呋喃唑酮及其代谢物 牙鲆肌肉组织
呋喃唑酮快速检测试剂盒说明书
-01版呋喃唑酮代谢物（AOZ）快速检测试剂盒说明书一、原理本试剂盒采取间接竞争ELISA方法检测水产和鸡肉等组织样本中AOZ, 在微孔条上预包被上偶联抗原, 利用抗原与抗体特异性免疫化学反应原理来进行, 样本中AOZ和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗呋喃唑酮代谢物衍生物抗体, 加入酶标识物后, 用TMB底物显色, 样品中AOZ含量与样品吸光度值呈反比, 与标准曲线比较即可得出呋喃唑酮代谢物含量。
二、试剂盒技术指标:试剂盒灵敏度: 0.05ppb样本检测下限:组织（鸡/鸭/猪/牛/羊/鱼/虾肉）—---——0.1ppb肝脏（鸡/鸭/猪/牛/羊肝脏）--------———0.1ppb蜂蜜、牛奶、肠衣--------------------------—0.1ppb 鱼/虾等水产品组织因存在一定干扰,检测下限为0.2ppb交叉反应率: 呋喃唑酮代谢物————————————100%呋喃它酮代谢物———————————﹤0.1% 呋喃妥因代谢物———————————﹤0.1% 呋喃西林代谢物———————————﹤0.1% 回收率:组织、肝脏……………………………90%±10% 蜂蜜、牛奶、肠衣……………………75%±15%三、试剂盒组成1、微量测试孔: 每条8孔, 一板12条2、标准液X6瓶: （1ml/瓶）0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb3、酶标识物12m l………………………红色帽4、抗体工作液7m l………………………蓝色帽5、底物A液7 m l………………………白色帽6、底物B液7 m l………………………黑色帽7、终止液7 m l………………………黄色帽8、20X浓缩洗涤液40 m l…………………白色帽9、2X浓缩复溶液50 m l…………………透明帽10、衍生化试剂10m l…………………白色帽四、所用仪器、试剂含有仪器: 微孔酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）微量移液器: 单道20µl-200µl, 100µl-1000µl、多道250µl试剂:氢氧化钠、乙酸乙酯、正己烷、浓HCl、磷酸氢二钾（全部样本使用）亚硝基铁氰化钾（K2Fe（CN）5·NO·3H2O）、ZnSO4·7H2O（奶样专用）五、样本前处理步骤样本处理前须知处理任何样本时, 都必需注意:（a）本试剂盒所检测组织样本包含: 动物组织、禽类和水产组织。
禽蛋中呋喃唑酮代谢物（AOZ）残留量的酶联免疫检测
禽蛋中呋喃唑酮代谢物（AOZ ）残留量的酶联免疫检测贺燕，王益军，张苏珍，葛敏，谭海荣（连云港市畜产品质量监督检验测试中心江苏连云港222001）用酶联免疫方法对禽蛋中呋喃唑酮代谢物（AOZ ）残留量进行检测，随机抽取20个禽蛋样品进行处理，样品经2-硝基苯甲醛衍生化并用乙酸乙酯提取AOZ 。
通过样品中残留的AOZ 和酶标板上预包被的抗原竞争抗体，加入酶标二抗后与底物显色，测得禽蛋中AOZ 的残留量。
检测结果为18个阴性样，2个阳性样，经液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS ）比对试验，样品阴、阳性判断结果一致，且与阳性样测定结果相符。
综上，酶联免疫法能够实现禽蛋中AOZ 残留量的准确检测。
代谢物；残留量；酶联免疫；禽蛋；检测呋喃唑酮又称痢特灵，是人工合成的广谱抗菌药物，属硝基呋喃类药物，它有非常好的抗菌效果和药代动力学的特性[1]，曾经被广泛应用于畜牧业，它还可以作为猪、禽类和水产促生长的添加剂。
但在长时间的实验室研究过程中发现，硝基呋喃类的药物和代谢物均可使实验动物发生癌变和基因突变，因此，此类药物禁止在治疗和饲料中使用[2]。
