超氧化物歧化酶(SOD)的生产
超氧化物歧化酶(SOD)的生产
超氧化物酶（SOD）的生产SOD（超氧化物歧化酶）是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。
对人体不断地补充SOD具有抗衰老的特殊效果。
超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase, EC1.15.1.1, SOD）是1938年Marn等人首次从牛红血球中分离得到超氧化物歧化酶开始算起，人们对SOD 的研究己有七十多年的历史。
1969年McCord等重新发现这种蛋白，并且发现了它们的生物活性，弄清了它催化过氧阴离子发生歧化反应的性质，所以正式将其命名为超氧化物歧化酶。
它催化如下的反应：202+2H+→H2O2+O2O2-称为超氧阴离子自由基，是生物体多种生理反应中自然生成的中间产物。
它是活性氧的一种，具有极强的氧化能力，是生物氧毒害的重要因素之一。
SOD是机体内天然存在的超氧自由基清除因子，它通过上述反应可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢。
尽管过氧化氢仍是对机体有害的活性氧，但体内6性极强的过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)会立即将其分解为完全无害的水。
这样，三种酶便组成了一个完整的防氧链条。
一、实验目的a．掌握有机溶剂沉淀法的原理和基本操作。
b．掌握SOD酶提取分离的一般步骤。
二、实验原理超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)是一种具有抗氧化、抗衰老、抗辐射和消炎作用的药用酶。
它可催化超氧负离子(O2-)进行歧化反应，生成氧和过氧化氢。
大蒜蒜瓣和悬浮培养的大蒜细胞中含有较丰富的SOD，通过组织或细胞破碎后，可用pH7.8的磷酸缓冲溶液提取出来。
由于SOD不溶于丙酮，可用丙酮将其沉淀析出。
有机溶剂沉淀的原理是有机溶剂能降低水溶液的介电常数，使蛋白质分子之间的静电引力增大。
同时，有机溶剂的亲水性比溶质分子的亲水性强，它会抢夺本来与亲水溶质结合的自由水，破坏其表面的水化膜，导致溶质分子之间的相互作用增大而发生聚集，从而沉淀析出。
超氧化物歧化酶的生产
四、操作步骤
整个操作过程在0 5℃条件下进行。 整个操作过程在0到5℃条件下进行。 条件下进行 SOD酶的提取 称取5g大蒜蒜瓣， 5g大蒜蒜瓣 （1）SOD酶的提取 称取5g大蒜蒜瓣，加入石 英研磨破碎细胞后，加入0.05mol/L的磷酸缓冲 英研磨破碎细胞后，加入0.05mol/L的磷酸缓冲 0.05mol/L Ph7.8）15ml，继续研磨20min 20min， SOD酶充 液（Ph7.8）15ml，继续研磨20min，使SOD酶充 分溶解到缓冲液中，然后6000r/min 6000r/min冷冻离心min，弃沉淀，取上清液。 15min，弃沉淀，取上清液。
超氧化物歧化酶（SOD） 超氧化物歧化酶（SOD）的生产
王琼
一、实验目的
掌握有机溶剂沉淀法的原理和基本操作
掌握SOD酶提取分离的一般步骤 掌握SOD酶提取分离的一般步骤 SOD
二、实验原理
超氧化物歧化酶(SOD)是广泛存在于生物体内各 超氧化物歧化酶(SOD)是广泛存在于生物体内各 (SOD) 种组织的一种金属酶， 种组织的一种金属酶，是机体细胞抵御氧化损 伤最重要的酶之一。 伤最重要的酶之一。 SOD的主要功能是 清除体内多余的自由基， 的主要功能是： SOD的主要功能是：清除体内多余的自由基，延 缓由于自由基侵害而出现的衰老现象， 缓由于自由基侵害而出现的衰老现象，提高人 体抵抗自由基诱发疾病的能力，能抗疲劳、 体抵抗自由基诱发疾病的能力，能抗疲劳、甚 至抗肿瘤。 至抗肿瘤。
2、酶活性的测定
（1）连苯三酚自氧化速率的测定
在10ml试管中加入pH值为8.30的 10ml试管中加入pH值为8.30的 试管中加入pH值为8.30 缓冲溶液4.50ml 4.50ml， 50mol/LK2HPO4-KH2PO4缓冲溶液4.50ml，在 25±0.5℃的恒温水浴中保温10min，然后加入 25±0.5℃的恒温水浴中保温10min， 的恒温水浴中保温10min 25±0.5℃的恒温水浴中事先预热好的连苯三 在25±0.5℃的恒温水浴中事先预热好的连苯三 酚溶液（空白管用10mmol/L HCL代替），迅速 代替）， 酚溶液（空白管用10mmol/L HCL代替），迅速 摇匀倒入1cm比色皿中，以空白管为参比， 1cm比色皿中 摇匀倒入1cm比色皿中，以空白管为参比，在 325nm下 每隔30s 30s测 次吸光值，连续记录3min 3min， 325nm下，每隔30s测1次吸光值，连续记录3min， 调节
