染色体实验原理
染色体G显带技术及其原理
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示中期染色体Ga显带结果
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示中期染色a体R显带结果
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示中期染色a 体C显带结果
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示中期染色体N显带结果
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实验原理(8)
G显带是最常用的，染色体经胰蛋白酶处 理后，使染色体的蛋白质变性，然后用一种 能结合DNA的化学染料吉姆萨染色，使染色 体呈深浅不同的带型，人类的24种染色体可 显示出各自特异的带纹。
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DNA核苷酸的组成
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实验原理(6)
非显带的标本上虽然可以根据染色体的 形态识别1，2，3，16，17和18号，有时还 可以识别Y染色体，但却不能有把握地鉴别其 他大多数染色体。自1970年Caspersson等首 次报道用喹吖因对人体染色体进行染色可在 各号染色体上显现出宽窄和位置不同带纹以 来，细胞遗传学工作者以不同的染色方法为 基础，提出了各种显带方法的名称。
染色体G显带技术 及其原理
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染色体G显带核型图
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实验原理 (1)
人们将用各种不同的方法，以及用不同 的染料处理染色体标本后，使每条染色体上 出现明暗相间，或深浅不同带纹的技术称为 显带技术（banding technique）。本世纪70 年代以来，显带技术得到了很大发展，且在 众多的显带技术中（Q带、G带、C带、R带、 T带），G带是目前被广泛应用的一种带型。 因为它主要是被Giemsa染料染色后而显带， 故称之为G显带技术，其所显示的带纹分布在 整个染色体上。
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实验原理(7)
如用芥子喹吖因作为染料,染出的荧光带称为Q 带,其方法称为Q显带法;用Giemsa作为染料,染出的 带称为G带,其方法称为G显带法。同样用Giemsa或 其他荧光染料作为染料，但在其中加上不同的预处 理而获得的与Q带或G带着色强度正好相反的带称为 R带，其方法称为反式显带法（R显带法）；将专一 的显示“结构性异染色质”的方法称为C显带法， 其带称为C带。其它一些显带技术还可以专门显示 染色体的端粒（T显带）和核仁组织区（N带）等。
染色体 实验报告
染色体标本的制备及组型实验生命科学学院张瀛【实验目的】1．掌握染色体标本的制作方法。
2．认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组型图。
【实验用品】小白鼠，秋水仙素，生理盐水，0.3%KCl液，固定液，铜网，酒精灯，离心机，注射器，剪刀，镊子，载玻片，滴管，显微镜等。
【实验原理】染色体标本制作的原理细胞分裂中期染色体形状较为清楚，故使用中期细胞，并以每条染色体相对独立存在为染色体标本制作的四大要点1）PHA：促细胞分裂，使淋巴细胞返幼，变为淋巴母细胞。
2）秋水仙素：破坏微管装配，使纺锤体不能形成，使大量细胞停止在分裂中期。
（相同作用：秋水仙胺、长春碱、鬼臼素）3）低渗作用：水进入细胞内，使细胞内容空间变大，染色体间的距离拉大，易于染色体分散开。
4）空气干燥：使细胞和染色体展开。
5）固定：用camoy`s solution（甲醇：冰醋酸=3:1）作用使蛋白质变性，对染色体内的组蛋白来说，变形后硬度增加，保持了染色体的“即时形态”，对细胞膜蛋白来说，变形使细胞膜硬度增强，形成屏障作用，防止了细胞内物质外溢和丢失。
染色体标本制作的意义根据染色体的特征（数目、形态、大小等）制作染色体组型图。
染色体标本制作的应用1） 生物学方面：根据染色体特征鉴别生物及种类。
