蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐含量的测定
白菜、生菜和黄瓜中硝酸盐与亚硝酸盐的测定-离子色谱法
５ ４ ． ４ ５ ． ９
５ ５ ． ６ ５ ． ９
生 菜 ７ ． Ｏ ９ ４ ． Ｏ Ｏ ｌ １ ． ２ ２ １ ０ ３
２ ． ５ ０ ． ０
黄 瓜 ７ ． １ ６ ８ ． ０ ０ １ ４ ． ８ ４ ９ ６ ． ０
表 １ 标 准工 作 液 系 列 元素 硝酸盐 亚硝酸盐
名 称
ｍｇ ／ Ｌ ８ ｔ ｄ ５ １ ０ ． ０ ５ ． ０ ０ Ｉ Ｓ ｔ ｄ ６ ｌ １ ４ ． ０ Ｉ ７ ． ｏ ０
ＲＳ Ｄ（ ％）
Ｊ Ｓ ｔ ｄ ｌ １ ０ ｌ ０
３－ ５ ． ３ 样 品 处 理
Ｉ ． ！ ！苎
Ｉ 工业
称取风干 后的蔬菜５ ０ 克于搅拌机 中， 加水５ ０ ｍｌ ， 搅 拌２ 分钟 ， 再加入５ ０ ｍｌ 氢氧化钠 ， 搅拌 １ 分钟 。 密 闭超声 ３ ０ 分钟 ， 于７ ０ ￣ Ｃ 水 浴３ ０ 分钟 ， 冷 却至室温后用布 氏漏斗 过 滤至５ ０ ０ ｍｌ 容量瓶 中 ， 加水至刻度 ， 混匀， 静置取部分 上 清夜于离心管 中， ５ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍｉ ｎ 离 心１ ０ 分 钟后过０ ． ４ ５“ 硝酸 盐对 人 体健康 的损害 不亚 于农 药 。 因为 硝酸 １ Ｔ Ｉ 滤膜后 备用 ； 同时作试剂 空 白。 盐不仅 容易诱 发糖尿病 ， 对 肾脏造成 的损 害也 十分 严 ３ ． ６样 品分 析 重。 肾脏 是 过滤 血液 和废 物 、 排 泄 水分 及 盐分 的重 要 ３ ． ６ ． １仪 器 工 作 条 件 器官 ， 如果 人们 摄取 了高 浓度 的硝 酸盐 ， 肾脏 的负 担 （ １ ） 流动相 ： Ｎａ ＨＣ ０ ３ １ ． ７ ｍＭ— Ｎａ ２ Ｃ Ｏ ３ １ ． ８ ａＭ。 ｒ 加重 ， 容易 引起溶血 性贫血 。 除此 之外 ， 留存 在蔬菜 内 （ ２ ） 柱温： ３ ５ ℃。 （ ３ ） 流速 ： ０ ． ８ ｍｌ ／ ｍｉ ｎ 。 （ ４ ） 泵压 ： Ｐ ｓ ｉ ８ ６ ４ 。 的硝 酸盐 在酶 和 细菌 的作 用 下 ， 被还 原成 亚硝 酸 盐 ， （ ５ ） 进样 量 ： ２ ５ ｕ ｌ 。 进而 与人体 内的蛋 白质类物质 结合 ， 生成 致癌性极 强 ３ ． ６ ． ２标 准 曲 线绘 制 的亚硝 酸 胺类 物质 。 配置 硝酸 盐标 准使用 液 ： 将硝 酸 盐贮备 液配 置成 亚硝 酸盐为强氧化 剂 ， 进人 人体后 ， 可使 血 中低铁 ２ ０ ０ ｍｇ ／ Ｌ的工作液 ， 配置标 准 曲线 ； 血红蛋 白氧化成 高铁血 红蛋 白 ， 十血红蛋 白失去 携氧 配置 亚硝 酸盐 标准使 用 液 ： 将 亚硝 酸盐 贮备 液配 能力 ， 致使 组织缺 氧 ， 并对 周 围血 管有扩 张作用 。 亚硝 置 成 １ ０ ０ ｍｇ ／ Ｌ的工作液 ， 配置标 准 曲线 ； 各 点浓 度见 酸盐 的危 害还 不 只是 使人 中毒 ， 它还 有致 癌作 用 。 亚 表 １ 。 硝酸 盐 可 以与食 物 或 胃 中的仲 胺 类物 质 作用 转化 为 硝酸 盐及亚硝酸 盐标准贮 备液 已用 国家环 境保 护 亚硝 胺 。 亚硝 胺具 有 强烈 的致 癌作 用 ， 主要 引起食 道 总 局 标准 样 品研 究 所 的硝 酸盐 及 亚硝 酸 盐标 样 进行 癌、 胃癌 、 肝癌、 和 大肠癌 等 。 此外 ， 亚硝酸 盐还 可通过 分 析过 ， 浓度 均在 不确 定度 范 围之 内。 