实验一物染色体压片技1
植物染色体压片法
第一部分植物染色体压片法一实验目的1. 学习并掌握根尖处理、染色、压片及制片观察的方法。
2. 观察有丝分裂各时期染色体的形态变化，了解有丝分裂全过程。
二实验原理高等植物有丝分裂主要发生在根尖、茎尖生长点及幼叶等器官的分生组织(分生区)，其中根尖是最常用的材料：①根尖取材容易，操作和鉴定也比其它器官与组织方便；②实验室内采用种子萌发后所长出的新鲜幼嫩根尖，不受植物生长季节的影响和限制，并且可以大量获得；③对于某些珍贵而又稀少的试验材料，取用自然条件下生长植株的根尖，比取用茎尖、花器等对材料的伤害要小得多；④采用实验室内种子发根，切取根尖后的种苗通常还可以进行正常种植，利于后续研究进行。
有丝分裂期在整个细胞周期中所占的时间相对较短，有丝分裂制片的主要目的是进行染色体鉴定，希望观察到更多分裂相，尤其是分裂中期相，通常要对材料进行不同的预处理。
预处理主要通过抑制和破坏纺锤丝的形成来获得更多的中期分裂相；同时，预处理还可改变细胞质的粘度，促使染色体缩短和分散，便于压片和观察。
常用的预处理有物理法、化学法、混合处理法等。
植物细胞的细胞壁对细胞形态和结构起支撑和保护作用，分生组织的细胞壁结构将分生细胞结合成一个整体，因此在压片之前需要采用适当方法软化或部分分解细胞壁使细胞间易于分离，这一操作称为解离。
同时，解离也可适当清除部分细胞质，使细胞质背景趋于透明化，便于观察染色体。
常用的解离方法主要有酸解法和酶解法。
酸解法：步骤简便、容易掌握。
根尖分生组织经过酸解和压片后，呈单细胞。
酸解法广泛用于染色体计数、核型分析和染色体畸变的观察及相关分析。
酶解法：常用于染色体显带技术或姊妹染色单体交换研究。
通过解离和压片，分生细胞的原生质体能够从细胞壁里压出，使染色体周围不带有细胞质或仅有少量细胞质，让后续制片处理直接作用于染色体。
在普通光学显微镜下观察染色体形态结构还需要对材料进行染色，通常采用染色体染色效果好而细胞质着色少的碱性染料、酸性染料或孚尔根试剂染色。
实验一-植物细胞有丝分裂及染色体行为的观察
使细胞中的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变为不溶性物质，以保持活体的形态；
使组织内各种物质成分产生不同的折光率，便于观察和鉴定； 使不同组织成分对染料有不同的亲和力，便于染色； 防止细胞过度收缩或膨胀，失去原有的形态结构。
醋酸洋红
将洋红粉末1g倒入100mL45%醋酸溶液中，边煮边搅拌， 煮沸(沸腾时间不超过30s)，然后悬入一生锈的小铁钉 于染液中，过1min取出，或加入1%～2%铁明矾水溶液 5-10滴，至此液变为暗红色而不发生沉淀为止。静置 12h后，过滤于一棕色试剂瓶中，储存备用。
卡宝品红
配制方法： 先配成三种原液,再配成染色液 原液A: 3 g碱性品红溶于100 ml 70%酒精中. 原液B: 取原液A 10 ml加入到90 ml 5%石炭酸水溶液中. 原液C:. 取原液B 55 ml,加入6 ml 冰醋酸和6 ml福尔马林(38%的甲醛). (原液A和原液C可长期保存,原液B限两周内使用). 染色液:取C液10—20 m1,加45%冰醋酸80～90 ml,再加山梨醇1.8 g,配成 10%～20%浓度的石炭酸品红液,放置两周后使用,效果显著(若立即用,则 着色能力差). 适用范围:适用于植物组织压片法和涂片法,染色体着色深,保存性好,使 用2—3年不变质.山梨醇为助渗剂,兼有稳定染色液的作用,假如没有山梨
