主要荧光素一览表
卫生资格检验技师知识点归纳
卫生资格检验技师知识点归纳为适应我国人事制度的改革，由人事部与卫生部共同组织实施了卫生专业技术资格考试。
接下来应届毕业生店铺为大家编辑整理了卫生资格检验技师知识点归纳，希望对大家有所帮助。
荧光色素许多物质都可产生荧光现象，但并非都可用作荧光色素。
只有那些能产生明显的荧光并能作为染料使用的有机化合物才能称为免疫荧光色素或荧光染料。
常用的荧光色素有：1.异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate，FITC)为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水或酒精等溶剂。
分子量为389.4，最大吸收光波长为490——495nm，最大发射光波长520——530nm，呈现明亮的黄绿色荧光，结构式如下：有两种同分异结构，其中异构体Ⅰ型在效率、稳定性、与蛋白质结合能力等方面都更好，在冷暗干燥处可保存多年，是应用最广泛的荧光素。
其主要优点是：①人眼对黄绿色较为敏感，②通常切片标本中的绿色荧光少于红色。
2.四乙基罗丹明(rhodamine，RIB200)为橘红色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮。
性质稳定，可长期保存。
结构式如下：最大吸收光波长为570nm，最大发射光波长为595～600nm，呈橘红色荧光。
3.四甲基异硫氰酸罗丹明(tetramethylrhodamineisothiocyanate，TRITC)结构式如下：最大吸引光波长为550nm，最大发射光波长为620nm，呈橙红色荧光。
与FITC的翠绿色荧光对比鲜明，可配合用于双重标记或对比染色。
其异硫氰基可与蛋白质结合，但荧光效率较低。
免疫荧光原理免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。
由于抗原抗体反应具有高度的特异性，所以当抗原抗体发生反应时，只要知道其中的一个因素，就可以查出另一个因素。
免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上，与其相应的抗原(或抗体)结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。
直接法：将标记的特异性荧光抗体，直接加在抗原标本上，经一定的温度和时间的染色，用水洗去未参加反应的多余荧光抗体，室温下干燥后封片、镜检。
常见荧光素
常见荧光素：（1）异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC) ：FITC纯品为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水和酒精溶剂。
有两种异构体，其中异构体Ⅰ型在效率、稳定性与蛋白质结合力等方面都更优良。
FITC分子量为389.4，最大吸收光波长为490～495nm，最大发射光波长为520～530nm，呈现明亮的黄绿色荧光。
FITC在冷暗干燥处可保存多年，是目前应用最广泛的荧光素。
其主要优点是人眼对黄绿色较为敏感，通常切片标本中的绿色荧光少于红色。
（2）四乙基罗丹明(rhodamine, RB200) ：RB200为橘红色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮，性质稳定，可长期保存。
最大吸收光波长为570nm，最大发射光波长为595～600nm，呈现橘红色荧光。
（3）四甲基异硫氰酸罗丹明(tetramethyl rhodamine isothiocynate, TRITC)：TRITC为罗丹明的衍生物，呈紫红色粉末，较稳定。
最大吸收光波长为550nm，最大发射光波长为620nm，呈现橙红色荧光，与FITC的翠绿色荧光对比鲜明，可配合用于双重标记或对比染色。