染色体数目：兔-44条，猫-38条，狗-78条，马-64条，人-46条，小鼠-40条（18对端着丝粒染色体，第17、18对为亚端着丝粒染色体），大鼠-42条，鸡-78条。
2） 临床医学方面：主要用于遗传性疾病的诊断及研究。
因此，染色体组型实验广泛应用于胎儿遗传性疾病早期诊断中（抽取羊水）。
染色体组型把真核生物的一个体细胞中的各个染色体按其长度、形状和着丝粒的位置排列成一定顺序的过程，即为染色体组型。
染色体核型染色体组型是染色体核型的模式表达。
染色体组型及分群依据主要根据染色体的相对长度，着丝粒的位置，其次是臂的长短，以及次级缢痕或随体的有无等方面。
实验11 人体染色体核型分析
六、思考题
请描述核型： 45，XY, der (14;21) (q21;q14) 47，XY, +21
karyotyping软件应用技术 四、 karyotyping软件应用技术
3.7 点 图标，按原定物种分类器自动配对
karyotyping软件应用技术 四、 karyotyping软件应用技术
3.8鼠标左键双击，单条染色体翻转
karyotyping软件应用技术 四、 karyotyping软件应用技术
五、LUCA软件应用技术 LUCA软件应用技术
1.打开LUCA软件测定染色体长短臂长度
五、LUCA软件应用技术 LUCA软件应用技术
2.点击测量菜单中长度测定,出现
五、LUCA软件应用技术 LUCA软件应用技术
3.测量染色体每一个长臂和短臂长度,直到 23对染色体测完，点击Preprocess，点击 下拉菜单中 ，存盘。
karyotyping软件应用技术 四、 karyotyping软件应用技术
3.1.亮度和对比度键：点击“ ”图标出现
点击Auto键自动设定亮度和对比度，然后点击OK
karyotyping软件应用技术 四、 karyotyping软件应用技术
3.2点击Clean，去掉非染色体残渣, 完毕 后点击OK。出现
三、实验用品
1.计算机、核型分析元件 2.人染色体照片
karyotyping软件应用技术 四、 karyotyping软件应用技术
1.点击karyotyping软件,点击“ ”打开,出现
karyotyping软件应用技术 四、 karyotyping软件应用技术
2.选择分类器：已建人类、老鼠、猪、牛、 羊、鱼等物种染色体分类系统，默认值是 Human。掌握10大指令运用。
实验一 染色体核型分析
实验一 染色体核型分析一、实验目的1．了解人类正常染色体核型的组成； 2．掌握人类染色体核型分析的方法；二、实验原理：各种生物染色体的形态，结构和数目都是相对稳定的。
染色体核型：指一个物种所特有的染色体数目和每一条染色体的形态特征。
如人类体细胞中共有23对染色体，22对常染色体，一对性染色体。
细胞分裂中期是染色体的形态结构最典型的时期，通过显微镜摄影，将选取伸展良好，形态清晰，有代表性的细胞分裂相进行高倍拍摄放大，得到照片，该核型可以代表该个体的一切细胞的染色体组成。
从染色体玻片标本和染色体照片的对比分析，进行染色体分组，并对组内各染色体的长度，着丝点位置，臂比和随体有无等形态特征进行观测和描述，从而阐明生物的染色体组成，确定其染色体组型，这种过程称为染色体组型分析。
染色体组型分析也称核型分析。
染色体长度测定：可在显微镜下用测微尺直接测量或在放大的照片上测量得到。
通常以微米表示。
绝对长度：不稳定，只有相对意义。
相对长度：是每条染色体的绝对长度与正常细胞全部染色体总长度的比值，通常用百分比表示。
是稳定的比较可靠的数据。
着丝粒的位置：常用Evans 提出的方法，即以染色体的长臂（L ）和短臂（S ）的比值来表示。
在常规染色的情况下，不可能全部识别每个染色体，因此根据染色体的长度和着丝点的位置，可将正常人的染色体分为7组，即A 、B 、C 、D 、E 、F 和G 组，其分布如下：这7组染色体的主要特征如下：A 组：第1，2，3染色体．在染色体中是最大的三对染色体，按长短和着丝点的位置彼此可以分开．B 组：第4、5染色体，具有亚中部着丝点的两对大型染色体，第4比第5稍长些，彼此较难于区分。
C 组：第6、7、8、9、10、11和12染色体。
具亚中部首丝点的中型染色体。
第6、7、8和11染色体的着丝点比第9、10、12染色体的着丝点更近于中央。
组内各染色体的大小也略有不同。
该组内的各染色体较难于配对和确定。
高中物理第5章 第2节 探究实践 低温诱导植物细胞染色体数目的变化
谢谢观看 THANK YOU!
