葡萄糖细菌内毒素检查方法验证报告 模版
葡萄糖细菌内毒素检查方法验证报告文件编码：D01-5301 版本号：01目录一、目的 (1)二、适用范围 (1)三、内容 (1)四、附件 (14)五、变更历史 (14)一、 目的建立葡萄糖细菌内毒素检查方法，即按照《葡萄糖细菌内毒素检查方法验证方案》D01-5301进行验证，在本实验条件下的适用性，所采用的检验方法能够始终如一地获得符合客观实际的数据或结果，确保检验结果的准确性。
二、 适用范围适用于本公司所生产的葡萄糖细菌内毒素检查方法的验证。
三、 内容 1. 概述按照《2015年分析仪器、实验设备确认总计划》进度安排，验证小组按《葡萄糖细菌内毒素检查方法验证方案》D01-5301中既定检查项目，对葡萄糖细菌内毒素检查方法进行了检查、测试，且所有测试结果已收集齐全，现特此起草《葡萄糖细菌内毒素检查方法验证报告》，分析、总结各项验证情况，对葡萄糖细菌内毒素检查方法做出客观评价，提出合理化使用建议，以确保该检验方法的检验结果准确可靠。
2. 验证组织3. 验证实施时间：2015.10.124. 验证内容根据公司《验证管理规程》C05-0001的有关规定，对葡萄糖细菌内毒素检查方法进行验证。
验证内容包涵鲎试剂灵敏度复核试验、干扰试验以及凝胶限度试验，以部 门部门职责责任人 职 务工作划分 备注 质量部 方案起草、组织实施、过程监控、书写报告方案、报告起草，验证实施及操作结果的复核进行验证操作过程监控 验证委员会方案、报告审核、批准、验证合格证发放方案、报告审核方案、报告批准；验证合格证发放确认所建立的葡萄糖细菌内毒素检查方法可行性、准确性。
5.验证依据5.1.验证的法规依据《药品生产质量管理规范（2010年修订）》《药品GMP指南·质量控制实验室与物料系统》《中华人民共和国药典》2015年版四部6.验证前完成工作检查6.1.文件资料的检查确认项目认可标准确认方法确认结果是否符合是否验证方案已起草，并经过审核、批准对验证方案进行检查验证方案已完成起草，并按照规定结果验证委员会成员审核，验证委员会组长批准。
√参与人员已经过验证方案培训检查人员培训签到表已对验证参与人员进行了验证方案的培训，培训签到表作为验证方案附件保存。
√执行标准符合《中华人民共和国药典》2015年版四部《细菌内毒素检查法》检查验证方案是否符合《中华人民共和国药典》2015年版四部《细菌内毒素检查法》的要求检查验证方案符合《中华人民共和国药典》2015年版四部《细菌内毒素检查法》的要求√结论验证方案已起草，并经审核、批准，并对相关人员进行了培训，且符合相关法规规定要求。
检查人：日期：复核人：日期：Q A ：日期：确认项目认可标准确认方法确认结果是否符合是否工作标准品应由有资质的单位提供且在有效期内检查工作标准品瓶身由中国食品药品检定研究所提供，且在定值后有效期内。
√鲎试剂应由有资质的单位提供且在有效期内检查鲎试剂瓶身的信息鲎试剂由湛江安度斯生物有限公司提供，有效期至2017年04月。
√细菌内毒检查用水应由有资质的单位提供且在有效期内检查细菌内毒素瓶身的信息细菌内毒素检查用水由湛江安度斯生物有限公司提供，有效期至2018年06月。
√结论根据《葡萄糖细菌内毒素检查方法验证方案》D01-5301中既定项目进行确认，所有确认结果均符合规定要求。
检查人：日期：复核人：日期：QA ：日期：确认项目认可标准确认方法确认结果是否符合是否干燥箱已进行过检定，且在有效期内检查干燥箱检定合格证由仙桃市检定计量测试所进行检定，检定有效期至2016年03月10日。
√结论根据《葡萄糖细菌内毒素检查方法验证方案》D01-5301中既定项目进行确认，所有确认结果均符合规定要求。
检查人：日期：复核人：日期：QA ：日期：7.方法验证7.1.鲎试剂灵敏度复核试验鲎试剂生产单位：湛江安度斯生物有限公司批号：1505151 灵敏度：0.125EU/ml生产日期：2015.05.15 规格：0.1ml/支/ / 细菌内毒素工作标准品生产单位：中国食品药品检定研究所批号：150601-201580 效价：80EU/支细菌内毒素检查用水/BET水生产单位：湛江安度斯生物有限公司批号：1504130 / /7.1.2.内毒素标准溶液的制备：80EU/ml 10EU/ml 1EU/ml 0.5EU/ml 0.25EU/ml0.5EU/ml 0.25EU/ml 0.125EU/ml0.06 EU/ml0.03EU/ml （4λ）（2λ）（λ）（0.5λ）（0.25λ）验证项目认可标准验证方法鲎试剂灵敏度复核0.5λ≤λc≤2λ检验操作：将已充分溶解的待复核鲎试剂18支（管）放在试管架上，排成5列，其中4列4支（管），1列2支（管）。
4 支（管）4 列每列每支分别加入0.1ml 的2λ、λ、0.5λ、和0.25λ的内毒素标准溶液；另2支（管）加入0.1ml 检查用水。
加样结束后，将试管中溶液轻轻振动混匀，封闭管口，避免产生气泡，垂直放入37℃±1℃的恒温器中，保温60±2 分钟。
