成熟成骨细胞中敲除基因fgfr1小鼠的制备
【国家自然科学基金】_条件性敲除_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140731
2014年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23
2014年 科研热词 推荐指数 黏蛋白1 1 锌指蛋白(plzf) 1 表型分析 1 精原干细胞 1 神经元损伤 1 生物学功能 1 条件性敲除 1 条件性剔除技术 1 常用系统 1 常染色体显性遗传性多囊肾疾病 1 展望 1 小鼠 1 功能研究 1 前脑缺血 1 内源性组胺 1 vil-cre 1 pten基因敲除 1 pkd2 1 perp 1 lck-cre 1 cre/loxp系统 1 cre-loxp系 1 adpkd 1
推荐指数 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2010年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8
科研热词 基因敲除 肝纤维化 肝癌 肝炎 杂合子 小鼠 cre/loxp技术 cdc42
推荐指数 2 1 1 1 1 1 1 1
2011年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31
2008年 序号 1 2 3 4
科研热词 骨骼发育 条件性基因敲除 小鼠 fgfr1
推荐指数 1 1 1 1
2009年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22
科研热词 过表达 软骨发育不全 软骨内成骨 肺腺癌 细胞转化 细胞成瘤性 甲基苯丙胺 条件性基因敲除 条件性位置偏爱 敲除小鼠鉴定 小鼠 多巴胺d3受体 多克隆抗体 基因敲除 内源性 低氧诱导因子-1α von'hippel-lindau pten p53 orai2 k-ras fgfr3
基因敲除小鼠的制作方法
基因敲除小鼠的制作方法基因敲除小鼠是一种常用的遗传工具，在科学研究中被广泛应用于功能基因组学和疾病模型研究。
基因敲除是指通过特定技术手段，将小鼠体内的目标基因完全沉默或失活，从而研究该基因在发育、生理以及疾病机制中的功能。
本文将介绍基因敲除小鼠的制作方法，包括设计目标基因的敲除载体、胚胎干细胞的筛选和注射、外显子敲除策略的选择等。
1.设计目标基因的敲除载体敲除载体是嵌入目标基因的重要工具。
它通常包含正向与反向的同源臂（homology arms）以及选择标记（如抗生素抗性基因）。
同源臂的长度通常在2-5 kb之间，确保在同源重组时准确而有效地替代目标基因。
此外，敲除载体中还应该包含可诱导甲基化的Cre-loxP重组体系或者FLP-FRT重组体系，以用于后续的基因定向敲除或基因重新组装。
2.筛选胚胎干细胞胚胎干细胞是从内胚层发育而来的多潜能细胞，可以分化为整个鼠体的各种组织和器官。
敲除载体首先需要通过电转或霰粒枪等手段转染到胚胎干细胞系中。
转染后，胚胎干细胞需要进行抗生素筛选，以过滤未转染的细胞。
为了确保目标基因的敲除率，可以使用增强绿色荧光蛋白（eGFP）等标记基因，通过荧光显微镜观察转染细胞的表达情况。
3.敲除载体注射到小鼠受精卵中一旦确认胚胎干细胞中存在敲除载体，接下来就是将胚胎干细胞植入小鼠受精卵。
这个步骤一般由经验丰富的研究人员或者专业公司进行。
首先，选择合适的受精卵（通常为C57BL/6J小鼠品系），然后利用显微操作技术，将敲除载体注射到受精卵的核酸注入腔。
注射后，将受精卵转入对应营养液中培养一定时间，以期达到最佳着床率。
4.敲除鼠胚移植到配子体内经过培养后，将敲除的胚胎植入雌性激素准备好的代孕小鼠（通常为白色的株系，如ICR）。
移植后，将代孕小鼠继续养育，直至分娩。
5.验证敲除小鼠的敲除效果通过提取敲除小鼠的DNA，可以利用PCR、Southern blot和DNA测序等技术验证敲除效果。
成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)对骨形成的直接调控作用
第三军医大学硕士学位论文
楚。 骨损伤后的再生修复是局部骨骼的再发育过程。一些参与调控骨骼发育的分子如
IHH/PTHrP、BMPs、Wnt 等在骨再生过程中也起着重要调控作用。研究发现，FGFR3 参与调节骨损伤后的再生过程，且在一定程度上，FGFR3 对骨再生和骨生长发育中的 软骨内成骨过程可能发挥相似的负性调控作用。而 Rundle 等发现 FGFR3 表达于骨折 部位成骨细胞和骨膜下间充质细胞，提示 FGFR3 直接参与调控骨再生过程中的成骨细 胞骨形成过程。那么 FGFR3 在骨再生过程中对成骨细胞骨形成的影响是否与 FGFR3 在成年期骨重建中的作用类似呢？
