_超高效液相色谱-飞行时间质谱法高通量筛查乳制品中20种镇静剂
超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱测定动物饲料中3种巴比妥类违禁药物
超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱测定动物饲料中3种巴比妥类违禁药物张峰;丁菲;储晓刚;李范珠;雍炜;王秀娟;吕泉福;许成保【摘要】建立了超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-O-TOF-MS)快速检测动物饲料中违禁添加的巴比妥、苯巴比妥和异戊巴比妥3种药物的分析方法.样品经甲醇振荡提取,再用C18固相萃取柱净化处理后,采用UPLC-O-TOF-MS分析检测.在电喷雾负离子模式和飞行时间模式下,以20mDa为提取离子窗口,输入各化合物的精确分子离子质量数得到相应的提取离子色谱图,以该色谱峰面积进行定量分析.通过碰撞诱导解离模式(CID)得到各化合物碎片离子的精确质荷比,进一步确证各化合物的结构.各化合物的质量精确度均小于5×10(-6),3种化合物在0.05～2.0mg/L范围内均呈良好的线性关系,线性系数均大于0.99.本方法的巴比妥、苯巴比妥和异戊巴比妥的定量限(LOQ)分别为0.25,0.20和0.23mg/kg.3个添加水平(LOQ,2LOQ和4LOQ)的回收率为62%～85%;相对标准偏差(RSD)均小于10%.本方法可用于饲料中禁用的巴比妥药物的测定.%A method using ultra-performance liquid chromatography (UPLC) quadrupole-time-of flight mass spectrometry (Q-TOF-MS) was developed for screening and confirmation of 3 barbital drugs, barbital, phenobarbital, amobarbital, in feeds. After homogenization, the samples were extracted with methanol, and then the extracts were directly purified through C18cartridge.Identification and detection were achieved in the negative electrospray ionization (ESI) mode using Q-TOF-MS. Accurate mass measurements were performed at a mass resolution of 10000 using continuous introduction of a lock mass with 20 mDa mass window. Thepotential of UPLC-Q-TOF MS for confirmatory analysis was shown by determining the accurate mass of all compounds and fragment ions upon collision-induced-dissociation (CID) at different energies. The extra mass measurements errors f or all barbital drugs were found to be within 5×10-6. The calibration graphs were linear in the concentration range of 0.05-2.0 mg/L for three drugs. All calibration curves showed good linearity (r＞0.99). The recoveries for all compounds in feeds were 62％ -85％ at the fortified levels of LOQ, 2LOQ and 4LOQ, with the limits of quantification (LOQ) of 0.25, 0.20 and 0.23 mg/kg. The relative standard deviations (RSD) for all compounds are less than 10％.【期刊名称】《分析化学》【年(卷),期】2011(039)006【总页数】5页(P788-792)【关键词】液相色谱;四极杆-飞行时间质谱;饲料;巴比妥【作者】张峰;丁菲;储晓刚;李范珠;雍炜;王秀娟;吕泉福;许成保【作者单位】中国检验检疫科学研究院,北京,100123;中国检验检疫科学研究院,北京,100123;浙江中医药大学,杭州,310053;中国检验检疫科学研究院,北京,100123;浙江中医药大学,杭州,310053;中国检验检疫科学研究院,北京,100123;中国检验检疫科学研究院,北京,100123;中国检验检疫科学研究院,北京,100123;西南大学,重庆,400715;中国检验检疫科学研究院,北京,100123;河北农业大学,保定,071060【正文语种】中文巴比妥类药物为巴比妥酸(丙二酰脲)的衍生物,属于安眠镇静类药物[1]。
