2SO4
H2SO4 + 2NaOH
MgSO4 + 2C17H35COOH Na2SO4 + 2H2O
（三）经氧化还原后测定法
COOH
I
I
[B型题]
HPLC。
按分离方法分为：PC；TLC；柱色谱；GC；
（一）HPLC法
1. 对HPLC仪器一般要求 色谱柱、流动相按品种项下要求。
色谱柱的理论板数：n = 5.54(tR /Wh/2)2
2. 系统性试验 于1.5
分离度：R = 2（tR1 – tR2)/(W1 + W2); 要大
拖尾因子：T = W /2d 应在0.9 ～
1. 原料药 可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准 确
度的另一方法测定的结果进行比较。 2. 制剂 要考察辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入 原
料对照品的方法作回收率试验，然后计算RSD。 具体做法：测定高、中、低三个浓度，n=3, 共9个数据来评价
回收率的RSD＜2%；用UV和HPLC发时，一般
三．含量测定 常用的方法对照品比较
法:Ci = (Ri-Rib)/(Rr-Rrb) ×Cr
Ch.P收载地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片。
二．荧光分析仪 有二个单
色光器—激发单色光器与
发射单色光
器；且激发光源、样品池和检测器成直 角。
三、色谱分析法
按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色 谱
方法分类
2. 用硫酸水解后测定法 例如：硬脂酸镁的含量测定
Mg(C17H35COO)2 + H2SO4
H2SO4 + 2NaOH
MgSO4 + 2C17H35COOH Na2SO4 + 2H2O
（三）经氧化还原后测定法
COOH
I
I
药典中常见定量分析方法概述推荐
5
课外作业 • 作业： • 请检索——高效液相色谱法在2010版药典
中的 应用 • 提交通道： • 【精品课程/论坛/药物分析作业提交/高效液
相色谱法在2010版药典中的应用】
6
• 第一节 化学分析法 • 第二节 紫外-可见分光光度法 • 第三节 高效液相色谱法 • 第四节 气相色谱法 • 第五节 分析方法的验证
第四章 药典中常见定量分析方法概述
（1）
1
• 药物的定量分析
– 准确测定药品有效成分或指标性成分的含量
2
化学分析法
重量分析 滴定分析
仪器分析法
电化学分析法 分光光度法 色谱法
3
滴定分析法的特点
• 优点
• 缺点
• 1.仪器设备简单
• 灵敏度低，药物用量大
• 2.易于操作、速度较快 • 不适合含量少的药物
– 重复性、中间精密度 – 重现性
• （三）专属性
• （四）检测限 • （五）定量限 • （六）线性 • （七）范围 • （八）耐用性
25
（一）准确度
26
• 准确度
– 系指用该方法测定的结果与真实值或参考值 接近的程度
• 一般用回收率（%）表示。 • 准确度应在规定的范围内测试。
27
1．含量测定方法的准确度
• 向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。 • 本法测定结果与另一成熟的方法进行比较 • 应明确表明 • 单个杂质和杂质总量相当于主成分的重量比
（%）或面积比（%）
30
3．数据要求
• 在规定范围内，至少用9个测定结果进行评价。 • 3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试品溶
液 • 应报告已知加入量的回收率（%） • 或测定结果平均值与真实值之差及其相对标准偏