因其荧光淬灭慢，也可用于单独标记染色。
（4）镧系：镧系螯合物某些3价稀土镧系元素如铕（Eu3）、铽（Tb3）、铈（Ce3）等的螯合物经激发后也可发射特征性的荧光，其中以Eu3 应用最广。
Eu3螯合物的激发光波长范围宽，发射光波长范围窄，荧光衰变时间长，最适合用于分辨荧光免疫测定。
（5）藻红蛋白（P-phycoerythrin，PE）：PE是在红藻中所发现的一种可进行光合作用的自然荧光色素，分子量为240kD的蛋白，最大吸收峰为564 nm，当使用488 nm激光激发时其发射荧光峰值约为576 nm，对于单激光器的流式细胞仪来说，推荐使用585±21nm的带通滤光片，双激光器的流式细胞仪推荐使用575±13nm的带通滤光片。
荧光染料波长查询
荧光染料波长查询
荧光染料是一种能够吸收光能并发射出更长波长的荧光的染料。
每种荧光染料都有其特定的吸收和发射波长。
以下是一些常见的荧光染料及其对应的吸收和发射波长：
1. 荧光素（Fluorescein）：
- 吸收波长：494-495 nm
- 发射波长：518-520 nm
2. 罗丹明B（Rhodamine B）：
- 吸收波长：540-550 nm
- 发射波长：565-580 nm
3. 二甲基琼脂绿（Ethidium Bromide）：
- 吸收波长：518-530 nm
- 发射波长：605-625 nm
4. 亚甲基蓝（Methylene Blue）：
- 吸收波长：600-660 nm
- 发射波长：660-740 nm
需要注意的是，荧光染料的波长可能因厂商和实验条件而略有差异。
因此，在具
体实验中，最好参考相关荧光染料的技术说明书或与供应商联系以获取准确的波长信息。
流式细胞分析中的荧光素你选择对了吗？
流式细胞分析中的荧光素你选择对了吗？流式细胞技术（flow cytometry，FCM）是利⽤流式细胞仪进⾏的⼀种单细胞定量分析和分选技术。
流式细胞术是单克隆抗体及免疫细胞化学技术、激光和电⼦计算机科学等⾼度发展及综合利⽤的⾼技术产物。
当前，流式细胞分析已成为科研发展的⼀个热点，它应⽤⼴泛，主要⽤于：1.测定细胞内 DNA 的变异系数2.DNA 倍体分析3.借助于荧光染料进⾏细胞内蛋⽩质和核酸的定量研究4.快速进⾏细胞分选和细胞收集5.医学应⽤：免疫功能研究各种⼲细胞的检测，癌症病⼈的多药耐药性，细胞功能及代谢动⼒学研究，⾎⼩板分析（⼼⾎管疾病），流式细胞术与分⼦⽣物学研究6.应⽤于外周⾎内⽪细胞测定、调节性 T 细胞等尖端领域流式技术借助于荧光染料进⾏细胞内蛋⽩质和核酸的定量研究，正是科研中所应⽤的重要技术之⼀。
⽽荧光素则⾸当其冲成为科研⼈员荧光标记研究的选择。
常⽤的荧光素及其特性1.藻红蛋⽩（PE）R-PE/B-PE：是⽤于⽣物学检测的超灵敏荧光染料。
它们⽐传统的有机荧光团灵敏度⾼ 100 倍。
其标记的抗体适⽤于所有配备 488nm 氩离⼦激光器的流式细胞仪；PE的最⼤发射波长为 575nm，在流式细胞仪的 FL2 通道检测。
产品货号 Cat#25562.PE-TexasRedPE-Texas Red 是流式细胞仪中常⽤的的试剂。
是由 PE 和 TexasRed（TR）组合⽽成的 Tandem 荧光素。
其主要吸收峰位于 565nm，发射峰位于 600nm。
其标记的抗体适⽤于所有配备 488nm 氩离⼦激光器的流式细胞仪；PE-TR 的最⼤发射波长为615nm，在流式细胞仪的 FL3 通道检测。
产品货号 Cat#26193.碘化丙啶（PI）碘化丙啶（PI）属于与溴化⼄锭相同的化学类别。
与溴化⼄锭的情况⼀样，其与荧光结合后的荧光增强 20-30 倍。
荧光激发最⼤值红移 30-40nm，荧光发射最⼤蓝移15nm 左右。
常用荧光探针小结
-
11
DAPI (magenta) bound to the minor groove of DNA (green and blue).
