姚敏杰基于磁性微粒和荧光微球的dna检测方法研究(西北大学硕士学位答辩ppt)
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基于纳米金胶和磁性纳米颗粒的DNA和凝血酶蛋白质电化学检测的研究
基于纳米金胶和磁性纳米颗粒的DNA和凝血酶蛋白质电化学检测的研究【摘要】：基因诊断已经成为分子生物学和生物医学研究中的重要领域。
人体、病毒和细菌核酸中特定碱基序列的检测在疾病诊断、食品污染、法医鉴定和环境监测等领域都将会发挥越来越重要的作用。
大规模的基因检测要求建立更简便、迅速、廉价、微型化的分析装置。
许多新的生物技术的开发，为发展高灵敏度、高特异性的基因分析检测方法注入了活力，其中利用DNA双链的碱基互补配对原则发展起来的各种DNA生物传感技术，受到生物分析工作者的高度重视。
电化学DNA检测方法以其灵敏度高、轻巧便宜、携带方便、耗能少、能与现代微电子技术联用，易于实现微型化等优点，受到了研究者们的广泛关注，俨然成为当今生物学、医学领域的前沿性课题。
随着人类基因组计划(HGP)的顺利完成，生命科学从确定核酸(DNA、RNA)序列层次深入到功能基因组研究和蛋白质组学研究上来。
如何构建高速度、高通量、集约化、有特异性的高灵敏蛋白质检测技术是目前蛋白质组学研究所面临的紧迫任务。
传统蛋白质的检测主要利用抗体一抗原的特异相互作用。
利用寡核苷酸间的严格的识别和亲和力而设计的人工合成寡核苷酸—适体(aptamer)的出现，使抗体抗原反应发生新的革命性变化，弥补了现有抗体的不足。
也为传统免疫传感器发展开辟了一条新的道路。
核酸适体对蛋白质的结合力和特异性可与抗原抗体间的作用力相媲美，且与抗体相比有许多优越性。
因此利用核酸适体构建蛋白质的电化学检测方法已引起许多科学工作者的关注。
蛋白质和核酸是组成生命的主要生物大分子，核酸具有传递遗传信息等功能，而蛋白质则贯穿所有的生命活动过程。
有关核酸与蛋白质之间的相互作用的信息的获得，将有助于对一些生命过程的的研究，进而掌握生命活动和信息传递规律并实施调节及调控。
纳米技术的出现为纳米材料在分析化学领域的发展和应用开辟了新的方向。
纳米材料的优异性能例如比表面积大、反应活性高等为分析化学开辟了新的研究途径，纳米粒子的独特性能为生物检测奠定了基础，其和核酸适体的高度特异性，电化学方法的高灵敏性相结合，使得检测的灵敏度大大提高，使其应用范围更加广阔，将为生物分析化学开辟新的领域。
于桉-磁性复合微粒在mRNA纯化中的应用(西北大学硕士学位答辩PPT)2007.6
（一） PG-Mag的制备及oligo(dT)20的偶联 （二） 应用PG-Mag从动植物组织总RNA中分离 纯化mRNA
(一) PG-Mag的制备及oligo(dT)20的偶联
OR RO Si OR OH OH OH 磁流体 S O Si O O Si NH C NH S O O Si NH C NH NH C NH S N C S N C S N C S NH2 O Si NH2 O Si O O Si NH2 O O Si NH2 氨基磁粒 S NH C NH O S O Si NH C NH S O O Si NH C NH S H NH CN H NH CN S H NH CN S NH2 S C N N C S (PDITC)
二 应用PG-Mag从动物组织中直 接纯化mRNA
反应步骤：
1 2 3 4 5 6 7 液氮研磨动物组织 加入裂解液匀浆、裂解组织 离心匀浆液，弃去沉淀 预处理磁性微粒 将匀浆上清液加入磁性微粒，杂交反应 清洗非特异性吸附 洗脱mRNA