既往研究表明，FGF/FGFRs 信号通路与骨骼发育、再生和骨骼疾病有密切联系。 FGFR1、2、3 功能增强或丧失突变可导致包括颅缝早闭(craniosynostosis, CS)、软骨发 育不全(achondroplasia, ACH)和 CATSHL (camptodactyly, tall stature, scoliosis, and hearing loss)综合征在内的多种人类骨骼系统遗传性疾病。
10
ห้องสมุดไป่ตู้
第三军医大学硕士学位论文
主要结论 1. 成骨细胞特异性表达 FGFR3 功能增强点突变小鼠体型变小，但生长板软骨未 见明显异常，提示成骨异常在 ACH 侏儒体型发生中有一定作用。 2. 成骨细胞特异性表达 FGFR3 功能增强点突变小鼠成年期骨形成增加，导致骨 量增多。 3. FGFR3 功能增强促进成骨细胞分化，抑制其矿化。 4. FGFR3 功能增强对成骨细胞的影响可能部分是通过 FGFR1、FGFR2 及 BMPRIA 的继发性改变所致。 5. FGFR3 功能增强导致小鼠骨皮质缺损愈合延迟。 关键词：FGFR3；骨形成；成骨细胞；破骨细胞；骨再生
基因敲除小鼠的制作方法
..一、常规基因敲除鼠（Conventional Knockout）常规基因敲除是通过基因打靶，把需要敲除的基因的几个重要的外显子或者功能区域用Neo Cassette 替换掉。
这样的小鼠其全身所有的组织和细胞中都不表达该基因产物。
此类基因敲除鼠一般用于研究某个基因在对小鼠全身生理病理的影响，而且这个基因没有胚胎致死性。
二、条件性基因敲除小鼠（Conditional Knockout）条件性基因敲除小鼠是通过基因打靶，把两个loxP 位点放到目的基因一个或几个重要的外显子的两边。
该小鼠和表达Cre酶小鼠杂交之前，其目的基因表达完全正常。
当和组织特异性表达Cre酶的小鼠进行杂交后，可以在特定的组织或细胞中敲除该基因，而该基因在其他组织或细胞表达正常。
条件性基因敲除鼠适用范围为：（1）该基因有胚胎致死性；（2）用于研究该基因在特定的组织或细胞中的生理病理功能。
三、基因敲入小鼠（Knockin）基因敲入小鼠是通过基因打靶，把目的基因序列敲入到小鼠的相应基因位点，使用小鼠的表达调控元件指导目的基因表达。
此类基因敲入鼠一般用于药物的筛选，信号通路的研究等。
获得嵌合体及之后品系纯化详细流程：基因敲除其他方法：一、ZFN技术制作基因敲除鼠ZFN能够识别并结合指定的基因序列位点，并高效精确地切断。
随后细胞利用天然的DNA 修复过程来实现DNA的插入、删除和修改，这样研究人员就能够随心所欲地进行基因组编辑。
这在过去是无法想象的，传统的基因敲除技术依赖细胞内自然发生的同源重组，其效率只有百万分之一，而ZFN的基因敲除效率能达到10%。
利用这些技术进行小鼠基因的定点敲除和敲入，可以把时间从一年缩短到几个月。
这项技术中设计特异性的ZFN是最关键的环节，目前研究者采用计算生物学方法设计高特异性的ZFN，但ZFN的脱靶（off target），也就是把不该切的地方切了的问题仍是一个挑战。
也正因为这个原因，利用ZFN技术进行小鼠的基因修饰还无法完全取代传统技术。
Hepcidin基因敲除对小鼠骨代谢的影响及相关机制研究的开题报告
Hepcidin基因敲除对小鼠骨代谢的影响及相关机制
研究的开题报告
背景介绍：Hepcidin是一种铁调节激素，其作用是调节体内铁的吸
收和排泄，进而影响机体内的铁代谢。
近年来的研究表明，Hepcidin除
了对铁代谢的调节作用外，还与骨代谢存在着密切的关系。
然而，目前
关于Hepcidin对骨代谢的作用机制还存在很多争议和未知之处。
目的：本研究旨在探讨Hepcidin基因敲除对小鼠骨代谢的影响及其
相关机制。
研究内容：采用Hepcidin基因敲除小鼠作为研究对象，通过比较敲
除小鼠和野生型小鼠的骨代谢指标，如骨密度、骨形态、骨质量、骨小
梁结构等，来初步探究Hepcidin对骨的影响。
同时，将从细胞分子水平
上分析Hepcidin基因敲除后对骨细胞分化及功能的影响，如成骨细胞和
破骨细胞的数目、形态、分泌细胞因子的能力、骨再生能力等，以此揭
示Hepcidin调节骨代谢的机制。
研究意义：通过本研究，将进一步认识Hepcidin在骨代谢中的作用，并且为解决一些与骨代谢相关的疾病提供新的治疗思路。
神经干细胞的增殖与分化调控机制
。
