DEHP及其代谢产物MEHP对MLTC-1细胞凋亡和类固醇激素合成基因表达的影响
叶婷 董 四君 王佳 杨 丹 杨 大 星 李灿
摘要 ：目的 实验 测评 ＤＥＨＰ及 其 主要代 谢 产物 ＭＥＨＰ暴 露 对 ＭＬＴＣ－１细胞 类 固醇激 素 合 成 关键 基 因 表 达的影 响 。方 法 将 ＭＬＴＣ－１分 别暴 露 于 ＤＥＨＰ（０，１，１０，１００，１ ０００ ｉ￣ｍｏｌ／Ｌ）和 ＭＥＨＰ（０，１，１０，１００，１ ０００ ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ）２４ ｈ，采 用 Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／ＰＩ双染 法测 定 细胞 凋 亡 ，并 应 用 荧光 定 量 ＰＣＲ 法分 析 细胞 类 固醇 激 素合 成 过程 中涉及 关键 酶的 基 因表 达 水平 。 结果 凋 亡 实验 结 果 显 示 ＤＥＨＰ（１００和 １ ０００ ｉｘｍｏｌ／Ｌ）和 ＭＥＨＰ（１０ 和 １ ０００￣ｍｏｌ／Ｌ）显著诱 导 ＭＬＴＣ．１细胞 晚期 凋亡 的发 生 ，１ ０００ ｌｘｍｏｌ／Ｌ ＤＥＨＰ和 ＭＥＨＰ显 著 降低 了 ＭＬＴＣ．１ 活 力 。所 以本研 究采 用 了较低 的 染毒 浓度 （１，１０和 １００￣ｍｏｌ／Ｌ）对 ＭＬＴＣ一１染毒 ２４ ｈ来评 估 ＤＥＨＰ和 ＭＥ． ＨＰ对 ＭＬＴＣ一１类 固醇合成 通路 的影响 。荧光 定 量结 果显 示 １ ｔｘｍｏｌ／Ｌ ＤＥＨＰ显 著增 加 ＭＬＴＣ－１ ＣＹＰ１７Ａ１基 因表 达 水平 ，而 １００ ｉ￣ｍｏｌ／Ｌ ＤＥＨＰ显 著抑 制 ＭＬＴＣ一１ ＣＹＰ１７Ａ１、ＣＹＰ１１Ａ１和 ＳＦ－１基 因表 达 水平 。１０ ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ ＤＥＨＰ显 著增 加 ＭＬＴＣ．１外 ＣＹＰ１Ａ１基 因表 达 水 平 。１００ ｉ￣ｍｏｌ／Ｌ ＤＥＨＰ显 著 抑 制 ＭＬＴＣ－１黄 体 激 素 受 体 ＬＨＲ基 因表 达水 平 。１ Ｉ￣ｍｏｌ／Ｌ ＭＥＨＰ显 著增加 ＭＬＴＣ一１ ３Ｂ—ＨＳＤ基 因表 达 水平 。然 而 ＭＥＨＰ对 类 固醇激 素 合 成过 程 中一 些 酶如 ＳＴＡＲ、ＣＹＰ１７Ａ１、ＣＹＰ１１Ａ１、重要 调 节 因子胰 岛素样 激 素 ３ ＩＮＳＬ．３、ＳＦ一１、关键 受体 ＡＲ 和 ＬＨＲ基 因表 达水 平均 无显 著影 响 。结 论 ＤＥＨＰ和 ＭＥＨＰ诱 导 ＭＬＴＣ．１凋 亡 ，ＤＥＨＰ和 ＭＥＨＰ都 可影 响 ＭＬＴＣ．１细胞 类 固醇激 素合 成过 程 中关键 基 因的表 达 ，从 而引起 内分 泌干扰 。
作 者 简介 ：叶 婷 ，讲 师 ，主 要 从 事 环境 污 染 物 的 毒 理 研 究 作 者 单 位 ：１贵 阳学 院 生 物 与 环 境 工程 学 院 贵 州 省 山 地珍 稀 动 物 与 经 济 昆 虫 重 点 实验 室 ；２ 中 国科 学 院 城 市环 境研 究所 中 国
《环 境 卫 生 学 杂 志 ）２０１８年 ８月 第 ８卷 第 ４期 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｈｙｇｉｅｎｅ Ａｕｇ．２０１８，Ｖｏ１．８ Ｎｏ．４
【调 查 研 究 】
ＤＥＨＰ及 其 代 谢 产 物 ＭＥＨＰ对 ＭＬＴＣ一１细 胞 凋 亡和 类 固 醇 激 素合 成 基 因表 达 的 影 响