乳 汁进入 婴儿 体 内 ， 造 成婴 儿机体 组 织缺 氧 ， 皮肤黏 打开 电脑 ， 接通气 源 ， 将 离子 色谱仪 打开 ， 预 热至 膜 出现青 紫斑 。 柱 温箱 温度到达３ ５ ℃， 打开泵 ， 流速为０ ． ８ ｍｌ ／ ｍｉ ｎ 至仪 器稳定。 按 照标 准 曲线各 工作 点依 次进样 ， 并 记录 仪 ２ 我国现有食品中亚硝酸盐与硝酸盐的监测分析方法 器 响应值 ， 求得一 元 线性 回归方程 。 Ｇ Ｂ ／ Ｔ ５ ０ ０ ９ ． ３ ３ － ２ ０ ０ ３ 食 品中亚硝 酸盐与硝酸盐 的 ３ ． ６ ． ３试 样 测 定
食品中亚硝酸盐的测定
（一）亚硝酸盐的测定
原理：试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐 与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色 染料，与标准比较定量。 试剂 1 亚铁氰化钾溶液：称取106.0g亚铁氰化钾，用水溶解，并稀 释至1000mL。 2 乙酸锌溶液：称取220.0g乙酸锌，加30mL冰乙酸溶于水， 并稀释至1000mL。 3 饱和硼砂溶液：称取5.0g硼酸钠，溶于100mL热水中，冷 却后备用。
（二）硝酸盐测定—镉柱法
原理
• 试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，溶液通过镉柱，使其
中的硝酸根离子还原成亚硝酸根离子，在弱酸性条件下 ，亚硝酸根与对氨苯基磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二 胺偶合形成红色染料，测得亚硝酸盐总量，由总量减去 亚硝酸盐含量即得硝酸盐含量。
（二）硝酸盐测定—镉柱法
1 氨缓冲溶液(pH9.6～9.7)：量取20 mL盐酸.加50 mL水，混 匀后加50 mL氨水，再加水稀释至1 000 mL，混匀。
• 井水中含有亚硝酸盐，据报道广东一村庄受井水中亚硝酸盐危
害几十年，男人寿命不足40岁，经化验结果表明亚硝酸盐含 量大大超过国家标准。
• 亚硝酸盐在食品生产中作为食品添加剂使用，用作发色剂和防
腐剂，允许用于肉及肉制品的生产加工中，其作用是使得肉与 肉制品呈现良好的色泽。
1.农产品中硝酸盐来源
• 化肥：硝酸铵、硝酸钙、硝酸钾、硝酸钠和尿素等； • 生活污水、生活垃圾与人畜粪便：1公斤垃圾粪便堆肥在自然
够容纳 2 倍试样体积的带盖容器中，通过反复摇晃和颠倒容器使样品充 分混匀直到使试样均一化。
• 发酵乳、乳、炼乳及其他液体乳制品：通过搅拌或反复摇晃和颠倒容器使
试样充分混匀。
• 干酪：取适量的样品研磨成均匀的泥浆状。为避免水分损失，研磨过程中
蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐的测定及含量分析
蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐的测定及含量分析
硝酸盐和亚硝酸盐在一些地区的日常食物中存在，如蔬菜和肉类。
它们也被添
加到食品中，如香肠和酱油，以改善口感和保鲜时间，可以减少有害微生物的生长。
硝酸盐和亚硝酸盐在高浓度下有毒，所以监管机构和食品安全官员必须密切监测它们在食品中的含量，以确保食物安全。
为了确定蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐的含量，原理是用水解和酸解的方法，然后
用标准的分光光度法进行测定分析。
首先解冻样品，采用乙醇或其他适当的溶剂消化；消化液可以用酸浓度调节器进行调节，如HCl或NaOH；然后将消化液向容易