自1993年起，欧盟范围内便禁止在动物饲养中使用硝基呋喃类药物盐酸呋喃它酮、呋喃妥因和呋喃西林，而呋喃唑酮也从1995年起被禁用。
我国农业部第235号公告中也规定动物性食品中呋喃唑酮检出限为不得检出[3]。
硝基呋喃类药物在体内迅速代谢，在组织中与细胞膜蛋白结合长期持续存留，因此在分析此类药物的残留时以分析代谢物为主[4]。
目前，动物组织中呋喃唑酮代谢物（AOZ ）残留分析主要采用高效液相色谱法（HPLC-MS ）、液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS ）和酶联免疫法（ELISA)。
前者由于需要复杂的仪器设备、繁琐的前处理过程及对检验人员的高技能要求，不适合现场监控和大量样本的筛查，而以抗原抗体特异性反应为基础的酶联免疫法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，已在农兽药残留检测中得到广泛应用[1]。
呋喃唑酮及其代谢物在牙鲆肌肉组织中的代谢动力学研究
关 于 呋 喃 唑酮 和 呋 喃 西 林 代 谢 物 在 大 菱 鲆 、 罗 非 鱼ｌ ｌ ｏ ］ 、 日本 鳗 鲡 】 １ 以 及 鲤 １ 组 织 中 的 药 物 代
有限公 司 ） ； Ａ ｎ ｋ ｅ Ｔ Ｄ Ｌ一４ ０ Ｂ离 心 机 （日本 日立 公 司） ； Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ｏ ｔ ａ ４ ０ ０ 型旋 转蒸 发 仪 （ 德国 Ｈ ｅ ｉ ｄ ｏ ｌ ｐ ｈ公 司） ； Ｈ Ｚ Ｓ—Ｈ 水 浴恒 温振荡 器 （ 哈尔 滨市 东联 电子 技 术 开发有 限公 司 ） ； Ｉ Ｋ Ａ—Ｔ １ ８ ｂ ａ ｓ ｉ ｃ匀 质 机 （ 德国 Ｉ Ｋ Ａ
摘要 ： 采用高效液相 色谱法 和液相色谱 一串联质谱联用法分别 测定 牙鲆肌 肉组织 中的呋 喃唑酮及 其代谢 物 ３一氨基
一
２一嗯 唑 烷 酮 （ Ａ Ｏ Ｚ ） 的 残 留 浓 度 。在 （ ２ ２± ２ ）℃ 条 件 下 ， 研 究 了单 剂 量 口灌 条 件 下 （ 以８ ０ ｍｇ ／ ｋ ｇ 计） ， 呋 喃唑 酮 及 其 … 出 现在 ２ ｈ ， 第 一 次 达 峰 浓度 Ｃ ……为 ３ ０ ６ ０ ． ５ ｇ ／ ｋ ｇ ； 第
价值 较 高 。呋喃 唑酮 已经 禁 用 ， 但 是 禁 而 不止 ， 在 牙
鲆养 殖 中违法 使 用 现 象仍 然 存 在 。 本研 究 探 讨 了呋
喃 唑酮及 其。
１ 材 料 和 方 法
１ － １ 仪器 、 试剂及材料
２ ０ １ ３年 ３月 第 ３卷 第 １期
中 国 渔 业 质 量 与 标 准
Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｆ ｉ ｓ ｈ ｅ ｒ ｙ Ｑ ｕ ａ ｌ ｉ ｔ ｙ ａ ｎ ｄ Ｓ ｔ ａ ｎ ｄ ａ ｒ ｄ ｓ
呋喃唑酮在凡纳滨对虾组织中代谢动力学研究
呋喃唑酮在凡纳滨对虾组织中代谢动力学研究张海琪;丁雪燕;薛辉利;姚高华【期刊名称】《宁波大学学报（理工版）》【年(卷),期】2009(022)004【摘要】运用液相色谱-串联质谱法研究了呋喃唑酮药饵多次给药后在凡纳滨对虾体内的药物代谢动力学.研究结果表明:呋喃唑酮代谢物在血淋巴、肝胰脏、肌肉组织中的代谢过程均符合二室模型,其动力学方程分别为C血液=414.107×e-0.092t+124.451×e-0.005t,C肝胰腺=1625.563×e-0.019t+125.700.C肌肉=120.434×e-0.019t+71.579×e-0.001t.