6.镜检
• 压好的片先在低倍镜下镜检，找到分裂细胞后，再转换成 高倍镜观察染色体动态变化。 • 如果染色体分散良好，图像清晰，可以进行显微照相保存。
一个解离良好的材料，只要用镊子尖轻轻敲打盖玻片，分生组织细胞就可以铺 展成薄薄的一层，再用毛边纸把多余的染色液吸干，经显微镜检查后，选择理 想的分裂细胞，再在这个细胞附近轻轻敲打，使重叠的染色体渐渐分散，就能 得到理想的分裂相。
果蝇唾液腺
果蝇唾腺染色体制片技术PB12207007 王思雨一、背景知识1、实验对象介绍：黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）昆虫纲，双翅目，果蝇科，果蝇属。
2、选择原因：①饲养容易。
在常温下，以玉米粉等作饲料就可以生长，繁殖。
②生长迅速,产量大。
十二天左右就可完成一个世代，每个受精的雌蝇可产卵400～500个，因此在短时间内就可获得大量的子代，便于遗传学分析。
（25℃下，卵→幼虫5天，幼虫→成虫4天）③染色体数少。
只有4对。
④唾腺染色体制作容易。
横纹清晰，是细胞学观察的好材料。
⑤突变性状多，而且多数是形态突变，便于观察。
饲养简便：形体小，食物简单⑥实验处理方便，易于重复实验，便于观察分析结果。
3、成虫雌雄的鉴别4、果蝇染色体模式图染色体的带间带异染色质染色中心胀泡5、实验实例6、实验目的和要求①练习分离果蝇幼虫唾腺的技术，掌握唾腺染色体的制片方法。
②观察了解果蝇唾腺的形态学及遗传学特征。
③认识黑腹果蝇的形态学特征；了解果蝇在遗传学研究中的突出贡献。
7、唾液腺的分离效果图8、道德9、注意事项①染色十分钟时最好盖上盖玻片②敲片时染色液稍多些，或用物垫着盖玻片，轻轻敲打③剥离好唾液腺请让老师帮助确定④在四倍物镜下解剖果蝇⑤在前一个虫子没确定失败之前不要进行下一个虫子的解剖⑥晚七点之前必须全部离开教室10、实验结果果蝇唾液腺分离（显微镜下直接观察4*10）果蝇唾液腺分离（显微镜下直接观察4*10）果蝇唾液腺染色体压片观察（40*10）果蝇唾液腺染色体压片观察（40*10）果蝇唾液腺染色体压片观察（40*10）果蝇唾液腺染色体压片观察（40*10）11、实验反思实验中遇到的比较大的问题是果蝇唾液腺的分离。
经过体验发现，解剖时的手法比较重要，要分别按压住头部与尾部，使得果蝇幼虫在相应的位置断开，记得滴加清水。
然后认真寻找，要有耐心，因为显微镜下操作与肉眼操作正好相反。
故开始有些不喜欢，可以先用一个解剖针在肉眼下确定大致位置，然后在显微镜下缓慢移动。
实验 植物染色体组型分析
实验植物染色体组型分析一、实验目的通过本实验，要求学生初步掌握植物有丝分裂观察的基本流程（包括试验材料的选取、预处理、固定、离解、染色、压片和核型观察等）和染色体组型的分析方法。
二、实验原理有丝分裂是细胞均等增殖的过程，是体细胞分裂的主要方式。
在有丝分裂过程中，细胞内每条染色体都能复制一份，然后分配到子细胞中，因此两个子细胞与母细胞所含的染色体在数目、形态和性质上均是相同的，在各种生长旺盛的植物组织中均存在着有丝分裂。