ＹＥ Ｔｉｎｇ ，ＤＯＮＧ Ｓｉｊｕｎ ，Ｗ ＡＮＧ Ｊｉａ。，ＹＡＮＧ Ｄａｎ ，ＹＡＮＧ Ｄａｘｉｎｇ ，ＬＩ Ｃａｎ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅｓ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＤＥＨＰ ａｎｄ ｉｔｓ ｍａｉｎ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ ｍｏｎｏ（２－ｅｔｈｙｌｈｅｘｙ１）ｐｈｔｈａｌａｔｅ （ＭＥＨＰ）ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｏｎ ｓｔｅｒｏｉｄｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ＭＬＴＣ－１．Ｍ ｅｔｈｏｄｓ ＭＬＴＣ一１ ｗｅｒｅ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ＤＥＨＰ （０，１，１０，１００， １ ０００ ｉｘｍｏｌ／Ｌ）ａｎｄ ＭＥＨＰ（０，１，１０，１００ｏｐｔｏｓｉｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ Ａｎ－
关键 词 ：邻 苯二 甲酸二 （２一 乙基 己）酯 ；邻 苯二 甲酸单 乙基 己基 酯 ；类 固醇激 素合 成 中 图 分 类 号 ：Ｘ１７１．５ ＤｏＩ：１０．１３４２１／ｊ．ｃｎｋｉ．ｈｊｗｓｘｚｚ．２０１８．０４．Ｏ０１
Ｅｆｌ ｆｅｃｔｓ Ｏｆ Ｄ ＥＨ Ｐ ａｎｄ ｉｔｓ Ｍ ｅｔａｂｏｌｉｔｅ Ｍ ＥＨ Ｐ ｏｎ Ｃｅｌｌ Ａ ｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｓｔｅｒｏｉｄｏｇｅｎｉｃ Ｇ ｅｎｅｓ ｉｎ Ｍ ＬＴＣ ．１ Ｃｅｌｌｓ
ｎｅｘｉｎ Ｖ／ＰＩ ｄｏｕｂｌｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ， ａｎｄ ｒｅａｌ ｔｉｍ ｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＲＴ－ＰＣＲ ｍ ｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｍ ＲＮＡ ｅｘ－ ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｔｈｅ ｋｅｙ ｅｎｚｙｍｅｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｓｔｅｒｏｉｄ ｈｏｒｍｏｎｅｓ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｅｄ １００ ａｎｄ １ ０００ ｉｘｍｏｌ／Ｌ ＤＥＨ Ｐ ａｎｄ Ｍ ＥＨＰ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｄｕｃｅｄ ｔｈｅ ｌａｔｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ＭＬＴＣ－１，１ ０００ ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ ＤＥＨ Ｐ