凡纳滨对虾血淋巴和肝胰腺中呋喃唑酮代谢物浓度在4h达到高峰,肌肉中药物浓度在2 h达到最大值;最高峰时血淋巴、肝胰腺和肌肉中药物浓度平均为570.6μg·L-1、1 948.6μg·kg-1和210.0μg·kg-1.在血淋巴、肝胰腺和肌肉组织中呋喃唑酮代谢物浓度的吸收半衰期(t1/2α)分别为7.497 h、36.206 h和36.484 h,消除半衰期(t1/2β)分别为132.525 h、1 000 479.21 7 h和505.637 h,总表观分布容积(V1/F)分别为55.775 L·kg-1、17.16 L·kg-1和161.574 L·kg-1.说明给药后呋喃唑酮代谢物在凡纳滨对虾体内消除缓慢,残留严重,尤其以肝胰脏残留最为明显.【总页数】5页(P472-476)【作者】张海琪;丁雪燕;薛辉利;姚高华【作者单位】浙江省水产质量检测中心,浙江,杭州,310012;浙江省水产质量检测中心,浙江,杭州,310012;浙江省水产质量检测中心,浙江,杭州,310012;浙江省水产质量检测中心,浙江,杭州,310012【正文语种】中文【中图分类】S948【相关文献】1.自主创新开拓地壳动力学研究新领域——访中国地震局地壳应力研究所谢富仁教授 [J], 龚海莹;吴应清2.凡纳滨对虾摄食诺氟沙星强化卤虫的药代动力学研究 [J], 曹立民;李健;刘淇;王群3.菠萝叶片绿色组织与贮水组织中代谢物水平的昼夜变化 [J], 陈产松;齐一萍;等4.呋喃西林和呋喃唑酮在海参组织中的代谢消除规律 [J], 付树林;邢丽红;孙伟红;李兆新;郑关超;翟毓秀;郭江涛5.呋喃唑酮及其代谢物在牙鲆肌肉组织中的代谢动力学研究 [J], 刘莹;李兆新;郑炯;邢丽红;王英姿因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
毕业设计(论文)动物组织中硝基呋喃代谢物残留量的测定方法
山东理工大学毕业论文题目：动物组织中硝基呋喃代谢物残留量的测定方法学院：专业：食品科学与工程学生姓名：指导教师：毕业论文时间：二ОО八年二月二十五日～六月二十日共十七周摘要用高效液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）法同时测定动物组织及水产品中呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林和呋喃妥因的代谢物。
盐酸水解动物组织及水产品中蛋白结合的代谢物，同时加入2-硝基苯甲醛（2-NBA），37℃过夜衍生化。
加入氢氧化钠，调节PH值至7.0后，再加入正己烷去除蛋白。
后用乙酸乙酯提取，正己烷净化，分析物采用电喷雾电离正离子（ESI+）、多反应检测（MRM）模式检测，內标法定量。
在添加浓度0.5~2μg/kg范围内，內标法回收率为89.5%~110.3%；相对标准偏差（RSD）小于11.3%。
5-马啉代甲基-3-氨基-2-恶唑酮（5-methylmorpholino-3-amino-2-oxazolidinone，AMOZ）、3-氨基-2-恶唑酮（3-amino-2-oxazolidinone，AOZ）、氨基脲（semicarbazide，SEM）和1-氨基-乙内酰胺（1-amino-hydantoin，AHD）方法检出限为0.5μg/kg。
关键词：液相色谱-串联质谱，硝基呋喃类代谢物，内标法AbstractA high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometric method was established for simultaneous determination of the nitrofuran metabolites, furazolidone, nitrofurazone and nitrofurantoin in animals，tissue and aquatic