动物组织mRNA直接提取结果
动物组织 （大鼠）
肝脏 肾脏 组织用量 52 mg 51 mg mRNA 1.16 μg 0.48 μg OD260/OD280 1.95 1.87
致谢
衷心的感谢崔亚丽教授对我三年来的指导和帮助，她 严谨缜密的思维、一丝不苟的工作作风深深感染了我，她 的对我的严格要求和在学习工作中谆谆善诱让我终生难忘。 衷心的感谢陈超教授创立了国家微检测中心，让我们 有了如此优良的实验平台，他睿智的思想和敏锐、深刻的 洞察力极大的启发了我。 衷心的感谢磁性材料组的所有研究生和员工，与你们 在一起的一千多个日夜是我人生美好和宝贵的财富。
PG Mag
偶 联有 oligo dT的 磁 粒
(一) PG-Mag的制备及oligo(dT)20的偶联
OR RO Si OR OH OH OH 磁流体 S O Si O O Si NH C NH S O O Si NH C NH NH C NH S N C S N C S N C S NH2 O Si NH2 O Si O O Si NH2 O O Si NH2 氨基磁粒 S NH C NH O S O Si NH C NH S O O Si NH C NH S H NH CN H NH CN S H NH CN S NH2 S C N N C S (PDITC)
二 应用PG-Mag从动物组织中直 接纯化mRNA
反应步骤：
1 2 3 4 5 6 7 液氮研磨动物组织 加入裂解液匀浆、裂解组织 离心匀浆液，弃去沉淀 预处理磁性微粒 将匀浆上清液加入磁性微粒，杂交反应 清洗非特异性吸附 洗脱mRNA
动物组织mRNA直接提取结果
动物组织 （大鼠）
肝脏 肾脏 组织用量 52 mg 51 mg mRNA 1.16 μg 0.48 μg OD260/OD280 1.95 1.87
致谢
衷心的感谢崔亚丽教授对我三年来的指导和帮助，她 严谨缜密的思维、一丝不苟的工作作风深深感染了我，她 的对我的严格要求和在学习工作中谆谆善诱让我终生难忘。 衷心的感谢陈超教授创立了国家微检测中心，让我们 有了如此优良的实验平台，他睿智的思想和敏锐、深刻的 洞察力极大的启发了我。 衷心的感谢磁性材料组的所有研究生和员工，与你们 在一起的一千多个日夜是我人生美好和宝贵的财富。
PG Mag
偶 联有 oligo dT的 磁 粒
纳米磁性功能微球在免疫分析中的应用及生物传感器的研究
结论
结论
单分散磁性纳米粒子微球作为一种具有重要应用价值的纳米材料，在生物医 学领域具有广泛的应用前景。虽然目前其制备成本较高，表面修饰和稳定性仍需 进一步优化，但在医学诊断、药物输送、细胞分离和组织工程等领域展现出巨大 的潜力。随着科学技术的不断进步和相关研究的深入开展，单分散磁性纳米粒子 微球在生物医学领域的应用将得到进一步拓展和完善。
纳米磁性功能微球在生物传感器中的应用
在信号转换过程中，纳米磁性功能微球可以作为磁场响应单元，实现生物传 感器信号的转换。例如，将纳米磁性功能微球与电化学或光学传感器结合使用时， 可通过磁场控制纳米磁性功能微球的排列和运动，进而提高传感器的响应速度和 精度。
纳米磁性功能微球在生物传感器中的应用
在数据分析过程中，纳米磁性功能微球可以作为生物传感器的标记物，实现 对待测物的定量和定性分析。例如，将纳米磁性功能微球与荧光探针或放射性同 位素标记的抗体结合使用时，可通过磁场富集和分离荧光探针或放射性同位素标 记的抗体，进而提高检测的灵敏度和特异性。
纳米磁性功能微球在生物传感器中的应用