三、实验材料洋葱根尖四、实验用具显微镜、载玻片、盖玻片、酒精灯、解剖用具、刀片、秋水仙素8—羟基喹啉、醋酸洋红（或醋酸地衣红）、盐酸法莫氏固定液等。
五、实验方法1、洋葱根尖的培养在实验课前3～4天，取洋葱一个，放在广口瓶上。
瓶内装满清水，让洋葱的底部接触到瓶内的水面。
把这个装置放在温暖的地方，注意经常换水，使洋葱的底部总是接触到水。
待根长5 cm时，可取生长健壮的根尖制片观察。
2、预备处理细胞分裂时由于纺锤体的牵引及染色体不一定都缩到最短，故在制片时染色体易相互缠绕、重叠，所以，材料在固定前必须经理化因素预先处理，目的是改变细胞质粘度，破坏或抑制纺锤体的形成，使染色体缩短，并促使染色体分散等。
常用的药物浓度，处理如下：0.04%—0.2%秋水仙碱水溶液处理2—5小时，a—溴代萘饱和水溶液处理0.5—4小时；对二氯苯饱和水溶液处理2—4小时；0.002M—0.2M 8羟基喹啉2—4小时，上述处理在室温下即可，若低温处理则用蒸馏水在1—4度下处理24小时。
这些药物对植物细胞都有不同程度的毒害作用，高温或长时间的处理，往往会产生多倍体或使染色体发生粘结、聚缩和解体现象，因此处理时间一般以4小时以内为适宜，温度以10—16度效果较好。
本实验：用0.002 mol／L的8-羟基喹啉20℃条件下避光处理4 h，或者0.7mM的环己酰胺中室温处理8h，将处理液吸出，然后用蒸馏水漂洗。
3、固定目的是将细胞迅速杀死，并使染色体的结构尽可能保持不变和便于染色。
根尖压片实验(使用)
实验2 植物染色体压片法
一、实验原理
植物根尖的分生细胞的有丝分裂，每天都有分裂高峰时间，此时把根尖固定，经过染色和压片，再置放在显微镜下观察，可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。
二、实验目的
通过实验，掌握根尖染色体压片法。
三、实验材料
小麦的种子。
四、实验步骤
（1）催芽：5-20粒种子放入培养皿（铺两层滤纸），有一薄层水。
室温下浸种24h左右。
（2）低温预处理：待种子刚萌发时（露白），放入4℃冰箱处理1-2天（一般为1天，24～36h也可）。
（3）生根：将培养皿中的水吸干。
种子腹沟朝下。
放入25℃培养箱中17～20h，不光照。
一般在头一天的早上10点左右放，第二天10点左右取根。
一天中取根较好的时间在早上10点左右，下午4点左右。
（4）取材：当根生长到0.5-2cm时，取根尖0.5cm左右，放入盛水试管中（取根时速度尽量快）。
（5）预处理：在1-4℃下，离体处理24-36小时，最好放在冰浴中，置4℃冰箱。
（6）固定：用卡诺氏Ⅰ（C arnoy’sⅠ）固定液，无水乙醇或95%乙醇：冰乙酸(体积比)=3：1，固定2—7天，4℃冰箱中存放或冰浴中。
（7）转入70%乙醇中保存（-20℃可长期保存）。
第（8）可以不要：（8）根尖处理：将根尖从保存液（70%乙醇）中取出，清水冲洗，加入1N盐酸适量，65℃水浴7-8分钟，取出清水冲洗，
放入锡夫试剂，20分钟后观察（制片观察）。
开放实验 染色体制片
玉米、洋葱、人染色体
果蝇染色体
三、实验步骤
利用血淋巴细胞制备染色体标本步骤 ： 1、采血（0.5ml） 可在采血前向实验动物腹腔注射0.01％秋水素，因血易在注射器