对比度测量物体中添加适量氧化铌，水解时加热蒸发；最后添加分光光度滴定液，如凯氏滴定液，测量出总硝酸盐摩尔浓度，并建立比例。
以上是硝酸盐和亚硝酸盐在蔬菜样品中的分析测定方法。
硝酸盐和亚硝酸盐的含量可以通过上述方法利用标准的分光光度法确定。
这一
测定方法简单容易，重点是精确度较高，可以准确检测出不同样品中硝酸盐和亚硝酸盐的含量，从而提高食物的安全性。
蔬菜中亚硝酸盐含量测定实验方案
蔬菜中亚硝酸盐含量测定实验方案烹饪蔬菜在不同保存条件下的亚硝酸盐含量变化一、实验原理蔬菜样品经磨碎后，样品中的亚硝酸盐可被饱和硼砂溶液提取至溶液中；弱酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应生成重氮盐，再与盐酸萘乙二胺偶合成红色染料，于538nm处测定吸光度，亚硝酸盐含量与溶液吸光度成正比。
二、仪器和试剂仪器1、分光光度计2、分析天平3、搅拌机4、振荡机5、电热恒温水浴锅6、烧杯、移液管、容量瓶等试剂1、饱和硼砂溶液（50g/L）称取10.0g硼酸钠（Na2B4O7·10H2O），溶于200mL热水，冷却后备用；2、亚铁氰化钾溶液（0.25mol/L）称取26.5g亚铁氰化钾（K4Fe(CN)6·3H2O），溶于水，定容至250mL; 3、乙酸锌溶液（1mol/L）称取55.0g乙酸锌（Zn(CH3COO)2·2H2O）加7.5mL冰醋酸（CH3COOH）4、对氨基苯磺酸（0.4%）称取0.4ｇ对氨基苯磺酸（C6H7NO3S），溶于100 mL 20 %（体积比）盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。
5、盐酸萘乙胺溶液（0.2%）称取0.2 g 盐酸萘乙二胺（C12H14N2·2HCl），溶于100 mL 水中, 混匀后，置棕色瓶中，避光保存。
6、亚硝酸钠标准储备液（200 μg /mL）称取0.1000ｇ于110℃～120℃干燥恒重的亚硝酸钠（预先在干燥器中放置24h以上），加水溶解移入500 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，储于棕色瓶，冰箱中保存。
7、亚硝酸钠标准使用液（10μg /mL）吸取储备液5.00mL于100mL容量瓶中，定容，临用时配制。
8、粉末状活性炭。
三、测定步骤1、样品前处理烹煮后的白菜暴露在空气中冷却30分钟，模拟一般家庭进食情况，随后把样品分成3分。
对照组暴露在空气中常温保存；实验组A 置于冰箱中4℃下保存；实验组B用保鲜膜密封于常温下保存。
离子色谱测定对蔬菜中亚硝酸盐及硝酸盐的研究
图1 样品中氯离子、亚硝酸根离子色谱图2.2 检测范围为了验证色谱测定法的极限测定范围，使用不同浓度的硝酸根离子（0～100 mg/L）和亚硝酸根离子（0～200 mg/L）—），女，广东信宜人，本科，助理工程师。
研究方向：食品的理化检验工。
图2 样品硝酸根离子与亚硝酸根离子色谱图2.4 对照实验分别采用离子色谱法（IC）与比色法测定大白菜鲜样中硝酸根离子和亚硝酸根离子的含量，进行对照实验，测定结果详见表3，从数据上看，两次方法的检测结果数据基本接近，无明显差异，表明检测方法结果数据可靠，稳定性好，对实际蔬菜监控中具有指导意义，在实际应用中，根据卫生部门的指导标准进行监控，能够快速将不合格的蔬菜查出，部分蔬菜实际测试图谱如图3所示。
表3 对照实验结果阴离子亚硝酸根离子/（mg/kg）硝酸根离子/（mg/kg）测定方法比色法IC比色法IC测定值12.612.5138.8125.813.913.5524.4834.514.815.8350.2325.5 30.527.3159.7178.6 7.97.4341.8357.5 16.915.8161.9180.8t值－ 1.354－ 2.098图3 部分样品色谱图2.5 样品测定通过前述的方法，证明离子色谱分析测定法的结果数据可靠性高，为了应用于实践总，按上述条件对上海地区7种蔬菜进行测定，结果详见表4，从数据上看，每种蔬菜的亚硝酸根离子与硝酸根离子浓度都能定量分析，如韭菜、空心菜等显示亚硝酸根离子浓度很低，使监控人员对蔬菜的质量能有直观的判断。