生物过程代谢组学与代谢流测定
生物过程代谢组学与代谢流测定黄明志;鲁洪中;林佳【摘要】整合的代谢组学和13C代谢流数据能充分反映细胞的代谢状态,对代谢组学和代谢流的测定技术已成为工业生物过程研究的重要手段,并能为工业生物过程优化和高产菌株理性设计提供重要帮助.阐述了代谢组学和代谢流测定的完整流程,包括实验方法、数据处理方法和软件工具,并综述了其在代谢途径鉴定、代谢机制解析和代谢工程等领域的应用进展.【期刊名称】《生物产业技术》【年(卷),期】2018(000)001【总页数】6页(P68-73)【关键词】代谢组学;代谢流;生物过程【作者】黄明志;鲁洪中;林佳【作者单位】华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海 200237;华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海 200237;华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海 200237【正文语种】中文1 代谢组学测定生物过程代谢组学（metabolomics）的测定是指通过对生物过程中的细胞代谢物进行定量分析，以阐释生物过程中细胞代谢的变化。
代谢组学数据的测定包括三个步骤，分别是样品处理、仪器分析和数据处理。
1.1 样品处理在代谢组学研究中，适当的预处理是获得可靠分析结果的基础。
样品预处理的目的是固定细胞的新陈代谢活动，以尽可能多地获得细胞的新陈代谢信息。
根据代谢物所处位置，可以分为胞外代谢物组和胞内代谢物组，两者分别关注所有胞外代谢物和所有胞内代谢物。
胞外代谢物的获取相对简单，常用方法包括低温离心和冷钢珠过滤。
低温离心是将样品注入预冷管，低温离心分离出生物质和上层清液。
冷钢珠过滤是将样品注入含有不锈钢珠的预冷注射器，通过快速过滤分离生物质和上层清液[1]。
由于离心需要的时间较长，过滤操作更为方便，因此冷钢珠过滤法的使用更加普遍。
胞内代谢物的可靠获取较为复杂，要经过取样、灭活和代谢物抽提等操作。
许多胞内成分，特别是糖酵解途径中间代谢物、与能量相关的代谢物（如ATP）和辅因子（如NADH）等，其转化时间都在秒级。
超高效液相色谱质谱法测定饼干中3种大麻酚
超高效液相色谱质谱法测定饼干中3种大麻酚张闯;赵孔祥;张敏;王利强【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2024(45)9【摘要】使用超高效液相色谱-串联质谱法,建立饼干中大麻酚、大麻二酚和四氢大麻酚的测定方法。
样品经乙腈醋酸(99+1)提取,加入醋酸体系盐包超声离心后,再加入吸附剂离心。
采用0.1%甲酸水溶液和甲醇为流动相,梯度洗脱,通过C18色谱柱分离,大气压化学电子源(atmospheric pressure chemical ionization,APCI)正离子多反应模式监测。
通过考察不同种类提取溶剂、超声时间、萃取盐包组成、吸附剂组成的目标化合物回收率,确定最优前处理方式。
结果表明:大麻酚、大麻二酚、四氢大麻酚在2~100 ng/mL时呈现良好线性关系,相关系数(R2)均大于0.999,方法检出限0.01 mg/kg,定量限0.02 mg/kg。
低、中、高3个浓度加标回收试验,大麻酚回收率为80.3%~91.1%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为2.4%~6.5%,大麻二酚回收率为78.4%~88.5%,RSD为2.9%~7.5%,四氢大麻酚回收率为81.5%~91.3%,RSD为2.6%~6.8%。
该方法适用于饼干中大麻酚、大麻二酚和四氢大麻酚的检测。
【总页数】7页(P159-165)【作者】张闯;赵孔祥;张敏;王利强【作者单位】天津海关工业产品安全技术中心;天津海关动植物食品检测中心【正文语种】中文【中图分类】R28【相关文献】1.超高效液相色谱-串联质谱法分析测定食用植物油中痕量△9-四氢大麻酚2.超高效液相色谱-串联质谱法测定火麻食品中特征大麻酚3.超高效液相色谱-串联质谱法同时测定食用油中痕量的δ-9-四氢大麻酚、大麻酚和大麻二酚4.超高效液相色谱-串联质谱法测定化妆品中的大麻二酚5.超高效液相色谱-质谱法同时测定大麻植物中Δ9-四氢大麻酚和Δ9-四氢大麻酚酸A因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
超高效液相色谱－串联质谱法同时测定水产品中10种镇静剂及其代谢物残留
第42 卷第 7 期2023 年7 月Vol.42 No.7833~840分析测试学报FENXI CESHI XUEBAO（Journal of Instrumental Analysis）超高效液相色谱－串联质谱法同时测定水产品中10种镇静剂及其代谢物残留王旭峰，王强，张英侠，黄珂*（农业农村部渔业环境及水产品质量监督检验测试中心（广州），中国水产科学研究院南海水产研究所，广东广州510300）摘要：建立了测定水产品中10种镇静剂及其代谢物的通过式固相萃取（SPE）/超高效液相色谱－串联质谱（UPLC－MS/MS）多残留分析方法。
样品经1%氨水－乙酸乙酯提取，KNORTH m-PFC SPE小柱一步式净化。
洗脱液经氮气吹干浓缩，0.5 mL乙腈溶解残渣，采用UPLC－MS/MS测定。