植物雌激素代谢的分子机制和调控
植物雌激素代谢的分子机制和调控植物中的雌激素，通常指的是天然存在于植物中的雌激素类化合物，包括黄酮类、异黄酮类和儿茶酚类等。
这些化合物对植物发育和逆境响应等方面具有重要作用。
由于其结构相对简单，且天然存在，因此在研究植物代谢途径方面有着重要的应用价值。
本文将从分子机制和调控两个方面来论述植物雌激素代谢的相关知识。
一、植物雌激素代谢的分子机制1.酶催化作用植物雌激素代谢中最为关键的分子机制，就是酶催化作用。
在植物体内，有多种酶参与到雌激素代谢过程中，其中最为重要的是3-羟基异黄酮-4'-还原酶（3-hydroxyisoflavanone-4-reductase, HIFR）和花青素合酶（anthocyanin synthase, ANS）。
HIFR是一种NADPH依赖性的酵素，能将3-羟基异黄酮还原为异黄酮，是异黄酮合成途径的限速酶。
而ANS则是合成花青素的重要酶，能将花青素前体分子合成成花青素。
这些酶在雌激素代谢中起到关键性作用，是相关代谢途径的限制步骤酶。
2.细胞信号通路植物雌激素代谢除了酶催化作用外，还受到一些细胞信号通路的调控。
比如，ABA信号能促进花青素的积累和苯丙氨酸代谢途径的启动，从而影响到植物的生长和发育。
此外，外界环境因素对雌激素代谢的影响也是通过细胞信号通路实现的。
例如，光周期不同会对花青素的积累量和有机酸的合成产生影响，从而影响到植物的生长和逆境响应等方面。
二、植物雌激素代谢的调控1.激素调控植物体内的激素在雌激素代谢中扮演着重要的调控作用。
以赤霉素为例，赤霉素能促进植物生长和发育，同时也能抑制异黄酮的合成，从而减少花青素的积累。
而乙烯则能促进花青素的积累和抗氧化物质的合成，从而增强植物的逆境抗性。
2.基因调控基因调控是植物雌激素代谢调控中最为直接的方式。
各种転錄因子、核移位蛋白和miRNA等都对植物雌激素代谢基因的表达产生影响。
以MYB转录因子为例，MYB78能够负向调节HIFR基因的表达，从而抑制异黄酮的合成。
基因表达及其调控与代谢物分析
基因表达及其调控与代谢物分析基因表达是指基因上的信息被转录成RNA分子，最终转化为蛋白质的过程。
在细胞代谢过程中，不同的基因表达量和调控机制对于细胞的功能和特性起着重要的作用。
因此，基因表达及其调控与代谢物分析是当今生物医学研究领域中的热点问题。
基因的表达量由多种环境和遗传因素调节。
通常来说，基因转录起始因子和转录核酸酶是控制基因表达的两个主要因素。
转录起始因子与特定DNA序列的结合激活转录过程，而转录核酸酶则是识别DNA序列并促进mRNA的合成。
此外，基因组上的诸多的表观遗传修饰（包括DNA甲基化、组蛋白修饰等）和非编码RNA （如甲基化miRNA、siRNA等）也可影响基因表达。
在细胞增殖和分化过程中，上述因素的调控极为复杂。
为了更好地研究基因表达及其调控，在取得细胞样品后，可以利用RNA测序技术和qPCR等方法检测不同基因的表达量，识别某些表达模式与不同生物功能之间的关系。
此外，分子标记方法（如北方杂交法、原位杂交法），蛋白质组学方法（如蛋白质质谱法、蛋白质芯片法），和功能基因组学方法（如基因敲除法、RNA干扰技术）等，也是流行的基因表达分析方法。
在基因表达分析的基础上，代谢物分析是对细胞生命过程的加强理解，特别是对于了解某些代谢性疾病。
代谢物是细胞内化学反应的产物，也是描述细胞状态和活动的有力工具。