表4 上海地区蔬菜测试结果蔬菜亚硝酸根离子平均值/（mg/kg）RSD/%硝酸根离子平均值/（mg/kg）RSD/%韭菜＜0.03—257.37 3.2香椿475.26 2.2455.48 2.6空心菜＜0.04—586.33 4.2蒜苗 1.08185.25 2.7葱＜0.04—225.04 1.7茴香0.89 1.5469.26 2.8油菜 4.77 2.72886.36 4.53 结论对于新鲜蔬菜中的硝酸根离子和亚硝酸根离子，离子色谱分析测定其含量，样品需要经过前期的处理，如柱处理等。
高效液相色谱法同时测定蔬菜中的硝酸盐和亚硝酸盐
用 ｌＯ ￣ｍ 的硝酸钠和亚硝酸钠标准使用液配制标准 系 Ｏｕ ｌ
列 浓度 。在 ０５～ ０ ｇｍ 范 围内成 线 性关 系 ， ． ５ ｕ／ ｌ 相关 系数 大 于 ０ ．
２ ４ 氯化 钠 对检 测结 果的 影 响 ．
９９ ． 据 ＩＰ Ｃ的规 定 倍 噪 音 为 样 品 检 出 限 ， 酸钠 的 检 出 ９２ 根 ＵＡ 硝
健康 天地
２１ ００年
第 ４卷
第 ２期
综 述
高效液 相色谱法 同时测定 蔬菜 中的硝酸盐 和亚硝酸盐
尹 华
蔬菜中富含硝酸盐 ， 亚硝酸盐在新 鲜蔬菜 中含量很低 ， 但
是在 运 输 、 存 、 工 过 程 中 由 于 硝 酸 盐 还 原 酶 和 微 生 物 的 作 储 加 用， 硝酸 盐 可被 还 原 为 亚 硝 酸 盐 。众 所 周 知 ， 期 食 入 过 量 含 长
速 ：．ｍ／ ｉ １０ ｌｍ ｎ
两者不仅可以完全分离 ， 而且色谱峰型漂亮 ｊ 。见图 １
柱 温 ： ℃ 检 测波 长 ：１ ｎ ３ ０ ２０ ｍ进 样 量 ２ｕ 保 留时 间定性 ， ０ｌ 峰
面积 定 量
１ ２ 样 品 预 处 理 ．
称取 １ｇ 右 绞碎 均 匀 的样 品 ， ８ ｍ 水洗 人 １０ ｌ 量 ０左 用 ０ｌ ０ｍ容
瓶中， 超声 提取 ３ ｍｎ 每 隔 ５ ｉ ０ ｉ， ｍ ｎ振摇一次 ， 保持 固相 完全分
散 。于 ７ ℃水 浴 中放 置 ５ ｉ。 后 用水 定 容 至刻 度 。溶 液经 滤 ５ ｍｎ然
纸过 滤后 再 取上猜 液 过 ０ ４ ｕ 的膜 ， ．５ ｍ 待测 。
１ ３ 标 准 曲线 制备 ．
限为 ０ ２ ｇ亚硝 酸钠 的检 出限 为 ２ ｇ ．ｎ ， ｎ。
蔬菜的硝酸盐亚硝酸盐分光光度法测定
蔬菜硝酸盐亚硝酸盐分光光度计测定法仪器：分光光度计、组织粉碎机（或研钵小）、水浴锅、电子天平、冷藏冰箱、烘箱器材：烧杯500mL、容量瓶1000mL（至少2个）、250mL(多个)、100mL(至少8个)、50mL （至少2）。
5mL移液枪（或小于50mL量筒）、漏斗、铁架台、滤纸药品：硝酸钾、硼砂、亚铁氰化钾、乙酸锌、冰醋酸、活性碳粉（分析纯）去离子水。
试剂：饱和硼砂溶液（50g溶于1000mL热去离子水、下同）0.25mol/L亚铁氰化钾溶液（106g定容于1000ml容量瓶）1mol/L乙酸锌溶液（220g溶于30mL乙酸水混合物，定容至1000mL）100mg/L硝酸钾标准液（110摄氏度下烘至恒重的样品取0.1631g定容至1000mL）标准曲线的绘制吸取硝酸根标准贮备液0、2、4、6、8、10、12、14mL分别于8个100mL容量瓶中去离子水定容至刻度混匀配置成：0、2、4、6、8、10、12、14mg/L在风光光度计上220nm???处比色绘标准曲线。
