第九批绒促性素国家标准品的建立

第九批绒促性素国家标准品的建立816中国药事2007年第21卷第1O期第九批绒促性素国家标准品的建立钱德明,刘群丽,张媛,邵燕,杨赘昀,孙圆媛,华晓东,张月玲,芮菁,朱社敏.,匡荣.(中国药品生物制品检定所,北京100050;北京市药品检验所;天津市药品检验所;.浙江省药品检验所)摘要:制备,标定第九批绒促性素(HumanChorionicGondotrophin,HCG)国家标准品.以第四批绒促性素国际标准品(NIBSCCode:75/589)为标准,全国有4个实验室参加,用幼龄小鼠子宫增重法进行协作标定.采用4个实验室共18个标定结果,经合并计算,测得本批待标品每支含生物效价为6O个国际单位.本批待标品可以作为绒促性素第九批国家标准品使用,其批号为150513—200409.2007年6月份正式分发使用.关键词:绒促性素;标准品;生物效价中图分类号:R977.1+2文献标识码:A文章编号:1002—7777(2007)10—0816—03 Establishthe9thNationalStandardforHumanChorionicGonadotrophin QianDeming,LiuQunli,ZhengYuan,ShaoYan,YangBinyun,SunYuanyuan,HuaXiaodon g2,ZhangYuelingz,RuiJing,ZhuShemin.,KuangRonga(NationalInstitutefortheControlof Pharmaceutica1andBiologica1Products,Beijing100050;BeijingInstituteforDrugContro l;TianjinInstituteforDrugControl;.ZhejiangInstituteforDrugContro1) ABSTRACTTopreparedanddeterminethe9thnationa1standardofHumanChorionicGona dotroDhin(H0G).Determinethe9thnationa1standardofHCGbyyoungfemalemiceuterusweightassay,whichregardedthe4ththeinternationa1standardofHCG(NIBSCCode:75/589).Thepotenciesoft he9thnationa1standardofHCGwas60unitsperampoule.whichwascombinativecalculated18res ultsfrom41aboratories.The9thnationa1standardofHCGwasestablishedsuccessfully,whose1Otwas 150513—200409,andwasdistributedinJune2007. KEYWoRDSHumanChorionicGonadotrophin(HCG);standard;potency绒促性素可提取于孕妇尿液,胎盘等_l1≈],是胎盘滋养层细胞分泌的一种促性腺激素,具有促黄体生成素(LH)活性,而促卵泡成熟素(FSH)样作用甚微,可促使雌性卵泡成熟及排卵,并使破裂卵泡转为黄体,促使其分泌孕激素.对雄性则具有促间质细胞激素(ICSH)作用,能促进曲细精管功能,特别是睾丸间质细胞的活性,使其产生雄激素,促使性器官和副性征发育,成熟,促使睾丸下降和精子生成.临床常用来治疗性功能障碍,不孕症,先兆流产或习惯性流产,功能性子宫出血,闭经,隐睾症,男性性腺机能减退症,精子过少等.绒促性素国家标准品是该产品生产中进行生物效价测定的重要标准,该标准品自1960年以来已经延续了8个批次,1988年制备的第八批绒促性素国家标准品现已用完,为了检验的需要,使本品种的国家标准品得以延续,特制备和标定第九批绒促性素国家标准品.同时也考察了第八批长期保存的稳定性.