sod酶生产工艺流程
sod酶生产工艺流程英文回答：SOD (superoxide dismutase) is an enzyme that plays a crucial role in antioxidant defense systems. It helps to convert harmful superoxide radicals into less harmful forms, such as hydrogen peroxide and molecular oxygen. The production process of SOD involves several steps.Firstly, the production of SOD starts with theselection and cultivation of a suitable microbial strain. This strain should have the ability to produce high levelsof SOD enzyme. Various strains of bacteria, yeast, andfungi have been used for SOD production.Once the strain is selected, it is then grown in a suitable growth medium. The growth medium contains all the necessary nutrients required for the microbial strain to grow and produce SOD. These nutrients include carbon sources, nitrogen sources, minerals, and vitamins. The pHand temperature of the growth medium are also optimized to promote the growth of the strain.After the microbial strain has grown to a sufficient biomass, it is then induced to produce SOD. This can bedone by subjecting the strain to specific stress conditions, such as high temperature, low pH, or the addition ofcertain chemicals. These stress conditions trigger the production of SOD as a defense mechanism by the microbial strain.Once SOD production is induced, the microbial cultureis harvested and the SOD enzyme is extracted. This can be done using various techniques, such as cell disruption, centrifugation, and filtration. The extracted SOD enzyme is then purified to remove any impurities or contaminants.After purification, the SOD enzyme is typically formulated into a final product. This can be in the form of a liquid solution, powder, or capsules. The formulation process may involve the addition of stabilizers, preservatives, and other excipients to ensure the stabilityand shelf-life of the SOD product.Finally, the SOD product is packaged and labeled for distribution. It can be used in various industries, such as pharmaceuticals, cosmetics, and food supplements. The SOD product is marketed for its antioxidant properties and potential health benefits.中文回答：SOD（超氧化物歧化酶）是一种在抗氧化防御系统中起关键作用的酶。