观察并记录结果：将试管架从恒温器中轻轻取出，避免振动，将每管拿出缓缓倒转180°观察，若管内形成凝胶，并且凝胶不变形，不从管壁滑脱者记录为阳性（+）；未形成凝胶或形成的凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱者记录为阴性（－）。
实验结果判断与计算：当最大浓度2λ 4管均为阳性，最低浓度0.25λ 4管均为阴性，阴性对照为阴性时实验方为有效，按下式计算反应终点浓度的几何平均值，即为鲎试剂灵敏度的复核结果（λc）。
计算公式：λc = lg-1(∑X/4)式中：x为反应终点浓度的对数值（lg）。
反应终点浓度是系列递减内毒素标准溶液中最后一个呈阳性结果浓度。
0.5ml3.5ml BET水0.5ml4.5ml BET水3ml3ml BET水1ml1ml BET水1ml1ml BET水1ml1ml BET水1 ml1ml BET水1ml1ml BET水仪器名称：试管恒温仪仪器型号：TAL-40D 设备编号：03-ZL-189 恒温时间：10:25 ～11:25 恒温温度：37.0℃//验证项目验证结果是否符合内毒素浓度平行管数2λ（0.25）EU/mlλ（0.125）EU/ml0.5λ（0.06）EU/ml0.25λ（0.03）EU/ml阴性对照反应终点浓度（EU/ml）λC是否鲎试剂灵敏度复核1 + + - - - 0.1250.125 √2 + + - - - 0.1253 + + - - / 0.1254 + + - - / 0.125结论根据《葡萄糖细菌内毒素检查方法验证方案》D01-5301中既定项目进行确认，所有测试结果均符合规定要求。
检查人：日期：复核人：日期：QA ：日期：7.2. 干扰试验葡萄糖 生产厂家： 潍坊盛泰药业有限公司 批号： P2******* 进厂编号： 1212Y000158L15009鲎试剂生产单位： 湛江安度斯生物有限公司批号： 1505151 灵 敏 度：0.125EU/ml生产日期： 2015.05.15规格： 0.1ml/支// 细菌内毒素工作标准品 生产单位： 中国食品药品检定研究所 批号： 150601-201580 效 价： 80EU/支细菌内毒素检查用水/BET 水生产单位：湛江安度斯生物有限公司批号：1504130//7.2.2. 内毒素标准溶液的制备：80EU/ml 10EU/ml 1EU/ml 0.5EU/ml 0.25EU/ml7.2.3. 供试品溶液的制备：取本品0.514g ，加细菌内毒素检查用水5 ml 溶解，制成样品溶液。
样品 3 ml 样品 2 倍 稀释液/ ml 样品 / 倍 稀释液/ ml 供试品溶液3 mlBET 水/ mlBET 水/ mlBET 水7.2.4. 鲎试剂标示灵敏度的对照系列：0.5EU/ml 0.25EU/ml 0.125EU/ml 0.06EU/ml 0.03EU/ml（4λ） （2λ） （λ） （0.5λ） （0.25λ）7.2.5. 干扰试验系列：1ml1ml BET 水1ml1ml BET 水1ml1ml BET 水1ml1ml BET 水0.5ml3.5ml BET 水0.5ml4.5ml BET 水3ml3ml BET 水1ml1ml BET 水2.5EU/ml 0.25EU/ml 0.125EU/ml 0.06EU/ml 0.03EU/ml（2λ） （λ） （0.5λ） （0.25λ）验证项目认可标准验证方法干扰试验0.5λ≤E s ≤2λ 0.5λ≤E t ≤2λ检验操作：将准备好的鲎试剂取其中18支（管）放在试管架上，排成5列，4列4支（管），1列2支（管）。
其中的4支4列每列每支分别加入0.1ml 的2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ的内毒素标准溶液，另一列2支（管）加入0.1ml 检查用水作为阴性对照。
将另外18支（管）鲎试剂放在试管架上，排成5列，4列4支（管），1列2支（管）。
其中的4支4列每列每支分别加入0.1ml 的含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ的内毒素的供试品溶液，另一列2支（管）加入0.1ml 供试品溶液作为样品阴性对照。
加样结束后，将试管中溶液轻轻振动混匀，封闭管口，避免产生气泡，垂直放入37℃±1℃的恒温器中，保温60±2分钟（保温和拿取试管过程中应避免受到振动）。
结果计算：只有当两组最大浓度2λ均为阳性，最低浓度0.25λ均为阴性，阴性对照,管均为阴性时，试验方为有效。
按下式计算用检查用水制成的内毒素标准溶液的反应终点浓度的几何平均值(E s )和用供试品溶液或稀释液制成的内毒素溶液的反应终点浓度的几何平均值(E t ).计算公式：E s = lg -1 (∑X s /4)、E t = lg -1 (∑X t /4) 式中：X s 、X t 分别为用检查用水和供试品溶液制成的内毒素溶液的反应终点浓度的对数值（lg ）。