现将结果报告如下.1材料绒促性素(HumanChorionicGonadotrophin):原料由上海丽珠制药有限公司提供,批号: 030703,生物效价:4074IU?mg-(按干燥品计算);人血白蛋白:批号:20010909,中泰药业有限公司产品;乳糖:药用规格,上海丽珠制药有限公司提供;第四批绒促性素国际标准品,批号:75/589,每支650IU;第八批绒促性素国家标准品,批号:513—8808,每支57IU;第九批绒促性素国家待标品(估计效价每支56IU)的组分和制中国药事2007年第21卷第10期817备:绒促性素原料126.8mg,乳糖83g,259/5人血白蛋白100mL,lmol?L醋酸83mI,蒸溜水加至8300mI,充分混匀后,测得pH值3.8.溶液经0.45#m滤膜抽滤.滤液分装到2mL的安瓿中,每支装量0.8mL(机器灌装),分装完毕进入冻干机进行冻干(48小时),然后出箱封口.动物:SPF级KM小鼠,雌性,体重10～13g,日龄15～16天,由中国药品生物制品检定所实验动物种子中心提供,动物质量合格证号: SCXK(京)2005—0004.实验动物使用许可证号: SYXK(京)2006—0004.饲料合格证号:SCXK (京)2005—0007,(北京科奥协力饲料有限公司).北京市药检所实验动物:清洁级ICR雌性小鼠,体重9~12g,合格证号:SCXK(京)2002—0003,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供.天津市药品检验所实验动物:SPF级雌性ICR小鼠,体重11～13g,合格证号:SCXK(京)2002—0003,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供.浙江省药品检验所实验动物:清洁级ICR雌性小鼠,体重10～13g,合格证号:SYXK(浙) 2005—0057,由浙江省动物中心提供,清洁级KM雌陛小鼠,体重9～12,合格证号:SCXK(浙) 2004—0012,由浙江省药品检验所实验动物房提供. 2方法E43与结果2.1效价测定结果每次实验取上述小鼠190只,按体重随机均匀分成12组,每组15只,剩余动物为空白对照组.实验设计为3×3法,分别取1支绒促性素国际标准品,1支s8国家标准品,2支待标品(设T1和T2).实验当日先用0.9氯化钠注射液将每个制品溶解稀释成10IU?mL的溶液,再取一定量的10IU?mI稀释液,用0.5羧甲基纤维素钠溶液分别稀释成高,中,低3种浓度的溶液(标准品和待标品溶液浓度相同,浓度为0.20,0.12,0.07IU?mL,剂距为1:0.6),于每日同一时间经背部皮下注射给予各组动物对应浓度的待标品或标准品溶液0.2mL,连续3日,空白对照组给相同体积的0.59/6羧甲基纤维素钠溶液.最后一次给药24小时后,按给药顺序将动物处死,称体重后解剖,摘取子宫,剥离附着的组织,用滤纸吸干子宫外液,立即称重(精度0.1mg).采用沈连忠等编制的BS2000生物统计软件中量反应平行线测定随机设计法计算生物效价及实验误差.可靠性测验应通过,可信限率不得大于259/6,实验结果成立【_5].用第四批绒促性素国际标准品作标准,测得待标品8个实验成立的结果,合并计算生物效价每支为59.980IU,可信限率为6.0018;测得S8绒促性素国家标准品3个实验成立的结果,合并计算生物效价每支为6O.000IU,可信限率为10.4800;用S8绒促性素国家标准品作标准,测得待标品8个实验成立的结果,合并计算生物效价每支为56.090IU,可信限率为6.3156.另外,本批标准品的标定邀请了北京市,天津市药品检验所和浙江省药品检验所药理室参加,标定结果分别为:用第四批绒促性素国际标准品作标准,测得待标品分别有4,2,4个实验成立的结果(北京,天津和浙江所),合并计算生物效价每支为55.255IU,59.247IU,68.352IU,可信限率为5.15729/6,15.8850,7.0424;测得S8绒促性素国家标准品分别有1,2,2个实验成立的结果(北京,天津和浙江所),合并计算生物效价每支为55.515IU,59.347IU,68.695IU,可信限率为9.72589/6,13.5850,11.5360;用S8绒促性素国家标准品作标准,测得待标品分别有2,2,3个实验成立的结果(北京,天津和浙江所),合并计算生物效价每支为53.713IU,58.141lid,55.914IU, 可信限率为7.0980,16.43809/6,11.3330.4个实验室用第四批绒促性素国际标准品作标准,对第八批绒促性素国家标准品进行标定,生物效价合并计算,结果不均一,经校正权重计算,生物效价每支为6O.548IU,可信限率为10.50,见表1.