结论纳米磁性功能微球在免疫分析和生物传感器领域都具有广泛的应用前景。 在免疫分析方面，纳米磁性功能微球可用于免疫沉淀、免疫标记和免疫分析等多 种方法中，提高检测的灵敏度、特异性和快速性。在生物传感器方面，纳米磁性 功能微球可用于传感膜制备、信号转换和数据分析等过程中，提高传感器的响应 速度、精度和稳定性。
纳米磁性功能微球在免疫分析中 的应用
纳米磁性功能微球在免疫分析中的应用
纳米磁性功能微球作为一种独特的纳米材料，具有磁响应性和生物相容性等 特点，因此在免疫分析中具有广泛的应用。
纳米磁性功能微球在免疫分析中的应用
免疫沉淀是纳米磁性功能微球在免疫分析中的一种重要应用。利用抗原抗体 特异性结合的原理，将待测抗原与特异性抗体结合形成抗原-抗体复合物，再利 用纳米磁性功能微球的磁响应性，将复合物从样本中分离出来，从而实现抗原的 富集和检测。此种方法具有高灵敏度、高特异性和快速等优点，但也存在抗原抗体复合物稳定性不足等问题。
毕业答辩-磁性载药微球 ppt课件
➢磁性PLGA载药微球的载药量为3.2 wt.%，包覆率为77.9 wt.%；磁性PLGA载药微球具有
很好的缓释作用
ppt课件
33
5
学术论文及译文
[学术论文]
[1] Lili Hu, Ming Huang, Jiaoning Wang.Yi Zhong, Yan Luo. Preparation of magnetic poly (lactic-co-glycolic acid) microspheres with
制备PLGA磁性微球
乳液稳定 单分散性好 磁热效应显著
粒径可控
纳米Fe3O4颗粒的制备
制备简单
磁响应性好
ppt课件
7
3-1 纳米Fe3O4颗粒的制备
粒径可控 易操作 磁响应性好
ppt课件
8
3 纳米Fe3O4颗粒的制备方法
高温热解法：
（乙酰丙酮铁）
油酸、油胺 二苄基醚
高温
溶剂热法：
ppt课件
22
3 Fe3O4纳米颗粒及葡萄糖浓度对磁性PLGA微球的影响
图1 不同FeCl3浓度所得Fe3O4纳米颗粒的平均粒径及
图2 葡萄糖质量分数不同的PVA外水相制备的磁性
相应磁性PLGA微球的粒径及SEM照片
ppt课件
微球的SEM图片
23
3 调控磁性PLGA微球平均粒径的可能机制
图 复合乳液法调控PLGA微球粒径的可能机制
ppt课件
24
3-4 PLGA磁性微球的药物缓释性能
单分散 具有缓 磁响应 释作用 性优良
ppt课件
25
3
磁性PLGA载姜黄素微球制备
PLGA/DCM溶液
O
很好的缓释作用
ppt课件
33
5
学术论文及译文
[学术论文]
[1] Lili Hu, Ming Huang, Jiaoning Wang.Yi Zhong, Yan Luo. Preparation of magnetic poly (lactic-co-glycolic acid) microspheres with
制备PLGA磁性微球
乳液稳定 单分散性好 磁热效应显著
粒径可控
纳米Fe3O4颗粒的制备
制备简单
磁响应性好
ppt课件
7
3-1 纳米Fe3O4颗粒的制备
粒径可控 易操作 磁响应性好
ppt课件
8
3 纳米Fe3O4颗粒的制备方法
高温热解法：
（乙酰丙酮铁）
油酸、油胺 二苄基醚
高温
溶剂热法：
ppt课件
22
3 Fe3O4纳米颗粒及葡萄糖浓度对磁性PLGA微球的影响
图1 不同FeCl3浓度所得Fe3O4纳米颗粒的平均粒径及
图2 葡萄糖质量分数不同的PVA外水相制备的磁性
相应磁性PLGA微球的粒径及SEM照片
ppt课件
微球的SEM图片
23
3 调控磁性PLGA微球平均粒径的可能机制
图 复合乳液法调控PLGA微球粒径的可能机制