DAPI can be used for fixed cell staining, the concentration of DAPI needed for live cell staining is generally very high and rarely used for live cells. Though it was not shown to have mutagenicity to E. coli, it is labelled as a known mutagen in manufacturer information. As it is a DNA binding compound it is likely to have some low level mutagenic properties and care should be taken in its handling and disposal.
-
1
Exitation λmax: 495 nm; Emission λmax: 519 nm; Solvent pH:8.00
-
2
Immunocytochemistry/Immunofluorescence-alpha Tubulin antibody [DM1A] (FITC) (ab64503)
ac413230010rb200也称丽丝胺罗丹明b无定形褐红色粉末不溶于水易溶于酒精和丙酮性质稳定可长期保存最大吸收光谱为570nm呈明亮的橙色荧光因与fitc的黄绿色有明显区别故被广泛用于对比染色或用于两种不同颜色的荧光抗体的双重染色
常见荧光染料及用途
常见荧光染料及用途《常见荧光染料及用途》荧光染料是一种能够吸收可见光或紫外光，并在吸收能量的激发下发射可见光的化学物质。
它们的应用非常广泛，涵盖了许多领域，例如生物医学、材料科学、环境监测等。
以下介绍几种常见的荧光染料及其主要用途。
1. 墨水蓝(BR)：墨水蓝是一种具有强烈蓝色荧光的染料，常用于生物实验中的DNA染色。
它与DNA结合后能发出强烈的荧光信号，从而在实验中方便地观察和分析DNA的存在和定位。
2. 罗丹明B(RhB)：罗丹明B是一种红色荧光染料，广泛用于组织切片和细胞染色。
它能够与细胞核和胞浆中的核酸结合，以显示细胞和组织的结构，帮助科研人员研究细胞分裂和组织结构变化。
3. 草酸罗丹明G(OG)：草酸罗丹明G是一种绿色荧光染料，主要应用于蛋白质和核酸的定量分析。
在分光光度计中配合荧光检测器使用，可以精确测定溶液中蛋白质和核酸的浓度。
4. 罗丹明110(Rh110)：罗丹明110是一种黄绿色荧光染料，常用于细胞活性检测。
通过与细胞内的酶或细胞膜结合，罗丹明110可以用来评估细胞的活力和存活情况，特别适用于细胞毒性测试和细胞增殖研究。
5. 荧光素(FITC)：荧光素是一种与生物相容性极高的荧光染料，常用于免疫染色和分子生物学实验。
它能与抗体特异性结合，在免疫组化和流式细胞术中用于检测蛋白质的表达以及细胞表面标记。
以上只是常见的荧光染料中的几种，它们的应用还远不止于此。
随着科学技术的不断进步，新型的荧光染料不断问世，为各个领域的研究提供了更多更有力的工具。
通过荧光染料的运用，科学家们能够更好地理解和研究生物、物质和环境，进一步推动科学的发展。
干货满满！荧光染料大总结！
干货满满！荧光染料大总结！荧光显微镜技术的基本原理是借助荧光剂让细胞成分呈现高度具体的可视化效果，比如在目的蛋白后面连一个通用的荧光蛋白—GFP。