研究表明, NSC 广泛存在于发育期和成年哺乳 动物的 CNS 中。在对人胚胎期 NSC 的研究中, 已先 后从大脑皮质、 海马、 纹状体、 嗅球、 侧脑室、 室管膜 下层、 小脑和脊髓等区域分离出 NSC 。自从 1992 年 Reyno lds和 W e iss 周内
。
大鼠海马神经元数量明显减少, 但随后在坏死区和 边缘带可见显著的神经元新 生, 同时证实这些 N e uN 细胞来源于内源性神经前体细胞。上述研究表 明, NSC 的增殖和分化与局部微环境信号密切相关。 2 3 NSC 增殖和分化的内在机制 各类细胞因子对 NSC 的影响 最终在基因水平
W e i Tu , Zh i F eng Deng , Y ang W ang 1 Depart m ent o f Neurosurgery , the Second A ffiliated H ospital o fM edical Co llege of N anchang 2 Un iv ersity , Nanchang 330006 , Ch in a ; Institute of U rological Surgery , the F irst A ffilia ted H osp ital o fM ed ic al Co llege of N anchang University , N anchang 330006 , Chin a Abstract N eural stem cells ( NSC s) have th e ab ility o f h ig hly se lf renew a l and can be dif ferentiated into neurons , astrocytes and o ligodendrocytes . NSC s can be iso lated from the brain s o f em bryon ic and adu lt m amm als. T he proliferation and d ifferent iatio n of stem ce lls are regu lated by both m icroenv iron m enta l factors and genes . It has been found th at a num ber of cy tok in es and genes can regu late the pro liferation o f NSCs, and deter m ine their d irectio n of d ifferent iatio n . Furth er understanding of the m echan ism s of pro liferat io n and d ifferent iatio n of NSC sw ill sign if icantly prom ote the c lin ical app lication o f NSCs. K ey W ords neural stem ce l; l proliferation ; d ifferent iation 神经干细胞 ( neural stem cel, l NSC )是具有高度 自我更新能力并能分化为神经元、 星形胶质细胞和 少突胶质细胞的神经前体细胞。 NSC 概念的提出彻 底改变了 以往认 为中 枢神 经系 统 ( central nervous system, CNS) 细 胞不能 再生 的观 念。 NSC 移 植为 CNS损伤和神经 退行性疾病的治疗 提供了新的方 向。因此, 对 NSC 增殖和分化调控的研究显得尤其 重要。 1 N SC 的特性 、 来源和分布 NSC 具有 2 个显著的特性 : ( 1) 高度自我更新 能力, 能够重复进行有丝分裂, 产生大量子代细胞 ; ( 2) 在一定条件下可分化为神经元、 星形胶质细胞 和少突胶质细胞。在对称分裂情况下, NSC 产生的 2 个子代细胞可以均为 NSC, 也可以均为神经祖细 胞; 而在不对称分裂情况下 , 则 产生 1 个 NSC 和 1 个神经祖细胞。后者的自我更新能力有限, 终将逐 步分化成熟。这样 , 既 能维持 NSC 的自我更新 , 又 能不断补充分化的神经祖细胞。巢蛋白 ( nestin) 属 于细胞骨架蛋白 , 可作为 NSC 的标志性蛋白 , 从而 为进一步研究 NSC 的特性提供了一把钥匙
成纤维细胞生长因子23在骨矿物质代谢中的作用及其调控机理