A．应该选用洋葱根尖成熟区细胞作为实验材料 B．该实验应设置室温下、－4 ℃的冰箱中、2%的秋水仙素溶 液中3组实验
探究实践 低温诱导植物细胞染色体数目的变化
C．在显微镜下观察和比较经过不同处理的根尖细胞内染色体 数目
D．若低温处理结果大部分细胞染色体数目不变，则低温不能 诱导细胞染色体数目加倍
探究实践 低温诱导植物细胞染色体数目的变化
探究实践 低温诱导植物细胞染色体数目的变化
3.实验操作的提醒及目的
实验操作提醒
操作目的
①解离前冲洗：洗去卡诺氏液，同时为解离做准
解离前后都 需要清洗
备，用体积分数为95%的酒精(解离液的组分之一) 冲洗两次。 ②解离后漂洗：洗去解离液防止解离过度，用清水
进行漂洗
探究实践 低温诱导植物细胞染色体数目的变化
探究实践 低温诱导植物细胞染色体数目的变化
(2)染色体染色 染色体容易被碱性染料染成深色，用质量浓度为 0.01 g/mL 的 甲紫 (旧称龙胆紫)溶液染色。
探究实践 低温诱导植物细胞染色体数目的变化
2．实验步骤
探究实践 低温诱导植物细胞染色体数目的变化
3．实验现象：视野中既有正常的二倍体细胞，也有染色体数目 发生改变 的细胞。
室温→都是正常二倍体细胞 低 有染温色→体既加有倍二细倍胞体细胞，也―对 分―照 析→低 体温 数使 目染 加色 倍
探究实践 低温诱导植物细胞染色体数目的变化2．变量分析自变量及其控 Nhomakorabea 因变量
无关变量(不同实验组 中等同原则)
培养条件
自然条件下培养
低温处理
细胞中染色体数目
举例：
①不定根的长度
②适宜的pH
染色体制备的实验原理
染色体制备的实验原理
染色体制备是一种从细胞中提取染色体的方法，通常用于研究染色体的结构和功能。
以下是染色体制备的基本原理：
1. 细胞收集：选择需要研究的细胞类型并进行培养，使其增殖到足够数量。
2. 处理细胞：细胞在特定条件下被处理，以使染色体膨胀并保持其形态和结构。
3. 染色：染色体被染色以提高其可视性。
不同的染料和处理方法可用于不同类型的研究。
4. 制备幻灯片：染色体被放置在玻璃幻灯片上，并用显微镜观察。
通过染色体制备，可以观察染色体的形态、大小、数量、分布等特征，并进一步研究其在遗传学和细胞生物学中的作用。
实验九、 染色体组型分析
染色体的分类 （1） telocentric chromosome (t) （2）sub-telocentric chr.（st) （3）sub-midcentric chr.（sm) （4） midcentric chr. （m)
t, r>7
st,r=3～7
sm, r=1.7～3
m,r=1～1.7
实验九、 染色体组型分析
（教材上实验2，p7-10）
一、实验目的
课余时间做
掌握染色体组型分析的基本方法
二、实验原理 1. 染色体组型(Karyotype,核型)概念
2. 3. 4.
染色体组型分析的意义 染色体组型分析方法 相对长度=（某一条染色体长度/单倍染色体总 长）×100%（精确0.01）
5.
ห้องสมุดไป่ตู้
实验报告：展示核型分析结果
实验报告纸 题头
后 天 交 老 师 信 箱
图注
染色体片照片 （标染色体号）
次级图注 核型图
• • • •
思考题 1.核型分析的意义是什么？ 2.核型分析包括哪些指标？ 3.以形态为依据的核型分析有什么缺陷？ 用什么方法可以补救？
现在，先做Feulgen染色前的60℃酸解 一步，等待间开始做性染色质实验，然 后有机安排时间。 做完性染色质实验并尽快做好染色体 畸变制片染色后，到4楼显微互动实验室 观察、摄影。
臂比值=长臂/（短臂+随体）
染色体组型和染色体组型分析
染色体组型（Karyotype,核型）主要是指有 丝分裂中期的染色体数目及其各种特征的总和。 对不同生物的染色体组型的各种特征进行 定性和定量的分析和研究称之为染色体组型分析。 核型分析之所以选用中期染色体，是由于 中期染色体充分缩短、比较稳定。
实验十四植物染色体组型分析
染色体组型分析的方法
01
02
03
显微观察
通过显微镜观察染色体的 形态和排列顺序，是进行 染色体组型分析的基础。