produces. Potein-bound metabolites were released in HCl solution and deriatised with 2-nitrobenzaldehyde(2-NBA)overnight at 37℃. Proteins were sedmentated by n-hexane , after adjusting pH to 7.0 by sodium hydroxide. Then the analytes were extracted by ethyl acetate and cleaned up by n-hexane. Identification was achieved by electrospray ionization in positive mode(ESI+%~110.3%with spiked levels of 0.5~2μg/kg. The RSDs were less than 11.3%. The limits of detection were 0.5μg/kg for AMOZ, AOZ, SEM and AHD.Keywords:Liquid chromatography-tandem mass spectrometric, metabolites of nitrofurans, internal standard.第一章目录摘要 (I)ABSTRACT（英文摘要） (Ⅱ)目录 (Ⅲ)第一章引言 (1)硝基呋喃类药物的性质和使用 (1)硝基呋喃类药物的危害及其管理对策 (2)1.2.1硝基呋喃类药物的主要危害 (2)1.2.2硝基呋喃类药物的管理对策 (3)1.3硝基呋喃类物质及其代谢物的样品处理方法 (4)1.3.1样品的均质 (4)1.3.2提取和衍生化 (5)1.3溶剂提取 (5)1.3.2.2水解和衍生化 (5)1.3.3样品的净化 (6)1.3.3.1液液萃取（LLP） (6)1.3.3.2基体固相分散技术（MSPD） (6)1.3.3.3固相萃取技术（SPE） (7)1.3.3.4在线透析和微量富集技术 (7)1.4硝基呋喃类物质及其代谢物的检测方法 (8)1.4.1色谱分析方法 (8)1.4.1.1高效液相色谱法(HPLC) (8)1.4.1.2联用技术分析法 (10)1.4.2分光光度法 (12)1.4.3免疫分析法（IA） (13)1.4.4总结 (14)第二章实验方法 (17)2.1原理 (17)2.2仪器和设备 (17)2.3试剂与溶液 (18)2.3.1 主要试剂 (18)2.3.2 主要溶液的配制 (18)2.3.3 标准物质和标准溶液 (19)2.4实验方法 (20)2.4.1 试样制备与保存 (20)2.4.2 分析步骤 (20)2.4.2.1 洗样 (20)水解 (20)2.4.2.3 提取和净化 (20)2.4.2.4 仪器参数与设定 (21)2.4.2.5液相色谱-串联质谱测定 (22)2.4.2.6定性方法 (22)2.4.2.7定量方法 (23)第三章结果计算及讨论 (24)3.1结果计算 (24)3.2总离子流图和保留时间 (24)3.3样品衍生条件的优化 (25)3.4净化条件的选择 (26)质谱条件的优化 (26)检测限、测定低限、回收率和精密度 (29)3.6.1 回收率统计 (29)3.6.2 重复性统计 (33)3.7內标法定量 (38)3.8标准曲线图谱及线性范围 (39)3.8.1 标准曲线图谱 (39)3.8.2 线性范围 (41)3.9质量控制及注意事项 (41)3.9.1 质量控制 (41)3.9.2 注意事项 (42)结论 (44)参考文献 (45)致谢及声明 (48)第一章引言1.1 硝基呋喃类药物的性质和使用硝基呋喃类药物(Nitrofurans)是人工合成的具有5-硝基呋喃基本结构的广谱抗菌药物，对大多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌、某些真菌和原虫均有作用，在低浓度下对上述病原体有抑制作用，高浓度则有杀灭作用，其抗菌作用机理是干扰细菌体内的氧化还原酶系统，使细菌代谢紊乱[1]。