内凝固，故注射器预先经肝素纳浸湿，可采心脏血、静脉血。 2、低渗 加入经37℃预温的0.0375mol/L KCl溶液至7ml混匀后，置37℃水浴中低渗
=3：1)中固定4-5h，固定后的根尖若不能及时制片，用蒸馏水冲洗后， 换70%
的乙醇溶液，置冰箱中保存备用 。
3、解离 根尖从冰箱中取出后，先用自来水冲洗掉根表面的乙醇，再用1N HCL
酸解根尖，温度55—60℃左右，时间1—2分钟，以根变软为止。
4、染色 用水冲洗根表面的HCL，取前端乳白色部分放在干净的载玻片上捣
处理20分钟左右﹙目的 红细胞将破裂，白细胞吸水充分膨大，利于染色体的分散﹚。 3、预固定 加1ml新配制的甲醇-冰醋酸3∶1的固定液，待充分混匀后，离心
1500r/min、 10min ，弃上清液，留管底细胞。 4、固定 加5 ml固定液，室温20 min，再离心，1500r/min、10min，弃上清液，留
培养基的一种配方 ：
1640 4ml ：优质胎牛血清 1 ml
PHA 0.2mg ：肝素钠 0.03ml ： 双抗
PHA (植物凝集素，从血豆中提取的一种糖蛋白，可刺激淋巴母细胞进 行分裂 ) 肝素钠 (配成的浓度为700—1000个效价/ml，起防止血液凝固用 ) ，
双抗（青霉素和链霉素，最终浓度各为100单位/ml ，起杀死培养基中
得染色体的不同带型。 以上采的血样未经培养直接制片，还可将血放入到培养基中培养一定的时间，再制 片。但采血及培养基的配制都必须在无菌室内进行。制片过程将步骤1改为1★其余步 骤相同。 1★收集细胞 速1500r/min 将含有血细胞的培养基（培养瓶充分摇匀）转移到离心管中离心，转 10min ，弃上清液（用吸管吸走，不要将下部细胞吸走），留1ml 。
第一章染色体制片方法
➢ 8-羟基喹啉（8-hydroxyquinoline），多用 0.002mol/L水溶液。适宜中、小染色体，离 体处理好。优点在于显示缢痕清晰，缺点在 于中期分裂相不如其他的多，但总体优于其 他药物。
➢ α-溴萘（α-Bromonaphthalene ）,饱和液 现配最好，适于禾本科及水生植物，活体处 理。100ml加2滴即可。
2.染色体形态比较完整：染色体各组 成成分—长臂、短臂、着丝点、随体、 染色体单体的显示都比较清楚，有利 于染色体的测量与分析。
3.方法简单，不需特殊设备，不需压 片，揭盖片等程序，且Giemsa染色 后，不用树胶封片，可在显微镜下直 接观察，方便，长期保存不褪色。
2.4 制片过程中的问题及可能原因
原因：
为预处理不足的明显标志。即预处理 液未能阻止纺锤丝的形成和活动，使 细胞分裂过程能顺利进行到底。这主 要是预处理液变质或处理时间太短所 致。
（5）染色体发生粘连或聚集成团而 不分散。
原因：
a.预处理液浓度太高或温度太高。
b.固定时间太短。
c.软化或酶解时间太长，染色体过度 膨胀。
（6）细胞核或染色体完全解体，而 只能看见细胞壁或细胞核与染色体 只见染色成淡、残缺不全的轮廓， 有时可见到细胞核碎裂成大小不等 的碎块。
➢ 放线菌酮（cycloheximide）,适宜早中期染 色体供核型分析和G-带研究。20-50ppm， 小+α-溴萘，100ml对二氯苯饱 和液加1-2滴α-溴萘，对大、中染色体 作用迅速。可在短时间内明显缩短。
实验动物染色体标本的制备与观察
注射器 解剖器 移液管 载玻片 盖玻片 光学显微镜