目标物采用JADE－PAK KP－C18（100 mm × 2.1 mm，1.7 μm）色谱柱分离，以0.1%甲酸－乙腈和0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱。
电喷雾电离正离子（ESI+）扫描，多反应监测（MRM）模式下检测，以保留时间和离子丰度比定性，内标法定量。
10种目标物在对应质量浓度范围内呈良好的线性关系，相关系数（r2）大于0.999，检出限和定量下限分别为0.1 ~ 0.15 μg/kg和0.3 ~ 0.5 μg/kg。
在4种水产品基质中进行3个浓度水平的加标实验，平均加标回收率为82.6% ~ 117%，相对标准偏差（RSD，n = 6）为1.5% ~ 9.3%。
该方法灵敏度高、适用性强，适用于不同水产品基质中镇静剂及其代谢物残留的分析。
关键词：镇静剂；代谢物；通过式固相萃取；超高效液相色谱－串联质谱；水产品中图分类号：O657.7；TS207.3文献标识码：A 文章编号：1004-4957（2023）07-0833-08Simultaneous Determination of Ten Tranquilizers and Their Metabo⁃lites in Aquatic Products by Ultra-performance LiquidChromatography－Tandem Mass SpectrometryWANG Xu-feng，WANG Qiang，ZHANG Ying-xia，HUANG Ke*（South China Sea Fisheries Research Institute，Chinese Academy of Fishery Sciences；Fishery Environment and Aquatic Products Quality Inspection & Testing Center of the Ministry of Agriculture andRural Affaires（Guangzhou），Guangzhou 510300，China）Abstract：A multi-residue analytical method was established for the simultaneous determination of ten tranquilizers and their metabolites in aquatic products by pass-through solid phase extraction（SPE）in combination with ultra-performance liquid chromatography－tandem mass spectrometry（UPLC－MS/ MS）．Samples were extracted with 1% ammonium hydroxide－ethyl acetate，followed by one-step clean⁃up based on KNORTH m-PFC SPE cartridge．The purified extractions were blew to dryness under nitro⁃gen gas．The dried residues were dissolved with 0.5 mL acetonitrile and then injected into UPLC－MS/ MS．The chromatographic separation of ten target analytes were conducted on a JADE－PAK KP－C18 column（100 mm × 2.1 mm，1.7 μm） by gradient elution，utilizing 0.1% formic acid－acetonitrile and 0.1% formic acid solution as mobile phases．The targeted analytes were analyzed with positive electro⁃spray ionization under multiple reaction monitoring（MRM） mode，confirmed using ion ratio and retention time，and quantitated by internal standard method．Excellent linearities for ten target analytes were ob⁃tained in the corresponding mass concentration ranges，with correlation coefficients（r2）larger than 0.999．The limits of detection and the limits of quantitation for aquatic product samples were in the range of 0.1－0.15 μg/kg and 0.3－0.5 μg/kg，respectively．The average recoveries for four negative aquat⁃ic product matrixes at three spiked levels ranged from 82.6% to 117%，with relative standard deviations （RSDs，n = 6） of 1.5%－9.3%．