代谢物组学方法以人体代谢物和代谢物组为研究对象，运用各种分析技术和数据处理手段对大量生物样品进行分析，以确定不同状态的代谢物指纹图谱，寻找新的代谢性疾病标志物，并发现特定代谢物在疾病的发展过程中的机制。
在代谢物分析领域，代谢物组学方法（如质谱代谢物组学和核磁共振代谢物组学）是最常见和流行的，通过分析组织和体液中代谢物的浓度和结构差异，可以确定不同状态的代谢物指纹图谱。
此外，也有人使用代谢物芯片、代谢物关注方法和有针对性地定向扫描特定代谢物的方法等。
总的来说，基因表达及其调控和代谢物分析是两个相辅相成的研究领域。
DEHP、MEHP对小鼠胚胎干细胞细胞毒性的研究
DEHP、MEHP对小鼠胚胎干细胞细胞毒性的研究李玉秋;段志文;裴秀丛;张玉敏;马明月【摘要】目的分析不同浓度的邻苯二甲酸二乙基己酯[di(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP]及其活性代谢产物邻苯二甲酸单乙基己基酯[mono(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP)对小鼠胚胎干细胞细胞毒性、增殖的影响.方法用含有不同浓度DEHP(1 000、100、10、1、0.1、0.01 μmol/L)、MEHP(1000、100、10、1、0.1、0.01 μmol/L)的培养液,对胚胎干细胞进行培养,用CCK-8法检测细胞活性.结果染毒96 h后,高剂量(1 000μmol/L) DEHP、MEHP均对胚胎干细胞的增殖有抑制作用(P＜0.05),且染毒剂量与细胞抑制率之间存在明显的正相关性,相关系数分别为0.51、0.62 (P ＜0.05).结论在一定浓度范围内,DEHP及MEHP均对小鼠ESC具有细胞毒性,且有浓度依赖性.【期刊名称】《实用药物与临床》【年(卷),期】2016(019)008【总页数】4页(P925-928)【关键词】DEHP;MEHP;小鼠胚胎干细胞;细胞毒性【作者】李玉秋;段志文;裴秀丛;张玉敏;马明月【作者单位】沈阳医学院公共卫生学院毒理学教研室,沈阳110034;沈阳医学院公共卫生学院毒理学教研室,沈阳110034;沈阳医学院公共卫生学院毒理学教研室,沈阳110034;沈阳医学院公共卫生学院毒理学教研室,沈阳110034;沈阳医学院公共卫生学院毒理学教研室,沈阳110034【正文语种】中文邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[di (2-ethylhexyl) phthalate，DEHP]作为可塑剂，全球年产量达300～400万吨[1]，广泛应用于包装材料、医疗用品、儿童玩具以及化妆品等制造行业[2]。
DEHP仅依靠分子间的作用力，而非化学键实现与塑料主体基质的结合，因此可以不断地从塑料制品中游离出来[3]，污染空气、土壤、水源甚至食物。
考研药学综合(生物化学)模拟试卷12(题后含答案及解析)
考研药学综合（生物化学）模拟试卷12(题后含答案及解析)题型有：1. 名词解释题 2. 填空题 3. 单项选择题 4. 判断题请判断下列各题正误。
5. 简答题1．体液水平调控正确答案：体液水平调控主要是指激素调控，细胞的物质代谢反应不仅受到局部环境的影响，即各种代谢底物及产物的正、负反馈调节，而且还受来自于机体其他组织器官的各种化学信号的控制，激素就属于这类化学信号。
2．PRPP正确答案：5一磷酸核糖在磷酸核糖焦磷酸激酶催化下与ATP作用生成，为嘌呤核苷酸、嘧啶核苷酸生物合成提供磷酸核糖，它对于核苷酸代谢有重要意义。