在组织样本中，目的基因无法进行克隆，则需要用免疫荧光染色等其他技术手段来观察目的蛋白。
为此，就需要利用抗体，这些抗体连接各种不同的荧光染料，直接或间接地与相应的靶结构相结合。
此外，借助荧光染料，荧光显微镜技术不只局限于蛋白质，它还可以对核酸、聚糖等其他结构进行染色，即便钙离子等非生物物质也可以检测出来。
本文就对几种常用的荧光剂进行了具体的介绍。
免疫荧光 (IF)在荧光显微镜技术中，可以通过两种方式观察到你的目的蛋白：利用内源荧光信号，即通过克隆手段，用遗传学方法将荧光蛋白与目的蛋白相连；或利用荧光标记的抗体特异性结合目的蛋白。
有些生物学问题采用第二种方法会更有用或更有必要。
比如，组织学样品无法使用荧光蛋白，因为通常来说，标本都是从无法保存荧光蛋白的生物体中获取。
此外，当有一个有功能的抗体可用时，免疫荧光法会比荧光蛋白技术快很多，因为后者必须先克隆目的基因再将DNA转染到适当的细胞中。
荧光蛋白的另一项劣势在于其本身属于蛋白质。
因此，细胞内的这些荧光蛋白具有特定的蛋白质特性，其会导致附着的目的蛋白质发生功能紊乱或出现误释的情况。
然而，荧光蛋白技术仍然是观察活细胞的首选方法。
免疫荧光法利用了抗体可以和相应抗原特异性结合的这个特性，对此它还有两种不同的表现形式。
最简单的方式是使用可与目的蛋白相结合的荧光标记抗体。
这种方法被称为“直接免疫荧光法”。
在很多情况下，我们可以利用两种不同特性的抗体。
第一种抗体可以结合目的蛋白，但其本身并未进行荧光标记（一抗）。
第二种抗体本身就携带荧光染料（二抗），并且可以特异性结合一抗。
这种方法被称为“间接免疫荧光法”。
这种方法存在诸多优势。
一方面，它会产生放大效应，因为不只一个二抗可以与一抗相结合。
另一方面，没有必要始终用荧光染料标记目的蛋白的每个抗体，但可以使用市售荧光标记的二抗。
【源版】免疫荧光细胞化学技术
一、荧光的特征
分子都含有电子，电子在不停地运动着。根据量子理论，运 动着的电子可以处于一系列不连续的能量状态中，电子遵守一定的规则， 要以从一个能级向另一能级跃迁，并伴随着与能级差相对应的特定能量 的吸收或释放。
激发: 当电子吸收能量跃迁到较高能
级，这个过程叫激发。
发射: 以辐射方式跃迁时，能量转化
一个IgG分子最多能标记15-20个FITC分子
最大吸收光谱：490～495nm， 最大发射光谱：520～530nm。 分子量：389.4KD
(2)四乙基罗达明(RB200)
褐红色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮，性质稳定，可长期保存。呈 明亮橙红色荧光。RB200在五氯化磷(PCl5)作用下转变成磺酰氯，在碱性 条件下易与蛋白质的赖氨酸一氨基反应结合而标记在蛋白分子上。
(1)原理：当FITC在碱性溶液中与抗体反应时，主要是抗体分子上的赖 氨酸-氨基与FITC上硫碳胺键结合，一个IgG分子中有86个赖氨酸残基， 一般最多能结合15～20个。
荧光素FITC-N＝C ＋ N-蛋白质→ FITC- N – C – N - 蛋白质
‖
‖
S HH
HS H
(2)操作流程 抗体与荧光素比例为50-100:1
最大吸收光谱:570nm 最大发射光谱:596～600nm 分子量：580KD
(3)四甲基异硫氰酸罗达明(TMRITC) 紫红色粉末，罗达明的衍生物，易溶于水，性质较稳定。呈橙红色荧 光，与FITC的黄绿色荧光对比清晰，与蛋白质结合方式同FITC。它可 用于双标记示踪研究。
最大吸收光谱:550nm