超氧化物歧化酶的制备
超氧化物歧化酶（SOD）的制备超氧化物歧化酶，简称SOD（Super Oxide Dismutase），是一种广泛存在于动、植物及微生物中的金属酶，至少可分为三种类型：第一种类型-Cu·Zn-SOD，呈蓝绿色，主要存在于真核细胞的细胞浆内，分子量在32000左右，由两个亚基组成，每个亚基含一个铜和一个锌。
第二种类型-Mn-SOD，呈粉红色，其分子量随来源不同而异。
来自原核细胞的分子量约为4000，由两个亚基组成，每个亚基各含一个锰；来自真核细胞线粒体的-Mn-SOD，由4个亚基组成，分子量约为80000。
第三种类型-Fe-SOD，呈黄色，只存在于真核细胞中，分子量在38000左右，由两个亚基组成，每个亚基各含一个铁。
此外，在牛肝中还存在一种-Co·Zn-SOD。
自从1973年Weisiger等在鸡肝中发现二种SOD以来，至今已采用了各种分离及分析方法，成功地从各种动物肝脏及血液中，分离纯化了SOD。
同时发现SOD的存在可能与机体衰老、肿瘤发生、自身免疫性疾病和辐射防护有关。
目前临床上主要用于延缓人体衰老，防止色素沉着，消除局部炎症，特别是治疗风湿性关节炎、慢性多发性关节炎及放射治疗后的炎症，无抗原性，毒副作用较小，是很有临床价值的治疗酶。
SOD不仅在临床上大显身手，而且近年来又被广泛的应用于日用化工行业。
含有SOD的化妆护肤品，对抗衰老及去除脸面雀斑等有显著作用。
添加SOD的化妆护肤品倍受女士的青睐，其产品具有很强的竞争力。
如市场上销售的奥琪、大宝、紫罗兰、永芳等高级护肤化妆品，都因添加了SOD而成为抢手货。
随着SOD被广泛应用于护肤霜、洗面奶、香皂等领域及活性氧、疾病诊断和抗辐射等方面的研究，SOD将成为广大药厂和日用化工厂的重要原料。
目前我国大规模生产SOD 厂家屈指可数，市场需求量大，在今后一段时间内供应将趋紧，因此充分利用动物废弃物，生产SOD是大有发展前途的。
（一）原料及试剂：1、牛血或猪血：动物血液一定要保证新鲜，无污染。
sod的产生
在生物学中，SOD（超氧化物歧化酶）是一种非常重要的抗氧化酶。
它的产生过程涉及到多个步骤。
首先，SOD的基因在细胞核中被转录成mRNA，这个过程需要RNA聚合酶的参与。
然后，mRNA通过核孔运输到细胞质中。
在细胞质中，mRNA需要经过一系列的修饰和剪接，才能形成成熟的mRNA。
这个过程需要多种蛋白质的参与，包括剪接体、剪接因子等。
接下来，成熟的mRNA需要被翻译成蛋白质。
这个过程需要核糖体、tRNA、氨酰-tRNA合成酶等多种蛋白质的参与。
在这个过程中，mRNA上的密码子会被翻译成对应的氨基酸序列，这些氨基酸会按照特定的顺序排列，形成SOD的蛋白质结构。
最后，SOD的蛋白质结构需要经过折叠和修饰，才能形成具有活性的SOD。
这个过程需要多种蛋白质的参与，包括分子伴侣、蛋白酶等。
总的来说，SOD的产生是一个复杂的过程，涉及到基因的转录、mRNA的修饰和剪接、蛋白质的翻译和折叠等多个步骤。
这些步骤都需要多种蛋白质的参与，任何一个步骤出现问题，都可能导致SOD的产生受到影响。
此外，SOD的产生还受到许多因素的影响，包括环境因素、遗传因素等。
例如，一些环境污染物可以导致SOD的活性降低，从而增加细胞的氧化压力；一些遗传突变可以导致SOD的基因发生改变，从而影响SOD的产生。
sod_百度百科
接受化疗的癌症病患体内的抗氧化能力会大大地降低，万一低到某个程度，自由基就会损害细胞、黏膜、五脏六腑、脑、中枢神经等．所以癌症患者应及时补充抗氧化剂来维持好体力。日本厚生省与美国癌症中心(NCI)亦建议使用抗氧化剂来预防癌症或治疗因[氧自由基]破坏细胞所引起的病变。降低抗癌药物所引起的如呕吐，食欲不振、掉发等副作用。
术语：超氧化物歧化酶
别名：肝蛋白、奥谷蛋白