3．结构基因。
正确答案：结构基因是指操纵子中表达一种或几种功能相关的蛋白质的基因，受同一个控制位点控制。
4．蛋白的腐败作用正确答案：蛋白的腐败作用是指肠道中未被消化的蛋白质及未被吸收的氨基酸在肠道细菌的作用下，生成多种降解产物的过程。
5．维生素缺乏症正确答案：维生素缺乏症是指因缺乏某种维生素而引起机体不能正常生长，甚至引起疾病的发生。
维生素缺乏常见的原因是缺乏或摄入量不足、吸收障碍、需要量增加等。
6．ubiquitin正确答案：ubiquitin(泛素)又称泛肽，是由76个氨基酸组成的高度保守的小分子蛋白，它广泛存在于各种细胞中，故名泛素。
泛素在真核细胞中的含量尤为丰富，负责标记待分解的蛋白质，介导其选择性降解。
泛素在蛋白定位、细胞周期、凋亡、代谢调节、免疫应答、信号传递、转录调控、应激反应以及DNA修复等生命活动中发挥重要作用。
7．酶的非竞争性抑制正确答案：酶的非竞争性抑制是指非竞争性抑制剂与酶活性中心以外的基团结合，形成复合物，从而不能进一步形成E和P，因此使酶反应速率降低的可逆作用不能通过增加底物的方法解除。
8．蛋白质的营养价值(nutrition value ofprotein)正确答案：蛋白质的营养价值是指各种蛋白质由于所含的氨基酸种类和数量不同，而具有不同的营养价值。
若体内所需氨基酸的种类和数量越多，则蛋白质营养价值越高。
研究生高级植物生化第五章细胞代谢和基因表达的调控
核酸生物合成需要糖和蛋白质的代谢中间产物参 加，而且需要酶和多种蛋白质因子。
各类物质代谢都离不开具备高能磷酸键的各种核 苷酸，如ATP是能量的“通货”，此外UTP参与多糖 的合成，CTP参与磷脂合成，GTP参与蛋白质合成与 糖异生作用。
核苷酸的一些衍生物具重要生理功能（如CoA、
NAD+，NADP+，cAMP，cGMP）。
硕士生－植物高级生物化学－第三讲
15
蛋白质 核酸
淀粉、糖原
脂肪
氨基酸
核苷酸
1-磷酸葡萄糖
6-磷酸葡萄糖
生糖氨基酸
核糖-5-磷酸
脂肪酸
糖
甘氨酸天
磷酸二羟丙酮
甘油
类
冬氨酸谷
氨酰氨
PEP
、
丙氨酸
甘氨酸 丝氨酰
通过三种中间代谢产物使细胞中4 类主要有机
物质：糖、脂类、Pr 和核酸实现相互转变。
硕士生－植物高级生物化学－第三讲
8
脂肪
多糖
蛋白质
脂肪酸、甘油 葡萄糖、其它单糖 氨基酸
乙酰CoA
+Pi
磷酸化
电子传递
e-
（氧化）
三羧酸 循环
合成代谢是否是分解代硕谢士生的－逆植物转高级呢生物？化学－第三讲
分解代谢的 三个阶段
细胞C代ar谢bo和h第y基d五r因ate讲表s 达的调控
Regulation of cell metabolism and gene expression
张金文
2005年12月6日
硕士生－植物高级生物化学－第三讲
1
代谢调节
新陈代谢是指生物体内一切分解和合成的作用。 生命是靠代谢的正常运转维持的。生命有限的空间内同时有那
动物生物化学_西北农林科技大学中国大学mooc课后章节答案期末考试题库2023年
动物生物化学_西北农林科技大学中国大学mooc课后章节答案期末考试题库2023年1.下列有关代谢途径中的变构酶及其变构剂正确的有（）。
答案:脱氧胸苷激酶 : 变构激活剂/ dATP；变构抑制剂/ dTTP_乙酰CoA羧化酶 : 变构激活剂/柠檬酸；变构抑制剂/长链脂酰CoA_谷氨酸脱氢酶 : 变构激活剂/ ADP；变构抑制剂/ NADH2.生物体与外界环境进行有规律的物质交换，称为__ 。