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第四章 药典中常见定量分析方法概述
（1）
1
• 药物的定量分析
– 准确测定药品有效成分或指标性成分的含量
2
化学分析法
重量分析 滴定分析
仪器分析法
电化学分析法 分光光度法 色谱法
3
滴定分析法的特点
• 优点
• 缺点
• 1.仪器设备简单
• 灵敏度低，药物用量大
• 2.易于操作、速度较快 • 不适合含量少的药物
– 重复性、中间精密度 – 重现性
• （三）专属性
• （四）检测限 • （五）定量限 • （六）线性 • （七）范围 • （八）耐用性
25
（一）准确度
26
• 准确度
– 系指用该方法测定的结果与真实值或参考值 接近的程度
• 一般用回收率（%）表示。 • 准确度应在规定的范围内测试。
27
1．含量测定方法的准确度
• 向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。 • 本法测定结果与另一成熟的方法进行比较 • 应明确表明 • 单个杂质和杂质总量相当于主成分的重量比
（%）或面积比（%）
30
3．数据要求
• 在规定范围内，至少用9个测定结果进行评价。 • 3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试品溶
液 • 应报告已知加入量的回收率（%） • 或测定结果平均值与真实值之差及其相对标准偏
药物分析课件 第四章 药物定量分析与分析方法验证_OK
样品能在足够的氧气中燃烧分解完全样品能在足够的氧气中燃烧分解完全有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸防止爆炸的可能性防止爆炸的可能性26燃烧瓶要洁净不能残留有机溶剂不能用有机润滑剂涂抹瓶塞要有防爆措施氧气要充足确保燃烧完全产物不能有黑色炭化物燃烧产生的烟雾要被完全吸收充分振摇和放置都是为了保证吸收完全例
③要有防爆措施 ④氧气要充足，确保燃烧完全，产物不能有黑色
炭化物 ⑤燃烧产生的烟雾要被完全吸收
充分振摇和放置都是为了保证吸收完全 例：碘产生紫色烟雾；氯、氟产生白色烟雾，烟
雾颜色完全消失后，即表示吸收完全 ⑥测定含氟有机化合物时要用石英燃烧瓶
26
4、应用
含卤素、硫、磷、氟及硒等有机药物的鉴别、杂 质的检查及含量测定
100%
注射剂：标示量％＝
V0
V T 标示量
100%
V VO
T F 标示量
100%
VO : 量取注射剂的体积， ml
36
(2)间接滴定法 1）生成物滴定法
供试品＋试剂 A 化合物 B
化合物 B＋滴定液 C 化合物 D
计量滴定液消耗的量，计算供试品的含量 计算同直接滴定法
37
2）回滴定法（剩余滴定法） 原理：先在待测样品溶液中加定量、过量的滴定
10
（一）湿法破坏
（1） 硝酸-高氯酸法 适用于血、尿、组织等生物样品的破坏，有
机金属药物经破坏后，得到的无机金属离子一 般呈高价态。
本法不能用于含氮杂环药物的破坏
干法灼烧法 11
（2） 硝酸-硫酸法 适用于大多数有机物质的破坏，破坏得到的
无机金属离子均为高价态。 不能用于含碱土金属有机药物的破坏
27
氧瓶燃烧
③要有防爆措施 ④氧气要充足，确保燃烧完全，产物不能有黑色
炭化物 ⑤燃烧产生的烟雾要被完全吸收
充分振摇和放置都是为了保证吸收完全 例：碘产生紫色烟雾；氯、氟产生白色烟雾，烟
雾颜色完全消失后，即表示吸收完全 ⑥测定含氟有机化合物时要用石英燃烧瓶
26
4、应用
含卤素、硫、磷、氟及硒等有机药物的鉴别、杂 质的检查及含量测定
100%
注射剂：标示量％＝
V0
V T 标示量
100%
V VO
T F 标示量
100%
VO : 量取注射剂的体积， ml
36
(2)间接滴定法 1）生成物滴定法
供试品＋试剂 A 化合物 B
