3显微镜直接计数法
显微镜直接计数法实验报告
显微镜直接计数法实验报告实验报告：显微镜直接计数法一、实验目的本实验旨在通过显微镜直接计数法，测定微生物样品中细胞的数量，以了解其生长和繁殖情况，为生物工程、生物医学、环境科学等领域的研究提供依据。
二、实验原理显微镜直接计数法是一种通过显微镜直接观察并计数样品中微生物数量的方法。
该方法具有操作简便、快速等优点，适用于测定样品中微生物的数量和生长情况。
通过显微镜直接计数法，可以观察到微生物的形态、大小、分布等情况，从而对其生长环境、生长状况等进行评估。
三、实验步骤1.样品制备：将待测样品进行适当稀释，使微生物细胞分散均匀。
2.显微镜观察：将样品滴加到显微镜载玻片上，用盖玻片固定，调整显微镜焦距，观察并计数微生物的数量。
3.计数方法：采用直接计数法，即直接观察并计数样品中的微生物数量。
对于压在盖玻片下的细胞，可以通过轻轻移动盖玻片进行观察和计数。
4.数据记录：记录每个样品中微生物的数量，并计算平均值。
同时记录观察到的细胞形态、大小、分布等情况。
5.结果分析：根据实验数据，分析微生物的生长情况、繁殖速度等。
四、实验结果及数据分析1.实验数据（见附表1）附表1：显微镜直接计数法实验数据2.数据分析通过附表1的数据，我们可以得出以下结论：（1）样品A中微生物的数量较少，而样品B、C、D中微生物的数量较多。
这表明不同样品中微生物的数量存在差异。
（2）在相同稀释倍数下，观察到的细胞数越多，计数结果越准确。
因此，选择合适的稀释倍数对于准确测定微生物数量至关重要。
在本实验中，选择100倍和1000倍作为稀释倍数，可以较为准确地测定微生物数量。
（3）通过对比不同样品在同一稀释倍数下的计数结果，可以得出不同样品中微生物的生长情况。
例如，样品B和D在1000倍稀释下的计数结果较高，说明这两个样品中微生物的生长情况较好。
而样品A和C在100倍稀释下的计数结果较低，说明这两个样品中微生物的生长情况较差。
（4）根据实验数据，可以进一步分析微生物的生长规律和繁殖速度。
微生物活菌计数方法
杂菌数 亿/g
细菌杂菌 (亿 / g ) 10 8 19 .3 10 4
100 0.19 10 .10 0.1
重复 1 2 3 菌落 平均数
稀释倍数 （霉菌在马丁培养基 上） 103 104 105 6 / / 7 / / 8 / / 7.0 /
3
/
霉菌数 个/g 0.69×106
两个稀 释倍数 度菌落 数之比 / / / 1.1 2.5 / /
菌数 亿 /g,mL 25.3 3.2 0.38 0.30 / 0.032 0.015
无法数 无法数 无法数 313 289 无法数 32 15 315 38 32 136 5 3
3.2 标准差
标准差(Standard Deviation) ：各数据偏离平均数的距离 （离均差）的平均数，它是离差平方和平均后的方根。用δ表 示。标准差体现随机变量取值与其期望值的偏差。 标准 NY411-2000 固氮菌肥料的7.2.6.2。
浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正 比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表 示样品菌液浓度。根据浊度计算出细菌的数量。该方法一 般可以估计出细菌的数量级。
经常用于一些特殊的微生物的快速计数，如光合细菌和
藻类的测数。但是由于该方法仅能估测菌数，不能准确定 量，而且由于一些颗粒和添加剂的作用，不能正确反映该 样品的质量，所以在质检过程中不予采用。
微生物活菌平板计数方法和技术
微生物肥料和食用菌菌种质检中心 曹凤明
微生物计数方法种类
1. 2. 3.