（5）结果
荧光显微镜下观察，呈现黄绿色荧光部分为阳性细胞。
2 间接法
（1）基本原理 先用未标记特异性抗原与细胞或组织内抗体反应，再用此 抗原的特异性荧光抗体与结合在细胞内抗体上的抗原相结合，抗原夹在细胞 抗体与荧光抗体之间，故称夹心法。
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（1）荧光素类
Flｕoｒescein
标准荧光素(Refｅrence standａrd)之一,在其基础上进行结构改造,可产生一系列荧光素衍生物。
Ｆluoｒesceｉｎ适用于Argon-ioｎ Laser的４8８nm光谱线,有相对高的荧光吸收,较好的荧光产率以及良好的水溶性。
标记蛋白时通常不会产生蛋白沉淀。
与其他荧光素类衍生物一样，Fluｏreｓceiｎ具有光淬灭率高，pH敏感性强与发射波谱宽的缺点。
ﻫ主要应用于聚焦激光扫描微阵列(Ｃonfocal laｓeｒｓcanｎｉnｇ micｒｏｓｃopｙ）和流式细胞计应用(Floｗ cytomeｔry）。
ＦITＣﻫ异硫氰酸荧光素,Flｕoreｓcｅｉn ｉsoｔｈiocyanate，是荧光素衍生物的一种，5-ＦITC较６-FITC更经常使用。
ﻫFＩＴC的异硫氰酸基能与氨基反应,可用于标记氨基修饰DＮA,一旦形成，产物极为稳定。
适用于Arｇoｎ-ioｎ Laｓeｒ的488nｍ光谱线,Abs/Em=492/519nm(pH=９.0）。
与蛋白的结合力也强。
ﻫ FITＣ具有荧光素衍生物的普遍特性。
在水中易变坏,不能长久保存。
ﻫFＩTC－Oliｇo 广泛用于杂交探针;FＩＴＣ-多肽用于Edｍan降解蛋白测序；FIＴＣ也经常被用于蛋白电泳检测（即使是毛细管电泳）和荧光能量激发转移测试。
ＦAＭﻫ羧基荧光素,Caｒbｏxyfｌｕoresｃeiｎ，是荧光素衍生物的一种，5-ＦAＭ较６-FAM更经常使用。
ﻫCaｒｂoｘyｆluｏresｃｅｉn－5-sｕccｉｍidyl ｅstｅｒ，即5－FAＭ(NHS)广泛存在于荧光标记试剂盒。
与FＩTC相比,FAM与氨基反应更快,产物也更稳定,但FITC结合蛋白的量更大且进程更易于控制。
FAM也适用于Aｒgoｎ－iｏn Lasｅr的488ｎm光谱线,Aｂs/Ｅm=４92／518nm（ｐH＝9.0），具有荧光素衍生物的普遍特性,在水中稳定。
5－FAM主要应用于DNA自动测序中,标记其中的ｄ／ｄdCTP（PＥ公司),也经常用于ＰCR产物定量,核酸探针等。
ＴETﻫ四氯荧光素,Tetｒaｃhloｒo flｕoresｃeiｎ，是荧光素衍生物的一种。
ＴＥT以及HＥＸ均是在FＡM基础上加以改进的，氯原子使ＦAＭ的Aｂs与Eｍ值都产生一定的红移，并在一定程度上减弱了pＨ敏感性。
TEＴ也适用于Ａrgｏn-iｏn Laser激发光源，Abｓ/Em=５2１／5３６nm 。
ＴET,HＥX，ＦAM和TAMＲA可配合用于DNＡ自动测序中，其中TET用于标记ｄ/ddATＰ,HEX用于标记
ﻫHEXﻫ六氯荧光素,Hｅxachｌｏro fluoreｓcein,是荧光素衍生d／ddGTP或ｄ/ddAＴP(PE公司）ﻫ
物的一种。
适用于Argon－ioｎＬaser激发光源,Abs/Em=53５/５56ｎm。
（请参见TＥT介绍）ﻫ
JOＥﻫ羧基-4',5'-二氯-２',7'-二甲氧基荧光素,Ｃaｒbｏｘy-4＇，5'-dｉchlｏro－2＇，7＇-dimｅthｏｘyfｌuorescein,是荧光素衍生物的一种,6-JOE更被广泛使用。