The proposed method is sensitive and versatile，and it can be applieddoi：10.19969/j.fxcsxb.23040604收稿日期：2023－04－06；修回日期：2023－05－09基金项目：中国水产科学研究院南海水产研究所中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金（2021SD20）；农业国家标准和行业标准制修订项目（NYB-23110）；广东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金（2023KJ151）∗通讯作者：黄珂，副研究员，研究方向：水产品质量安全检测与风险评估，E-mail：xiamike@834分析测试学报第 42 卷to the multi-residue analysis of ten tranquilizers and their metabolites in various aquatic product matrixes.Key words：tranquilizers；metabolite；pass-through solid phase extraction；ultra-performance liq⁃uid chromatography－mass spectrometry；aquatic product镇静剂是一类具有镇定和安眠作用的药物，通过直接抑制中枢神经系统多巴胺活性，从而使动物机能恢复安定，防止狂躁，也能降低动物运输途中死亡率［1］。
超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱
超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱
超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱（UPLC-QTOF-MS）是一种
综合性的分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
该技术将
高效液相色谱（UPLC）和四极杆-飞行时间质谱（QTOF-MS）相结合，
具有分离技术分辨率高、分析方法灵活、精确度高、基质干扰小等优点。
UPLC是一种高效液相色谱技术，其分离柱颗粒大小通常为1.7微米，比传统的HPLC柱颗粒小得多，因此具有更高的分离能力和更快的
分离速度。
QTOF-MS则是一种高分辨质谱技术，具有高精度、高分辨率、高灵敏度和高通量等特点。
QTOF-MS通过对物质的分子离子进行加速、分离和检测，可以得到物质的分子式、分子量和结构信息。
UPLC-QTOF-MS技术结合了两种先进的技术，可以实现快速、准确地分离、鉴定和定量各种样品中的化合物。
在医疗保健领域，UPLC-QTOF-MS技术可以用于快速筛选和鉴定化合物中的生物标志物，为疾病诊断和治疗提供重要依据。
同时，在药物研发方面，该技术可以快速
鉴定化合物的结构、性质和代谢产物，为新药研发提供重要信息。
总的来说，UPLC-QTOF-MS技术是一种高效、精确的分析技术，已经被广泛应用于化学、生物、医药等领域。
该技术的广泛应用将为相
关科研、工业和医疗保健领域提供更为准确和精密的分析手段。
兽药残留参考文献
兽药残留Veterinary drug residue[1] 王炼，黎源倩，王海波等.基质固相分散-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定畜禽肉和牛奶中20种兽药残留[J].分析化学，2011，（02）：203-207.[2] 尹怡，李平杰，林晨等.超声辅助-分散固相萃取高效液相色谱串联质谱法联用测定鱼肝脏中喹烯酮的残留量[J].分析测试学报，2013，（11）：1349-1353.[3] 王丽娜，田晓玲，陈玉艳.GC-MS法测定生鲜乳中雌激素类药物残留量[J].现代畜牧兽医，2013，（10）：38-42.[4] 郭德华，邓晓军，赵善贞等.固相萃取-高效液相色谱/串联质谱同时检测动物源性食品中76种兽药残留[J].分析化学，2010，（03）：318-324.[5]卜明楠，石志红，康健等.QuEChERS结合LC-MS/MS同时测定虾肉中72种兽药残留[J].分析测试学报，2012，（05）：552-558.[6] 吴海燕，郭萌萌，李兆新.高效液相色谱-荧光法测定水产品中多种四环素残留[J].渔业科学进展，2012，（05）：102-108.[7] 田玮.基于量子点的荧光免疫分析在农兽药残留检测中的应用研究[J].吉林农业，2012，（09）：79-80.[8] 王伟，石志红，康健等.改进的QuEChERS结合LC-MS/MS同时测定蜂蜜中60种兽药残留[J].分析试验室，2013，（07）：82-88.[9] 高馥蝶，赵妍，邵兵等.超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法快速筛查牛奶中的农药和兽药残留[J].色谱，2012，（06）：560-567.[10] 刘楠，苏璞，朱茂祥等.高通量悬浮芯片技术检测多农兽药残留[J].分析化学，2010，（05）：673-677.