答案:新陈代谢3.遗传密码的特点有方向性、连续性、通用性和__。
答案:简并性4.基因中参与基因转录调控的DNA序列称__。
答案:顺式作用元件5.下列关于脂肪酸β氧化作用的叙述正确的是( )。
答案:除硫激酶外，其余所有的酶都属于线粒体酶_脂肪酸仅需一次活化，消耗ATP分子的两个高能键_β氧化包括脱氢、水化、再脱氢和硫解等重复步骤6.下列酶中，参与补嘌呤救合成的酶有（）。
答案:次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶_腺苷激酶_腺嘌呤磷酸核糖转移酶7.下列组织器官中不能进行嘌呤从头合成的有（）。
答案:脑_骨髓8.糖在细胞内的代谢包括糖的分解代谢和合成代谢；分解代谢包括__、糖有氧氧化、磷酸戊糖旁路、糖醛酸循环和糖原分解。
答案:糖酵解9.下列化合物中能随着脂肪酸β氧化不断进行而产生的有( )。
答案:_乙酰CoA_脂酰CoA10.食物中__的营养作用是满足动物生长、修补和更新组织的需要。
答案:蛋白质11.下列与丙酮酸异生为葡萄糖途径有关的酶是（）。
答案:果糖二磷酸酶_丙酮酸羧化酶_醛缩酶12.关于酮体的叙述，不正确的是（）。
答案:合成酮体的关键酶是HMG CoA还原酶_各组织细胞均可利用乙酰CoA合成酮体，但以肝内合成为主_酮体是肝内脂肪酸大量分解产生的异常中间产物，可造成酮症酸中毒13.下述酶中不是多酶复合体的是 ( )。
答案:丙二酰单酰CoA-ACP-转酰基酶_β-酮脂酰-ACP还原酶_ACP-转酰基酶14.代谢途径中的关键酶变构调节的生理意义包括（）。
华中农业大学生物化学本科试题库 第17章 细胞代谢和基因表达的调控
第17章 细胞代谢和基因表达的调控四、典型例题解析例题16-1：某种微生物的营养突变型Ⅰ需要供给氨基酸B 和C 才能生长。
而突变型Ⅱ仅需要氨基酸B 。
另外两种突变型Ⅲ和Ⅳ只要有氨基酸C 就能生长。
突变型Ⅲ累积中间代谢物D ，D 可供突变型Ⅳ生长，但不能维持突变型Ⅰ和Ⅱ的生长。
突变型Ⅳ累积中间代谢物A ，A 能维持突变型I 的生长。
（以上突变均属单一突变，即只有一个基因受到损害）(1)试画出A 、B 、C 和D 在此合成途径中的关系，并指出每一个突变型受阻的步骤。
(2)哪一步被C 抑制？解：(1)氨基酸B 和C 的合成途径。
既然所有的突变型都只有一个基因发生突变，突变型I 的营养需求说明氨基酸B 和C 是同一合成途径两个分支的终产物。
中间代谢物A 可以代替B 和C 维持突变型I 的生长，说明A 是氨基酸B 和C 的共同前体，突变型I 在合成A 之前受阻。
突变型Ⅲ和Ⅳ只要有氨基酸C 就能生长，表明它们在氨基酸C 合成的分支上受阻。
突变型Ⅲ累积的中间代谢物D 可供突变型Ⅳ利用，说明突变型Ⅲ和Ⅳ之间没有分支，同处于氨基酸C 合成途径之中。
又因为突变型Ⅳ累积的中间代谢物A 可供突变型I 生长，从而可知氨基酸C 合成途径和突变型Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ的受阻位置为：于突变型I 和II 都需要氨基酸B 才能生长，而中间代谢物D 不能供突变型I 和II 生长，表明D 与氨基酸B 的合成没有直接关系。
前面已经表明A 是氨基酸B 和C 的共同前体，因此突变型II 的受阻位点必然在A 与B 之间。
综合以上分析，可得到氨基酸B 和C 的合成途径以及各突变型受阻位置图：（2）因为分支代谢终产物通常反馈地抑制生成它的第一步分支反应，同时与另一分支代谢终产物共同抑制整个途径的第一步反应。