呋喃唑酮
抗菌药。
遮光，密封保存。
呋喃唑酮片。
药物说明
01
药理作用
02
药代动力学
03
适应症
04
不良反应
06
孕妇用药
05
注意事项
1
儿童用药
2
药物相互作用
3
药物过量
4
用量用法
5
毒副作用
本品为硝基呋喃类抗菌药。对革兰阳性及阴性菌均有一定抗菌作用，包括沙门菌属、志贺菌属、大肠杆菌、 肺炎克雷伯菌、肠杆菌属、金葡菌、粪肠球菌、化脓性链球菌、霍乱弧菌、弯曲菌属、拟杆菌属等，在一定浓度 下对毛滴虫、贾第鞭毛虫也有活性。其作用机制为干扰细菌氧化还原酶从而阻断细菌的正常代谢。
公告显示，此次禁用的含呋喃唑酮复方制剂共涉及四种，分别为复方雪胆呋喃唑酮胶囊、呋喃苦参黄连素片、 二维呋喃唑酮片、谷海生片。
注意呋喃唑酮单方制剂没有受到影响。
化合物简介
1
基本信息
2
理化性质
3
分子结构数据
4
计算化学数据
5
用途
化学式：C8H7N3O5 分子量：225.158 CAS号：67-45-8 EINECS号：200-653-3
4、本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱（光谱集182图）一致。
酸度 取本品1.0g，加水100mL，振摇15分钟，滤过，取滤液依法测定（通则0631），pH值应为5.5～7.0。 乙醇中溶解物 取本品5.0g，置250mL锥形瓶中，加乙醇100mL，加热回流5分钟，放冷至25±2℃，用5号垂熔漏斗滤过，滤 渣用乙醇50mL洗涤，洗液与滤液合并，置已称定重量的蒸发皿中，蒸去乙醇，残渣在80℃干燥1小时，遗留残渣 不得过0.5%。 5-硝基糠醛二乙酸酯 照薄层色谱法（通则0502）试验，避光操作。 供试品溶液：取本品约50mg，精密称定，置10mL量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺5mL，置水浴中微温使溶解， 放冷，用丙酮稀释至刻度，摇匀。 对照品溶液：取5-硝基糠醛二乙酸酯对照品适量，加N,N-二甲基甲酰胺-丙酮（1:1）溶液溶解并定诫稀释制 成每1mL中含50µg的溶液。
酶联免疫法测定水产品中呋喃唑酮代谢物AOZ的残留.pdf
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治疗长期腹泻的药_部分不合格项目的小知识
部分不合格项目的小知识一、呋喃唑酮代谢物呋喃唑酮是硝基呋喃类抗菌药，具有抗菌谱广等特点。
动物产品的呋喃唑酮代谢物残留，一般不会对人体产生急性毒性作用。
长期大量摄入呋喃唑酮代谢物残留超标的食品，可能会在人体内积蓄。
《食品动物中禁止使用的药品及其他化合物清单》（农业农村部公告第250号）中规定，呋喃唑酮代谢物氯霉素为禁止使用的药物，在禽类肌肉中不得检出。
二、恩诺沙星恩诺沙星属于氟喹诺酮类药物，是一类人工合成的广谱抗菌药，用于治疗动物的皮肤感染、呼吸道感染等，是动物专属用药。
《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》（GB 31650-2019）中规定，恩诺沙星在水产品中的最大残留限量为100 μg/kg。
长期食用恩诺沙星残留超标的食品，对人体健康有一定影响。
三、氯霉素氯霉素是一种广谱抑菌剂，《食品动物中禁止使用的药品及其他化合物清单》（农业农村部公告第250号）中规定，氯霉素为禁止使用的药物，在水产品中不得检出。
水产品中检出氯霉素的原因可能为养殖环节为预防相关疾病而非法使用。