[11] S. J. Lehotay, A. R. Lightfield, L. Geis-Asteggiante, et al. Development and validation of a streamlined method designed to detect residues of 62 veterinary drugs in bovine kidney using ultra-high performance liquid chromatography –tandem mass spectrometry [J]. Drug Testing and Analysis, 2012, 4 (s1): 75-90.[12] J. Wang, D. Leung. The challenges of developing a generic extraction procedure to analyze multi-class veterinary drug residues in milk and honey using ultra-high pressure liquid chromatography quadrupole time-of-flight mass spectrometry [J]. Drug Testing and Analysis, 2012, 4 (s1): 103-111.[13] M. Martinez, J. Blondeau, C. E. Cerniglia, et al. Workshop report: The 2012 Antimicrobial Agents in Veterinary Medicine: exploring the consequences of antimicrobial drug use: a 3-D approach [J]. Journal of Veterinary Pharmacology and Therapeutics, 2014, 37 (1): 1-16.[14] M. J. Schneider, S. J. Lehotay, A. R. Lightfield. Evaluation of a multi-class, multi-residue liquid chromatography –tandem mass spectrometry method for analysis of 120 veterinary drugs in bovine kidney [J]. Drug Testing and Analysis,4 (s1): 91-102.[15] M. J. Groot, J. J. P. Lasaroms, J. V. Hende, et al. Veterinary treatment of cows with isoxsuprine for a caesarian section may temporarily lead to residues in hair of both cow and calf [J]. Drug Testing and Analysis, 2012, 4 (6): 515-518.[16] A. L. Chicoine, J. O. Boisin, S. Parker, et al. Kinetics and residues after intraperitoneal procaine penicillin G administration in lactating dairy cows [J]. 2009, 32 (3): 289-295.[17] W. Xie, C. Han, J. Hou, et al. Simultaneous determination of multiveterinary drug residues in pork meat by liquid chromatography-tandem mass spectrometry combined with solid phase extraction [J]. Journal of Separation Science, 2012, 35 (24): 3447-3454.[18] J. J. Lohne, W. C. Andersen, S. B. Clark, et al. Laser diode thermal desorption mass spectrometry for the analysis of quinolone antibiotic residues in aquacultured seafood [J]. Rapid Communications in Mass Spectrometry, 2013, 26 (24): 2854-2864.[19] F. Xiao, Y. Lai, N. Zhang, et al. Photoelectrochemical Immunosensor Array Based on Thioglycolic Acid Capped CdS Quantum Dots for Multiplexed Detection of Veterinary Drug Residues [J]. Chinese Journal of Chemistry, 2012, 30 (5): 1168-1176.[20] T. Janssens, E. E. M. Brouwers, J. P. Vos, et al. Inductively coupled plasma mass-spectrometric determination of platinum in excretion products of client-owned pet dogs [J]. Veterinary and Comparative Oncology, 2011, 25 (9): 1061-1066.-----精心整理，希望对您有所帮助!。