四、实验内容
1、注射秋水仙素（按4μg/g的剂量） 2、取骨髓细胞：股骨，剪掉两端，2%柠檬酸钠冲 洗，离心管收集，取下针头，反复吸打 3、低渗： 0.4%Kcl，8~10ml，37±0.5℃， 10min； 1000rpm，8min 4、固定：固定液5ml，注意不要冲动细胞团块 （？），轻轻吸打细胞，静置20min。固定2~3次。 5、滴片：干净、冷、湿的载玻片上，2~3滴，文 火烘干。 6、染色:Giemsa染液,10min。 7、镜检。（绘图） 疑问：有的染成蓝色，有的染成紫红色，为什么？
3、小白鼠染色体的特点：呈“U”型，全部 为端着丝粒染色体； 40条（19对常+1对性）
一些常见动物的染色体数目： 家兔：44 野兔：48 猪：38 黄牛：60 马：64 驴子：62 骡子：63 猩猩：48 金丝猴：44 猫：38 狗：78
三、实验材料与仪器
1、材料：小白鼠 2、试剂：
2%柠檬酸钠、0.1%秋水仙素（现用现 配）、Giemsa染液（pH6.8） 0.4%Kcl溶液
颈椎脱臼法
股骨
取骨髓细胞
滴片
图: 小白鼠染色体
拓展实验
1、实验前不给小白鼠腹腔注射秋水仙素 （每组2只）
2、注射秋水仙素后2h、 4h、 6h、 8h 后再进行试验
五、作业及思考题
1、制备的小白鼠染色体标本，分裂相是否 多，染色体分散程度如何？有什么不足处， 原因何在？
2、如果在实验前不给小白鼠腹腔注射秋水 仙素，所制备的染色体制片会出现怎样的情 况？
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实验一植物染色体压片技术
一、实验原理：
植物染色体压片技术是利用化学或物理的方式，将具有割裂能力的细胞维持原有的割裂状态，并对其染色体进行染色，压片后观看它的染色体割裂的一种方式。
二、实验目的：
植物染色体压片技术是细胞遗传学和细胞分类学等研究中应用最为普遍的大体技术，是其他新技术所不能完全取代的，是从事染色体研究的工作者第一应该把握的一项大体的实验方式。
三、材料的制备：
黑麦根尖(2n=14)
根尖材料的制备：
1.浸泡：大、油、壳浸泡24h(23~25℃)；小、裸的不浸泡。
2. 发根：将材料放入具有团粒结构条件的土壤中培育（锯木屑、土壤、砾石、麦杆、谷草)；最适温度(23~32℃)；培育24h再放入0~4℃冰处置1~7天。
目的:(1)使割裂速度减慢，根尖长度整齐一致；
(2)调剂工作时刻。
再将材料从冰箱中掏出又放回最适温度条件下培育1~2天；待根尖长度为~2Cm即可处置。
3. 愈伤材料的制备：(适合春、夏两季)用刀片将树杆割去爱惜组织露出伤口，用75﹪乙醇消毒包裹一天，再用50~75ppm赤霉素处置；几天后长出白色幼嫩的愈伤组织即可固定。
四、预处置：
1. 方式：(化学和物理两种)
(1) 化学方式：(适合所有生物)
a. 秋水仙素~﹪ (白色粉末，易溶于水的巨毒药品)；
b. 0.002M 8-羟基喹啉 (淡黄色晶体，用少量的乙醇溶解再稀释，
对禾本科植物的随体表现很清楚)；
C.а-溴萘饱和液 (淡黄色的乳浊液，易溶于乙醇和苯；难溶于
水，100ml水中倒入1~2滴猛烈的振动5分钟)；
（以上abc三种药剂在15~18℃温度下处置3~5h）
d. 对二氯苯饱和液 (淡黄色的晶体，难溶于水；具有强烈的侵