染色体测量
使用显微测微尺等工具对 染色体进行精确测量，获 取染色体的长度、宽度等 数据。
核型分析
将染色体按照大小、形态 进行排列，形成核型图谱， 可以直观地了解染色体的 特点和变异情况。
03 实验步骤
染色体组型分析
通过对染色体进行显微观察和测 量，将染色体的数目、形态特征 和排列顺序进行描述和分类，从 而确定生物的染色体组型。
染色体数目与形态特征的描述
染色体数目
每种生物都有一定数量的染色体，这 些染色体在细胞分裂过程中起到关键 作用。
形态特征
染色体的形态特征包括长度、着丝粒 位置、核型等，这些特征可以反映染 色体的功能和进化历程。
实验结果提示，该植物可能具有较好的遗传稳定性和适应性，对于农业 生产具有潜在的应用价值。
实验结果还表明，染色体组型分析技术在实际应用中需要综合考虑多种 因素，如染色体大小、着丝粒位置、核型对称性等，以确保结果的准确 性和可靠性。
对实验方法的改进与展望
在未来的研究中，可以采用更先进的染色体组型分析技术，如全染色体微列阵技术和高通量 测序技术等，以提高分析的准确性和分辨率。
可以进一步优化实验方法，如改进染色体制片技术、优化显微观察条件等，以提高实验效率 和结果的可靠性。
在应用方面，可以进一步拓展植物染色体组型分析在遗传资源评价、物种分类和进化生物学 等领域的应用，为相关领域的研究提供有力支持。
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径。
染色体数目和结构的变异是物种形成和 进化的基础，可以导致物种间的生殖隔
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【实验原理】染色体是在显微镜下可见细胞有丝分裂过程中出现的结构。
因此，必须获得染色体标本才能进行检查分析，通常情况下，都是利用外周血淋巴细胞进行核型分析。
正常情况下，人体外周血淋巴细胞不再分裂，但植物血凝素（PHA）可刺激血中的淋巴细胞转化成淋巴母细胞，使其恢复增殖能力。
因此，可采取少量外周静脉血，做短期培养，培养至72小时细胞进入增殖旺盛期，此时加入秋水仙素抑制细胞分裂，使细胞分裂停止在中期以获得足够量的分裂期细胞，经低渗、固定、制片、染色后镜下观察进行核型分析。
上述制备的染色体标本经胰蛋白酶消化、Giemsa染色后，可在染色体纵轴上显示出着色深、浅相间的横纹——带，表明每条染色体的特征。
一. 常规染色体核型分析1．根据染色体的形态、大小及着丝粒的位置，将染色体分为七组。
A组染色体：包括1～3号染色体。
长度最长，1号和3号染色体为中央着丝粒，2号染色体为亚中央着丝粒染色体。
B组染色体：包括4～5号染色体，长度次于A组；亚中央着丝粒染色体，短臂较短。
C组染色体：包括6～12号和X染色体，中等长度，亚中央着丝粒染色体。
D组染色体：包括13～15号染色体，具有近端着丝粒和随体。
E组染色体：包括16～18号染色体，16号染色体着丝粒在 3/8处，17号和 18号染色体着丝粒约在 1/4处。
F组染色体：包括19号和20号染色体，中央着丝粒。
G组染色体：包括21号、22号和Y染色体，是染色体组中最小的，为近端着丝粒的染色体。
21号和22号染色体具有随体。
二．G显带染色体标本分析G带显示的正常人显带核型特征（见附图1.1、1.2、1.3）A组染色体：包括1～3号染色体。
长度最长，1号和3号染色体为中央着丝粒，2号染色体为亚中央着丝粒染色体。
1号染色体短臂：在320条带左右的分裂相上，近侧段有两条深带，第2条深带稍宽；在处理好的标本上，远侧段可显出34条浅染的深带。
此臂分为3个区，近侧的第1深带为2区1带，第2深带为3区1带。
长臂：副缢痕紧贴着丝粒，染色深浅不一，其远侧为一宽的浅带，近中段与远侧段各有两条深带，中段两条深带稍靠近，其中第2条染色较浓。
此臂分为四个区，副缢痕远侧的浅带为2区1带，中段第2深带为3区1带，远侧段第1深带为4区1带。
2号染色体短臂可见四条深带，中段的两条深带较靠近。
此臂分为2个区，中段两条深带之间的浅带为2区1带。