超高效液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中20种磺胺类药物残留
超高效液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中20种磺胺类药物残留作者：邱慧珍黄凤妹何孝金江建丽来源：《食品安全导刊·中旬刊》2021年第10期摘要：目的：建立超高效液相色谱-串联质谱法同时检测动物源性食品中磺胺类药物残留。
方法：用含0.1%甲酸乙腈提取，均质离心，上清液减压蒸干，2.0 mL的20%甲醇水溶解，2.0 mL正己烷除酯，流动相0.1%甲酸水（含6%乙腈）-甲醇进行梯度洗脱，采用电喷雾正离子多反应监测模式检测。
空白基质加标准物质配制工作曲线，外标法定量。
结果：20种化合物在2.0～40 ng/mL线性关系良好，相关系数均大于0.99，在3个加标水平2.0 μg/kg、4.0 μg/kg和10.0 μg/kg上，平均回收率在70.4%～118.1%，相对标准偏差在1.5%～10.0%，定量限为2.0 μg/kg。
结论：该方法高效、快速、灵敏度高，可用于动物源性食品中磺胺类药物残留的日常分析。
关键词：质谱;磺胺;兽药残留;动物源性食品磺胺类药物是二氢叶酸合成酶抑制剂，对氨基苯磺酰胺是此类药物产生药效的基本结构，甲氧苄啶是磺胺类药物的抗菌增效剂，抑制二氢叶酸还原酶，与磺胺类药物合用，对细菌的生长起到双重抑制作用。
磺胺类药物是应用广泛的抗生素之一，被用于治疗动物感染，因为它们价格低廉、毒性低，并且对常见细菌感染具有出色的抗菌活性，这些抗生素若不加控制地使用，以及不遵守停药期指南，会导致抗生素耐药性的发展。
药物的原形及其代谢产物可蓄积于动物的组织器官或可食性产品中（如蛋、奶）中，从而危及人们的健康。
目前兽药残留的检测方法主要有液相色谱法、液相色谱-串联质谱法、液相色谱-四级杆-飞行时间质谱法等，其中液相色谱-串联质谱法对复杂样品具有高灵敏度、高分辨率等优点，是兽药残留分析的重要手段[1-2]。
《国家食品安全监督抽检实施细则（2021年版）》中规定磺胺类药物检验的指定方法有《动物源性食品中磺胺类药物残留检测液相色谱-质谱/质谱法》（GB/T 21316—2007）、农业部1077号公告-1-2008《水产品中17种磺胺类及15种喹诺酮类药物残留的测定液相色谱-串联质谱法》、农业部1025号公告-23-2008《动物源食品中磺胺类药物残留检测液相色谱-串联质谱法》，判定依据有农业部公告第235号、GB 31650—2019。
超高效液相色谱-串联质谱法快速定性和定量筛查贴敷类医疗器械产品非法添加的水杨酸甲酯
超高效液相色谱-串联质谱法快速定性和定量筛查贴敷类医疗器械产品非法添加的水杨酸甲酯刘路;皮璟渔;余永红;刘小辉;胡红刚;梁国东【期刊名称】《医疗装备》【年(卷),期】2024(37)5【摘要】目的通过建立一种利用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS),对贴敷类医疗器械非法添加的水杨酸甲酯进行定性、定量分析。
方法样品经甲醇提取、过滤后上机,采用超高效液相色谱-串联质谱法,WATERS ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm×100mm,1.7μm)分离,以0.05%氨水-甲醇为流动相,进行梯度洗脱;电喷雾电离(ESI),负离子扫描,多反应监测(MRM)模式采集数据。
结果水杨酸甲酯1~100μg/ml范围内线性关系良好,相关系数为0.9997;3个添加水平平均加样回收率为90.3%~100.7%;相对标准偏差(RSD)为0.5%~0.9%;方法检出限为0.1μg/ml;定量限为0.3μg/ml;114份样品中,共检出阳性样品29份,检出率为25.4%,含量为每贴1~47mg,且阳性样品多集中在医用冷敷贴、远红外镇痛贴样品中。
结论该方法准确度高、快捷灵敏,适用于贴敷类医疗器械产品非法添加的水杨酸甲酯进行定性与定量分析。
【总页数】5页(P39-43)【作者】刘路;皮璟渔;余永红;刘小辉;胡红刚;梁国东【作者单位】江西省医疗器械检测中心【正文语种】中文【中图分类】O657.63【相关文献】1.液相色谱-串联质谱法快速筛查减肥类中药及保健品中非法添加30种化学药2.高效液相色谱-离子阱飞行时间串联质谱法快速筛查保健食品中非法添加的磷酸二酯酶-5抑制剂及其类似物3.超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法定性筛查保健食品中西地那非及其相关功效类非法添加化合物4.超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法快速筛查及定量分析减肥类保健品中20种非法添加药物5.超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法快速筛查及定量分析保健品中29种非法添加物因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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分析化学
