免疫检测常用方法及运用
免疫检测技术的研究和应用
免疫检测技术的研究和应用随着现代生物技术的发展，免疫检测技术受到越来越多的关注和应用。
免疫检测技术是指利用生物学方法来检测和测量特定的生物体分子，如蛋白质、抗体、细胞等。
免疫检测技术广泛应用于医学诊断、生物学研究、环境监测、食品安全等领域，具有灵敏、特异、快速等优点。
目前，免疫检测技术主要有免疫层析、酶联免疫吸附检测（ELISA）、免疫荧光、免疫电泳等几种常见的方法。
其中，ELISA是最为常用的一种免疫检测方法。
它通过将待测物与特异性抗体结合，再通过酶偶联的二抗与该复合物发生化学反应，从而产生信号。
ELISA具有灵敏度高、特异性好的优点，因此被广泛应用于医学诊断、疫苗研发和生物药物监测等领域。
免疫检测技术在医学领域的应用尤为广泛。
例如，在临床医学中，免疫检测技术可以用于探测病原体感染、肿瘤标志物、免疫功能异常等疾病诊断。
通过对患者血清或组织样品中特定抗体或抗原的检测，可以快速、准确地确定疾病的类型和严重程度，有助于合理制定治疗方案。
此外，免疫检测技术还广泛应用于疫苗研发、药物监测与药代动力学研究等领域。
免疫检测技术的应用还涉及到生物学研究领域。
免疫检测技术可以用于研究细胞分子的产生和功能，揭示生物体内的信号传导机制和生命过程。
特定的抗体可以用于检测细胞表面的蛋白质，从而帮助研究人员了解细胞的结构与功能。
此外，免疫检测技术还可以用于蛋白质相互作用的研究，在研究蛋白质相互作用的分子基础和生物学功能方面发挥重要作用。
环境监测是另一个免疫检测技术的重要应用领域。
通过使用特定的抗体可以检测环境中的污染物或致病菌，从而帮助监测和评估环境质量。
例如，通过检测水体中的细菌或有毒物质，可以及早发现并遏制水污染的蔓延。
此外，免疫检测技术还可以应用于食品安全领域，检测食品中的残留物或有害物质，保障人民的食品安全。
总之，免疫检测技术在医学诊断、生物学研究、环境监测和食品安全等领域具有广泛的应用前景。
随着科学技术的不断进步和优化，免疫检测技术将更加灵敏、准确、可靠，为人们的生活和健康提供更多的保障。
免疫检测技术精选干货
意放 图射
免 疫 测 定 法
Ag*
Ab
Ag
标记抗原 特异性抗体 待测抗原
( Ag*-Ab)+ (Ag-Ab) 抗原抗体复合物
分离Ag*-Ab 和游离Ag* 测定Ag*-Ab和游离Ag*放射性
(RIA)
示
从标准曲线上读知含量
•32
RIA法原理及标准曲线
Ag*-Ab
结
Ag*
合 75
/ %
未
（
结 合
•3
一、体外抗原抗体反应的特点
①特异性：抗原抗体反应具有高度的特异性。 ②可逆性：抗原抗体反应所形成的复合物较稳定，
但在一定条件下可解离。（低酸、高盐） ③比例性：抗原抗体的比例合适，才可出现可见的
反应现象。（网格理论） ④阶段性：特异性结合阶段和可见反应阶段。
•4
网格理论——解释抗原抗体形成沉淀的机制
1 双抗夹心法测抗原
适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗 原及低于二价的小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心
•43
2 间接法测抗体
•44
几种标记/检测技术灵敏度的比较
灵敏度(mol/L)
10-18 10-15 10-12 10-9
酶标
荧光
放免
发光
•45
几种标记/检测试剂的有效期比较
火箭免疫电泳技术又称作单向电泳扩散 免疫沉淀试验，它是由单向扩散发展起 来的一项定量技术，实质上是加速度的 单向扩散。
•21
火箭电泳图
沉淀线的高度与抗原量成正比
•22
二、凝集反应（Agglutination）
颗粒性抗原（如细菌、细胞）与相应抗体，在适当电解 质存在的条件下，经过一定时间后出现肉眼可见凝集块 称为凝集反应。 1、直接凝集：将细菌或红细胞与相应的抗体直接反应，出
免疫检测技术及其应用研究
免疫检测技术及其应用研究免疫检测技术是一种能够检测身体免疫反应、抗原-抗体反应以及细胞表面分子表达和功能等的检测方法。
免疫检测技术在疾病诊断、治疗监测和免疫学研究中扮演着不可或缺的角色。
一、免疫检测技术的分类免疫检测技术包括多种方法，根据不同的原理和应用可以分为以下几种。