蚀性，只能处置1~。
(2) 物理方式：(适合禾本科作物，本次实验所采纳)
冰水混合物在0~4℃温度下处置24h。
预处置的目的破坏或抑制纺锤体形成；增加中期图象，改变细胞质的粘度，使染色体缩短变粗，易于染色体的显带及研究。
五、固定：
卡诺氏Ⅰ 3︰1 (乙醇︰醋酸);
卡诺氏Ⅱ 6︰3︰1 （5︰3︰2）(乙醇︰氯仿︰醋酸);
固定的目的利用药剂迅速杀死正在割裂的细胞，使之维持细胞中的染色体处于被固定前的原有状态。
六、保留：
冲洗置换，从95﹪~70﹪的乙醇梯度置换；每次置换需停留
20~30min,目的是将固定液中的醋酸从材料中置换掉，最后将材料保留在70﹪的乙醇中备用。
七、解离：(酸解、酶解)
一、1mol/HCl 在60℃水浴中处置5~10min；
二、HCl 在25℃水浴中处置1~；
3、酶解纤维素酶＋果胶酶。
解离的目的使胞间层的果胶类物质解体，利于细胞分散，有助于压片；同时解离也可适当清除部份细胞质，使细胞质背景趋于透明化，
便于观看染色体。
经常使用的解离方式要紧有酸解法和酶解法。
八、染色：
一、﹪的醋酸洋红，5~30min；
2锡夫试剂、减性品红、石炭酸品红。
染色的目的是为了更好的辨别染色体。
本次实验用的染料是﹪的醋酸洋红。
九、制片：
制得10张割裂相好的片子，保留在片盒内，以备显带实验所用。
十、揭片：
将制片在未干燥之前，在－176℃液氮中冷冻50~70秒，掏出后迅速地揭片。
实验二植物染色体去壁、低渗、火焰
干燥制片技术
一、实验原理：
用此法能够显著提高染色体的分散程度和平稳性，能够减少染色体的变形、断裂等现象，也能够减轻细胞质对染色体的覆盖。
使染色体各组成部份——长臂、短臂、着丝粒、随体、染色单体等都显示得比较清楚，有利于染色体测量和显带的分析。
此法也很简单，第一用酶解法去除植物细胞壁，再利用热胀冷缩的原理，将植物细胞在冰片上用火焰烧烤，使劲甩片能使细胞膜破裂，不需要特殊设备，同时也省去了繁杂的压片手续，显著提高了制片的效率。
二、实验目的：
学习植物染色体标本制备去臂、低渗法的技术，为染色体显带实验提供了优良的标本。
三、实验步骤：
１、分生组织材料的制备：需要量大，方式与第一次实验相同。
(关于不容易压片技术的材料可用该种方式。
比如小染色体或多染色体、和机械组织含量高的和木本植物的根尖等。
而比较珍稀的材料或容易制作的材料可不用此法)。
二、常规处置：分为活体材料和离体材料两类。
本实验采纳离体
材料，用物理的方式进行预处置。
（方式与上次实验相同）。
(活体处置：前低渗：加入前低渗液，在25℃下处置30分钟。
作用：
让kcl渗入到细胞中，细胞浓度加大，细胞内的水分渗透出来，便于后面实验步骤的药剂顺利进入细胞。
后面的实验步骤与离体材料的相同)。
3、解离：将根放在中，在25℃下浸泡1h。
作用：以软化细胞壁，去除细胞壁之间的果胶质。
4、前低渗：用自来水冲洗材料，再用25℃的蒸馏水浸泡
作用：可置换出细胞内的HCL，使细胞充分吸水。
染色体在细胞内处于游离状态，在制片时便于染色体分散。
五、酶解去壁：倒掉蒸馏水，加入2％的纤维素酶与果胶酶的混合液，在35-37℃下处置1h。
作用：对细胞壁所含的纤维素、半纤维素和果胶质进行消化。
6后低渗：用镊子夹住根部抖落分生区，将其它部份抛弃，搜集分生区组织，转入指形管，沉淀10min后吸出酶液，加蒸馏水浸泡。