第 41 卷
第 41 卷 2013 年 1 月
分析化学 （ FENXI HUAXUE） 研究报告 Chinese Journal of Analytical Chemistry
第1 期 31 ～ 35
DOI： 10． 3724 / SP． J． 1096． 2013． 20555
超高效液相色谱-飞行时间质谱法 高通量筛查乳制品中 20 种镇静剂
2 实验部分
2． 1 仪器与试剂 超高效液相色谱（ 美国 Waters 公司） ； 四极杆 / 飞行时间质谱（ 美国 Bruker 公司） ； Speedvac 离心浓
缩仪（ 美国 Thermo 公司） ； 高速离心机（ 德国 Hettich 公司） 。 氯丙嗪、氟哌啶醇、地西泮和艾司唑仑等 20 种镇静剂标准品（ 纯度 ＞ 98% ） ，购自美国 Cerilliant 公
镇静剂药物具有抑制躁狂、镇吐等作用，可能被添加到奶牛饲料中以促进采食，提高饲料转化率，并 缓解奶牛热应激，提高产奶量［8］。但是，这类药物的残留会造成过敏、心悸、肝损害等不良反应。农业 部第 176 号公告中明确禁止在动物饲料和饮用水中添加氯丙嗪、异丙嗪、地西泮、利血平等镇静剂［9］。 国标 GB / T22993-2008 也制定了乳制品中氯丙嗪和氟哌啶醇等 8 种镇静剂的检测方法［10］。鉴于我国食 品安全的现状，有必要对更多镇静剂进行监测。本研究以氯丙嗪、氟哌啶醇、地西泮和艾司唑仑等 20 种 镇静剂为例，发展了基于超高效液相色谱-飞行时间质谱技术，结合筛查数据库的高通量分析方法，成功 应用于乳制品的快速筛查，方法检出限等技术指标满足相关法规要求。
对于奶粉等固体样品，准确称取 0． 6 g 粉末样品，加入 2 mL 超纯水充分溶解，其它处理步骤同液态奶。 2． 3 超高效液相色谱-高分辨飞行时间质谱的分析条件
Waters ACQUITY BEH 色谱柱（ 100 mm × 2． 1 mm i． d． ，1． 7 "m） 。流动相 A 为 0． 1% （ V / V） 甲酸溶 液，流动相 B 为 0． 1% （ V / V） 甲酸-乙腈溶液。梯度洗脱： 0 ～ 2 min，30% B； 2 ～ 9 min，30% ～ 72% B。流 速： 0． 30 mL / min； 柱温： 30 ℃ ； 进样器温度 4 ℃ ； 进样体积： 1 "L。电喷雾离子源（ ESI） ； 正离子模扫描模 式； 毛细管电压： 4． 5 kV； 雾化气： 150 kPa； 干燥气温度： 180 ℃ ； 干燥气流速： 6 L / min； 采集质量数范围 m / z 50 ～ 1000。三氟乙酸钠溶液作为外标以校正分子量。
第1 期
严丽娟等： 超高效液相色谱-飞行时间质谱法高通量筛查乳制品中 20 种镇静剂
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3． 3 精密度、线性关系和回收率 在基于 UPLC / HRTOF-MS 的高通量筛查研究中，保留时间的重现性和质量准确度是定性分析的关
键参数。加标样品重复进样 5 次，保留时间偏差均小于 0． 1 min，测定分子量偏差均小于 3 mDa。测定 分子量偏差越小，数据处理时可设置更窄的提取离子窗口，从而可更有效排除干扰化合物，实现更准确 的定性分析。另外，高质量准确度使得在无标样情况下对未知物定性成为可能，特别是针对镇静剂这类 分子量较小的化合物。例如，某化合物的实测分子量为 388． 1591，与氟西泮的理论分子量（ 388． 1586） 的偏差仅为 0． 5 mDa，而且同位素峰形匹配度为 98． 6% ，依据这些信息即可将该化合物定性为氟西泮。
图 1 20 种镇静剂的高分辨提取离子流图 Fig． 1 High resolution extracted ion chromatograms （ hrEIC，± 0． 003 Da） of twenty tranquilizers 峰号同表 1（ The peak numbers are the same as in Table 1） 。
分子式 Formula
C19 H21 N3 O C16 H14 ClN3 O C18 H19 ClN4 C18 H13 ClFN3 C21 H23 ClFN3 O C21 H23 ClFNO2 C15 H11 N3 O3 C16 H12 FN3 O3
C17 H20 N2 S C16 H11பைடு நூலகம்ClN4 C16 H14 N2 O C16 H16 F3 NO C15 H11 ClN2 O2 C17 H13 ClN4 C33 H40 N2 O9 C17 H12 Cl2 N4 C17 H19 ClN2 S C16 H13 ClN2 O2 C21 H26 N2 S2 C16 H13 ClN2 O
3 结果与讨论
3． 1 样品前处理条件优化 本研究采用乙腈和酸化乙腈沉淀蛋白质和脂肪，并结合高速离心，有效去除了乳制品中大量蛋白质
和脂肪，大多数镇静剂的提取率可达到 80% 以上。固相萃取柱常被用于进一步去除基质的干扰［2］，本 研究通过对比发现，对于这 20 种镇静剂，虽然在不经固相萃取柱净化的情况下存在一定的基质干扰，但 是高分辨飞行时间质谱完全可以实现待测物和干扰物的区分，而且采用基质匹配法拟合标准曲线也可 在一定程度上消除基质干扰。经过和不经过固相萃取柱净化的两种方法的定量准确度基本相当，并无 明显差异。 3． 2 超高效液相色谱-高分辨飞行时间质谱条件的优化