ppt课件
24
3-4 PLGA磁性微球的药物缓释性能
单分散 具有缓 磁响应 释作用 性优良
ppt课件
25
3
磁性PLGA载姜黄素微球制备
PLGA/DCM溶液
O
磁共振监测的肝癌载药纳米粒研发和临床应用幻灯片
研究内容和研究试验方法
1.纳米粒的制备和鉴定 。 2.制备兔肝癌模型 及MRI成像 。 3.介入法注射载药微粒入肿瘤内实验。 4.载药微粒成像实验及药物动力学实验 。 5.病理组织学分析与图像分析比较 。
纳米粒的制备和鉴定
以乳滴聚结法合成小于500nm的PLA-GdADM-NP，并对其外表进展修饰 。
病理组织学分析与图像分析比较
在成像之后，将5组各随机各分3小组，每小组 各5只，分别在治疗后的1、2、3周再次行 MRI成像后记录肿瘤内信号、大小变化情况， 随即处死动物，取肿瘤标本进展病理组织学分 析，分析肿块大小、细胞坏死情况，比照分析 MRI监测纳米粒在肿瘤代谢规律及作用情况， 评价MR成像的效果和价值及治疗情况。
M-NP混悬液肝癌组每组 选取5～10只以MRI分别在术后1d、3d、5d、7d、 14d、21d观察记录溶液在肿瘤内分布、信号变化情 况，重点观察肝癌内和正常肝组织的分布。
C 每组各5～10只分别于术后1d、3d、5d、7d、 14d、21d行MRI检查观察肿块的坏死情况。
采用经肝动脉插管法将PLA-Gd-ADM-NP混 悬液、Gd-DTPA、阿霉素溶液、生理盐水等 四种成分，注射入随机分组的兔肝癌内。
采用同法将PLA-Gd-ADM-NP混悬液注射到 正常兔肝动脉内。
每组各15只，途中假设有以外死亡，那么给以 增补。
载药微粒成像实验及药物动力学实验
A 常组、注射PLA-Gd-ADM-NP混悬液肝癌组、注 射阿霉素肝癌组分别在注射术后外周静脉采血1ml,通 过反相高效液相色谱检测药物浓度，监测药代动力学。
病率仍呈上升势头，我国年发病率高于10/10万， 每年死于肝癌约11万人，占全世界肝癌死亡人数 的45％。
肝癌的治疗情况
磁性纳米粒子及磁性微球的研究课件
磁性纳米粒子----
Hongwei Gu etc Chem. Commun., 2003, 1966 - 1967
磁球脱附
Ming Yang ，etc . analyst , 2001,126,676-678
磁性微球----靶向给药
磁性微球----靶向给药
磁性微球----细胞分离
磁性微球----细胞分离
阳性分离
磁性微球----细胞分离
阴性分离
蛋白质分析
磁性微球----其他应用
核酸分离、固定化酶、热疗、药物纯化、磁性塑料等
磁性纳米粒子----磁流体
磁流体的组成
载液
组成：水、烷烃、 酯、聚苯醚、
氟聚醚、硅碳 氢化物、单体等
表面活性剂
磁性纳米粒子
磁性纳米粒子----磁流体
旋转轴动态密封
圆环形永久磁铁，极靴和转轴及磁流体构成磁性回路；磁铁 使轴与极靴顶端缝隙间的磁性流体集中，形成一个 “O”形环， 将缝隙通道堵死而达到密封的目的。
磁性纳米粒子及磁性微球的研究
磁性纳米粒子 磁性微球 总结与展望
磁性纳米粒子
顾名思义，就是具有磁性的纳米粒子。
❖金属： Co 、Ni、 Fe或Ni-Fe 、Co-Fe合金等 ❖铁酸盐：Fe3O4、γ-Fe2O3 、MeFe2O4(Me=Mn、Co、Ni)
❖氮化铁
磁性纳米粒子
特性
➢量子尺寸效应 ➢超顺磁性 ➢宏观量子隧道效应 ➢磁有序颗粒的小尺寸效应 ➢磁相变温度变化 ➢表面磁性
Chul-Ho Jun, etc mun. 2006,1619-1621
磁性纳米粒子----催化
Product seperation