作用：可置换出酶液。
使细胞充分吸水膨胀，染色体游离在细胞质中，制片时便于染色体分散，是关键步骤。
7、固定：吸去蒸馏水，加3︰1的甲醇固定液，静置15min。
作用：置换出细胞内的水分，便于燃烧。
(甲醇固定液作用有：①具有必然的脆性，甩片时容易使细胞膜破裂。
2能改善染色，有助于以后实验时的吉姆萨染色)。
八、制备悬浮液：吸去上清液，以1︰10的比例加入新鲜的固定液(即一份细胞，10份固定液)，用吸管不断的吸放以捣碎组织，制成均匀的细胞悬液。
九、标本片制备：将冷冻的载玻片斜放30-45°角，点上酒精灯，吸2-3滴细胞悬液在该片上，加热烧烤，现在使劲甩片，制作10张标本片。
实验三植物染色体Giemsa—C带技术
一、实验原理：
染色体显带技术是借助于特殊的处置程序，使染色体显现出深浅不同的染色带。
染色带的数量、部位、宽窄与浓淡具有相对的稳固性。
从而在以往染色体形态特点（长度、着丝粒位置、臂比、随体等）之外又增添了一类新的标志。
染色体分带技术能有效地辨别染色体，研究染色体的结构与功能。
C一带是植物吉姆萨分带的一种类型，是染色体通过C一带程序处置，使染色体着丝粒双侧显现带纹，故名C一带。
二、实验目的：
把握植物染色体吉姆萨分带技术和方式。
三、实验步骤：
1、制片：选取前两次实验(压片法、去壁低渗法)制备的片子各
10张。
二、干燥：两种方式⑴自然干燥松树、洋葱15天，(不超过
3过月)；禾本科作物2—15天。
⑵无水乙醇干燥只需要1—12
小时即可。
(目的：①染色体具有后熟的作用；②去除染色体上
的蛋白质；③使材料凝固在片子上)。
本实验采纳自然干燥方式。
3、酸处置：两种方式⑴用45%醋酸在时温下处置1— h；⑵用，
在时温下处置1— h，或25℃下处置10—12min；（处置完毕
用，用30℃的蒸馏水过一次）作用：①去除制片上的杂质和染色体上的蛋白质；②破坏细胞质；③使第一次染色褪色。
④与染色体上的DNA或某些减基结合，使染色体上不同程度减基脱落，有助于程度不同的显带。
应选用⑵种方式。
(酸处置是变性的进程。
应注意操纵时刻，若是处置恰倒益处感觉染色体饱满，带纹丰硕；若是处置不够，染色体上的色差不明显，观看不到带纹；若是处置过度，染色体很薄，带纹也不丰硕)。
4、减处置：两种方式⑴强减NaOH、KOH；室温处置，不得超过20秒；(大约15秒) ⑵弱减 Ba(OH)2饱和溶液，在25℃下处置10-12min。
减处置也是使染色体变性的进程，作用是与染色体上的DNA减基结合，消化DNA。
处置完毕不能直接倒去减液，以避免Ba(OH)2与空气中CO2结合生成的碳酸钡薄膜覆盖在制片材料的表面，阻碍后续工作的正常进行，因此必需用流动的自来水冲洗，以去除表面的薄膜和水中的沉淀物,冲洗完毕用30℃蒸馏水漂洗浸泡几分钟，置换出减液。
五、盐处置：用2×SSC盐溶液+ 2H2O)，在60℃下处置。
盐处置是使染色体复性的进程，作用(1)调剂PH值；(2)修饰DNA 上的减性基团和酸性基团。
后倒去盐溶液，加入30℃蒸馏水浸泡几分钟，置换出盐溶液。
六、染色：取吉姆萨母液(1％浓度)10-15ml,用磷酸缓冲液稀释至1000ml（比较新鲜的母液15ml,氧化1年以上的母液10ml）。
在25℃下染色80min。