直接计数法 核酸计数法 活菌计数法（培养法）
MPN（Most-Probable-Number ）最大可能数法 混菌法 平板技术法
显微镜直接计数法原理
显微镜直接计数法原理
显微镜直接计数法是一种用于测定溶液中微粒数量的方法，其原理是通过显微镜观察溶液中的微粒并进行直接计数。
这种方法适用于微粒浓度较低的溶液。
在进行显微镜直接计数之前，需要将待测溶液适当稀释，以保证在显微镜下观察到的微粒较为分散，不会产生严重的重叠。
然后，取少量稀释好的溶液放置在显微镜下的玻片上，利用显微镜进行观察和计数。
在显微镜观察过程中，可以使用目视计数法或者计数仪来进行微粒数量的计数。
目视计数法是通过直接观察显微镜视野中的微粒数量来进行计数，但这种方法需要操作人员具备一定的经验和技巧，否则容易产生误差。
计数仪则是通过将显微镜和计数器结合在一起，使用计数仪的软件进行自动计数，可以提高计数的准确性和效率。
在进行显微镜直接计数时，需要注意减小观察误差。
例如，应该避免在显微镜下对颗粒悬浮物的快速移动进行计数，应尽量保持视野稳定。
此外，还要随机选择计数视野，以确保样本的代表性。
显微镜直接计数法不仅可以用于测定溶液中的微粒数量，还可以用于观察微粒的形状、大小和分布情况。
但是，由于此方法需要借助显微镜进行观察，操作相对繁琐，且对于微粒浓度较高的溶液不适用。
因此，在实际应用中，常常需要结合其他测量方法来进行微粒数量的确定，以提高准确性和可靠性。
3-酵母菌形态的观察和显微镜直接计数法
实验三 酵母菌形态的观察和显微镜直接计数法
执教 单位
刘森林
生命科学学院
实验目的
观察酵母菌的形态，学习区分酵母菌死活细 胞的实验方法。
掌握酵母菌的一般形态特征。 明确血球计数板计数的原理。
掌握使用血球计数板进行微生物计数的方法。
实验原理
美兰染色检时为无色。活的 酵母细胞具有还原能力，能使美兰保持为还原态， 因此染色后死的为蓝色、活的为无色。
三.实验步骤: 作业 画图说明你所观察到的酵母菌的形态特 征，并说明死细胞和活细胞分别为什么颜 色。
三.实验步骤:
二．显微镜直接计数法
1. 菌悬液的制备：以无菌水将酿酒酵母制成浓度适 中的菌悬液 2. 镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进 行镜检，若有污物，则需清洗，吹干后才能计数。 3. 加样品：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片， 再用无菌滴管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘滴一小 滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室， 一般计数室均能充满菌液。 注意：取样时先要摇匀菌液；加样时计数室不可有 气泡产生。
酵母菌细胞计数的原理:
将菌液放在已知体积计数室(1mm2×0.1mm)，计数 室薄，因此每个细胞都可以被看到。体积确定，因 此数完所有细胞后就知道单位体积的细胞个数。
三.实验步骤: 一、酵母菌形态的观察 （美蓝浸片的观察）
1. 在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色 液，然后按无菌操作接种环挑取少量酵母菌苔放 染色液中，混合均匀。 2. 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触， 然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。 注意：盖玻片不宜平放，以免产生气泡影响观察 3. 将玻片放置约3分钟后镜检，先用低倍镜观察 后用高倍镜观察酵母菌的形态，并根据颜色区别 死活细胞。
显微镜的直接计数和细菌大小测定-精选文档
四、操作方法
(一)酵母菌大小测定的操作方法 1.测微尺的构造和使用方法 (1)目镜测微尺的构造 目镜测微尺是一块圆形玻片， 其中央刻有精确的刻度，通常是将5mm划分为50 格，实际每格等于100μm。刻度的大小是随使用 的接目镜和接物镜的放大倍数而改变，用前必须用 物镜测微尺来标定，如图。 (2)物镜测微尺的构造 物镜测微尺为一块特制的 载玻片，其中央有一小圆圈。圆圈内刻有分度，将 长1mm的直线等分为100小格，每小格等于10μm， 如图 。
五、实验报告及思考题
1、微生物大小测定实验结果
（1）将目镜测微尺校正结果填入下表：
接物镜 接物镜倍数 目镜测微尺格 镜台测微尺格
数
数
低倍镜
高倍镜
油镜
目镜测微尺每格代表 的长度(μm)
接目镜的放大倍数________
（2） 酵母细胞大小的测量结果：
微生物 名称
目镜测微尺每 格代表的长度
/μm
宽
目镜测微 尺格数
2.目镜测微尺的标定
(1)取下接目镜，旋下目镜上的目透镜，将目镜测微 尺放人接目镜的中隔板上，使有刻度的一面朝下， 再旋上目透镜，并装入镜筒内。 (2)将物镜测微尺置于显微镜的载物台上，使有刻度 的一面朝上，同观察标本一样，使具有刻度的小圆 圈位于视野中央。 (3)先用低倍镜观察，对准焦距，待看清物镜测微尺 的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与物镜 测微尺的刻度相平行，并使两尺的左边第一条线相 重合，再向右寻找两尺的另外一条重合线。如图 (4)记录二条重合线间的目镜测微尺的格数和物镜测 微尺的格数。