化合物 B＋滴定液 C 化合物 D
计量滴定液消耗的量，计算供试品的含量 计算同直接滴定法
37
2）回滴定法（剩余滴定法） 原理：先在待测样品溶液中加定量、过量的滴定
10
（一）湿法破坏
（1） 硝酸-高氯酸法 适用于血、尿、组织等生物样品的破坏，有
机金属药物经破坏后，得到的无机金属离子一 般呈高价态。
本法不能用于含氮杂环药物的破坏
干法灼烧法 11
（2） 硝酸-硫酸法 适用于大多数有机物质的破坏，破坏得到的
无机金属离子均为高价态。 不能用于含碱土金属有机药物的破坏
27
氧瓶燃烧
定量分析方法概述
标准曲线法
仪器的校正和检定
01
02
03
a. 波长的校正
b. 吸光度的准确性
c. 杂散光的检查
（二）仪器的校正和检定
仪器的校正和检定
波长：常用汞灯中的较强谱线、氘灯的谱线、钬玻璃尖锐吸收峰、高氯酸钬溶液
吸光度的准确度：重铬酸钾的硫酸溶液，规定波长处测定并计算 ，应符合下表规定
杂散光的检查：一定浓度的碘化钠和亚硝酸钠溶液，规定波长处测定透光率，应符合下表规定
调整流动相组分比例时，当小比例组分的百分比例X≤33%时，允许改变范围为0.7 X~1.3 X，当X＞33%时，允许改变范围为X-10% ~ X+10%
药品标准中规定的色谱条件，固定相种类、流动相组成、检测器类型不得任意改变，其他均可适当改变，以适应系统适用性实验的要求。
高效液相色谱图：信号---时间曲线
一、高效液相色谱法
温度要求：≤40℃ 流动相pH：2~8
常用紫外检测器
01
其次有二极管阵列检测器(DAD)
02
荧光检测器
03
示差折光检测器
04
蒸发光散射检侧器
05
电化学检测器和质谱检测器等
06
2.检测器Βιβλιοθήκη 010203
甲醇-水、 乙腈-水
尽可能少用含有缓冲液的流动相
有机溶剂比例不能低于5%
流动相
二、应用与实例
氧化还原滴定法 亚硝酸钠滴定法 基本原理
氧化还原滴定法
亚硝酸钠滴定法 应用:含有芳香第一胺或水解后能生成芳香第一胺的化合物
二、应用与实例
滴定条件：
加入过量的盐酸
在室温条件（10～30℃）下滴定
滴定时加入溴化钾作为催化剂
仪器的校正和检定
01
02
03
a. 波长的校正
b. 吸光度的准确性
c. 杂散光的检查
（二）仪器的校正和检定
仪器的校正和检定
波长：常用汞灯中的较强谱线、氘灯的谱线、钬玻璃尖锐吸收峰、高氯酸钬溶液
吸光度的准确度：重铬酸钾的硫酸溶液，规定波长处测定并计算 ，应符合下表规定
杂散光的检查：一定浓度的碘化钠和亚硝酸钠溶液，规定波长处测定透光率，应符合下表规定
调整流动相组分比例时，当小比例组分的百分比例X≤33%时，允许改变范围为0.7 X~1.3 X，当X＞33%时，允许改变范围为X-10% ~ X+10%
药品标准中规定的色谱条件，固定相种类、流动相组成、检测器类型不得任意改变，其他均可适当改变，以适应系统适用性实验的要求。
高效液相色谱图：信号---时间曲线
一、高效液相色谱法
温度要求：≤40℃ 流动相pH：2~8
常用紫外检测器
01
其次有二极管阵列检测器(DAD)
02
荧光检测器
03
示差折光检测器
04
蒸发光散射检侧器
05
电化学检测器和质谱检测器等
06
2.检测器Βιβλιοθήκη 010203
甲醇-水、 乙腈-水
尽可能少用含有缓冲液的流动相
有机溶剂比例不能低于5%
流动相
二、应用与实例
氧化还原滴定法 亚硝酸钠滴定法 基本原理
氧化还原滴定法
亚硝酸钠滴定法 应用:含有芳香第一胺或水解后能生成芳香第一胺的化合物
二、应用与实例
滴定条件：
加入过量的盐酸
在室温条件（10～30℃）下滴定
滴定时加入溴化钾作为催化剂
第四章药物定量分析
第四章药物定量分析第四章药物定量分析第四章药物定量分析第一节定量分析样品的前处理方法常用的处理方法：药物分析中常用的分析方法1.不经有机破坏的分析方法2.经有机破坏的分析方法一．不经有机破坏的分析方法（1）直接测定法。