SOD（超氧化物歧化酶）是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充 SOD具有抗衰老的特殊效果。超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase, EC1.15.1.1, SOD）是1938年Marn等人首次从牛红血球中分离得到超氧化物歧化酶开始算起，人们对SOD的研究己有七十多年的历史。1969年McCord等重新发现这种蛋白，并且发现了它们的生物活性，弄清了它催化过氧阴离子发生歧化反应的性质，所以正式将其命名为超氧化物歧化酶。
1、抗氧化
医学报告指出， 抗氧化能力的衰退期已提前至35岁左右，光靠蔬果已经不足以消除人体内外共同形成的氧化压力
②．预防慢性病及其并发症
[自由基]是科学家最近才发现导致各种慢性病与老化的罪魁祸首故说它是[万病之源]，是人体健康的大敌，自由基对身体的伤害是日积月累的，尤其是糖尿病与心血管方面的疾病，林天送博士说：[照顾好您的心血管，就可以活到九十岁]。养成多多摄取抗氧化物的好习惯，保证可以让您远离慢性疾病的威胁。
(一) SOD
超氧化物岐化酶(SuperoxideDismutase)，简称SOD，ECl.15.1.1，是1969年美国Dude大学I．Fridovich教授和他的研究生McCoard发现的。
SOD酶生产
3.3SOD稳定性及影响因素
PH、热、蛋白酶的影响：SOD在pH5.3～ 9.6间催化性能良好，在pH4.5～pH11间能 稳定存在。pH3.6时， CuZn-SOD中95%的Zn 要脱落，在pH12.2时，SOD的构象会发生不 可逆的转变而使酶失活。 SOD对热的稳定性与溶液中离子强度有关。 当离子强度很低时,即使加热到95℃, 其活 性损失也很少其他因素：SOD活性受饮料的 色泽、成分、酸碱度、乙醇含量等多种因 素的影响，只有在无色、近中性、无乙醇 饮料中SOD活性较稳定。另外还发现有机溶 剂和Cl对SOD的活性具抑制作用
◆谢谢观看
试剂
空白管/mL
自氧化管/mL
50mmol/L的Tris-HCL
2.98
2.98
10mmol/L的HCL
0.02
0.01
50mol/L的邻苯三酚
_
0.01
SOD活性的测定
SOD的安全性
◆大量试验和临床应用表明， 无论何种给药 方式，除罕见的超敏反应外，SOD对人体无 毒性。虽然SOD是Mr在30 000以上的蛋白质， 但却未发现具有抗原性， 其原因也正在进 一步研究中。
另外还发现有机溶剂和cl对sod的活性具抑制作用它催化超氧阴离子转化为h2o2和o2的反应即催化超氧阴离子自由基o2发生歧化反从而清除o22o22hh2o2o2在生命体的自我保护系统中起着极为重要的作用在免疫系统中也有重要的功因而它能防御氧毒性增强机体抗辐射损伤能力防衰老
超氧化物歧化酶（SOD）的生产
破碎 组织 细胞
去除 杂蛋 白
SOD 的沉 淀分 离
测定 邻苯 三酚 自氧 化速 率
测定并 计算 SOD样 酶活性
实验原理
邻苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化， 释放出 O2-，生成带色的中间产物，中间 物的积累在滞留30～45s后，与时间成线性 关系，一般线性时间维持在4min的范围内， 中间物在420nm波长处有强烈光吸收。当有 SOD存在时，由于它能催化O2-与H+结合生 成O2和H2O2，从而阻止了中间产物的积累， 因此，通过测定光吸收即可求出SOD的酶活 性。
超氧化物歧化酶生产方法
超氧化物歧化酶生产方法(总3页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--紫草种籽超氧化物歧化酶提取方法：属于生物工程领域，涉及一种紫草种籽ＳＯＤ及其用提取紫草种籽油后的残渣为原料，用生物工程装置提取紫草种籽ＳＯＤ的方法，迄今为止紫草种籽是植物中ＳＯＤ含量最高、质量最好、最有提取价值的唯一原料，含量为２０万Ｕ／公斤种籽，是用任何动物血提取的ＳＯＤ所不能比拟的，创下了国内外唯一的用植物提取ＳＯＤ的记录，不仅填补了国内外空白，在科学研究上也是一个重大突破，它将在人类的延年益寿、防衰抗皱、抗紫外线辐射、清除人体内氧自由基保证身体健康上做出巨大的贡献。
超氧化物歧化酶耐高温、不失活的制备方法：该方法是在提取的固体粉末状超氧化物歧化酶中加入２—８％固体状保护剂，该方法是将它们按上述比例混匀后再进行冻干处理。
该技术保证了添加超氧化物歧化酶的产品，如化妆品、口服液、啤酒、牛奶等等中的超氧化物歧化酶酶活力的稳定性，并扩充了产品开发和应用范围，相对保证了含超氧化物歧化酶的产品在高温工艺中及常温储存下不易变质。