成纤维细胞生长因子23在骨矿物质代谢中的作用及其调控机理董中亮;任晓曼;卜舒扬;闪爱婷;王玉婷;杨建成【摘要】骨源性激素成纤维细胞生长因子23(FGF23)介导由甲状旁腺、肾脏、骨骼和维生素D组成的负反馈回路,建立"骨骼-肾脏-甲状旁腺"内分泌轴,参与骨矿物质代谢并发挥重要作用.钙、磷、铁、维生素D、甲状旁腺素(PTH)、成纤维细胞生长因子受体(FGFR)/FGF以及蛋白质翻译后修饰调控FGF23的分泌、活性和胞内过程.随着深入的研究,探索出了一些以FGF23为靶点治疗骨矿物质代谢障碍疾病的新疗法.本文综述了FGF23在骨矿物质代谢中的作用及其调控机理的研究进展,以期为相关研究提供参考依据.%fibroblast growth factor?23 ( FGF23 ) as a bone?derived hormone plays an important role in bone mineral metabolism by mediating the negative feedback loops formed by parathyroid gland, kidney, bone and vitamin D to constructing abone?kidney?parathyroid gland endocrine axis. The secretion, activity and intracel?lular processes of FGF23 are regulated by calcium, phosphate, iron, vitamin D, parathyroid hormone ( PTH) , fibroblast growth factor receptor ( FGFR)/FGF and posttranslational modifications. With the increase of study on FGF23, the researchers have explored new therapeutic interventions on bone mineral metabolism disorder. In order to provide reference for relevant research, functions and regulation mechanism of FGF23 in bone min?eral metabolism were reviewed in this paper.【期刊名称】《动物营养学报》【年(卷),期】2017(029)010【总页数】5页(P3467-3471)【关键词】成纤维细胞生长因子23;骨矿物质代谢;钙;磷;铁【作者】董中亮;任晓曼;卜舒扬;闪爱婷;王玉婷;杨建成【作者单位】沈阳农业大学畜牧兽医学院,沈阳 110866;沈阳农业大学畜牧兽医学院,沈阳 110866;沈阳农业大学畜牧兽医学院,沈阳 110866;沈阳农业大学畜牧兽医学院,沈阳 110866;沈阳204医院,沈阳 110043;沈阳农业大学畜牧兽医学院,沈阳110866【正文语种】中文【中图分类】S852.2钙、磷是动物生长、骨骼发育和维持机能所必需的矿物质元素，是骨骼的基本组成成分，它们结合生成的羟基磷灰石构成骨盐。
小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化中的核受体Rev-erbα及Rorα
小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化中的核受体Rev-erbα及Rorα林富伟;徐晓梅;崔琰;谢乙加;赵青【摘要】BACKGROUND: The orphan nuclear receptors Rev-erbα and Rorα play important roles in lipid metabolism and glucose metabolism. But it is unclear whether they are involved in bone metabolism. OBJECTIVE: To observe the expression of Rev-erbα and Rorα during the osteoblastogenesis process of bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs). METHODS: BMSCs were isolated and purified from C57BL/6 mice by the whole bone marrow adherence method followed by morphology observations and then BMSCs were induced to differentiate into osteoblasts