长臂：有7条深带，第3和第4深带有时融合。
此臂分为3个区．第2和第3深带之间的浅带为2区1带，第4和第5深带之间的浅带为3区1带。
3号染色体着丝粒区浓染短臂：在近侧段可见一条较宽的深带，远侧段可见两条深带，其中远侧的一条较窄，且着色较浅，这是区别3号染色体短臂的重要特征。
近侧段的深带可分为两条深带。
此臂分2个区，中段浅带为2区1带。
长臂：一般在近侧和远侧段各有一条较宽的深带。
在显带好的标本上，近侧段的深带可分为两条深带，远侧段的深带可分为三条深带。
此臂分为2个区，中段浅带为2区1带。
B组染色体：包括4～5号染色体，长度次于A组；亚中央着丝粒染色体，短臂较短。
4号染色体短臂：可见两条深带，近侧深带染色较浅，短臂只有一个区。
长臂：可见均匀分布的四条深带，在显带较好的标本上，远侧段的两条深带可各自再分为两条较宽的深带。
此臂分为3个区，近侧段第1和第2深带之间的浅带为2区1带，远侧段的两条深带之间的浅带为3区1带。
5号染色体短臂：可见两条深带，其中远侧的深带宽而且色浓，短臂只有一个区。
长臂：近侧段有两条深带，染色较浅，有时不明显；中段可见三条深带，染色较深，有时融合成一条宽的深带；远侧段可见二条深带，近末端的一条着色较浓。
此臂可分为3个区，中段第2深带为2区1带，中段深带与远侧段深带之间的宽阔的浅带为3区1带。
C组染色体：包括6～12号和X染色体，中等长度，亚中央着丝粒染色体。
6号染色体短臂：中段有一条明显而宽阔的浅带，其中近侧段和远侧段各有一条深带，近侧深带紧贴着丝粒；在显带较好的标本上，远侧段的深带又可分为两条深带。
此臂分为2个区，中段的明显而宽阔的浅带为2区1带。
长臂：可见五条深带，其中近侧的一条紧贴着丝粒，远侧段末端的一条深带着色较浅。
此臂分为2个区，第2和第3深带之间的浅带为2区1带。
7号染色体着丝粒浓染。
短臂：有三条深带，中段深带着色较淡，有时不明显；远侧深带着色浓宽，状如”瓶盖”。
此臂分为2个区，远侧段的浅带为2区1带。
长臂：有三条明显的深带，远侧近末端的一条深带着色较淡，第2和第3深带稍接近。
此臂分为3个区，近侧第1深带为2区二带，中段的第2深带为3区1带。
8号染色体短臂：有两条深带，中段有一条较明显的浅带，这是与10号染色体相区分的主要特征。
此臂分为2个区，中段的浅带为2区1带。
长臂：可见三条分界不明显的深带，远侧段的深带着色较浓。
此臂分为2个区，中段的深带为2区1带。
9号染色体着丝粒浓染。
短臂：近侧段和中段各有一条带，在显带较好的标本上，中段可见两条窄的深带，此臂分为2个区，中段的深带为2区1带。
长臂：可见明显的两条深带，副缢痕一般不着色，在有些标本上显现出特有狭长的颈部区。
此臂分为3个区，近侧的一条深带为2区1带，远出的一条深带为3区二带。
10号染色体着丝粒浓染。
短臂：近出段和中段各有一条深带，在有些标本的中段可见两条深带，但与8号染色体短行比较，其深带的分界不够清晰。
此臀只有一个区。
长臂：可见明显的三条带，近侧的深带较明显，远侧的两条深带较靠近，这是与8号染色体相鉴别的主要特征。
此管分为2个区，近侧段的一条深带为2区1带。
11号染色体短臂：近中段可见两条靠的很近的较窄的深带．在显带较差的标本上，只能看见一条宽带。
此臂只有1个区。
长臂：近侧有一条深带，紧贴着丝粒．远侧段可见一条明显的较宽的深带，这条深带与近侧的深带之间是一条宽阔的浅带，这是与12号染色体相鉴别的一个明显特征；在显带较好的标本上，远侧段的深带可分为两条较窄的深带，两深带之间有一条很窄的浅带，一般极难辨认，但它是一个分区的界标，在有些标本上近末端处还可见一条窄的淡色的深带。
此臂分为2个区，上述远侧两条深带之间的浅带为2区1带。
12号染色体短臂：中段可见一条深带。
此臂只有1个区。
长臂：近侧有一条深带，紧贴着丝粒；中段有一条宽的深带，这条深带与近侧深带之间有一条明显的浅带，但与11号染色体相比较这条浅带较窄，这是鉴别11号与12号染色体的一个主要特征；在显带好的标本上，中段较宽的深带可分为三条深带，其正中的一条着色较浓；在有些标本上，远侧段的近端还可见1～2条染色较淡的深带。