1.免疫荧光检测技术：免疫荧光检测技术是通过标记特定的免疫分子（如抗体）和激发它们的荧光来检测免疫分子在样本中的表达以及抗原-抗体结合。
2.酶联免疫吸附测定（ELISA）：ELISA法基于抗原-抗体反应，在试剂盒中直接反应形成可检测的颜色和荧光信号，用于检测分子间特异性的相互作用，如抗原和抗体之间的相互作用。
3.流式细胞术：流式细胞术是一种多参数分析技术，通常用于分析细胞表面分子的表达和功能，可以用于定量细胞表面特异性的抗原-抗体结合，检测细胞内的蛋白表达和功能状态。
4.免疫电泳：免疫电泳是一种将蛋白质或核酸分离并在电泳技术中联合免疫反应进行识别的方法，它是一种在电泳胶上进行免疫染色的方法，主要用于检测血清和组织蛋白的多态性。
5.免疫印迹：免疫印迹是一种通过对蛋白质的空间结构和特异性抗原-抗体结合来检测特定蛋白质表达和活性的方法。
它能够用于病原体的识别和鉴定，以及重组蛋白质的制备和检测等。
二、免疫检测技术的应用免疫检测技术应用广泛，在生命科学研究和临床医学等领域都有很大的应用价值。
1.疾病诊断：免疫检测技术可以用于疾病的早期诊断、疾病的监测和治疗效果的评估，如HIV、乙肝等常见病的检测和诊断。
2.药物开发：免疫检测技术可以用于药物的发现和开发，如用于检测药物分子和靶标分子之间的相互作用，筛选新型药物分子。
3.生命科学研究：免疫检测技术可以用于分子和细胞水平的研究，如研究基因表达、肿瘤细胞、细胞因子等方面。
三、未来发展方向在未来的研究中，我们可以预见到免疫检测技术会继续向着更高级、更精细的方向发展。
具体而言，未来的发展方向包括以下几个方面。
临床免疫学检验方法与应用
临床免疫学检验方法与应用免疫学是一门研究机体对抗病原体、维持免疫平衡的科学，其在临床诊断中起着举足轻重的作用。
免疫学检验方法多种多样，能够准确地检测机体的免疫状态，有助于诊断和治疗各种疾病。
本文将介绍几种常见的临床免疫学检验方法及其应用。
1. ELISA法ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种常用的免疫学检验方法，通过酶标法测定抗体或抗原的存在量。
ELISA法可用于检测HIV、乙肝、梅毒等疾病的抗体水平，也可用于测定药物浓度或病毒载量。
由于ELISA法操作简便、灵敏度高，因此在临床诊断中得到广泛应用。
2. 免疫荧光法免疫荧光法是一种通过检测抗体或抗原在细胞或组织中的荧光信号来进行免疫检测的方法。
免疫荧光法被广泛用于自身免疫性疾病的诊断，如风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等。
通过观察免疫荧光信号的强度和分布，可以判断患者的免疫状态和疾病程度。
3. 免疫印迹法免疫印迹法（Western Blot）是一种通过检测抗体与特定抗原结合而形成的免疫复合物来进行检测的方法。
免疫印迹法主要用于检测蛋白质的表达水平和鉴别不同蛋白质。
在临床上，免疫印迹法常用于肿瘤标记物的检测和分析，有助于早期发现恶性肿瘤。
4. 细胞免疫学方法细胞免疫学是研究机体免疫细胞及其功能的学科，其方法主要包括细胞毒活性测定、淋巴细胞亚群分析、细胞因子测定等。
这些方法在免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反应的诊断和治疗中起着关键作用。
5. 其他免疫学检验方法除了上述几种常见的免疫学检验方法外，还有许多其他方法，如流式细胞仪、PCR法、化学发光法等。
这些方法在特定疾病的诊断和治疗中有其独特的应用价值，为临床医生提供了更多的诊断手段和治疗选择。
总结免疫学检验方法在临床诊断中发挥着不可替代的作用，能够帮助医生准确判断患者的免疫状态和疾病情况，指导治疗方案的制定和调整。
不断发展的免疫学技术为医学进步提供了强大的支持，相信随着科学技术的不断创新和进步，免疫学检验方法将在临床应用中发挥越来越重要的作用。
免疫学检测技术及应用
划痕法
细胞因子的检测技术
一、 生物学检测技术 二、 免疫学检测技术 三、分子生物学检测技术
依赖细胞株测定法 ELISA法
分子杂交、PCR 等检测mRNA
细胞因子检测的特点
• 样品含量低 •样品具有时效性 •生物效应特异性差
Figure 14-12
细胞因子的功能
Cell activation
／immunogold staining)