7.2.7. 验证结果0.2ml 1.8ml 供试品1ml 1ml 供试品1ml 1ml 供试品1ml 1ml 供试品葡萄糖细菌内毒素检查方法验证报告D01-530101 页码：10/14仪器名称：试管恒温仪仪器型号：TAL-40D 设备编号：03-ZL-189 恒温时间：13:14 ～14:14 恒温温度：37.0℃验证项目验证结果是否符合内毒素浓度平行管数2λ（0.25）EU/mlλ（0.125）EU/ml0.5λ（0.06）EU/ml0.25λ（0.03）EU/ml阴性对照供试品溶液反应终点浓度（EU/ml）λC是否鲎试剂灵敏度复核1 ＋＋－－－/ 0.1250.125 √2 ＋＋－－－/ 0.1253 ＋＋－－/ / 0.1254 ＋＋－－/ / 0.125干扰试验1 ＋＋－－/ －0.1250.125 √2 ＋＋－－/ －0.1253 ＋＋－－/ / 0.1254 ＋＋－－/ / 0.125结论根据《葡萄糖细菌内毒素检查方法验证方案》D01-5301中既定项目进行确认，所有测试结果均符合规定要求。
诺氟沙星葡萄糖注射液中细菌内毒素的定量检测
诺氟沙星葡萄糖注射液中细菌内毒素的定量检测江苏药学与临床研究2OO4年第12卷第1期中,分别加入精密量取的苯酚对照品溶液1.0,1.5,2.0ml各2份,按”2.6”项下的方法操作,计算回收率,结果见表1.表1加样回收率试验2.4精密度试验取同一批号样品,连续测定6次,RSD为0.74%(Tt=6).本法的精密度良好.2.5稳定性试验取”2.3”项下的溶液,在室温下放置,按上法每隔0.5h测定一次,结果3h内△A值几乎无变化,RSD为1.87%(Tt=7).2.6样品测定取不同批号的复方硼砂溶液,按上述方法测定苯酚含量,同时与溴量法[1j作比较,结果见表2.经统计学处理,两种方法测定的结果无显着性差异,P>0.05.表2苯酚含量测定结果(n=3)3讨论3.1本法利用苯酚为一弱酸,其pKa=10.0,在水溶液中存在电离平衡,当苯酚变为酚盐时氧原子上的孤对电子与苯环上的大兀键发生共轭,吸收带向长波方向移动,吸收也显着增大原理[]进行测定.3.2利用差示分光光度法不经分离,直接测定样品中苯酚的含量,方法简单,结果准确,适合医院制剂的快速测定.参考文献l中华人民共和国卫生部药政部编.中国医院制荆规范?西药制剂[s].第2版,北京:中国医药科技出版社,1996:225.2中国药学会上海分会编.上海市医院制剂手册[s].第3版,上海:科学技术出版社,1995:350.3黄北雄.差示分光光度法测定替硝唑葡萄糖注射液中替硝唑含量[J].中国医院药学杂志,2O02,(8):473.4于如嘏.分析化学(下册)[M].第2版,北京:人民卫生出版社.1986:71.(收稿日期:2003-06-12)诺氟沙星葡萄糖注射液中细菌内毒素的定量检测邰顺章盐城市药品检验所(盐城224002)摘要:目的通过对诺氟沙星葡萄糖注射液进行细菌内毒素回收干扰试验,建立定量检测诺氟沙星葡萄糖注射液中细菌内毒素的试验方法.方法采用<中国药典)2ooo年版附录中检测细菌内霉素的动态浊度法.结果诺氟沙星葡萄糖注射液用细菌内毒素定量检测无干扰因素影响,内毒素回收率在50%一200%范围内.结论使用细菌内毒素动态浊度法定量检测诺氟沙星葡萄糖注射液中细菌内毒素是可行的,可用细菌内毒素定量检查法代替家兔热原检查法.关键词:诺氟沙星葡萄糖注射液;细菌内毒素;动态浊度法;干扰试验中图分类号R927.12文献标识码A文章编号1007.306(2004)01.61.03 QuantitativeTestMethodStudyofBacterialEndotoxininNorfloxacinGlucoseInjectionTaiShun-zhangYanchenglnait~forDnlgControl(Yancheng224002)Abstr~:ObjeceveToestablishaIlassayfordeterminationofBacterialend0面(BEr)innodloxacingIllc0seiI归d0lIbyrecovery?61?江苏药学与临床研究2004年第12卷第1期testandinterferencetest.MethodAdopttheturbidimetric—kineticmethodbyTheChinesePharmacopoei a2000edition.ResultTherearenoimerferencein thettabidimetric’kineticmethod,therecoveryofBETwasbetween50%and200%.Colld ll~OllThemethodwasprovedto besuitablefordeterminationtheBETinnorfloxacingluco~injectionandcouldbeusedasanalternativefort herabbitpyrogentesttotheinjection.KeyWords:Norfloxacingluco~injection;Bacterialcndotoxin;Turbidimetfic.kineticmethod;Interferen cetest诺氟沙星葡萄糖注射液为第三代喹诺酮类抗菌药,主要作用于细菌的DNA促旋酶,使细菌DNA螺旋开裂,迅速抑制细菌的生长和繁殖;且对细胞壁有很强的渗透作用,使其杀菌作用增强.