水产品中氯霉素残留，一般不会对人体产生急性毒性作用，长期大量摄入氯霉素超标的食品，可能会在人体内积蓄，产生耐药并对同类药物有交叉耐药。
四、磺胺类（总量）磺胺类药物是一种人工合成的抑菌药，具有抗菌广谱、性质稳定、便于储存、吸收迅速等优点。
根据《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》（GB 31650-2019）规定，磺胺类（总量）在水产品中的残留限量为100 μg/kg。
养殖环节未严格控制休药期或超量使用可能导致残留超标。
水产品中磺胺类药物残留量很低时，一般不会对人体产生急性毒性作用，长期大量摄入磺胺类药物残留不合格的食品，可能会在人体内蓄积，引起过敏反应的耐药性菌株，也可能导致泌尿系统和肝脏损伤。
五、氟苯尼考氟苯尼考是一种广谱抗菌药物，一般为动物专用抗菌药。
一般由于饲料添加或者家禽疾病治疗导致残留积累在家禽体内。
GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》中规定产蛋家禽禁止使用。
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值较高。 呋喃唑酮已经禁用， 但是禁而不止， 在牙鲆 养殖中违法使用现象仍然存在。 本研究探讨了呋喃 唑酮及其代谢物 AOZ 在牙鲆肌肉组织中的代谢和消 除规律。
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1． 1
材料和方法
仪器、 试剂及材料
1． 1． 1
仪器 Agilent 1100 高 效 液 相 色 谱 仪， 配 紫 外 检 测 器； Agilent 1100 离子阱质谱仪， 配有 Agilent 1100 液相色 谱仪、 自动进样器和电喷雾离子源（ 美国 Agilent 科技 有限公 司 ） ； Anke TDL － 40B 离 心 机 （ 日 本 日 立 公 司） ； Laborota400 型 旋 转 蒸 发 仪 （ 德 国 Heidolph 公 司） ； HZS － H 水浴恒温振荡器（ 哈尔滨市东联电子技 术开发有限公司 ） ； IKA － T18basic 匀质机 （ 德国 IKA 公司） ； pHS － 3C 精密 pH 计（ 上海雷磁仪器厂 ） ； Milli
2013 年 20 中国渔业质量与标准
为色谱纯， 其他未做特别说明的实验药品均为分析 纯， 实验所用水为 Millipore 纯水器制备的超纯水。 1． 1． 3 牙鲆 选自辽宁省旅顺市太平洋海珍品养殖基地 ， 平均 质量为 100 g， 鱼体表面无白化或黑化斑块， 体质健 壮， 经抽样检测无呋喃唑酮和 AOZ 残留后作为实验 用鱼， 共 200 尾， 实验期间水温为（ 22 ± 2 ） ℃ 之间。
氘代内标使用液： 准确吸取氘代内标储备液， 用 4 ℃ 水于逐级稀释配制成 100 ng / mL 标准工作溶液， 冷藏保存。 标准工作曲线的制备： 移取标准工作溶液， 使之 2、 5、 10 、 20 μg / L 的系列浓度， 成为 1 、 分别加入 100 μL 内标工作溶液。 1． 2． 3 样品处理 呋喃唑酮： 称取经均质的匀浆样品约 10 g （ 精确 至 0． 01 g ） ， 加 25 mL 二氯甲烷搅拌分散后浸泡 15 min， 在振荡器上振荡 5 min， 提取液经无水硫酸钠柱 残渣分别用 25 mL 和 15 mL 二氯甲 滤入蒸发烧瓶中， 烷按上述方法各重复提取一次， 再用 15 mL 二氯甲烷 并采用洗耳球吹出柱中液体， 滤 冲洗无水硫酸钠柱， ， 液均滤入同一蒸发烧瓶中 滤液于旋转蒸发仪上在 45 ℃ 左右水浴下减压蒸发去除溶剂， 蒸发速度控制 在每秒一滴。 用 1． 0 mL 流动相和 1． 