（一）免疫荧光技术(又称荧光抗体技术) 原理：用荧光素(如异硫氰酸荧光素、罗
丹明B200等) 标记抗体(荧光抗体)，用荧光 抗体浸染细胞或组织切片，抗原与荧光抗体 结合，于荧光显微镜下观察荧光，确定被检 抗原的存在。
免疫荧光技术包括：
直接法
间接法
间接补体增强法
ELISA法： 直接法 间接法 双抗体夹心法(双位点法) 竞争法
ELISA
(三) 同位素标记技术(isotope-labelling technique) 放射免疫分析(radioimmunoassay,
RIA) 是一种用放射性同位素分析抗原抗体反应 相结合方法。 优点：灵敏度高, 可检测0.001pg／mL
Direct and indirect immunofluorescence staining of membrane antigen (mAg).
（二）免疫酶技术(immunoenzymatic techniques)
是将抗原抗体反应与酶催化底物的作用 相结合的一种方法。
主要有两种类型： 1.免疫酶染色 2.酶免疫测定（enzyme immunoassay, EIA）
•3H-胸腺嘧啶核苷参入法（3H-TdR）: 间接观察DNA 合成含量。灵敏度高，具有放射性。 •四甲基偶氮唑盐法（MTT）: MTT商品名为噻唑蓝。 原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶可将外源性 MTT还原成蓝紫色结晶-甲瓒（formazan）, DMSO使 其溶解，酶标分析仪检测。简便，灵敏度高，稳定性 差。
免疫学检验的方法和特点
免疫学检验的方法和特点免疫学检验是一种通过检测和分析机体免疫系统相关指标来评估机体免疫功能的方法。
它可以用于疾病的诊断、预防和治疗过程中，对于研究免疫系统的功能和疾病的免疫机制也具有重要意义。
免疫学检验的方法主要包括体外诊断试验、免疫组化技术和流式细胞术等。
下面将逐一介绍这些方法的特点和应用。
1. 体外诊断试验：体外诊断试验是最常用的免疫学检验方法之一，包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫分析（RIA）、免疫印迹（Western Blot）等。
这些试验通过检测血清中的抗体或抗原来评估机体的免疫状态。
其特点是操作简单、结果准确可靠、样本来源广泛，可以用于检测多种疾病，如感染病、自身免疫病等。
体外诊断试验的优势在于可以进行大规模筛查，对于人群健康状况的监测和疾病的早期诊断具有重要意义。
2. 免疫组化技术：免疫组化技术是利用抗体与组织或细胞中特定分子的结合反应来检测和定位这些分子的方法。
常用的免疫组化技术包括免疫组织化学（IHC）和免疫荧光染色（IF）等。
这些技术可以用于检测和定位肿瘤标志物、炎症细胞因子、免疫细胞表面标志物等，对于疾病的诊断和治疗有重要的指导意义。
免疫组化技术的优势在于可以直接观察到分子的表达和分布情况，具有较高的灵敏度和特异性。
3. 流式细胞术：流式细胞术是一种通过检测和分析细胞表面标志物来鉴定和分类细胞的方法。
通过标记细胞表面的抗原或抗体，结合流式细胞仪的高速流式分析技术，可以对单个细胞进行高通量的检测和分析。
流式细胞术可以用于检测和鉴定免疫细胞亚群、肿瘤细胞、干细胞等，对于疾病的诊断和治疗选择有重要的指导作用。
流式细胞术的优势在于可以同时检测多个指标，对于复杂的样本分析有较高的效率和准确性。
免疫学检验的特点包括以下几个方面：1. 高度特异性：免疫学检验方法可以通过特异的抗体-抗原反应来检测和定量分析特定的分子或细胞，具有较高的特异性。
这使得免疫学检验方法在疾病的诊断和治疗中具有重要的优势，可以准确地鉴定和区分不同的疾病类型。
常见免疫学检测方法
常见免疫学检测方法免疫学检测方法是一种通过检测人体免疫系统中特定分子或细胞的存在、数量或功能来评估免疫系统状态的方法。
这些方法在临床诊断、药物研发和疾病监测等领域起着重要作用。
本文将介绍几种常见的免疫学检测方法。
一、酶联免疫吸附试验（ELISA）酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常见的免疫学检测方法，广泛应用于疾病的诊断和研究中。
ELISA基于抗原与抗体的特异性结合原理，通过固相支持物上的抗原或抗体与待测样品中的相应抗体或抗原结合，然后用酶标记的二抗或二抗-抗体复合物来检测结合物质的存在。