临床上常用于敏感菌所致的泌尿道,肠道,耳鼻喉,皮肤等部位的感染性疾病.目前该品的内毒素检查为家兔热原试验法,不仅费时费力,干扰因素多,且结果的重现性差.采用定量检测细菌内毒素的动态浊度法,则避免上述缺陷,直接定量检测出供试品中的内毒素.1材料与仪器诺氟沙星葡萄糖注射液(批号:021106,030212,030216,030218,021112,江苏长江药业有限公司);鲎试剂(批号0206282,入=O.03EU/ml,规格0.5ml/ Amp,湛江海洋生物制品厂);细菌内毒素国家标准品(批号2002.7,150EU/Amp,中国药品生物制品检定所);细菌内毒素检查用水(批号2001-4,10ml/ Amp,中国药品生物制品检定所).BET-32C细菌内毒素测定仪(天大无线电厂).2方法与结果2.1细菌内毒素限值的确立[1]按公式L=K/M.K为规定的给药途径,即人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量,注射剂量为5.0EU/kg;M为1小时内每公斤体重人的最大给药剂量为10ml/kg;计算得样品的内毒素限值L为0.5EU/ml.2.2标准曲线制备及可靠性…用细菌内毒素检查用水将细菌内毒素国家标准品进行1O倍及4倍稀释,使其最终细菌内毒素浓度分别为1.0,O.25,O.0625EU/ml稀释系列,各取0.2m1分别加到预先加有0.10mlTAJL试剂反应管内,混合均匀,立即插入BET-32C细菌内毒素测定仪内进行自动检测,其中每一个浓度重复3管.结果见表1.回归方程:logT=2.805一O.33631ogC,r:一O.9985最低内毒素浓度=0.0625EU/lTll,空白对照管在检测时间外,故内毒素标准曲线成立.?62?表1标准曲线的可靠性2.3干扰试验2.3.1样品稀释倍数计算…按公式MVD=L?C/l.L为诺氟沙星葡萄糖注射液内毒素限值;C为1.0ml/ml;为标准曲线的最低内毒素浓度O.0625 EU/ml.计算得诺氟沙星葡萄糖注射液最大有效稀释倍数MVD为8倍.2.3.2样品溶液配制及预干扰试验[J将诺氟沙星葡萄糖注射液用内毒素检查用水依次稀释为2, 4,8倍溶液,记为液;同时另取3管,进行同样倍数稀释,但在稀释液中添加细菌内毒素标准溶液,使其最终浓度为中点浓度M(0.25EU/m1),作为样品添加内毒素阳性对照管,记为Bi液;分别取上述各液0.2ml加入预先加有0.10ml鲎试剂的反应管内,混匀,立即插入BET-32C细菌内毒素测定仪内进行检测,其中每一浓度重复3管,计算平均回收率.回收率(%)=(Bi液内毒素值一液内毒素值)×M一1×100%.结果见表2.其中内毒素回归方程:logT=2.805—0.3363logC.r=一0.9985表2诺氟沙星葡萄糖注射液的预干扰试验由表2看:不同稀释倍数下的诺氟沙星葡萄糖注射液添加内毒素平均回收率均在50%～200%范围内,表明样品稀释溶液在本试验条件下对鲎试剂反应均无干扰影响.因此正式干扰试验时用2倍稀释溶液进行.2.3.3样品溶液正式干扰试验分别取4批诺氟江苏药学与临床研究2004年第12卷第1期沙星葡萄糖注射液,用细菌内毒素检查用水制成2 倍稀释液,记为Ai液;同时另取4管用0.5EU/ml的内毒素标准溶液进行2倍稀释,使其浓度为中点浓度M(0.25EU/m1),记为Bi液;分别取上述各液0.2ml加入预先加有0.1mlT虬试剂的反应管内进行检测,每一浓度重复3管,计算平均回收率.结果见表3.其中标准曲线回归方程:logT=2.786—0.3588logC.r=一0.9988表3诺氟沙星葡萄糖注射液正式干扰试验由表3看:4批诺氟沙星葡萄糖注射液中的内毒素含量均小于0.0625EU/ml,且添加内毒素回收率均在50%200%范围内,表明诺氟沙星葡萄糖注射液2倍稀释液在本试验条件下对鲎试剂反应无干扰影响,常规监控时用2倍稀释液即可进行检测.2.4供试品的检测根据《中国药典)2000年版附录XIXF细菌内毒素测定法,按0.5EU/ml细菌内毒素限值对5批供试品进行内毒素定量检测,并同时进行5批供试品的家兔热原检查对比试验,结果一致,均为阴性.3讨论3.1从表2,表3实验结果表明:诺氟沙星葡萄糖注射液用细菌内毒素动态比浊法检测,由于内毒素回收率均在50%一200%范围内,表明不存在干扰因素影响,且4批诺氟沙星葡萄糖注射液中的内毒素含量均在规定限值L(0.5EU/m1)以下.3.2诺氟沙星葡萄糖注射液用动态浊度法进行细菌内毒素定量检测,与传统的热原家兔法和定性凝胶法相比,具有操作简便,结果准确,检测灵敏度高等优点,尤其避免了由于家兔差异及人为主观判断所出现的假阳性或假阴性结果.