实验步骤：1.取待测样品洗净吸干水分称取3g磨成匀浆（5分钟以内）2.将匀浆入用约80mL热水（70~80℃，不超过100mL）洗入250mL烧杯，加5mL饱和硼砂溶液，沸水浴15min并不时搅拌。
3.冷却洗入250mL容量瓶，加入10mL亚铁氰化钾溶液和10mL乙酸锌溶液沉淀蛋白，1g 活性炭吸附有机物（每加一种均需摇匀）定容至刻度，摇匀过滤的透明待测液。
（取100mL去离子岁做空白对照3个）4.分吸取2mL待测液与对照分别220nm（石英比色杯）处比色于标准曲线上读取浓度亚硝酸盐测定取叶片约5克磨成匀浆（五分钟内）称取匀浆3克于100mL烧杯中，用量筒量取4%的乙酸锌30mL倒入搅拌均匀，用2mol/L的NaOH调节pH至7.2-7.5，加入粉状活性炭0.5克，于70度恒温水浴锅加热30min并不时搅拌，后冷却到室温，用布氏漏斗初次抽滤，（用清洗玻璃棒的烧杯的液体洗涤滤渣3-5次），将滤液倒入100mL容量瓶后用约30mL的蒸馏水分多次清洗抽滤瓶洗液倒入容量瓶定容到刻度，用注射器和0.45um滤膜再次抽滤，吸取滤液10mL入25mL比色管加入2.5mL对氨基苯磺酸，摇匀震荡，5min后加入2.5mL的N-1-萘乙基乙二胺震荡摇匀，用4%的盐酸调节pH至1.1-1.3定容到刻度，取此溶液在540nm处比色。
蔬菜中的硝酸盐、亚硝酸盐的气相色谱法测定
蔬菜中的硝酸盐、亚硝酸盐的气相色谱法测定我们都知道，蔬菜中含有一定量的有毒物质，其中硝酸盐和亚硝酸盐就是其中重要的有毒物质。
它们的存在会对人体健康产生不利的影响，因此必须采取测量的方法，以便在食用前及时准确地测量出其中的硝酸盐和亚硝酸盐的含量，以确保食物的安全。
硝酸盐和亚硝酸盐的测量方法多种多样，但以其测定准确、灵敏等特点而被广泛采用的是气相色谱法。
它通过将硝酸盐和亚硝酸盐放入气相色谱仪中，以及利用其特定的色谱特征，分离出硝酸盐和亚硝酸盐，最后用浓度检测器对分离出的两种物质的浓度进行准确的测定。
气相色谱法测定的实验步骤较多，但每一步都是重要的，否则将会影响实验结果的准确性。
首先，实验者需要准备一定量的样品，并用容器容器把它们放在一起，然后用电离室把样品离心，这样才能保证实验结果的准确性。
接着，实验者需要准备相关的仪器、玻璃器皿，并用于吸收塔将离心的样品加入，之后将其载入气相色谱仪中，利用其特定的色谱特征，将硝酸盐和亚硝酸盐分离出来，并用浓度检测器对分离出的两种物质的浓度进行准确的测定，完成整个实验。
在气相色谱法测定硝酸盐、亚硝酸盐时，实验者必须特别注意准备工作，例如正确选择、精确调整样品、搭配适当的色谱仪器等，以保证实验结果的准确性。
此外，实验者也要留意实验中出现的异常情况，确保将异常情况及时处理，以减少影响实验结果的不利因素。
经过正确的气相色谱法测定，我们可以准确测量出蔬菜中的硝酸盐和亚硝酸盐的含量，从而确保食物的安全。
此外，实验者也可以利用上述方法，测量植物中其他含有毒物质的含量，来保证人们在食用时不受其影响。
因此，气相色谱法测定硝酸盐、亚硝酸盐在食品安全检测方面有着非常重要的意义。
综上所述，本文以《蔬菜中的硝酸盐、亚硝酸盐的气相色谱法测定》为标题，就气相色谱法测定硝酸盐和亚硝酸盐的实验步骤及重要性进行了详细的阐述，以便更好地保障食物的安全。
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蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐含量的测定摘要：蔬菜中的硝酸盐和亚硝酸盐是一种对人体有害的化学物质,其含量比其它植物都高,人体摄入它会引起多种疾病.本实验采用分光光度发分别对拜城县恰玛古，柯坪县恰玛古，伊宁市恰玛古，大白菜，黄萝卜，黄瓜中亚硝酸盐及硝酸盐含量进行测定。