如富马酸亚铁( 用于各种原因引起的缺铁性贫血) 溶于热稀矿酸，采用铈量法，邻二氮菲作指示剂富马酸亚铁的含量测定:取本品约0.3g，精密称定，加稀硫酸15ml，加热溶解后，放冷，加新沸过的冷水50ml与邻二氮菲指示液2滴，立即用硫酸铈滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。
每1ml硫酸铈滴定液(0.1mol/L)相当于16.99mg。
（2）经水解后测定法1. 直接回流后测定法. 例如：三氯叔丁醇的含量测定CCl3-C(CH3)2-OH + 4NaOH = (CH3)2CO +3NaCl + HCOONa +2H2ONaCl+AgNO3= AgCl + NaNO3 AgNO3+ NH4SCN = AgSCN + NH4NO32. 用硫酸水解后测定法. 例如：硬脂酸镁的含量测定Mg(C17H35COO)2 + H2SO4 =MgSO4 + 2C17H35COOH H2SO4+2NaOH =Na2SO4 + 2H2O取本品约0.1g，精密称定，精密加硫酸滴定液(0.05mol/L)50ml，煮沸至油滴澄清,继续加热10min，放冷至室温，加甲基橙指示液1-2滴，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定。
每1ml 硫酸滴定液(0.05mol/L)相当于2.016mg 的MgO 。
（3）经氧化还原后测定法1. 碱性还原后测定例如：泛影酸（用于泌尿系造影）的含量测定(曙红钠指示剂)2. 酸性还原后测定(硫酸铁铵指示剂) 例如：碘番酸（口服胆囊造影剂）的含量测定 Zn 还原后银量法3. 利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量（1）含锑药物例如：葡萄糖酸锑的含量测定Sb5+ +2KI =Sb3+ + 2K+ + I2 I2 +2Na2S2O3 =2NaI +Na2S4O6 （连四硫酸钠）2）含铁药物 2Fe3+ + 2KI =2Fe2+ + 2K+ + I2 I2 +2Na2S2O3 =2NaI + Na2S4O6二、经有机破坏的分析方法药物分析中常用的有机破坏的方法有干法破坏湿法破坏氧瓶燃烧法(一)湿法破坏HNO3-HClO4法；HNO3-H2SO4法；H2SO4-硫酸盐法；HNO3-H2SO4-HClO4法；H2SO4-H2O2；H2SO4-KMnO4COOH I I I NHCOCH 3CH 3CONH COOH H 2N NH 2+ 11NaOH + 3Zn + 3NaI + 2CH 3COONa + 3NaZnO 2 + 3H 2O NaI + AgNO 3 AgI + NaNO 3(二)干法破坏（加Na2CO3或MgO以助灰化；温度控制在420℃）本法系将有机物灼烧灰化以达分解的目的。
第4章-药物定量分析
*已有重现性验证，则不需
**视具体情况予以验证
第四节 生物样品分析的 基本要求
一．常用样品的种类、采集和贮藏 二．生物样品分析前处理技术 三．定量分析方法的验证
一．常用样品的种类、采集和贮藏 （一）生物样品
常用品种： 血液、尿液、唾液 其次： 可用乳汁、泪液、脑脊液、 胆汁等。
1．血样
血细胞 抗凝 血浆（plasma） 血小板 血液 自然 血清（serum） 血细胞
%
%
2．仪器校正和检定 波长校正：仪器使用前校正 吸收度准确度的检定： 用重铬酸钾的硫酸溶液检定 杂散光的检查：
3. 对溶剂的要求 • 溶剂在所选波长附近的吸收度应不 超过一定值 • 空气为空白
4．测定法 核对: 供试品的实际吸收峰波长是否与药 典给出的波长一致(±1nm) 如果不一致，可能与试样的真伪、 纯度及仪器波长的准确度有关.