同时由于采用电脑监控,除避免了操作者的判断误差外,还便于试验数据的分析管理.因此用定量动态浊度法检测诺氟沙星葡萄糖注射液中的细菌内毒素是可行的.参考文献l国家药典委员会.中华人民共和国药典[s].二部.200o年版.附录.xIxF.2国家药典委员会.中华人民共和国卫生部新药转正标;隹[s].第5册.1995:8o.(收稿日期:2003-08-26)复方苯甲酸软膏和10%硫磺软膏两种制剂配方的改进许振平淮安市第一人民医院(淮安223300)摘要:目的改进复方苯甲酸软膏和硫磺软膏,以取得更好的疗效.方法将原处方中增加苯酚,樟脑,薄荷脑并加大羊毛脂用量.结果与结论临床双盲法进行比较,改进后的处方与原处方的疗效比较,有较大的提高,P<O.01.关键词:复方苯甲酸软膏;硫黄软膏;配方;改进中图分类号R942文献标识码A文章编号1007—306(2004)01.63.02复方苯甲酸软膏临床上用于皮肤霉菌感染的治疗,能软化患部角质及治疗手足癣等;10%硫磺软膏在临床上用于治疗疥疮,体癣,花斑癣,脂溢性皮炎等症.但医疗实践中,有一些病人感染部位角质化较厚并伴有其它细菌感染,治疗效果不够理想.针对上述情况,我们对原配方加以改进,使配方组成更趋合理,性质稳定,操作方便.1原配方与改进方药物组成1.1复方苯甲酸软膏?63?。
内毒素问题总结报告
内毒素问题总结报告1.目的1.1解决内毒素反复的问题1.2找出内毒素反复的原因2.背景从200501批次验证到200701批次验证一直存在内毒素反复不合格的问题，为了确认内毒素不合格的原因并予以解决，现进行内毒素问题筛查与解决。
3.试验过程3.1初步筛查准备SAM溶液、活化I、活化II、匀浆后溶液按照以下列表取样：按照上述样品取样后，每组样品加入内毒素用水13ml置于37℃、100rpm摇床振摇浸提。
取浸提液100ul加入1.5ml内毒素用水稀释16倍，置于漩涡混合机混合，取100ul 内毒素用水至0.03EU鲎试剂，然后加入100ul混合液封口置于内毒素测定仪37℃反应1h，倒转观察鲎试剂凝固或滴落，以此判定待测产品内毒素是否合格。
试验结果如下：初步筛查结果显示为活化II步骤存在问题，下一步主要针对活化II 进行筛查。
准备活化II、溶液＋CaCl2、溶液＋EDC、清洗未匀浆、200501二楼冻干成品、200501三楼冻干成品样品，按照下表取样：按照上述样品取样后，每组样品加入内毒素用水13ml置于37℃、100rpm摇床振摇浸提。
取浸提液100ul加入1.5ml内毒素用水稀释16倍，置于漩涡混合机混合，取100ul 内毒素用水至0.03EU鲎试剂，然后加入100ul混合液封口置于内毒素测定仪37℃反应1h，倒转观察鲎试剂凝固或滴落，以此判定待测产品内毒素是否合格。
试验结果如下：根据当前两次筛查结果显示，可能在活化II阶段存在干扰，其他步段无法检出干扰因素，分别针对溶液加CaCl2、EDC进行筛查，结果显示均为阴性，因此结合文献推断可能是Ca2+和β-葡聚糖组合干扰。
当前阶段，可供选择的解决方案有：1.采用物理方法排除干扰因素2.采用试剂排除干扰因素3.增大稀释倍数，采用精度更高的鲎试剂4.采用抗增液，结合更高精度鲎试剂3.3物理方法排除干扰针对活化II溶液，采取离心、过滤的方法进行试验。
离心方案为取2.4g溶液在3000rpm离心10min，然后对上清液进行浸提、稀释、检测，结果发现3000rpm离心10min无明显分层现象，且上层呈阳性；过滤方案为取2.4g溶液使用0.22um和0.45um的过滤器进行过滤，对滤液进行浸提、稀释、检测，结果发现溶液使用过滤器容易堵塞过滤器且过滤效率慢，且检测滤液呈阳性。
氧氟沙星葡萄糖注射液细菌内毒素检查法的建立
氧氟沙星葡萄糖注射液细菌内毒素检查法的建立发表时间：2013-07-31T10:46:24.623Z 来源：《中外健康文摘》2013年第22期供稿作者：王贵英[导读] 实验结果证实，氧氟沙星葡萄糖注射液细菌内毒素限值确定为0.75EU?mg-1，可应用鲎试剂法代替家兔法。
王贵英（贵州省食品药品检验所贵州贵阳 550004) 【摘要】目的建立氧氟沙星葡萄糖注射液的细菌内毒素检查法。
方法按中国药典2010 年版二部附录Ⅺ E细菌内毒素检查法。
结果本品稀释为含氧氟沙星0.33 mg?mL-1的溶液对细菌内毒素检查无干扰作用，按拟定标准检验，该品种3 批样品细菌内毒素检查结果均符合规定。
结论对氧氟沙星葡萄糖注射液的检测可用细菌内毒素检查法代替家兔热原检查法，其细菌内毒素的限值(L)为0.75 EU?mg-1。
【关键词】氧氟沙星葡萄糖注射液细菌内毒素检查凝胶法干扰试验氧氟沙星葡萄糖注射液为较常用的喹诺酮类抗生素。
主要用于由敏感菌引起的泌尿生殖系统感染、呼吸道感染、胃肠道感染、伤寒、骨和关节感染、皮肤软组织感染、败血症。
氧氟沙星葡萄糖注射液收载于国家药品标准WS1－（X－070）－2002Z，原标准规定用家兔法进行热原检查, 受企业委托，建立其细菌内毒素检查法，代替家兔热原检查法。