结果表明：（1）亚硝酸盐：六种蔬菜中亚硝酸盐含量有明显的差异，测定结果是：大白菜0.7919mg/g，黄萝卜0.6930mg/g，黄瓜0.5763mg/g，拜城恰玛古0.5528mg/g，伊宁恰玛古1.1294 mg/g，柯坪恰玛古0.5174mg/g。
（2）硝酸盐：大白菜1.6098mg/g，黄萝卜0.0598mg/g，黄瓜0.7421mg/g，拜城恰玛古0.2608mg/g，伊宁恰玛古2.5308mg/g，柯坪恰玛古0.0317mg/g，蔬菜中亚硝酸盐含量的回收率88.80%。
关键词：硝酸盐；亚硝酸盐；蔬菜；测定方法；前言：蔬菜尤其是叶菜类蔬菜,是一种易于富集硝酸盐的植物。
人体摄入的硝酸盐81.2％来自蔬菜[1]。
硝酸盐本身毒性不大,对人畜无直接的危害,但含量过高对人体可能造成危害,因为在微生物的作用下极易还原为亚硝酸盐。
亚硝酸盐是一种有毒物质,可直接使动物中毒!造成亚铁血红蛋白症,严重可致死亡[2]。
亚硝酸盐，一类无机化合物的总称。
主要指亚硝酸钠.亚硝酸钠为白色至淡黄色粉末或颗粒状，味微咸，易溶于水。
外观及滋味都与食盐相似，并在工业、建筑业中广为使用，肉类制品中也允许作为发色剂限量使用。
由亚硝酸盐引起食物中毒的机率较高。
食入0.3～0.5克的亚硝酸盐即可引起中毒甚至死亡[3]。
硝酸盐,亚硝酸盐广泛存在于人类环境中,其对人类健康和生态环境的危害,日益受到人们的普遍关注。
硝酸盐在细菌的作用下可还原成亚硝酸盐,使血液的载氧能力下降,从而导致高铁血红蛋白症。
联合国世界卫生组织和粮农组织[4]早在1973 年就制定了食品中硝酸盐的限量标准,以ADI值为基础,提出蔬菜可食部分中硝酸盐含量的卫生标准为432mg/kg (鲜样),亚硝酸盐成人每人每日容许量为7.8mg。
蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐含量的高低已成为衡量蔬菜安全与否的一项重要指标,因此快速准确地测定蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐的含量极为重要[5]。
-)是氮循环的中间产物，不稳定,广泛存在于水体、土壤和各类食品中。
根亚硝酸盐(NO2据水环境条件，可被氧化成硝酸盐，也可被还原为氨。
亚硝酸盐可使人体正常的血红蛋白（低铁血红蛋白）氧化成为高铁血红蛋白，发生高铁血红蛋白症，失去血红蛋白在人体内输送氧的能力，导致出现组织缺氧症状。
另外，在人的肠胃中，亚硝酸盐还可与仲胺类物质反应，生成具有致癌性的亚硝胺类物质。
因此，亚硝酸盐成为水质、食品等的重要监测项目之一[6]。
用分光光度法测定蔬菜中亚硝酸盐含量时，为了消除蛋白质对测定结果的干扰，往往通过沉淀的方法来去除蛋白质[7]。
在GB《中华人民共和国国家标准—食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定（GB/T5009.33—1996）中的格里斯试剂比色法》中，“样品处理”的主要目的就是通过沉淀来去除蛋白质，获测定所需的澄清滤液[8]。
样品处理时所加的氢氧化钠溶液，亚铁氰化钾，乙酸锌溶液和水浴加热的作用是使蛋白质变性而易沉淀[9]。
本文根据测定亚硝酸盐的标准方法于540 nm处测定生成的偶氮化合物的吸光度,从而建立了一种简单、快速、灵敏度较高的测定痕量亚硝酸盐的方法。
1.1实验部分1.1.1实验原理弱碱性条件下,用饱和四硼酸钠、亚铁氰化钾、乙酸锌沉淀除去蛋白质,氢氧化铝悬浮液脱色,减压抽滤;在酸性条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸酰胺起重氮化作用,再与萘乙二胺盐酸盐和对氨基苯磺酸反应,生成紫红色偶氮染料,于波长540nm 处测量蔬菜中亚硝酸盐的含量。