ELISA方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便的特点，可用于检测多种物质，如病原体、抗体、激素等。
二、流式细胞术流式细胞术（Flow Cytometry）是一种利用激光技术对细胞进行快速、高通量的分析和分选的方法。
该方法通过将待测细胞标记上与特定抗原结合的荧光染料，然后通过激光束照射，测量细胞上荧光信号的强度和特征，以获得细胞的相关信息。
流式细胞术可用于细胞表面标记物的检测、细胞周期分析、细胞凋亡检测等。
此外，流式细胞术还可以进行单细胞分选，用于获得特定细胞亚群进行进一步的研究。
三、免疫组化免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种通过将抗体与待测组织中的特定抗原结合来检测抗原在组织中的分布和表达水平的方法。
免疫组化方法首先将待测组织样本进行处理，使其能够与抗体发生特异性反应，然后使用荧光染料、酶标记物或金标记物等标记抗体，通过显色或荧光信号来显示抗原的分布情况。
免疫组化方法可用于病理诊断、研究组织中特定蛋白的表达和定位等。
四、免疫电泳免疫电泳（Immunoelectrophoresis）是一种结合电泳和免疫学的方法，用于检测和鉴定蛋白质分子。
免疫电泳通过电泳将蛋白质在凝胶中分离，然后在凝胶上进行抗体与蛋白质的反应，形成免疫沉淀线，通过观察免疫沉淀线的形状和位置来判断蛋白质的类型和数量。
免疫学检测方法与操作规范
免疫学检测方法与操作规范免疫学检测方法一直是生物医学领域中的重要技术之一，广泛应用于免疫学研究、临床诊断和治疗监测等方面。
本文将介绍免疫学检测方法的基本原理、常用实验步骤以及操作规范，旨在为科研人员和实验室从业人员提供参考。
一、免疫学检测方法简介免疫学检测方法是通过检测人体免疫系统特异性抗原与抗体之间的相互作用来实现。
其原理基于人体免疫系统对外界病原体的免疫应答，通过检测抗原-抗体反应可以确定某种特定的抗原或抗体是否存在于样本中。
免疫学检测方法常见的类型包括ELISA（酶联免疫吸附测定法）、免疫印迹、流式细胞术等。
每种方法都有其特定的优势和适用范围，具体选择方法要根据实验目的和样本特点来确定。
二、常用免疫学检测方法及操作步骤1. ELISA方法ELISA是一种定性和定量检测抗原或抗体的常用方法。
其操作步骤包括：（1）涂底板：将包含目标抗原的溶液加入微孔板中，并在相应孔中加入阴性对照和阳性对照，孵育后洗涤；（2）加入特异性抗体：将标记有酶的特异性抗体加入孔中，并进行孵育和洗涤；（3）底物反应：加入酶底物，允许产生显色反应；（4）终止反应：加入终止液停止底物反应；（5）测定吸光度：使用酶标仪测定吸光值，计算样品中目标抗原或抗体的浓度。
2. 免疫印迹方法免疫印迹是一种用于检测特异性抗原和抗体的方法，常用于蛋白质的鉴定和定量。
操作步骤包括：（1）蛋白质分离：将待测蛋白经SDS-PAGE电泳分离；（2）膜转移：将分离后的蛋白转移到膜上，如PVDF或NC膜；（3）阻断：用蛋白阻断剂阻断膜上非特异性结合位点；（4）孵育抗体：使用特异性抗体孵育膜，结合目标蛋白；（5）洗涤：洗去未结合的抗体；（6）显色：加入特定底物进行显色反应；（7）图像分析：使用成像系统记录和分析显色结果。
3. 流式细胞术流式细胞术常用于分析和鉴定细胞表面标记物的表达情况，以及细胞在不同状态下的功能。
操作步骤包括：（1）细胞准备：对待测细胞进行处理，包括细胞培养、致死和洗涤等步骤；（2）标记抗体：使用荧光标记的特异性抗体孵育待测细胞，与目标表面标记物结合；（3）洗涤：洗涤去除未结合的抗体；（4）流式细胞仪分析：将标记后的细胞放入流式细胞仪中进行荧光检测和数据分析。
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将可溶性抗原（或抗体）先吸附于适当 大小颗粒性载体的表面，然后与相应抗 体（或抗原）作用，在适宜的电解质存 在的条件下，出现特异性凝集的现象称 间接凝集反应（indirectagglutination） 或被动凝集反应（assiveagglutination） 。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