0 mL 正己烷溶 将液体移入离心管中， 解残渣并充分洗涤蒸发烧瓶， 在 4 000 r / min 离心 5 min， 用尖嘴吸管移去上层正己 烷层， 再向离心管中加入 1． 0 mL 正己烷， 混匀 2 min， 离心， 用尖 嘴 吸 管 移 去 上 层 正 己 烷 层， 下层清液经 0. 45 μm 膜孔滤器过滤后进 HPLC 分析。 AOZ： 称取 2 g（ 精确到 0． 01 g ） 匀化后的样品于 100 mL 聚丙烯离心管中， 加入 100 μL 内标工作溶 液， 加入 20 mL 含 0． 2 moL / L 盐酸的水溶液， 涡动 1 min， 然后加入 500 μL 的 2 － 硝基苯甲醛溶液 （ 0． 05 mol / L 2 － 硝基苯甲醛二甲亚砜溶液） ， 在 37 ℃ 下， 水 浴振荡 16 h。取出上述样品， 冷却至室温， 反应产物 用 0． 5 mL 磷酸钠溶液 （ 0． 3 mol / L ） 中和， 然后用 2 mol / L 的氢氧化钠溶液将 pH 值调节至 7． 0 ～ 7． 5 ， 加 入 5 mL 的乙酸乙酯， 室温振荡 30 min， 然后离心 10 min。将有机相转移至干净的试管， 上述萃取过程重 45 ℃ 蒸到 复一次。 将两次的乙酸乙酯有机相合并， 近干， 然后在氮气流下吹干， 立即用 1 mL 70% 乙腈甲 V / V ） 溶液将残留 酸（ CH3 CN∶ 0． 1% HCOOH = 70∶ 30 ， 物溶解， 过 0． 45 μm 滤膜， 进行 LC － MS / MS 分析。 1． 2． 4 1． 2． 4． 1 仪器条件 呋喃唑酮检测 色谱 条 件： Zorbax SB － C18 柱 （ 4． 6 mm × 250 mm， 5 μm ） ； 流动相： 乙腈 / 水 （ 40 ∶ 60 ， V / V） ， 500 mL 乙腈水混合溶液中加 0． 5 mL 磷酸 （ 85% ） ， 流速 1． 0
中， 在冰箱中冷藏保存， 保存期 1 个月。该液 1 mL 相 取呋喃唑酮标准储 当于 200 μg 呋喃唑酮。 临用前， 备液， 用流动相稀释成 0． 01 ～ 1． 00 μg / mL 的标准工 作液。 1． 2． 2． 2 AOZ 标准溶液的制备 AOZ 标准储备液（ 0． 5 mg / mL ） ： 精确称取约 5． 0 mgAOZ， 4 ℃ 用甲醇溶解并定容于 10 mL 容量瓶中， 。 冷藏保存 AOZ 标准工作溶液： 准确吸取 AOZ 标准储备液， 4 ℃ 用水逐级稀释配制成 100 ng / mL 标准工作溶液， 冷藏保存。 氘代内标储备液（ 0． 5 g / L） ： 准确称取 5 mg 氘代 内标物 AOZ － d4 ， 用甲醇溶解并定容于 10 mL 容量 4 ℃ 冷藏保存。 瓶中，
、
组织中的药物代谢 动力学研究已有报道。呋喃唑酮及其代谢物 AOZ 在 牙鲆体内的药代动力学还未见相关报道。 牙鲆是我 国重要的海水增养殖鱼类品种， 其营养价值和经济价
、 日本鳗鲡
［11 ］
以及鲤
［12 ］
－ Q 纯水器（ 美国 Millipore 公司） 。 1． 1． 2 试剂 AOZ 标 样， AOZ － d4 标 样 （ 含 量 ＞ 呋喃 唑 酮， 98% ） ， 美国 SIGMA 公司； 乙腈， 甲醇， 二硝基苯甲醛
1， 3 2* 1 2 3 刘莹 ， 李兆新 ， 郑炯 ， 邢丽红 ， 王英姿