1.1.2仪器与试剂1.1.2.1 实验仪器：搅汁机;恒温水浴锅;722型分光光度计;电子天平;冰箱供试蔬菜为：大白菜，黄萝卜，黄瓜，拜城恰玛古，伊宁恰玛古，柯坪恰玛古。
1.1.2.2实验试剂主要试剂有10.6%亚铁氰化钾溶液；22%乙酸锌溶液；饱和四硼酸钠溶液；磺胺；萘乙二胺盐酸盐；盐酸；镉粒；氨缓冲溶液；活性碳；硝酸钾；亚硝酸钠标准使用液；1.1. 3试剂的配制：①10.6 %亚铁氰化钾溶液:称取106g(10.6g) 亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O] ,溶于水后,稀释至1000ml(100ml)。
②22%乙酸锌溶液:称取220g(22g)乙酸锌[Zn (CH2COO)2·2H2O] ,加30ml冰乙酸和适量水溶解,并用水稀释至1000ml(100ml)。
③饱和四硼酸钠溶液:称取25g(5g)四硼酸钠(Na2B4O7·10H2O),溶于500ml(100ml)热水中,冷却后备用。
④对氨基苯磺酸溶液:称取0.8g对氨基苯磺酸,溶于12 %乙酸溶液150ml中(低温加热并搅拌加速溶解),冷却后避光保存。
⑤α—萘胺溶液:称取0.2gα—萘胺溶于数滴冰乙酸中,再加12%乙酸溶液150ml,混匀,避光保存。
⑥对氨基苯磺酸和α—萘胺混合液:测定前,将对氨基苯磺酸溶液与α—萘胺溶液两种溶液等体积混合摇匀,备用。
⑦亚硝酸钠标准储备溶液:精密称取0.2999g于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠,加水溶解移入1000ml容量瓶中,加2ml氯仿作为保护剂,并稀释至刻度。
此溶液每毫升相当于0.2 mg亚硝酸根。
⑧亚硝酸钠标准使用液:临用前,吸取亚硝酸钠标准储备溶液5.00 ml ,置于100ml容量瓶中,加水稀释至刻度,此溶液每毫升相当于10μg亚硝酸钠。
⑨氢氧化铝悬浮液:称取125g(12.5g)硫酸铝溶于1000ml(100ml)蒸馏水中,慢慢加入浓氨水,使铝离子沉淀完全,放置澄清后倾去上层清液,加蒸馏水反复洗涤,直至清液加氯化钡溶液(检查硫酸根)和硝酸银溶液(检查氯离子)无浑浊现象为止,最后向氢氧化铝胶体沉淀中加300ml蒸馏水,使用时振摇均匀。
1.1.3 标准曲线的绘制准确吸取10μg/ml亚硝酸钠标准使用液0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0ml依次加入到50mL容量瓶,再分别加人3～4滴HCl(1∶1)混匀,2ml对氨基苯磺酸—α—萘胺混合液混匀,静置15 min,用3cm比色杯,于波长540nm处测吸光度,绘制标准曲线，结果见表2-2，图2-2。
1.1.4样品处理与测定（表1-1）测定亚硝酸盐含量的取样量（g）大白菜黄萝卜黄瓜拜城恰玛古伊宁恰玛古柯坪恰玛古第一次20.004 20.068 20.078 20.012 20.03 20.015第二次20.077 20.059 20.089 20.009 20.033 20.027第三次20.015 20.003 20.017 20.038 20.070 20.030把样品洗净，匀浆，称取20g匀浆液于烧杯中，加60ml热水（65℃—75℃），用NaOH 溶液调节至偏碱性，再用水将样品全部转移至50ml 溶液瓶中，置于60℃水浴加热10min，取出冷却，加水至刻度，混匀，静置30min，上清液经乙酸锌和活性炭混合过滤，收集滤液备用。