1 实验材料及仪器1.1 鲎试剂（TAL）湛江博康海洋生物有限公司，规格：0.1mL，批号：1210150，灵敏度：0.25EU?mL–1；湛江安度斯生物有限公司，规格：0.1mL，批号：1111142，灵敏度：0.25 EU?mL–1。
1.2 细菌内毒素工作标准品(WSE) 中国食品药品检定研究院，效价：160 EU/支，批号：150601－201174。
1.3 细菌内毒素检查用水（BET）中国食品药品检定研究院，规格：5mL，批号：201208。
1.4 氧氟沙星葡萄糖注射液：贵州科伦药业有限公司，规格100mL:氧氟沙星0.2g与葡萄糖5g，批号：A121003C、A121003 E、A121003F。
脂肪乳氨基酸葡萄糖注射液无菌保证与细菌内毒素质量风险评估报告
【最新资料，WORD文档，可编辑修改】1.简介脂肪乳氨基酸（17）葡萄糖（11％）注射液，商品名卡文，系由费森尤斯卡比集团公司研制，自2004年起由XX公司进口销售。
经费卡董事会批准XX公司接受费卡公司就该产品的技术转移，在XX公司无锡生产基地建造生产线，产品供应中国市场并出口至亚太地区市场。
项目分为生产线建设和产品注册两个相互影响的部分。
由于国内药品生产注册申请受理前要求必须具备实际的生产线并经验证生产出注册报批样品，在等待审批过程中必然存在生产设备投资的闲置问题。
由于生产设施中自动化制袋/灌装/装外袋的设备投资很大，为求得产品注册进展，项目费用、生产能力和市场需求的最优平衡，决定分两个阶段建设生产设施：第一阶段，2008年实现投资较低的进口成品空袋、半自动灌装，每小时灌装200袋的生产能力，以达到年产100万袋的产能，产品可满足国内市场需求。
但其中配制、灭菌、灯检、装箱等设备和公用工程应能为第二阶段每小时900袋的生产能力配套。
第二阶段，2010年投资一套全自动的制袋/灌装/装外袋的设备，以取代第一阶段的半自动设备，产品除满足国内市场外，还可供应亚太地区。
根据上述项目建设策略，因灌装速度的限制，会存在配制批量、灭菌能力超过第一阶段的灌装能力的问题。
主要表现为：如以1440ml规格的产品计算，脂肪乳注射液最大配制批量2000升生产，灌装时间会达到40小时；以最小批量1000升生产，则需要的灌装时间为20小时。
1920ml规格的产品灌装时间分别低于上述数据。
通常，营养类输液产品灭菌前存放时间超过12小时，应考虑灭菌前微生物繁殖导致的产品无菌保证和细菌内毒素质量的风险，并采取有针对性的措施控制风险。
而就产品的理化质量而言，只要产品灌装前和灌装后具有同样的氮气保护，相对于产品2年以上的稳定性保证，几十小时的灌装时间不会造成特殊的风险。
本文以产品的无菌保证和细菌内毒素质量风险控制为目标，通过分析药液长时间灌装导致微生物繁殖的各种风险因素，说明项目在设备与工艺设计、质量控制策略等方面采用的全面的风险控制策略与方案，并结合相应的验证和试验结果，以评估产品的实际风险控制水平。
葡萄糖注射液工艺及产品验证报告
编号:RP-大输液类生产工艺及产品验证报告玻璃瓶线葡萄糖注射液起草：日期：审核：日期：批准：日期：目录1.概述2.验证目的3.验证品种及范围4.验证依据及引用文件5.产品工艺验证小组及职责6.验证前工作准备7.验证方法与内容8.结果分析与评价9.验证方案与验证报告的审批1、概述大输液生产工艺及产品验证是在厂房与空调净化系统、纯化水系统、注射用水系统、压缩空气系统、配制与过滤系统、灌封系统、灭菌柜系统等各项验证完毕后的验证工作。
按GMP规定，产品初次生产需进行验证，在生产一定时间后需进行再验证，公司规定为每年一次。
验证批次为连续3个批次，而有些品种市场需求量较少，难以大批量生产，每年只能安排1-2批次，或间隔时间更长，这些品种只能做同步验证。
2、验证目的通过验证证明葡萄糖注射液生产工艺规程的重演性，在确认生产线各相关工艺参数符合规定的的基础上，是否能连续生产出符合法定质量标准要求的产品，并确认产品工艺规程是否适用可行。
3、验证品种及范围本次验证品种为葡萄糖注射液。
规格：□100ml：10g □100ml：5g□250ml：12.5g □250ml：25g□500ml：25g □500ml：50g4、验证依据及验证引用文件：4.1验证依据《药品生产质量管理规范》（1998修订）《药品生产质量管理规范实施指南》（2001）《药品生产验证指南》（2003）《中华人民共和国药典》（2005年版）国家药品标准及相关法定药品质量标准4.2验证引用文件4.2.1验证用生产操作规程文件检查人：日期：4.2.2验证用检测操作规程文件检查人：日期：5、产品验证小组及职责：5.1质保部：负责验证方案、报告的审核以及验证数据的分析。
5.2生产车间：①负责验证全过程项目的实施、人员、物料组织工作；②负责生产清场、清洁、消毒操作人员指导，生产记录的填写、药液配制检查、洗瓶的检查、药液灌封等各岗位的现场工艺、质量的检查工作；③负责验证方案的制订以及验证报告的形成；④负责灭菌工艺的检查、灯检、贴签、包装等各岗位的现场工艺、质量的检查工作。