ﻫＪOE荧光产量高,ｐＨ敏感性
弱,适合于标记蛋白。
６-JOE也适合于Aｒｇoｎ-ion Laseｒ激发光源，Ａｂs/Em＝520/548（pH=9.0)ﻫ常用于ＤNA自动测序，标记d/ddAＴP，也经常被用于进行电泳检测与PCR产物定量。
（2）罗丹明类（Ｒｈodaminｅ dye）
R 1１０ﻫ标准荧光素(Referencｅ standaｒｄ)之一,在其基础上进行结构改造,即可产生一系列罗丹明类衍生物。
与Fluoｒescein类衍生物相比,罗丹明类荧光素具有更强的光稳定性，更高的荧光产量以及更低的ｐＨ敏感性
罗丹明类荧光素极为适合于标记寡核甘酸，但蛋白会引起大多数罗丹明类荧光素的荧光淬灭,故大多数不适宜用于标记蛋白。
ﻫR11０被用于DNA自动测序。
TＡMRAﻫ全称羧基四甲基罗丹明，即Cａｒbｏxytetraｍethylrhodａｍine,是罗丹明类荧光素衍生物，6－ TＡＭＲA被广泛使用。
TAMRＡ是少数几个能用于标记蛋白的，6－ TＡMRＡ适用于Aｒgon-iｏn Laser激发光源,Aｂs/Em=547／573ｎm(Ph＝８.０），6－ＴＡMRＡ（NHS）常用于荧光标记试剂盒中。
6－ TAMRＡ主要用于DＮA自动测序中。
Texas Reｄ
Ｔexas Red是一个长波长荧光素,与Fｌｕoresｃｅｉn几乎没有波谱重叠,只适合于Ａｒ-Kr Lａser的5６8nm光谱线或He-Ne Lａser的５９４光谱线,比Tｅtｒaｍethｙlｒhodamｉｎe和LissamineＴM Rh ｏｄaｍine B波长更长,荧光量更高。
ＴeｘaｓＲed在荧光微阵列和流式细胞计中更被经常作为第三波长标记(Thｉｒｄ labｅlｓ)。
（3)ＢODIＰＹ类
BＯDＩPY类荧光素是由分子探针公司开发,以用来替代那些有部分缺陷的传统荧光素，普遍具有荧光产量高,ｐH敏感性低（无离子变化）,光稳定性强以及发射波谱窄的优点,故ＢＯＤＩPY类荧光素已被广泛用于核酸,,脂肪酸，磷脂以及各种受体。
同时，由于在电泳过程中对序列片段影响小,故已被逐渐用于DNA自动测序。
但相对而言, BOＤIPY类荧光素并不特别适合标记蛋白.ﻫ BＯDＩＰＹ FL可代替FlｕoｒｅｓｃeinﻫBODIPY R6Ｇ可代替Rｈodamine ６G
BODＩＰＹTMR可代替Teｔraｍethｙｌrhodamine
BODIPY ＴR可代替Texａs Red
这些BＯDＩPY类荧光素具有与被替代物几乎类似的光谱特征，能共用同样的光过滤器与激发光源,但更具优点。
（4）其他荧光素
Caｓcade blue
Cａsｃaｄe bluｅ是在芘 (pｙrenｅ)结构基础上改造得来的，即suｌfoｎatｅd pyrｅｎe,它是一种
短波长紫外激发荧光素,与另一种常用的紫外荧光素Aｍiｎocoｕｍaｒin相比,Cａscａｄｅｂlue的Em 与Ｆｌuorescein有更小的光谱重叠，有更高的荧光吸收和更大的荧光产量. Ｃaｓcａｄe ｂlue在376nm 处存在第二个吸收峰，水中不稳定。
ﻫ Cascade blｕe 主要用于标记蛋白,作为极性示踪子（ｐolar tra ｃer)可进行膜蛋白定位等.但也能用于标记核酸和葡聚糖。
Amiｎｏcoumariｎ
一种短波长紫外激发荧光素，通常使用的是７-amｉｎo－4-ｍeｔｈylcｏｕmarin, 红移现象明显,比Ｃａscaｄe ｂｌue有更长的发射波长，肉眼观察明显，更适用于cｏnfocal。
表1：主要荧光激发光源
表2:主要荧光素一览表。