表1标定结果用第四批绒促性素国际标准品作标准,对第九批绒促性素国家待标品进行标定,生物效价合并计算,结果不均一,经校正权重计算嘲,生物效价每支为6O.5275IU,可信限率为9.05,见表2.818中国药事2007年第21卷第1O期表2标定结果实验室被采用实验的序号(I效价U/5~)可率北京市药检所1234天津市药检所浙江省药检所中国药品生物制品检定所合并计算结果均一12合并计算结果均一1234合并计算结果均一12345678合并计算结果均一-四个宴验窜结果的合并(校权萤)计算12.65314.02411.9647.36635.157222.39822.94615.88513.71610.04919.71924.1727.042416.92117.05017.90216.65315.76219.22718.41416.9096.O0189.O5用第八批绒促性素国家标准品作标准测得第九批绒促性素国家待标品的生物效价合并计算,结果均一,生物效价每支为55.346IU,可信限率为4.57,见表3.表3标定结果2.2干燥失重测定按《中国药典》2005年版二部绒促性素检查项下,经60~C真空减压干燥,第九批绒促性素国家标准品的干燥失重为3.42.3讨论根据实验结果分析,本批待标品可作为第九批绒促性素国家标准品使用,批号为150513—200409. 根据合并计算和国家标准品生物效价确定的原则,第九批绒促性素国家标准品生物效价是以第四批绒促性素国际标准品作标准测得的效价为依据, 其他标准测得的效价为参考.本批标准品每支的生物效价定为6O个国际单位.绒促性素生物效价测定(3×3)法可靠性测验结果分析中经常出现二次曲线,反向二次曲线或偏离平行显着(P<O.05或P<O.01)的情况,使得实验失败.本次协作标定结果中也发现此问题,主要解决办法是:(1)每次实验时一定要有1个空白对照组,这样可以与标准品的低剂量组动物的反应值作比较,只要标准品的低剂量组动物的反应值(子宫重me/体重g)稍大于(有明显的差别)空白对照组动物的反应值,说明选择的低剂量是有效剂量,否则需要重新调节剂量.(2)实验中高,中,低3个剂量的反应值有时出现低和中剂量组反应值差的小,中和高剂量组反应值差的大,这种情况是由于实验剂距设计不合理所造成的,应该重新调整合适的剂距,如原来剂距是1:o.5,可调整为1:o.6,使高,中,低3个剂量的反应值能均匀地分开,与标准品的高,中,低3个剂量引起的反应值相当,这样可以提高实验的成功率.(3)实验动物的日龄,体重和管理,给药部位,溶液配制等都会影响实验结果,也应该引起重视.第八批绒促性素国家标准品在一20"C保存18年,本次经用第四批绒促性素国际标准品作标准,4个实验室标定得每支生物效价为60.548IU,相当于原标示量(每支57IU)的lO6,实验结果证明,绒促性素标准品在一20~C存放是稳定的.参考文献:Ell孙爱龙,庄苏星,彭士明.胎盘中人绒毛膜促性腺激素的提取I-j].镇江医学院,1997,7(4):405E2]曾宪彪.高效价人绒毛膜促性腺激素精品提取纯化[J].广西医学,1998,20(4):586[3]罗金华,郭东平.人工流产物中提取绒促性素新工艺研究I-J].中国生化药物杂志,2003,24(4):200[-43中国药典[S].二部,2005:附录103I-s]冷炜.药品的生物检定[M].北京:气象出版社,1995:104 [6]周海钧,申蕴如,朱承伟,等.生物检定统计方法[M].北京:人民卫生出版社,1988:20665845OO7976321725662S)5纵搦啪娜Ⅲ獬香;眠阻眠。