细菌内毒素检验方法验证方案
1 概述：为了符合2010版GMP的要求，为了确保生产检验出符合预定用途和注册要求的产品，确保产品质量合格。
保证用药安全。
确认检查方法的科学持续稳定可靠适用性理想。
本方案对注射用水细菌内毒素检查方法进行验证。
2 验证目的：为确保注射用水细菌内毒素检测方法的专属性、灵敏度在本实验室条件下的适用性保证检测结果科学准确可靠，特制定此方案对注射用水细菌内毒素检查方法进行验证。
3 验证方式：结合实验室实际情况，按照2010版药典附录细菌内毒素检查方法检查。
由合格的检验人员对同一批供试品进行检查同一操作方法同一批供试品检查重复检查3次记录检查结果对比，看检查结果是否符合要求，重复性稳定性是否符合要求。
4 验证范围：适用于注射用水细菌内毒素检查方法验证，按照2010版药典附录细菌内毒素检查方法检查项下要求逐一进行。
5 验证结果的评价：根据药典合格标准来验证确认，确认检查方法检查结果的重现性稳定性是否符合要求。
适用性是否理想。
6 验证机构组成6.1验证委员会根据验证工作需要，常设验证委员会，负责所有验证工作的领导和组织，负责审批验证方案和验证报告、发放验证证书。
验证委员会针对每一个具体验证项目成立专门的验证小组，负责该验证项目的验证方案起草，实施、组织与协调，负责验证结果记录与评定，负责完成验证报告。
6.2验证委员会组成：姓名部门及职务验证委员会中职务验证工作中职责6.4职责：6.4.1 验证委员会：6.4.1.1 负责验证方案的审批。
6.4.1.2 负责验证的总协调工作，以保证本验证方案顺利实施。
6.4.1.3 负责验证数据及结果的审核。
6.4.1.4 负责发放验证证书。
6.4.2 验证小组：6.4.2.1 负责验证方案的制定和实施。
6.4.2.2 负责验证工作的组织与协调。
6.4.2.3 负责验证数据的收集和结果评定。
6.4.2.4 负责完成验证报告。
7文件准备和培训7.1所需文件已准备齐全。
7.2培训：在确认实施前，依据验证小组通过的方案，对参加验证人员培训，明确分工。
细菌内毒素检查验证方案模板
文件编号：**-**-** 验证文件注射用********细菌内毒素检查法验证方案********公司目录1 适用范围2 目的3 责任人4 样品的来源及实验准备5 内毒素限值的确定6 具体验证步骤5.1 鲎试剂灵敏度复核5.2 干扰实验5.3 供试品的内毒素检查7 注射用********细菌内毒素检查方法1 适用范围本验证方案适用于注射用********细菌内毒素检查法的验证。
2 目的建立该产品的细菌内毒素检查方法，并对其有效性进行评价，确保检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求。
3 责任人细菌内毒素检验员、QC主管。
4 样品的来源及实验准备4.1 样品的来源、使用的主要试剂及实验条件和仪器注射用********注射用溶剂：批号20100201(规格：5ml) 生产厂：********公司注射用********：批号20100201(规格：500mg) 生产厂：********公司鲎试剂（标示灵敏度为：0.25EU/ml）批号：1110192 规格：0.1ml 生产厂：湛江安度斯生物有限公司鲎试剂（标示灵敏度为：0.5EU/ml）批号：1101050 规格：0.1ml 生产厂：湛江博康生物有限公司细菌内毒素检查用水：批号：1201160 规格：2ml/支生产厂：湛江安度斯生物有限公司细菌内毒素工作标准品：批号1004020 效价：12EU/支生产单位：湛江安度斯生物有限公司实验用具:移液管、凝集管、三角瓶、试管、试管架、洗耳球、时钟、75%酒精棉、剪刀、砂轮。
其他玻璃实验用具：250℃1小时灭菌处理后使用。
4.2 实验准备4.2.1 玻璃器皿的洗涤将玻璃器皿放入铬酸洗液或其他热原灭活剂或清洗液中充分浸泡，然后取出将洗液空干，用自来水将残留洗液彻底洗净，再用蒸馏水反复冲洗三遍以上，空干后放入适宜的密闭金属容器中或用锡箔纸包好后再放入金属容器内，放置入烤箱。
4.2.2 除去玻璃器皿表面可能存在的外源性内毒素玻璃器皿置烤箱后，将烤箱调至250℃，待烤箱温度升至设定的温度后开始计时，干烤至少1 小时。
细菌内毒素检查验证方案
细菌内毒素检查验证方案一、引言细菌内毒素是一类具有强毒性的生物毒素，可以由细菌产生并释放到环境中。
其存在对于人类和动物的健康具有潜在的危害。
因此，建立一种可靠有效的细菌内毒素检查验证方案至关重要。
本文将介绍一种基于实验室技术的细菌内毒素检查验证方案。
二、实验目的本实验的目的是开发一种验证细菌内毒素检测的方法，以确保检测结果的准确性和可靠性。
具体目标包括：1. 确定合适的细菌内毒素检测方法；2. 确定验证方案的实施步骤；3. 评估验证方案的可行性和有效性。
三、实验设计1. 材料准备- 细菌内毒素检测试剂盒（根据实验需求选择合适的试剂盒）- 多个细菌培养菌株- 培养基和培养用具- 杂质过滤器- 试管和离心管等实验室常用器具2. 实验步骤1) 培养细菌菌株：选择多个细菌菌株进行培养，确保含有多种不同类型的内毒素。