4.酵母菌大小的测定
(1)取下镜台测微尺，换上酵母菌水浸制片。
(2)测量菌体的长度和宽度各占目镜测微尺 几格，然后换算出菌体的实际长度。
人教(2019)生物选择性必修三(学案+练习)：微生物的选择培养和计数
人教(2019)生物选择性必修三(学案+练习)微生物的选择培养和计数1．微生物的选择培养(1)选择培养基：将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
(2)稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释后，将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基表面，进行培养。
①系列稀释操作系列稀释：移液管需要经过灭菌。
操作时，试管口和移液管应离火焰1～2 cm 。
操作过程如下：②涂布平板操作 序号图示 操作 1取0.1 mL 菌液，滴加到培养基表面2将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中 3将沾有少量酒精的涂布器在火焰上灼烧，待酒精燃尽后，冷却8～10 s 4用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。
涂布时可转动培养皿，使菌液涂布均匀 ③培养：待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入℃的恒温培养箱中培养1～2 d 。
2．微生物的数量测定(1)稀释涂布平板法①计数原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
②计数标准：为了保证结果准确，一般选择菌落数为30～300的平板进行计数。
③计数方法：通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数为30～300、适于计数的平板。
在同一稀释度下，至少应对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。
④统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此统计结果一般用菌落数表示。
(2)显微镜直接计数法①计数原理：利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量。
②优点：是一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法。
③缺点：统计的结果一般是死菌数和活菌数的总和。
3．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1．利用稀释涂布平板法和平板划线法均可实现细菌的分离和计数。
(×) 2．培养分解尿素的细菌，培养基的pH会增大。
显微镜直接计数法实验报告
显微镜直接计数法实验报告一、实验目的1、了解显微镜直接计数法的原理和应用。
2、掌握血细胞计数板的使用方法。
3、学会对细胞进行计数，并计算细胞浓度。
二、实验原理显微镜直接计数法是利用血细胞计数板在显微镜下直接计数细胞的一种方法。
血细胞计数板是一块特制的厚玻璃片，板上有四个槽构成三个平台。
中间的平台又被一短横槽隔成两半，每半边上面刻有一个方格网。
方格网上刻有 9 个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。
计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成 16 个中方格，而每个中方格又分成 25 个小方格；另一种是一个大方格分成 25 个中方格，而每个中方格又分成 16 个小方格。
但无论哪种规格，每个大方格的边长均为 1 毫米，盖上盖玻片后，计数室的容积是固定的。
因此，在计数时，只要测定一定体积的样品在计数室中所占的方格数，就能计算出样品中的细胞数量。
三、实验材料与设备1、材料酵母菌悬液2、设备显微镜血细胞计数板盖玻片吸管擦镜纸四、实验步骤1、准备血细胞计数板用酒精棉球擦拭计数板和盖玻片，然后用擦镜纸擦干。
将盖玻片盖在计数板上。
2、制备酵母菌悬液用无菌吸管吸取适量的酵母菌培养液，加入一定量的无菌生理盐水，充分混匀，制成适宜浓度的酵母菌悬液。
3、加样用吸管吸取酵母菌悬液，从盖玻片边缘滴一小滴（不宜过多），使菌液自行渗入计数室，注意不可有气泡产生。
4、计数静置片刻，待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部后，将血细胞计数板置于显微镜载物台上。
先用低倍镜找到计数室，再换高倍镜进行计数。
计数时，对于压在方格线上的细胞，只计上线和左线的细胞。
5、计算统计五个中方格中的细胞总数，然后按下式计算：每毫升菌液中的细胞数＝五个中方格中的细胞总数 × 5 × 10000 ×稀释倍数五、实验结果与分析1、实验结果经过计数，五个中方格中的细胞总数为_____个。
本次实验所使用的酵母菌悬液稀释倍数为_____倍。