and adipocytes. We detected their differentiation abilities using oil red O staining and alizarin red staining, respectively. Real-time PCR and western blot assay were conducted to detect the mRNA and protein levels of Rev-erbα and Rorα in BMSCs cultured in the osteogenic medium for 0, 7, 14 days. RESULTS AND CONCLUSION: BMSCs fromC57BL/6 mice were mainly spindle-shaped and exhibited the swirl-like pattern of growth. Following induction, oil red O staining and alizarin red staining produced a positive reaction in these cells. Rev-erbα expression at both gene and protein levels decreased at 0, 7, 14 days after osteogenic induction, while Rorα expression increased at both gene and pro tein levels. These findings indicate that Rev-erbα and Rorα may participate in the osteoblastogenesis of BMSCs.%背景:孤儿核受体Rev-erbα及Rorα已经被广泛证实与糖代谢、脂肪代谢等密切相关,但与骨代谢的关系尚不明确.目的:探讨孤儿核受体Rev-erbα及Rorα在骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的作用.方法:采用全骨髓贴壁法分离培养C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞,进行形态学观察和成脂、成骨诱导分化,采用油红O染色,茜素红染色对其分化能力进行鉴定.在骨髓间充质干细胞成骨诱导分化第0,7，14天,采用Real Time PCR及Western Blot分别检测孤儿核受体Rev-erbα及Rorα的mRNA及蛋白表达变化.结果与结论:①骨髓间充质干细胞形态以梭形为主,呈典型的漩涡样生长.油红O染色及茜素红染色呈阳性;②在成骨诱导的第0,7,14天,Rev-erbα的mRNA及蛋白表达均呈下降趋势,而Rorα的mRNA及蛋白表达均呈上升趋势,提示Rev-erbα及Rorα在骨髓间充质干细胞成骨诱导过程中可能发挥了一定的作用.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2018(022)017【总页数】6页(P2625-2630)【关键词】干细胞;骨髓间充质干细胞;成骨分化;核受体;Rev-erbα;Rorα【作者】林富伟;徐晓梅;崔琰;谢乙加;赵青【作者单位】西南医科大学附属口腔医院正畸科,口颌面修复重建与再生实验室,四川省泸州市 646000;西南医科大学附属口腔医院正畸科,口颌面修复重建与再生实验室,四川省泸州市 646000;西南医科大学公共卫生学院,四川省泸州市 646000;西南医科大学附属口腔医院正畸科,口颌面修复重建与再生实验室,四川省泸州市646000;口腔疾病研究国家重点实验室,国家口腔疾病临床研究中心,四川大学华西口腔医院正畸科,四川省成都市 610041【正文语种】中文【中图分类】R394.2文章快速阅读：文题释义：Rev-erbα：又名Nr1D1，是孤儿核受体超家族中的一员，Rev-erbα基因位于人类第17号染色体上。
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fgfr1flox/flox小鼠与在特定细胞 、组织或器官表达 Cre重组酶 的小鼠交配后 ,可以把表达 Cre细胞的 fgfr1基因的 8～14号外 显子区域敲除 (图 1 ) 。 fgfr1flox/ 小 flox 鼠与 OC2Cre转基因小鼠交 配 ,出生后代通过 PCR 筛选 。鉴定 Cre 引 物为 OCF1: 5′2AT2 GTCTAGGCATGCATAGGGT23′(位 于 O steocalcin 启 动 子 ) 和 OCR1: 5′2GCATCGACCGGTAATGCAGGC23′(位 于 Cre ) , 鉴 定