（ 1． 青岛市渔业技术推广站， 青岛 266071 ； 2 中国水产科学院黄海水产研究所，青岛 266071 ； 3． 中国海洋大学化学与化工学院， 青岛 266003 ） 摘要： 采用高效液相色谱法和液相色谱 － 串联质谱联用法分别测定牙鲆肌肉组织中的呋喃唑酮及其代谢物 3 － 氨基 － 2 － 噁唑烷酮（ AOZ） 的残留浓度。在（ 22 ± 2 ） ℃ 条件下， 研究了单剂量口灌条件下（ 以 80 mg / kg 计） ， 呋喃唑酮及其 代谢物 AOZ 在牙鲆肌肉中的代谢规律 。结果显示： 1 ） 呋喃唑酮在牙鲆肌肉组织中的药 － 时曲线出现明显的双峰现象， 非房室模型统计矩原理分析药动学数据， 第一次达峰时间 Tmax（ 1） 出现在 2 h， 第一次达峰浓度 Cmax（ 1） 为 3 060． 5 μg / kg； 第 二次达峰时间 T max（ 2） 出现在 8 h， 第二次达峰浓度 C max（ 2） 为 508． 3 μg / kg； 药 － 时曲线下面积 AUC 为 10． 9 ； 平均滞留时 间 MRT 为 6． 9 h， 说明呋喃唑酮在牙鲆体内吸收较迅速， 消除时间较短。2 ） 代谢物 AOZ 在牙鲆肌肉中的药代动力学 一级吸收速率常数 K a 为 0． 2 ， 吸收半衰期 t1 /2Ka 为 3． 2 h， 分布半衰期 t1 /2α 为 4． 2 h， 消除半衰期 模型符合二房室模型， t1 /2β 为 95． 1 。说明代谢物 AOZ 在牙鲆体内吸收、 消除所需时间较长， 直至停药后 528 h 仍然能够检测到残留。［ 中国 2013 ， 3 （ 1 ） ： 19 － 26］ 渔业质量与标准， 关键词： 牙鲆； 呋喃唑酮； 3 － 氨基 － 2 － 噁唑烷酮； 药物代谢动力学； 残留 中图分类号： S94 文献标志码： A 文章编号： 2095 － 1833 （ 2013 ） 01 － 0019 － 26
中国渔业质量与标准 2013 年 3 月 Mar. 2013 Chinese Fishery Quality and Standards Vol. 3 No. 1 第3 卷 第1 期
呋喃唑酮及其代谢物在牙鲆肌肉组织中的代谢动力学研究
1． 2
1． 2． 1
实200 mL 烧杯中， 先用少
量淀粉糊将呋喃唑酮制成乳化液， 再加入约 200 mL 水， 待完全溶解后转移到 250 mL 容量瓶中定容， 配制 的药物浓度为 8． 0 mg / mL。采用灌服的方式喂药， 每 尾鱼灌服 1 mL， 灌服剂量约为 80 mg / kg （ 以体质量 计） 。具体操作如下： 先将鱼随机捞出， 以 1 mL 的一 次性针管抽取 1． 0 mL 药液， 小心的插入牙鲆喉部， 推 拔出针管， 稍待片刻， 将鱼放回池中， 并开 入药液后， 始计时（ 灌喂过程中有回吐的鱼应弃去） 。 1． 5 、 2、 本实验共设置 28 个采样点， 分别为： 0． 5 、 2． 5 、 3、 3． 5 、 4、 4． 5 、 5、 5． 5 、 6、 7、 8、 9、 10 、 12 、 14 、 16 、 18 、 20 、 24 、 36 、 48 、 96 、 144 、 240 、 384 、 528 h； 每个采样点随 机抽取牙鲆 6 尾。 迅速将牙鲆处死后取其背部肌肉 20 ～ 25 g， 置于冰箱中 － 20 ℃ 冷冻待用。测试呋喃唑 酮和代谢物 AOZ 的牙鲆鱼分别取样， 每一个样取一 尾鱼， 每组药物 3 个平行样。 1． 2． 2 1． 2． 2． 1 标准品溶液的制备 呋喃唑酮标准工作液配制 呋喃唑酮标准储备液： 称取 10． 0 mg 呋喃唑酮， 用乙腈水溶液溶解并稀释定容至 50 mL 棕色容量瓶
收稿日期： 2013 － 01 － 03 ； 接收日期： 2013 － 03 － 06 资助项目： 中央级公益性科研院所基本科研业务费（ 2012A10 ） 和（ 20603022011014 ） 作者简介： 刘莹（ 1980 － ） ， 女， 工程师， 研究方向为水产品质量安全 。E － mail： qd8588@ 126． com 通信作者： 李兆新， 博士， 副研究员， 主要从事水产品质量安全检测与控制技术研究 。E － mail： lizx@ ysfri． ac． cn