实验技术十显微镜直接计数法
一、目的要求：
1. 理解血球计数板的计数原理 2. 学会并掌握使用血球计数板进行准确计数 3. 了解其在生产实践中的应用
生产实践中测定微生物生长繁殖的方法
测生长
间接法：平板菌落计数法 直接法 ：显微镜直接计数
二、基本原理
利用血球计数器在显微镜下直接计数， 这是生产实践中常用的一种微生物计数 方法。
1000mm3（1mL）相当于多少个计数室的体积？
设菌悬液稀释倍数为B
则：原菌液含菌数 个/毫升=每小格平均菌数 ×4×106×B
若数中方格 则：
原菌液含菌数 个/毫升=每中方格平均菌数 ×25（16）× 104×B
优点： 方便、迅速、直接 缺点： 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细胞浓度； 个体较小的细菌在显微镜下难以观察；
计繁殖数
利用血球计数板，在显微镜下计算一定 容积里样品中Βιβλιοθήκη 生物的数量。血球计数板的构造
25中格× 16小格计数室 16中格×25小格计数室
计数室边长为1mm，则计数室的面积为l mm2高 度为0.1mm，所以每个计数室的体积为0.1mm3，
1mL=1cm3=1000mm3
1mL原菌液含菌数？
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其原理与计数板的构造有关
?每块计数板上有两个计数室 （正方形），盖上 盖玻片后容积是一定的（0.1mm 3），深为 0.1mm ，边长为1mm ，其上面有精确的刻度。
计数室
其刻度一般有两种规格
16个中方格，每个中方格分 25个小格 16 ×25 25个中方格，每个中方格分 16个小格 25 ×16
注：该法适合菌浓度较高ຫໍສະໝຸດ 样品。比浊法在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度 成正比，即与吸光值成正比， 菌数越多，吸光值 越大。因此，借助于分光光度计，在一定波长下 测定菌悬液的光密度，就可反应出菌液的浓度。 该法适合测定大量的细胞。
显微镜直接计数法
利用血球计数板在显微镜下计数是常用的一 种微生物计数法
1ml
1ml
×2 ×2
1ml
×2
最常用的活菌计数法。
将适当稀释的菌液倾注平板或涂布在平板表面，经保 温培养后，每个细胞形成一个菌落，即菌落形成单 位。以平板上出现的菌落数乘以稀释度就可以计算 出原菌液的含菌量。
干重法
? 将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离出 来，然后烘干至恒重 (干燥温度可采用105℃、 100℃或80℃)、称重。一般干重为湿重的 10% —20% 。
稀释100 倍)
2.器具
显微镜、血球计数板、吸管、盖玻片 。
四 实验方法
1.检查计数板
检查计数板是否有破损。
2.镜检计数室
在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。 若有污物，则需清洗后才能进行计数。
3．加样品
将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用细 口滴管将稀释的酿酒酵母菌液由盖玻片边缘点 一小滴（不宜过多），让菌液沿缝隙靠毛细渗 透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满 菌液。注意不可有气泡产生。
3、计数时，格线上的菌体只数上方和右边线上的；
4、如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时， 作为两个菌体计算；
5、清洗计数板时切勿用手或硬物刷洗。在水龙头 上用水柱清洗，直到洗净为止。
6、一个样品要从两个计数室中计得的平均值来计 算。
特别注意
血球计数板均有编号，一人一 个，务必小心使用，若损坏，需原 价赔偿或赔偿原物！
五、作业
显微直接计数结果
?÷?D · ? ? ?D ?ú êy
12345 A
μ ú ò? êò μ ú ?t êò
?t êò
B ?ú êy /ml ? ?ù ?μ
1100 1
100
4. 显微镜计数
静置几分钟，将计数板放在显微镜下， 先用低倍镜找到计数室，再换成高倍镜进 行计数
5. 清洗血球计数板
计数完毕，将计数板在水龙头下冲洗干 净后自行晾干，镜检观察每小格内无残留 物为止。
注意事项
1、加样时先摇匀菌液，计数室中不可有气泡产生；
2、菌液浓度以每小格有 5-10 个菌体为宜。
? 我们采用的是25×16的，计数时查5个中方格的总菌数 。如图：
5个方格的总菌数
? 计算：1个计数室的总菌数=A/5×25×B
稀释倍数
? 1g（ml）样品中的总菌数=A/5×25×10×1000×B
=50,000A×B个
三 实验器材
1.菌种
酵母（Saccharomyces cerevisiae）菌悬液(已
实验三、微生物数量的测定
一、实验目的：
?掌握使用血球计数板进行微生物显微镜直接计 数的方法
?了解微生物数量测量的几种方法、原理及其应 用
二、实验原理
?常用的微生物细胞数目的检测法 血球计数板法 平板菌落计数法 干重法 比浊法等
平板菌落计数法
1ml 1ml 1ml
1ml
9ml 9ml 9ml
9ml