为了最大限度消除基质效应干扰，本研究采用基质匹配法进行定量分析。以空白牛奶样品的提取 液配制 0． 1 ～ 1000 "g / L 系列混合标准溶液。镇静剂（ 除唑吡旦外） 的质量浓度在 1 ～ 500 "g / L 或 5 ～ 1000 "g / L 范围内具有较好的线性关系，检出限为 0． 3 ～ 1． 5 "g / L，定量限为 1 ～ 5 "g / L（ 表 1） 。在 5 和 50 "g / L 两个添加水平测定方法回收率及精密度，平均回收率为 76． 1% ～ 108． 2% ，相对标准偏差为 2． 5% ～ 9． 0% 。
考察了 5 mmol / L 甲酸胺-甲醇、5 mmol / L 甲酸胺-乙腈、0． 1% 甲酸-甲醇和 0． 1% 甲酸-乙腈 4 种流 动相对镇静剂离子化效率和峰形的影响。甲酸胺体系可以获得较低的背景值，但是分析物的信号也较 低，严重影响了检测灵敏度。采用甲酸体系时，虽然背景值有所升高，但是分析物的信号显著增强，信噪 比比甲酸胺体系提高了 5 ～ 20 倍。与甲醇相比，采用乙腈作为流动相时可以获得更好的峰形，信号响应值 也略高。因此，本研究采用 0． 1% 甲酸-乙腈作为流动相，20 种镇静剂在 9 min 内可得到较好地分离（ 图 1） 。
司和德国 Dr． Ehrenstorfer 公司； 甲酸（ 纯度为 99% ，美国 Acros Organics 公司） ； 乙腈、甲醇（ HPLC 级，美 国 Merck 公司） 。 2． 2 样品前处理
准确移取 2 mL 液态奶于离心管中，加入 2 mL 乙腈，旋涡振荡提取 1 min，8000 g 离心5 min； 将上层 清液全部转移至新离心管中，加入 6 mL 酸化乙腈（ 0． 2% 甲酸，V / V） ，旋涡振荡 1 min，8000 g 离心5 min； 小心吸取 5 mL 上层清液至 15 mL 离心管； 浓缩至溶液体积小于 1 mL，全部转移到 1． 5 mL 离心管中继 续浓缩至近干； 加入 0． 3 mL 30% 乙腈溶液溶解提取物，经过 0． 22 "m 滤膜过滤，转移到装有内插管的样 品瓶中，分析前置于!20 ℃ 保存。
序号 No．
名称 Name
1 唑吡旦 Zolpidem 2 利眠宁 Chlordiazepoxide 3 氯氮平 Clozapine 4 咪达唑仑 Midazolam 5 氟西泮 Flurazepam 6 氟哌啶醇 Haloperidol 7 硝西泮 Nitrazepam 8 氟硝西泮 Flunitrazepam 9 异丙嗪 Promethazine 10 艾司唑仑 Estazolam 11 安眠酮 Methaqualone 12 诺氟西汀 Norfluoxetine 13 奥沙西泮 Oxazepam 14 阿普唑仑 Alprazolam 15 利血平 Reserpine 16 三唑仑 Triazolam 17 氯丙嗪 Chlorpromazine 18 替马西泮 Temazepam 19 甲硫达嗪 Thioridazine 20 地西泮 Diazepam
关键词 镇静剂； 乳制品； 超高效液相色谱； 飞行时间质谱； 高通量筛查
1引言
食品中兽药残留检测已从单一化合物发展为多种不同化合物的同时定性和定量分析。与低分辨的 三重四级杆质谱不同，高分辨飞行时间质谱 （ High resolution time-of-flight mass spectrometer，HRTOFMS） 能够采集高质量分辨率和高准确度的全扫描数据，目标化合物数目没有任何限制。利用精确分子 量和同位素峰形还可对异常未知峰进行准确的定性分析。研究人员已经利用该技术建立了蔬菜、水果、 肉制品中有害物质的同时检测方法［1 ～ 7］，显示了其在高通量筛查应用中的巨大潜力，但是国内该方面相 关的报道还较少。
严丽娟1 张 洁* 2 潘晨松3 林立毅1 张欣怡3 申河清2
1 （ 厦门出入境检验检疫局，厦门 361012） 2 （ 中国科学院城市环境研究所 城市环境与健康重点实验室，厦门，361021）
3 （ 美国布鲁克道尔顿公司北京代表处，北京 100081）
摘 要 利用超高效液相色谱 / 高分辨飞行时间质谱，结合数据库，建立了乳制品中 20 种镇静剂的高通量筛 查方法。样品以乙腈和酸化乙腈沉淀蛋白质和脂肪，冷冻离心浓缩，经超高效液相色谱分离，采用电喷雾离子 源，正离子模式，基质匹配法进行定量分析，可在 9 min 内对 20 种镇静剂进行高通量筛查和定量分析。镇静 剂的质量浓度在 1 ～ 500 "g / L 或 5 ～ 1000 "g / L 范 围 内 具 有 较 好 的 线 性 关 系，检 出 限 为 0． 3 ～ 1． 5 "g / L， 定量限为 1 ～ 5 "g / L。在 5 和 50 "g / L 添加水平时，平均回收率为 76． 1% ～ 108． 2% ，相对标准偏差为 2． 5% ～ 9． 0% 。利用 TargetAnalysis 软件建立镇静剂数据库，并应用于加标样品的筛查分析。通过数据库比对，样品 中添加的镇静剂被全部筛查出来，鉴定准确度达到了 100% ，保留时间偏差小于 0． 1 min，质量偏差小于 3 mDa，同位素峰形匹配度大于 89． 5% 。利用本方法对购自超市的 8 个不同品牌的 50 余份乳制品进行了筛查 分析，均未检出阳性样品。