作者简介 :李福兵 ,男 ,重庆市铜梁县人 ,博士研究生 ,主要从事 fgfr1信号通 路在骨骼发育和骨折修复中的作用的研究 。电话 : (023) 68757040, E2m ail: abbilson@ yahoo. com. cn
通信作者 :陈 林 ,电话 : (023) 68757041, E2m ail: linchen70@163. com 收稿日期 : 2007209214;修回日期 : 2007211209
1. 3 fgf r1flox/flox小鼠鉴定及保种
1. 3. 1 小鼠基因组 DNA 的提取 采取剪取脚趾编号方法 , 从前肢到后肢 ,从右至左依次编号 。剪取的脚趾组织用于提取 基因组 DNA。基 因 组 DNA 提 取 大 致 步 骤 如 下 : 组 织 放 入 1. 5 m l EP管中 ,加入 200 μl 裂解液 ( 0. 5% SDS, 0. 1 mol/L NaCl, 0. 05 mol/L EDTA , 0. 01 mol/L Tris·HCl, pH 8. 0,用前加 20 mg/m l 蛋 白 酶 K 2 μl) , 55 ℃消 化 过 夜 。加 入 100 μl 6 mol/L NaCl,剧烈振荡 (大于 200次 )后 ,冰浴 10 ～30 m in,然 后 14 000 r/m in离心 10 m in,取上清 ,加入等体积异丙醇 ,颠倒 混匀 , 14 000 r/m in离心 10 m in,弃上清 ,干燥后加入 TE缓冲液 50μl, 56 ℃溶解 DNA 1 h, 4 ℃保存 ,用于基因型鉴定 。 1. 3. 2 fgf r1flox/flox小鼠基因型鉴定及保种策略 fgf r1flox/ 小 flox 鼠与 C57BL /6J小鼠交配后得到的后代理论上全为 fgfr1flox/ +杂 合子小鼠 ,用于保种 。 fgfr1flox/flox小鼠的基因型 [6 ]中 , 8～14号外 显子两端含有 2个 LoxP序列 ,采用引物 fgfr1b和 fgfr1c进行小 鼠的基因型鉴定 (图 1) 。2 条染色体都带有 2 个 LoxP序列的 纯合子小鼠 , PCR仅扩增得到 1条 400 bp 左右的条带 。1条染 色体带 2个 LoxP序列 ,同时另外 1条染色体为野生型的杂合 子小鼠 PCR扩增出 400 bp和 360 bp 2条带 。野生型小鼠 PCR 仅扩增出 1条约 360 bp的条带 。引物 fgfr1b和 fgfr1c序列分别 为 : 5′2CTGGTATCCTGTGCCTATC23′和 5′2CAATCTGATCCCAA 2 GACCAC23′。 PCR反应体系参照天为时代公司的试剂说明书 。 PCR条件 : 94 ℃ 4 m in; 94 ℃ 40 s, 58 ℃ 1 m in, 72 ℃ 30 s 32 个循环 ; 72 ℃ 10 m in; 4 ℃保存 。 PCR产物行 2%琼脂糖凝胶 电泳 。电泳完成后用 B io2Rad凝胶电泳成像仪照相 。
M ilitary M edical University, Chongqing 400042, China)
Abstract: O b je c tive To obtain differentiated osteoblast2specific inactivation of fgfr1 m ice. M e tho d s To obtain fgfr1△/ + /OC2C reTG/ + m ice, fgfr1flox/flox m ice obtained from N IH were cro ssed w ith OC2C re m ice. To obtain fgfr1△/△ /OC2C reTG/ + m utan t m ice, fgfr1△/ + /OC2C reTG/ + fu rther cro ssed w ith them selves o r fgfr1flox/flox m ice. A fter fgfr1△/△ /OC2C reTG/ + crossed w ith fgfr1flox/flox m ice, half of their offsp ring were m utant m ice. R e su lts D ifferentiated osteoblast2specific fgfr1 knockout m ice were obtained. Co nc lu s io n fgfr1△/△ /OC2 C reTG/ + m ice were obtained through p roper crossing strategy, which p rovides a suitable p latform for studying