所以氨基酸C 抑制A 与D 之间的反应，并与B 共同抑制形成A 的反应。
例题16-2：试解释糖尿病患者为何出现酮尿？解：酮尿也称酮症、酮血，是酮体代谢异常病。
整理代谢调控期末总结
前百：1.代谢调控发酵技术利用遗传学或生物化学方法，人为在DNA分子水平上改变和控制微生物的代谢，使目的产物大量生成、积累的发酵2.代谢控制发酵的核心解除微生物代谢控制机制，打破微生物正常代谢调节，人为控制其代谢3.改变微生物遗传特性选育组成型突变株（无需诱导物就能生产目的产物）①在诱导物为限制性基质的恒化器中筛选②将菌株轮番在有、无诱导物的培养基中培养③使用诱导性能很差的基质④使用阻碍诱导作用的抑制剂选育营养缺陷型突变株一解除反馈作用获得中间产物，给予少量末端产物维持生长，但不足以引起抑制或阻遏反应解除反馈作用的方法：①改变培养环境条件来限制末端代谢产物在细胞内部积累②遗传上改造微生物，使其对末端代谢产物反馈调节作用不敏感选育抗反馈调节突变株①将经诱变处理过的野生菌型菌株涂布在含有末端代谢产物的结构类似物的琼脂平板上，培养一段时间后剩下不受末端代谢产物调节作用的突变株②先除去对末端代谢产物反馈阻遏敏感的酶，使之成为营养缺陷型菌株，再对其诱变处理，使编码该酶的基因发生回复突变，但能与末端产物结合的调节位点不能发挥抑制酶活性的作用选育耐分解代谢物阻遏突变株①以一种能引起分解代谢物阻遏的基质作为唯一氮源，用含这种氮源的培养基的琼脂平板培养筛选经诱变的菌株②轮番让菌株在含有和不含葡萄糖的培养基上生长4.改变代谢流加速限速反应通过生物合成中间体的分析，找到生物合成的速度限制步骤，外源合成该限速步骤的关键酶基因，并导入细胞内，提高目的产物产量改变分叉代谢途径的流向提高代谢分叉点的某一代谢途径酶系的活力，以得到高产的末端代谢产物构建代谢旁路用代谢工程方法还可阻断或降低合成副产物，特别是有毒产物改变能量代谢途径将血红蛋白基因导入大肠杆菌和链霉菌中，不仅在限氧条件下提高了宿主细胞的生长速率，而且促进了蛋白质和产物的合成延伸或构建新的生物合成途径引入外源基因延伸原代谢途径，产生新的末端代谢产物第一章微生物生长与调节1.微生物的生长形式细菌——二等分分裂法阳性：沿细胞上一次分裂周期中形成的中纬带开始；阴性：沿细胞长轴以居间并生的方式合成酵母一出芽繁殖两极性：母细胞在两端同一位置萌芽（子母不脱离会形成假菌丝）多极性：母细胞每次萌芽出现在不同位置，如酿酒酵母丝状微生物（霉菌，放线菌）——菌丝末梢伸长、分枝和交错成网，称为菌丝体，许多真菌能形成抱子，称分生抱子菌丝生长的主要表现：菌丝伸长，菌丝体干重增加影响菌丝长度的因素：遗传控制与生长环境（深层培养易受搅拌器的剪切作用）调节菌丝球的疏密程度：使菌丝球变密实：过程添加易利用碳源（如葡萄糖），搅拌加快，供氧改善，反之用乳糖，搅拌缓慢，供氧跟不上2.微生物生长的测量细胞数目的测定（优、缺点，适用范围P6表1-1）直接显微镜计数、平板活菌计数（稀释培养法）、自动细胞计数和分检法细胞总量的测量直接：细胞干重测量法（DCW）、比浊法、离心压缩细胞体积法（PCV）间接：营养物质消耗的测定、测量产物的形成、发酵热、测定细胞组分代谢产物：①细胞组分在胞内浓度应相当一致②在定量萃取与分析方面应当相当精确③ 非细胞固体中是否也含有同样的组分，细胞中此组分的含量与细胞量的关联营养消耗：①细胞得率是否稳定（高低）②养分测量方法准确性③是否存在干扰分析的物质，量有多少Monod 方程：N = 4S/（Ks+S）V = V m S/（K+S）用以描述生长速率与基质浓度S间的关系，是经验公式，而米氏方程由理论推导得Ks：营养物质的饱和系数，为〃=0.5州的营养物质浓度，衡量微生物对某种限制性营养物质亲和力的大小，Ks越小，说明微生物对该种营养物质的亲和力越大Ks=100〜300mg/L （被动扩散，异化扩散）；Ks=1〜100mg/L （载体介入，主动运输）S：营养物质的浓度，能否用测定细胞组分法估算生长取决于：①非细胞性固体中是否含有此组分，如有就不能用此组分与细胞生长相关联②细胞中该组分与细胞量间是否有定量关系、这种定量关系是否恒定微生物生长与环境的关系温度：菌在低于最适生长温度的温度范围内比在高温度范围内有更强适应力一种对生长必需的酶的改变会使生长对热变性比野生型更敏感;温度降低细胞脂肪酸不饱和程度增加；随温度升高，死亡速率的增加远大于低活化能的生长速率的增加与其细胞膜结构的物理化学特性有密切关系；与其细胞内某些关键酶的活性有密切关系影响微生物比生长速率；影响生物合成的方向；温度影响碳源的基质得率水活度：水对细胞的影响，A尸爪p s和p w分别为溶液和纯水在同一温度下的蒸汽压；A w相当于相对湿度。
塑化剂DEHP诱导HepG2细胞胆固醇代谢的研究
塑化剂DEHP诱导HepG2细胞胆固醇代谢的研究摘要目的研究DEHP染毒对HepG2细胞胆固醇代谢相关基因表达的影响，预测DEHP对人体胆固醇代谢的影响。
方法用DEHP对HepG2细胞进行24小时染毒，回收细胞并提取其核酸，用实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测目的基因表达。
结果在1000μmol/LDEHP处理组中，SR-BI、LRP1、HNF4和LDL-R基因表达明显下降，并有统计学意义（P<0.05）。
在1000μmol/LDEHP处理组中，ABCG8和CYP7a1的基因表达变化不明显。
结论 DEHP作用于HepG2细胞，达到1000μmol/L浓度，会使其胆固醇代谢相关基因的表达出现显著异常，且主要是影响胆固醇摄取和转运相关的基因表达，对胆固醇分解和胆汁分泌的相关基因表达的影响不明显。
关键词：DEHP；邻苯二甲酸酯；HepG2细胞；胆固醇代谢引言邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯（Di-(2-ethylhexyl)phthalate.DEHP)是一种邻苯二甲酸酯类化合物，也是当今全球范围内使用最广泛的塑化剂之一。
在轻工和化工工业生产中，其作为增塑剂使用于聚氯乙烯塑料产品中，包括食品包装材料、儿童玩具、医疗器械等[1-2]众多产品，用于改善塑料的性质，使其易于重塑，便于重复加工利用[3]。
然而，塑料制品中DEHP与塑料分子是以不牢固的非共价键结合的，故较易从塑料迁移至外环境中。
因此，DEHP广泛存在于大气、土壤和水等外环境[4]中，且由于DEHP和塑料分子的不稳定结合，DEHP很容易污染食品、饮用水和日常用品，与人体接触后进入体内富集。
根据有关报道，我国地表水中检出最高的邻苯二甲酸酯类化合物即为DEHP，其在我国主要流域如长江、黄河和珠江等检出浓度均较高[5]，其中长江流域检出高达61.29μg/kg。
美国发布的DEHP日均摄入参考剂量值为20 μg/kg[6]，而长江、珠江等地成人的日均摄入值均大大超过该值。
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