亚硝酸盐测定：用移液管吸取20ml提取液于50ml容量瓶中,用水稀释至约30ml,加入磺胺溶液5ml,再加入盐酸溶液3ml,混匀,置于室温遮光处,加入萘乙二胺盐酸盐1ml,混匀,用水定容。
在波长540nm处测定吸光度。
依公式求得样品中亚硝酸盐含量，结果见表4。
硝酸盐测定：用移液管吸取提取液20ml于50ml具塞锥形瓶中,加入5ml蒸馏水,5ml氨缓冲液和2g镉粒,振荡,过滤得还原液。
吸取10ml还原液至50ml容量瓶中。
显色步骤同亚硝酸盐测定步骤,依公式求得硝酸盐含量，结果见表2-3。
1.2.5计算样品中亚硝酸盐含量公式：C×50X=——————————m×V2/ V1×1000式中： X——样品中亚硝酸盐的含量，mg/g；m——样品质量，g；C——查得样品在曲线上浓度, μg/mLV1——样品处理液总体积，mL；V2——测定用样液体积，mL。
2.结果与分析分光光度法测定各蔬菜中亚硝酸盐及硝酸盐含量实验中对样品三次平衡分析，测定结果见下表。
亚硝酸盐最大吸收波长的选择：（表2-1）波长500 510 520 530 540 550 560 570 580 590吸光度0.065 0.085 0.102 0.115 0.121 0.117 0.11 0.096 0.072 0.047从表2-1，图2-1可以看出亚硝酸盐标准液的最大吸收波长为540nm.最大吸收波长对应的吸光度为0.121 。
亚硝酸盐标准曲线的绘制：（表2-2）亚硝酸盐标准溶液的浓度及吸光度浓度(μg/mL ) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1吸光度(A)0 0.089 0.201 0.329 0.451 0.584亚硝酸盐及硝酸盐含量的测定（表2-3）不同蔬菜中亚硝酸盐的含量(mg/g)吸光度 浓度 含量 平均值 相对平准偏差大白菜0.7919 3.76% 0.0570.12970.80780.058 0.1314 0.8208 黄萝卜0.043 0.1060 0.6605 0.6930 3.18% 0.046 0.1111 0.6924 0.049 0.1162 0.7261 黄瓜0.5763 4.79%0.0390.09930.61760.034 0.0908 0.5670 拜城恰玛古 0.5528 4.74%0.029 0.0823 0.51360.0920.1890 1.17950.087 0.1805 1.1265 0.0280.08060.50360.031 0.0857 0.5350 2.26%（表2-4）不同蔬菜中硝酸盐的含量(mg/g)总吸光度 总浓度 总含量 硝酸盐含量 平均值 相对平准偏差 大 白 菜 0.217 0.4007 2.5036 1.7564 0.193 0.3600 2.2415 1.4338 萝 卜 0.0490.1162 0.7237 0.06330.0598 7.85% 0.051 0.1196 0.7452 0.0528 0.055 0.1264 0.7896 0.0635 黄 瓜 0.7421 6.09% 0.1030.2076 1.2919 0.67430.105 0.2110 1.3177 0.7508 拜城恰玛古 0.057 0.1297 0.8104 0.2433 0.2608 4.47% 0.061 0.1365 0.8528 0.2750 0.054 0.1247 0.7776 0.2641 伊宁恰玛古 0.331 0.5937 3.7051 2.5255 2.5308 0.14% 0.3230.5802 3.6133 2.5311柯坪恰玛古0.031 0.0857 0.5353 0.0317 0.0317 0.11%亚硝酸盐回收试验：在蔬菜样品中添加标准物质后与样品的制备，样品含量测定步骤相同条件下做回收试验。