substrates/solvent
免疫磁性微球的研究现状PPT教学课件
的
变动所引起的句法和协韵的变化。如《浣溪沙》
上下阕的末
句，原为七言一句，句末协韵。乐曲
摊开后，就破七字为十
字，成为七言、三言两句，
改于三言末协韵，名《摊破浣溪
沙》。
婉约与豪放
明张綖：“少游多婉约，子瞻多豪放，当以婉约为主。”清王士 禎加以补充道：“仆谓婉约以易安为宗，豪放惟幼安称首”。（见《 花草蒙拾》）这些从宏观角度概括宋词中两种主要艺术风格，而以秦 观、李清照和苏轼、辛弃疾分别为其代表作者。
教授专题报告
免疫磁性微球(Immunomagnctic beads,IMB) 是免疫学和磁载体技术 免疫生物磁性微球 结合而发展起来的一类新型材料。IMB是包被有单克隆抗体的磁性微球，可 与含有相应抗原的靶物质特异性地结合形成新的复合物。通过磁场时，这 种复合物可被滞留，与其它组分相分离,该过程称为免疫磁性分离法 (Immunomagnctic Separation)。免疫磁性分离简便易行，分离纯度高，保 留靶物质活性，且高效、快速、低毒，可广泛应用于细胞分离和提纯、免 疫检测、核酸分析和基因工程、作靶向释药的载体等领域。
一般称为“
换头”，或称“过变”。
重头：唐宋词中上下片声
调全同的，叫“重头”。
减字：唐宋曲子词中的术语。词的句度和声韵，都须按
谱填
写，不能变换。但当时的音乐家的声腔方面，
仍可自由伸缩
，因旧曲为新声。如《木兰花》原
为七言八句，后将第一三
五七句各减去三字，称
为《减字木兰花》，押韵也有改变。
摊破：又名“摊声”。唐宋曲子词中的术语。指乐曲节拍
词初名曲、曲子、曲子词。简称“词”，又名乐府、近体乐府 、乐章、琴趣，还被称作诗余、歌曲、长短句。归纳起来，这许多 名称主要是分别说明词与音乐的密切关系及其与传统诗歌不同的形 式特征。
李芳-重组梅毒螺旋体抗原TpN17纯化及基于金磁微粒梅毒螺旋体抗体的检测(西北大学硕士学位答辩PPT)2007.5
20
西北大学硕士研究生论文答辩
梅毒螺旋体抗体检测
Tp抗原在金磁微粒表面的固定化和封闭
2.0 1.5
吸 光 度 值
1.0 0.5 0.0
2 1
1：固定前 2：固定后
固定前抗原溶液在280 nm 处 具有明显的光吸收，固定后 上清液在280 nm 处无特征光 吸收，说明大部分抗原均固 定在金磁微粒表面。
表达并成功纯化了梅毒螺旋体抗原Tp17。用CM介质装成层析柱， Tp17 最佳纯化条件是——在pH 6.9、20mmol/L PB 的条件下上样， 目的抗原约在0.6mol/L NaCl 的条件下被洗脱下来。 通过SDS-PAGE鉴定可得到高纯度的Tp17，经Bradford法测定所得到 的蛋白浓度为0.66mg/mL。 双抗原夹心法测定HRP-标记抗原的滴度为1:3,200。
金磁微粒检测梅毒螺旋体抗体方法的建立
• •
Tp抗原在金磁微粒表面的固定化和封闭 Tp17抗原用于双抗原夹心法检测梅毒螺旋体抗体
临界值的确定 血液筛查中的应用
• • • •
商品化抗原Tp15、Tp17 和Tp47用于双抗原夹心法 检测梅毒螺旋体抗体
温育时间的选择 精密度分析 灵敏度分析 血液筛查中的应用
0.054
0.035 0.052 0.052 0.034 0.084
0.034
0.035 0.050 0.102 0.074 0.073
0.026
0.050 0.050 0.063 0.042 0.072
0.073
0.042 0.047 2.031 0.085 0.056
抗原标记，过夜透析后(NH4)2SO4 沉淀 透析后离心收集上清物即为酶结合物