验证分析方法的具体内容
鉴 别 准确度 重复性 精密度 中间精密度 专属性 检测限 定量限 线性 范围 耐用性 － ＋ － － － － ＋ ＋* ＋ －** ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ － － － ＋ ＋* ＋ － － ＋ ＋ ＋ － － 杂质检查 定量 ＋ ＋ 限度 － － 含量测定及 溶出度测定 ＋ ＋
ΔC x Cx = ( Ais / Ax ) − 1
Cx和Ax：供试品中组分X的浓度和色谱峰面积； △Cx：所加入的已知浓度的待测组分对照品的 浓度； Ais：加入对照品后组分X的色谱峰面积。
第三节
药品分析方法的验证
需验证的分析项目：
鉴别试验 杂质限度或定量检查 原料药或制剂中有效成分的含量测定 制剂中其它成分的含量测定 溶出度、释放度测定方法
碱水解后测定法： 适用于卤素原子结合不牢固的含卤素 有机药物 三氯叔丁醇的含测 酸水解后测定法： 适用于金属原子不直接与碳原子相连 的含金属的有机药物。 十一稀酸锌的含测
药典常用定量分析方法概述
测Br－→曙红
D．避免阳光直射 E．被测物浓度应足够大 F．被测阴离子→阳离子指示剂 被测阳离子→阴离子指示剂
适用范围： 可直接测定CL-，Br-，I-，SCN-和Ag +
电位滴定法
原理：是一种容量分析中确定终点或选择、
核对指示剂变色域的方法。 应用标准溶液滴定待测物溶液过程中,借 助指示电极﹑参比电极和电位计来监测滴定 时电极电位的变化率, 发生“突跃”的最大 点就是滴定的终点,以替代一般指示剂用变色 来指示终点的方法。
-
2I-
I
2
I
0.5335V
I3- （助溶） 3 I-
I3
I
0.5345V
注：pH < 9 时，不受酸度影响，应用范围更为广泛
（一）直接碘量法:
利用I2的弱氧化性质滴定还原物质
测定物：具有还原性物质
' I '
3
I
可测：S2-，Sn(Ⅱ)，S2O32-，SO32 酸度要求：弱酸性，中性，或弱碱性(pH小于9) • 强酸性介质：I-发生氧化导致终点拖后； 淀粉水解成糊精导致终点不敏锐 • 强碱性介质：I2发生歧化反应 4I-+O2 + 4H+ 2I2 + 2H2O（氧化反应）
HAsO2
控制pH 8 H 3 AsO4
I
3
I
C I 2 VI 2 2
m As2O3 1000 M As2O3
NaS2O3标准溶液比较法 1 C Na2 S 2O 3 V Na 2 S 2O3 C I2 2 VI 2
（五）淀粉指示剂
要求：室温；弱酸性；新鲜配制 加入时间： 直接碘量法 —— 滴定前加入（终点：无色 → 深蓝色 间接碘量法——近终点加入（终点：深蓝色消失） 变色原理： I （过量）+ II2 3
D．避免阳光直射 E．被测物浓度应足够大 F．被测阴离子→阳离子指示剂 被测阳离子→阴离子指示剂
适用范围： 可直接测定CL-，Br-，I-，SCN-和Ag +
电位滴定法
原理：是一种容量分析中确定终点或选择、
核对指示剂变色域的方法。 应用标准溶液滴定待测物溶液过程中,借 助指示电极﹑参比电极和电位计来监测滴定 时电极电位的变化率, 发生“突跃”的最大 点就是滴定的终点,以替代一般指示剂用变色 来指示终点的方法。
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2I-
I
2
I
0.5335V
I3- （助溶） 3 I-
I3
I
0.5345V
注：pH < 9 时，不受酸度影响，应用范围更为广泛
（一）直接碘量法:
利用I2的弱氧化性质滴定还原物质
测定物：具有还原性物质
' I '
3
I
可测：S2-，Sn(Ⅱ)，S2O32-，SO32 酸度要求：弱酸性，中性，或弱碱性(pH小于9) • 强酸性介质：I-发生氧化导致终点拖后； 淀粉水解成糊精导致终点不敏锐 • 强碱性介质：I2发生歧化反应 4I-+O2 + 4H+ 2I2 + 2H2O（氧化反应）
HAsO2
控制pH 8 H 3 AsO4
I
3
I
C I 2 VI 2 2
m As2O3 1000 M As2O3
NaS2O3标准溶液比较法 1 C Na2 S 2O 3 V Na 2 S 2O3 C I2 2 VI 2
（五）淀粉指示剂
要求：室温；弱酸性；新鲜配制 加入时间： 直接碘量法 —— 滴定前加入（终点：无色 → 深蓝色 间接碘量法——近终点加入（终点：深蓝色消失） 变色原理： I （过量）+ II2 3
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保留时间
峰面积
供试品 内标物
7.25 11.00
2989311 4020105
• 另取氢化可的松对照品13.75mg，配成25ml，