280
第 30卷第 4期 2008年 2月
ACTA
第 三 军 医 大 学 学 报 ACADEM IAE M ED IC INAE M IL ITAR IS TERT
IA
E
Vol. 30, No. Feb. 2008
4
论著
文章编号 : 100025404 (2008) 0420280204
成纤维细胞生长因子 1 型受体 ( fibroblast grow th factor recep tor 1, fgfr1 ) 属 于 酪 氨 酸 激 酶 受 体 家 族 , fgfr1信号通路在胚胎发育 、骨骼发育 、血管生成等多种 生物信号通路中有着重要的生物学功能 [ 1 - 3 ] 。 fgfr1
第 4期
李福兵 ,等. 成熟成骨细胞 中 敲除基因 fgfr1小鼠的制备
281
1 材料与方法
1. 1 实验动物
fgfr1flox/flox小鼠从美国国立卫生研究院 (N IH )引进 ,雌雄各 2只 。OC2Cre转基因小鼠 [7 ]由军事医学科学院杨晓教授惠赠 , 雌雄各 2只 ,该小鼠在成熟成骨细胞中表达 Cre重组酶 。 SPF 级 C57BL /6J小鼠购于上海斯莱克实验动物有限公司 [许可证 编号 : SCXK (沪 ) 200320003 ] ,饲养于第三军医大学大坪医院野 战外科研究所实验动物中心 。所有实验动物操作均经第三军 医大 学 实 验 动 物 管 理 委 员 会 许 可 [执 行 标 准 SYXK (军 2002032) ]。
成熟成骨细胞中敲除基因 fgfr1小鼠的制备
李福兵 ,赵 玲 ,鲁秀敏 ,余 瑛 ,何启芬 ,陈锚锚 ,段亚琪 ,戚华兵 ,陈 林 (第三军医大学大坪医院野战外科研究
所全军创伤中心 ,创伤 、烧伤与复合伤国家重点实验室 ,重庆 400042)
摘 要 : 目的 制备在成熟成骨细胞中敲除基因 fgfr1 的特定细胞阶段性基因敲除小鼠 。方法 从美国 N IH 引进
SPF级 fgfr1条件性基因敲除 ( fgfr1flox/flox )小鼠 ,进行饲养 、繁殖和 PCR 鉴定 ; fgfr1flox/flox小鼠与在成熟成骨细胞表达 Cre重
组酶的 OC2Cre小鼠交配 ,获得在成熟成骨细胞中敲除一个基因拷贝的杂合子小鼠 ;杂合子小鼠之间交配 ,或者杂合子小
鼠与 fgfr1flox/flox小鼠交配 ,可以获得在成熟成骨细胞中敲除 fgfr1基因的小鼠 fgfr1△/△ /OC2CreTG/ + 。结果 成功制备在成熟
fgfr1 function in bone development and fracture healing.
Key words: fibroblast grow th factor recep tor 1; conditional gene knockout; m ice; bone developm ent
文献标识码 : A
Genera tion of d ifferen tia ted osteobla st spec if ic fgfr1 knockout m ice
L I Fu2bing, ZHAO L ing, LU Xiu2m in, YU Ying, HE Q i2fen, CHEN M ao2mao, DUAN Ya2qi, Q I Hua2bing, CHEN L in ( State Key Laboratory of Trauma, Burns and Combined Injury, Trauma Center, Institute of Surgery Research, Dap ing Hosp ital, Third
基金项目 :国家重点基础研究发展规划项目 “( 973”项目 ) (2005CB522604) ;国家 自然科学基金杰出青年基金 (30425023) ;国家自然科学基金重点 项目 (30530410) Supported by the National Key Basic Research and Development Plan of China (“973”Project, 2005CB522604) , the National Natural Science Foundation of China for Young Scholars (30425023) and the Key Pro2 gram of the National Natural Science Foundation of China (30530410)