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ELISA—双抗体夹心法
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ELISA—双抗体夹心法
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ELISA—双抗原夹心法
用特异性抗原进行包被和制备酶结 合物，以检测相应的抗体。 抗HBs的检测 抗HCV的检测 抗HIV的检测
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酶联免疫吸附剂试验
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酶联免疫吸附试验
双抗体夹心法 双抗原夹心法 间接法 竞争法 捕获法测 IgM 抗体
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ELISA—双抗体夹心法
用特异性抗体进行包被和制备酶标 抗体，以检测相应的抗原。
乙肝标志物中HBsAg、 HBeAg的检 测常采用本法
所用载体为人工合成的惰性明胶颗 粒 梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA） 肺炎支原体抗体检测（MP-Ab）
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正向间接凝集反应 —TPPA试验
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正向间接凝集反应 —TPPA试验
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正向间接凝集反应 —MP-Ab试验
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凝集反应(agglutination)
颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应的 抗体，或可溶性抗原(亦可用抗体)吸 附于与免疫无关的载体形成致敏颗 粒与相应的抗体(或抗原)，在有适量 电解质存在下，形成肉眼可见的凝 集小块。
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凝集反应的分类
间接凝集反应
常用的载体微球有人O型血红细胞、绵羊 或家兔红细胞、聚苯乙烯乳胶、活性炭/ 甲苯胺红、明胶颗粒等
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间接凝集反应
正向间接凝集反应 反向间接凝集反应
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正向间接凝集反应
用抗原致敏载体以检测标本中的相 应抗体
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直接凝集反应 间接凝集反应 抗人球蛋白试验（Coombs试验）
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直接凝集反应
颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应的 抗体在有适量电解质存在下，形成 肉眼可见的凝集小块。 常见的应用是血型的鉴定
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血型鉴定示意图
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血浆反应素试验(RPR) 所用载体颗粒为活性炭颗粒
甲苯胺红不加热血清反应素试验 （TRUST）
所用载体颗粒为甲苯胺红颗粒
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正向间接凝集反应 —RPR试验