同法测定。测得数据如下：
保留时间 对照品 内标物 7.25 11.00
峰面积 3381565 4020000
按内标法以峰面积计算，求供试品的百分含量：
CS = 0.4（mg/ml）；
3
由于98.48%＜99.0%， 故本品含量不合格
2．剩余滴定法
(V0 V) T F 10 含量% 100% m
公式推导
3
实例分析
• 司可巴比妥钠原料药含量测定：取本品0.1041g，置250ml
碘瓶中，加水10m1，振摇使溶解，精密加溴滴定液 （0.1mol/L）25ml，再加盐酸5ml，立即密塞并振摇1min， 在暗处静置15min后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10ml， 立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（0.1012mol/L） 滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失， 并将滴定结果用空白试验校正。每1ml溴滴定液（0.1mo1/L） 相当于13.01mg的C12H17N2NaO3。按干燥品计算，含 C12H17N2NaO3不得少于98.5%。已知样品消耗硫代硫酸钠滴 定液（0.1012mol/L）17.20ml，空白实验消耗硫代硫酸钠滴 定液（0.1012mol/L）25.02ml。
称取头孢唑林钠供试品3份，分别为28.13mg、
29.35mg和27.10mg，按上法测定，分别取10µl溶液注
入液相色谱仪，测得峰面积分别为2634858、2763699 和2536847，求供试品的百分含量。
AX CR V D AR 含量% 100% m
供试品和对照品配制溶液的方法、稀释倍数完全相同，故
3
• 盐酸普鲁卡因注射剂（规格1ml∶50mg）
AS
AR
（1）计算校正因子：
为内标物质的峰面积或峰高； 为对照品的峰面积或峰高； 为内标物质的浓度（mg/l）； 为对照品的浓度（mg/l）。
CS
CR
（2）计算供试品的百分含量：
f AX CS D V Cx D V 含量% 100% m AS m
AX CX f AS / C S
CX D V 0.49 25 含量 100% 100% 98.2% m 12.48
• 某药厂用高效液相色谱法外标法测定头孢唑林钠含量，
取含量为99.5%的头孢唑林钠对照品25.13mg，配成溶
液，取此溶液10µl注入液相色谱仪，测定峰面积，3次
测定值分别为：2490189、2492796和2492178；另外
V T F 10 W 标示量% 100% m S
0.1008 5.948 3 18.47 27.04 10 0.1 10 100% 99.9% 0.5996 0.5
3
含量合格
（一）滴定分析法
• • 2.注射剂 直接滴定法
•
剩余滴定法
（1）直接滴定法：
实例分析
• 呋塞米含量测定：取本品0.4988g，加乙醇30ml， 微温使溶解，放冷，加甲酚红指示液4滴与麝香草
酚蓝指示液1滴，用氢氧化钠滴定液（0.1003
mol/L）滴定至溶液显紫红色，消耗氢氧化钠滴 定液（0.1003mol/L）14.86ml；并将滴定的结果 用空白试验校正，消耗氢氧化钠滴定液 （0.1003mol/L）0.05ml。每1ml氢氧化钠滴定液
冷，加酚酞指示剂3滴，用氢氧化钠滴定液
（0.1008mol/L）滴定至粉红色，消耗量18.47ml。每
1ml氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于27.04ml的甲 苯磺丁脲。《中国药典》现行版规定本品含甲苯磺丁 脲应为标示量的95.0%～105%。试计算本品的标示量 百分含量，并判断是否符合规定。
(V0 V) T F 10 含量% 100% m
3
0.1012 (25.02 17.20) 13.01 103 0 . 1 100% 98.7% 0.1043
测定结果大于98.5%， 故本品含量合格。
（二）分光光度法
• 1．对照品对照法 • 2．吸收系数法
（0.1mol/L）相当于33.07mg的呋塞米。按干燥品
计算，含C12H11ClN2O5S不得少于99.0%。
(V V0 ) T F 10 含量% 100% m
0.1003 (14.86 0.05) 33.07 103 0.1 100% 98.48% 0.4988
• 1．直接滴定法 • 2．剩余滴定法
1．直接滴定法
(V V0 ) T F 10 含量% 100% m
V
为供试品消耗滴定液的体积（ml）； 为空白试验消耗滴定液的体积（ml）
3
V0
T
为滴定度（mg/ml）；
为滴定液浓度校正因数 为供试品取样量（g）
F m
