pbs-缓冲液的配置

1、0.01M 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法

称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保存存于室温或4℃冰箱中。

需要注意的是，通常所说的浓度0.01M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na 离子或K 离子的浓度，Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话，则需要在配置的时候分别加入100 u/ml青霉素和链霉素之后再调PH、定容、灭菌消毒。

2、磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer, PB）

试剂：NaH2PO4·2H2O Na2HPO4·12H2O

配制方法：配制时，常先配制0.2mol/L的NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4，两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液（PB），根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。

（1）0.2mol/L的Na2HPO4；称取Na2HPO4.12H2O 31.2g(或NaH2PO4·H2O 27.6g)加重蒸水至1000ml溶解。

（2）0.2mol/L的Na2HPO4：称取NaHPO4.·12H2O 71.632g（或Na2HPO4·7H2O 53.6g或Na2HPO4·2H2O 35.6g）加重蒸水至1000ml溶解。

（3）0.2mol/L pH7.4的PB的配制：取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的Na2HPO4·12H2O,充分混合即为0.2mol/L的PB（pH约为7.4～7.5）。若pH偏高或偏低，可通过改变二者的比例来加以调整，室温保存即可。

0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH5.7～8.0）

pH 0.2mol/L NaH2PO4(ml) 0.2mol/L Na2HPO4(ml) 5.7 93.5 6.5

5.8 92.0 8.0

5.9 90.0 10.0

6.0 8

7.7 12.3

6.1 85.0 15.0

6.2 81.5 18.5

6.3 7

7.5 22.5

6.4 73.5 26.5

6.5 68.5 31.5

6.6 62.5 3

7.5

6.7 56.5 43.5

6.8 51.0 49.0

6.9 45.0 55.0

7.0 39.0 61.0

7.1 33.0 67.0

7.2 28.0 72.0

7.3 23.0 67.0

7.4 19.0 81.0

7.5 16.0 84.0

7.6 13.0 87.0

7.7 10.5 89.5

7.8 8.5 91.5

7.9 7.0 93.0

8.0 5.3 94.7

3、0.1mol/L磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)的配制

方法一

1、首先配制0.2mol/L磷酸盐缓冲液(PB)

试剂：NaH2PO4·2H2O

Na2HPO4·12H2O

配制方法：先配制0.2mol/L的NaH2PO4(A液)和0.2mol/L的Na2HPO4(B液)，两者按一定比例混和即成0.2mol/L磷酸盐缓冲液。

A液：称取NaH2PO4·2H2O 31.2g，加双蒸水充分溶解定容至1000ml；

B液：称取Na2HPO4·12H2O 71.632g，加双蒸水充分溶解定容至1000ml；

2、0.2mol/L磷酸盐缓冲液(PB)的配制：

A液为碱性，B液为酸性；取A液和B液在pH计的监测下按一定比例进行混和，可得到所需的不同pH的0.2mol/L的PB。pH7.4所需A液和B液为19.0ml和81.0ml

0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH5.7～8.0）(PB)

pH 0.2mol/L NaH2PO4(ml) 0.2mol/L Na2HPO4(ml)

5.7 93.5

6.5

5.8 92.0 8.0

5.9 90.0 10.0

6.0 8

7.7 12.3

6.1 85.0 15.0

6.2 81.5 18.5

6.3 7

7.5 22.5

6.4 73.5 26.5

6.5 68.5 31.5

6.6 62.5 3

7.5

6.7 56.5 43.5

6.8 51.0 49.0

6.9 45.0 55.0

7.0 39.0 61.0

7.1 33.0 67.0

7.2 28.0 72.0

7.3 23.0 67.0

7.4 19.0 81.0

7.5 16.0 84.0

7.6 13.0 87.0

7.7 10.5 89.5

7.8 8.5 91.5

7.9 7.0 93.0

8.0 5.3 94.7

3、0.1mol/L磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)：

试剂：0.2mol/L PB500ml

NaCl

8.5～9.0g(约0.15mol/L)

双蒸水加至1000ml

配制方法：取0.2mol/L PB 500ml，加入300ml双蒸水及NaCl 8.5～9.0g，充分搅拌溶解后加入双蒸水定容至1000ml。一般情况下，0.2mol/L PB的pH值稍微高些，稀释成0.1mol/L PBS时，常可达到要求的pH；若需调整pH，通常是调PB 的pH。

4、参考：朱立平，陈学清主编，免疫学常用实验方法，北京:人民军医出版社，2000.3

方法二

1．PBS(0.1M，pH 7.4)贮存液配方（10倍浓缩）

NaCl80g

Na2HPO4.12H2O 32.3g

NaH2PO4.2H2O 4.5g

加蒸馏水至1000ml

或者

NaCl 80g

Na2HPO4.2H2O11.5g

KH2PO4 2g

KCl 2g

加蒸馏水至1000ml

贮存液室温下保存一个月

2．PBS工作液(0.01M，pH 7.4)

取贮存液10倍稀释后24小时内使用

方法三

溶液A：0.2mol/LNaH2PO4（27.8g NaH2PO4；或者36.14g 2水合NaH2PO4 溶于1000ml水中）

溶液B：0.2mol/LNa2HPO4（53.65g 7水合Na2HPO4或者71.7g 12水合Na2HPO4溶于1000ml水中）

溶液A与B按下表比例混合后，用水稀释至终体积为200ml