此行分为2个区，中段正中的深带为2区1带。
X染色体其长度介于7号和8号染色体之间。
短臂：中段有一条明显的深带，如竹节状。
在有些标本上，远侧段还可见一条窄的、着色淡的深带。
此臂分为2个区，中段的深带为2区1带。
长臂：可见4～5条深带，近中部的一条深带最明显。
此臂分为2个区，近中段的深带2区1带。
D组染色体：包括13～15号染色体，具有近端着丝粒和随体。
13号染色体着丝粒浓染。
长臂：可见4条深带，第1和第4带较窄，染色较淡。
第2和第3深带较宽，染色较浓，此臂分为3个区，第2深带为2区1带，第3深带为3区1带。
14号染色体着丝粒浓染。
长臂：近侧和远侧各有一条明显的深带，在处理好的标本上，中段尚可见一条较浅的深带。
此臂分为3个区，近侧深带为2区1带，远侧深带为3区1带。
15号染色体着丝粒浓染。
长臂：中段有一条明显的深带，染色较浓，有的标本上，近侧段可见l～2条淡染的深带。
此臂分为2个区，中段深带为2区1带。
E组染色体：包括16～18号染色体，16号染色体着丝粒在3/8处，17号和18号染色体着丝粒约在1/4处。
16号染色体短臂：中段有一条深带，较好的标本上可见两条深带。
此臂只有1个区。
长臂：中段和远侧各有一条深带，有时远侧段的一条不明显，副缢痕着色浓。
此臂分为2个区，中段深带为2区1带。
17号染色体短臂：有一条深带，紧贴着丝粒。
此臂只有1个区。
长臂：远侧段可见一条深带，这条带与着丝粒之间为一明显而宽的浅带。
此臂分为2个区，这条明显而宽的浅带为2区1带。
18号染色体短臂：有一条窄的深带。
此臂只有1个区。
长臂：近侧和远侧各有一条明显的深带。
此臂分为2个区，两深带之间的浅带为2区1带。
F组染色体：包括19号和20号染色体，中央着丝粒。
19号染色体着丝粒及周围为深带，其余为浅带。
短臂和长臂均只有1个区。
20号染色体着丝粒区浓染。
短臂：有一条明显的深带。
此臂只有1个区。
长臂：在中段和远侧段可见1—2条染色较浅的深带，有时全为浅带。
此管只有1个区。
G组染色体：包括21号、22号和Y染色体，是染色体组中最小的，具近端着丝粒的染色体。
21号和22号染色体具有随体。
21号染色体着丝粒区着色浅。
与22号染色体相比较，其长度比22号短。
其长臂近侧有一明显而宽的深带。
此臂分为2个区，其深带为2区1带。
22号染色体着丝粒区染色浓。
与21号染色体相比较，其长度比21号长；在长臂上可见两条深带，近侧的一条着色较浓而且紧贴着丝粒，近中段的一条着色浅，在有的标本上不显现。
此臂只有1个区。
Y染色体长度变化较大，有时整个长臂被染色成深带。
在染色较好的标本上，可见两条深带。
此臂只有1个区【注意的问题】1．采血时不要加入太多的肝素，因为肝素含量过多时往往抑制淋巴细胞的转化。
2．培养过程中培养液逐渐变黄色，说明pH发生了较大变化，将不利于细胞生长，此时可加入适量灭菌的1.4% NaHCO3溶液调整，或再加入2～3ml培养液的办法来校正。
3．培养失败的原因，一般有下述几种：①培养瓶及器材洗涤不符合要求；②配制溶液的双蒸水不符合要求；③PHA和培养液的质量有问题，或培养液pH不符合要求；④无菌操作不符合要求，发生污染；⑤淋巴细胞对PHA反应降低，致分裂相太少。
4．标本质量不佳的原因：①秋水仙素的处理不当，如秋水仙素的浓度不够或处理时间不足，结果分裂相太少；如浓度过高或处理时间过长，则使染色体过于缩短，难于进行分析；②低渗处理不当，低渗处理时间过长时，细胞膜往往过早破裂，染色体丢失；如果低渗处理不够，则染色体分散不佳，难以进行计数分析；③离心速度不合适，收集细胞时离心的速度太低易丢失细胞，如果低渗后离心速度过高，往往使分裂相过早破裂，完整的分裂相减少；④标本固定不充分，如固定液不新鲜，或甲醇、冰醋酸的质量不佳，结果染色体模糊，或残留胞浆痕迹，使背景不清；⑤玻片去污不彻底，冷冻不够，使细胞悬液不能均匀附着以致细胞大量丢失，或染色体分散不佳。
5．制备G显带染色体标本时，要严格控制胰酶消化时间，时间不足显不出带纹，时间过长，使染色体不规则或形成空泡状。