校正因数F
滴定液实际浓度 F 滴定液规定浓度
AS CS f D
AX 为供试品（或其杂）峰面积或峰高； C X 为供试品（或其杂质）的浓度（mg/ml）；
为内标物质的峰面积或峰高； 为内标物质的浓度（mg/ml）； 为校正因子； 为供试品的稀释倍数； 为供试品的质量（g）
m
实例分析
• 氢化可的松原料药含量测定：
• 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷 键合硅胶为填充剂甲醇-水（70∶30）为流动 相；检测波长为240nm。理论板数按氢化可的 松峰计算不低于2000，氢化可的松峰与内标物 质峰的分离度应符合要求
C R 13.75 / 25 0.55 （mg / ml）
AS / C S 4020000 / 0.40 校正因子( f ) 1.6345 AR / C R 3381565 / 0.55
AX 2989311 CR f 1.6345 0.49 （m g / m l） AS / C S 4020105 / 0.40
第四章 药典中常见定量分析方法概述
（2） 2010.9.17
第六节 定量分析计算
• 药物的定量分析
– 准确测定药品有效成分或指标性成分的含量 – 原料药与制剂含量表示方法不同
• 原料药的含量用百分含量表示 • 制剂的含量则用标示量的百分含量表示。
原料药的百分含量
mx 含量% 100% m
• （一）滴定分析法
• （二）紫外-可见分光光度法 • （三）色谱法（HPLC、PC）
（一）滴定分析法
• • 1.片剂 直接滴定法
•
剩余滴定法
（1）直接滴定法：
V T F 10 W 标示量% 100% m S
(V V0 ) T F 10 W 标示量% 100% m S
1．外标法
Ax CR V D AR 含量% 100% m
AX 为供试品峰面积或峰高；
AR 为对照品的峰面积或峰高；
V
C R 为对照品的浓度（mg/ml）；
为供试品初次配制的体积（ml）； 为供试品的稀释倍数；
D
m
为供试品的质量（g）
2．内标加校正因子法
AS /CS 校正因子（f ） AR /CR
AX mR AR 含量% 100% m
对照品平均峰面积：
2490189 2492796 2492178 2491721 3
第1次测定 第2次测定 第3次测定
2634858 2491721 100% 93.99% 含量% 28.13 2763699 25.13 99.5% 2491721 100% 94.49% 含量% 29.35 2536847 25.13 99.5% 2491721 100% 93.94% 含量% 27.10 93.99% 94.49% 93.94% 平均含量 % 94.1% 3 25.13 99.5
mx m
为实测值
为供试品的重量
制剂 标示量的百分含量
每片(每支)实测量 标示量% 100% 标示量 mx 标示量% 100% S m x 为每片（每支）实测量；
S 为标示量
一、原料药百分含量的计算
• （一）滴定分析法
• （二）分光光度法 • （三）色谱法（HPLC、GC）
（一）滴定分析法
1．对照品对照法
Ax CR V D AR 含量% 100% m
AX 为供试品溶液的吸光度；
C R 为对照品溶液的浓度（g/ml）； AR 为对照品溶液的吸光度； m 为称取的供试品重量（g）； D 为供试品的稀释倍数；
V
为供试品初次配制的体积（ml）
• 奥沙西泮原料药含量测定：精密称定0.0150g，置
200ml量瓶中，加乙醇150ml，于温水浴中加热，振
摇使奥沙西泮溶解，放冷，用乙醇稀释至刻度，摇
匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，用乙醇稀释至
刻度，摇匀，在229nm的波长处测定吸光度为0.480；
另精密称取奥沙西泮对照品0.0149g，同法操作，测
得229nm的波长处测定吸光度为0.460；药典规定本
测定结果在98.0％～102.0％范围内 故本品含量合格。
2．吸收系数法
A 1 V D 1% E1cm 100 含量% 100% m
A
为测定的吸光度； 为供试品初次配制的体积（ml）； 为供试品的稀释倍数；
1% E1cm 为供试品的百分吸收系数；
V
D m
为供试品的质量（g）。
• 对乙酰氨基酚原料药含量测定：精密称取对乙 酰氨基酚0.0411g，置250ml量瓶中，加0.4% 氢氧化钠溶液50ml，加水至刻度，摇匀，精密 量取5ml，置100ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠 溶液10ml，加水至刻度，摇匀。依照分光光度 法，在257nm波长处测得吸收度为0.582。按