2) 提取内毒素：将培养的细菌离心，取上清液，通过杂质过滤器去除细菌细胞残留和固体杂质。
得到的上清液即为细菌内毒素提取物。
3) 验证检测方法：使用细菌内毒素检测试剂盒对提取物进行检测，按照试剂盒说明书进行操作。
根据试剂盒结果，评估其准确性和可靠性。
4) 重复实验：根据上述步骤，重复多次实验以确保实验结果的稳定性和可重复性。
5) 数据分析：收集实验结果并进行统计分析，评估所选择的细菌内毒素检测方法的可行性和有效性。
四、实验注意事项1. 实验过程中要严格遵守实验室操作规范，注意安全。
2. 选择合适的细菌内毒素检测试剂盒，确保其适用于所需检测的内毒素类型。
3. 在提取内毒素时，要注意避免细菌细胞的污染。
4. 实验过程中要确保操作的准确性和重复性，避免人为误差的干扰。
5. 对于实验结果的分析，要进行统计学处理，确保数据的准确性和可信度。
五、预期结果通过本实验，预计将得到以下结果：1. 确定合适的细菌内毒素检测方法，验证其具有较高的准确性和可靠性。
2. 提供一个详细的细菌内毒素检查验证方案，使其可应用于实际生产中。
糖盐注射液细菌内毒素模板
细菌内毒素检验记录
名称葡萄糖氯化钠注射液检验日期2011.05.19 批号11051601 来源输液车间
规格500ml：葡萄糖25g与氯化
钠4.5g
检验依据中国药典2010年版二部批号规格生产厂家
鲎试剂0.1ml/支广西北海广东湛江福州新北（）（）（）
细菌内毒素检查用水2ml/支
广西北海广东湛江福州新北
（）（）（）
内毒素工作标
准品160EU/支
广西北海广东湛江福州新北
（）（）（）
鲎试剂灵敏
度：
0.25EU/ml 供试品内毒素限值：应小于0.50 EU/ml
取0.1ml/支的鲎试剂8支，每支加入0.1ml检查用水溶解备用。
取2支加入0.1ml检查用水。
（阴性对照2支）
内毒素标准品的稀释与计算：
①取160 EU/支+1.0ml检查用水混匀15min— 160 EU/ml内毒素溶液
②取0.2ml 160 EU/ml内毒素溶液+ 1.4ml检查用水— 20 EU/ml内毒素溶液
③取0.1ml 20 EU/ml内毒素溶液+ 1.9ml检查用水—1.0 EU/ml内毒素溶液
④取0.5ml 1.0EU/ml内毒素溶液+ 0.5ml检查用水— 0.50 EU/ml内毒素溶液（阳性照2
支）供试品稀释液：取本品ml，加入检查用水ml。
供试品阳性对照溶液：取供试品稀释液0.5 ml和浓度为 1.0 EU/ml的内毒素阳性对照溶液0.5 ml，混匀。
（供试品阳性对照2支）
供试品：取本品0.5 ml，加入检查用水0.5 ml。
（供试品2支）
检验结果
供试品阴性对照阳性对照供试品阳性对照————+ +++结论：符合规定
检验人：复核人：。
综合技能实训14 5萄糖注射液的细菌内毒素检查教案资料
1．确定检品的L值
L＝K/M
式中，L为供试品的细菌内毒素限值，一般以EU/ml、EU/mg或EU/U（活性单位）表示；K为人每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/（kg·h）表示，注射剂K＝5EU/（kg·h），放射性药品注射剂K＝2.5EU/（kg· h），鞘内用注射剂K＝0.2EU/（kg·h）；M为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，以ml/（kg·h）、mg/（kg·h）或U/（kg·h）表示，人均体重按60kg计算，人体表面积按1.62m2计算。注射时间若不足1小时，按1小时计算。供试品每平方米体表面积剂量乘以0.027即可转换为每千克体重剂量（M）。
三、学生分组完成操作，进行加样。
四、学生在老师指导下完成保温工作。
五、随机抽一名学生演示上述操作，由来自学们充当评委，指出操作不当之处。
六、根据中国药典，对检验结果进行判断。
七、老师组织组间评比，评比内容包括方案设计的合理性、操作的规范性、报告方法及检验结果的准确性等，由同学代表和老师共同综合上述各项打分。
S
供试品阳性对照
阳性对照
阴性对照
0.1ml水+0.1ml SMVD
0.1ml SMVD+0.1ml E2λ
0.1ml水+0.1ml E2λ
0.2ml水
（4）封闭管口，摇匀，放入37℃±1℃恒温水浴保温60分钟±2分钟，取出观察结果，记录结果。
将试管缓慢翻转180°，若管内凝胶显示坚实不变形为阳性，记录为“+”；若无凝胶出现，或虽有凝胶但不能保持完整，从管壁滑脱，均判定为阴性，记录为“－”。
4．结果判断若阴性对照溶液的平行管均为阴性，供试品阳性对照溶液的平行管均为阳性，阳性对照溶液的平行管均为阳性，试验有效。若检品S的两个平行管均为阴性，判定供试品符合规定；若检品S的两个平行管均为阳性，判定供试品不符合规定；若检品S的两个平行管中的一管为阳性，另一管为阴性，需进行复试。