从鸡雏胴体中提取超氧化物歧化酶的方法：取雏鸡胴体将其绞碎、浸泡、过滤、离心，将上清液在一定时间和温度控制下，加入丙酮提取超氧化物歧化酶，本发明用鸡场孵化鸡雏淘汰的蛋用公雏鸡胴体为原料，变废为宝产生高附加值，雏鸡与人无共患病，避免造成如牛、羊、猪血来源的污染，其工艺简单、产率高、活性好、利润高，并可提取一系列副产物，如表皮生长因子、精细蛋白、氨基酸等，为大批量生产超氧化物歧化酶开辟了广阔的前景。
重组人源锰超氧化物歧化酶的制备工艺：属于生物工程技术领域，其特点是先进行工程菌扩增，收集菌体，然后将菌体裂解，加热处理后离心取可溶部分，经离子交换柱层析纯化。
本发明具有工艺流程简便、ＳＯＤ半衰期长、质量稳定、单位成本低等特点，产品不仅可用于化妆品、保健品等民用领域，更适用于医疗领域。
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• 3.3 SOD稳定性及影响因素： • （1）PH、热、蛋白酶的影响：SOD在 pH5.3～9.6间催化性能良好，在pH4.5～ pH11间能稳定存在。pH3.6时， CuZn-SOD 中95%的Zn要脱落，在pH12.2时，SOD的构 象会发生不可逆的转变而使酶失活。 • （2）SOD对热的稳定性与溶液中离子强度 有关。当离子强度很低时,即使加热到95℃, 其活性损失也很少其他因素：SOD活性受饮 料的色泽、成分、酸碱度、乙醇含量等多 种因素的影响，只有在无色、近中性、无 乙醇饮料中SOD活性较稳定。另外还发现有 机溶剂和Cl对SOD的活性具抑制作用。
紫外分光光度法测定蛋白质含量
• 本实验采用紫外分光光度法测定蛋白质含 量。蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环 含有共轭双键，因此，蛋白质具有吸收紫 外光的性质，其最大吸收峰位于280 nm附 近（不同的蛋白质吸收波长略有差别）。 在最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液 的浓度的关系服从朗伯-比耳定律。该测定 法具有简单灵敏快速高选择性，且稳定性 好，干扰易消除不消耗样品，低浓度的盐 类不干扰测定等优点。
2、酶活性的测定： （1）连苯三酚自氧化速率的测定 在10ml试管中加入pH值为8.30的 50mol/LK2HPO4-KH2PO4缓冲溶液4.50ml，在 25±0.5℃的恒温水浴中保温10min，然后 加入在25±0.5℃的恒温水浴中事先预热好 的连苯三酚溶液（空白管用10mmol/L HCL 代替），迅速摇匀倒入1cm比色皿中，以空 白管为参比，在325nm下，每隔30s测1次吸 光值，连续记录3min，调节连苯三酚溶液 用量，将其自氧化速率控制在0.070 （±0.002）D/min。经实验测得连苯三酚 溶液的用量为6µ1。
生产流程：
提取SOD酶 测定蛋白 含量 冷冻 干燥 后得 成品
去除杂蛋白
超滤浓缩
SOD酶的沉淀分离
离心纯化
操作步骤： 整个操作过程在0到5℃条件下进行。
（1）SOD酶的提取 称取5g大蒜蒜瓣，加入 石英研磨破碎细胞后，加入0.05mol/L的磷 酸缓冲液（Ph7.8）15ml，继续研磨20min， 使SOD酶充分溶解到缓冲液中，然后 6000r/min冷冻离心15min，弃沉淀，取上 清液。
二 SOD的运用
• 1.药物 • SOD是一种新型的抗炎症药， 根据SOD作用机制和毒性试验 ，它对治疗因O2-· 引起的各种 疾病都有一定的疗效。为此， SOD可作为抗衰老、抗炎症、自身免疫疾病 患者广泛应用的医药品。此外，SOD对治疗 贝切特氏症、心肌梗塞等血虚性心脏病、 胶原病、新生儿呼吸困难综合症、防御放 射性伤害等也可望有效。
（2）去除杂蛋白 上清液中加入0.25倍体积 的氯仿-乙醇混合液搅拌15min，6000r/min 离心15min，弃去沉淀，得到的上清液即为 粗酶液。 （3）SOD酶的沉淀分离 粗酶液中加入等体 积的冷丙酮，搅拌15min，6000/min离心 15min，得到SOD酶沉淀。
• （4）将沉淀溶入pH7.8，0.05mol/L的磷酸 缓冲液5mL中，然后6000r/min离心15min， 放弃沉淀，取上清液，用凝胶sephacylS200进行纯化，然后超滤浓缩。 • （5）用紫外分光光度计测定浓液的蛋白含 量 • （6）将浓缩冷冻干燥后即得成品。