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正向间接凝集反应 —TRUST试验
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正向间接凝集反应 —明胶颗粒凝集试验
正向间接凝集反应 —胶凝集试验
所用载体颗粒为羧化的聚苯乙烯胶乳， 是一种直径约为0.8μm大小的圆形颗粒， 带有负电荷，可物理性吸附蛋白分子。
将溶血素O 吸附在羧化的聚苯乙烯胶乳 颗粒上检测抗”O”。 将变性IgG包被于羧化的聚苯乙烯胶乳颗 粒上检测RF。
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正向间接凝集反应 —RPR/TRUST试验
直接Coombs试验
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间接Coombs试验
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凝集反应总结
一、直接凝集反应 血型鉴定 二、间接凝集反应
胶乳凝集试验 ASO/RF 1正向间接凝集反应 RPP/TRUST
明胶颗粒凝集 TPPA/MP 2反向间接凝集反应 三、抗人球蛋白试验 直接/间接Coombs试验
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酶联免疫吸附试验 （ELISA）
① 使抗原或抗体结合到某种固相载体表 面，并保持其免疫活性。
② 使抗原或抗体与酶连接成酶标抗原或 抗体，且既保留其免疫活性又保留酶的 活性。
③ 标本中的抗原或抗体、酶标抗原或抗 体按一定的次序与固相载体表面的抗体 或抗原反应，并通过底物与酶的反应来 反映标本中的抗原或抗体的量。
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正向间接凝集反应 —MP-Ab试验
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正向间接凝集反应 —MP-Ab试验
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正向间接凝集反应 —MP-Ab试验
检测肺炎支原体的总抗体（IgM, IgA IgG) 以滴度的方式报告检测结果（<1:80 1:80、1：160、1:320 ……)
ELISA—双抗原夹心法
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ELISA—竞争法
标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争 与固相抗原结合。如受检标本中无抗体 ，则酶标抗体能顺利地与固相抗原结合 。加入酶标抗原后就显色深。如受检标 本中含有抗体，则与酶标抗体以同样的 机会与固相抗原结合，竞争性地占去了 酶标抗体与固相抗原结合的机会，使酶 标抗原与固相载体的结合量减少。加入 酶标抗原后就显色浅或不显色。
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反向间接凝集反应
用已知特异性抗体致敏载体以检测 标本中的相应抗原。
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抗人球蛋白试验 （Coombs试验）
抗人球蛋白抗体参与的间接血凝试 验，用于检测抗红细胞不完全抗体 分类：
直接Coombs试验 间接Coombs试验
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免疫学检测方法是应用免疫学理论 设计的一系列测定抗原、抗体、补 体、细胞因子等免疫相关物质及微 量物质如激素、酶、血浆微量蛋白 、血液药物浓度、微量元素、毒品 等试验方法。
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这些方法所具有的特异性好、敏感 性高、简单、快速和稳定的特点为 临床上确定诊断、分析病情、调整 治疗方案和判断预后等提供有效的 实验依据，使它们在临床的应用进 一步普及和推广。