• 2.添加剂 • 国外不少高级化妆品都添加SOD， 国内也 有数家工厂或公司在开发和生产SOD化妆品， 如大宝SOD密，康妮SOD、SOD康舒达霜剂等。 SOD作为化妆品添加剂主要有3个优点： • （1）有明显的防晒效果 • （2）可防皮肤衰老，阻止紫褐质（老年斑） 的形成 • （3）有明显的抗炎效果，对防治皮肤病有 一定效果。 • 国外把SOD作为食品添加剂的例子是加在口 香糖和饮料中。我国贵州农学院已开发出 刺梨SOD饮料。SOD及修饰过的SOD还可作为 外用药膏、眼药及牙膏等的添加剂 。
4.SOD的作用 • 它催化超氧阴离子转化为H2O2和O2的反应， 即催化超氧阴离子自由基O2-· 发生歧化反应， 从而清除O2-· ，2O2-· +2H+→H2O2+O2， 在 生命体的自我保护系统中起着极为重要的 作用， 在免疫系统中也有重要的功，因而 它能防御氧毒性，增强机体抗辐射损伤能 力，防衰老。 • SOD的主要功能是：清除体内多余的自由基， 延缓由于自由基侵害而出现的衰老现象， 提高人体抵抗自由基诱发疾病的能力，能 抗疲劳、甚至抗肿瘤。
• 3. 生化试剂 • 国外已有数家公司如Sigma公司等出售SOD 试剂，国内也有厂家批量生产SOD试剂， 如中科院上海生化所东风试剂厂、南京建 成生物工程研究所等。此外，SOD有可能作 为某些疾病的探针， 如郭彦等人认为脑瘤 组织线粒体Mn-SOD降低是转化细胞的可靠 生化指标之一， 并可作为评估脑瘤分化程 度的参考。
四、SOD酶的检验
原理：
连苯三酚在碱性条件下，能迅速自 氧化，释放出氧气，生成带色的中间产物。 在自氧化过程的初始阶段，黄色中间产物 的积累在滞后30~45s后就与时间成线性关 系。中间产物在420nm处有强烈的光吸收， 在有SOD存在时由于它能催化生成氧气与过 氧化氢，从而阻止了中间物的积累，通过 计算就可以求出SOD的活力。
（2）样品活性测定 在10ml试管中加入pH为8.30的 4.5ml50mmol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲溶液和 一定体积的样液，在25±0.5℃的恒温水浴 中保温10min，然后加入在25±0.5℃的恒 温水浴中事先预热好的连苯三酚6µ1， （空白管用 10mmol/L HCL代替），迅速 摇匀倒入1cm比色皿中，以空白管为参比， 在325nm下，每隔30s测1次吸光值，连续记 录3min，调节样液体积，使样液中连苯三 酚的氧化速度控制在0.035（±0.002） D/min，记录此时
一. SOD的概况
• 1.超氧化物歧化酶 （SOD）的概念： 超氧化物歧化酶 是一种广泛存在于 动物、植物、微生 物中的金属酶，是 生物体内抗氧化酶 系中主要成员之一。
• 2.SOD的分类 按其结合的金属离 子（即金属辅基的 成分）可分为： （1）Fe-SOD （2）Mn-SOD（是SOD 酶分子内所含金属 离子Mn2+） （3）Cu-Zn-SOD （铜．锌超氧化物）
• 随着人们对SOD更广 泛深入的研究，不 同类型SOD、SOD修 饰物及人工有机合 成SOD模拟酶将在医 疗、保健、食品、 农业增产等方面发 挥出更大的作用。
三.SOD的生产
仪器、试剂和材料： -研钵，石英砂，烧杯（50mL），玻璃棒，pH 计，冷冻离心机，离心管 -新鲜蒜瓣
-0.05mol/L磷酸缓冲溶液（pH7.8），氯仿乙醇混合液（氯仿-无水乙醇3：5），丙酮 （用前预冷至-10℃）。
五.SOD使用及生产时的注意事项
• 1.SOD的安全性 • 大量试验和临床应用表明， 无论何种给药方式，除 罕见的超敏反应外，SOD对人体无毒性。虽然SOD 是Mr在30 000以上的蛋白质， 但却未发现具有抗原 性， 其原因也正在进一步研究中。 • 2.SOD生产时的注意事项 （1）在破碎细胞时要注意安全，一定要破碎的彻底 （2）PH的控制力度很重要，以及在实验中的温度等 （3） 要学会正确使用分光光度计
3.SOD的理化性质
• 3.1 SOD对氰化物和H2O2的敏感性：长时间 用过氧化氢处理可使CuZn-SOD和Fe-SOD失 活，而Mn-SOD不受影响 • 3.2 SOD的吸收光谱特性：CuZn-SOD具有独 特的紫外吸收光谱。由于色氨酸和酪氨酸 的含量较低，它在280 nm处并没有最大吸 收峰。CuZn-SOD的可见光最大吸收波长都 在680 nm左右， 这反映了酶分子中Cu2+的 光学特性。
所需溶液的配制：
（1）pH值为8.30的50mol/LK2HPO4-KH2PO4缓 冲溶液：25℃下96.5mL 1mol/L的LK2HPO4与 3.5mL 1mol/L的KH2PO4混合后，用水稀释至 2000mL。 （2）0.05mol/L连苯三酚溶液：称取3.15g连 苯三酚用0.01mol/L盐酸溶液溶解并定容至 500mL。