张宁实验室实验规范化手册2010版
(完整word版)实验室质量手册
XXXXXXX有限公司实验室质量手册依据：ISO/TS16949:2009（7.6.3）及ISO/IEC17025:200501目录《实验室质量手册》修改记录02实验室概况及范围实验室概况实验室是公司计量管理﹑理化试验的技术机构。
实验室地址：实验室筹建于2008年7月，测量室于2008年底投入使用，测试室于2010年10月投入使用。
实验室范围公司为满足ISO/TS16949:2009标准中7.6.3条款“实验室要求”，依据ISO/IEC17025:2005《检测和校准实验室能力的通用要求》，并结合实验室实际情况编制了《实验室质量手册》。
《实验室质量手册》是描述实验室质量体系的纲领性文件，是实验室质量体系运行的行为准则和评审的依据，也是实验室质量保证能力的证实，手册所涉及的单位和员工都必须严格执行，确保实验室质量方针的实现。
对所有产品的检验和试验设备进行检定(外委) ﹑校准﹑检修，确保溯源统一﹑正确。
对公司所有产品提供内在质量检验及失效分析报告。
实验室开展的项目主要有：测量室：尺寸测量金属和橡胶材料硬度试验弹簧扭力测试测试室：高低温，湿度环境测试盐雾测试汽车门锁功能测试汽车门锁强度测试汽车门锁耐久测试汽车门锁灰尘测试汽车门锁水淋测试1 岗位职责1. 目的和范围1.1 为明确实验室各类人员的职责和权力以及相互关系特制定本程序。
1.2 本程序规定了实验室的组织机构，明确各部门的职责和相互关系，保证校准﹑检测工作的科学公正。
1.3 本程序适用于实验室的机构设置﹑职能分配。
2. 引用文件无3. 术语无4. 职责4.1 工程经理负责组织机构的设置﹑职能分配和资源的配置，任命关键岗位的人员，指定关键管理岗位的负责人4.2 实验室主管负责组织实施5. 要求5.1 组织机构图(见附图)5.2 员工行为规范a 严格执行《实验室质量手册》的规定b 实验室工作必须严格遵守工作程序，执行有关规程﹑规范和标准，不得违规操作或伪造数据c 履行职责，遵纪守法，与实验室工作无关的人员不得介入﹑干预实验室工作的进行d 样品到达后必须在规定的时间检出，不得超过规定的期限e 实验室的管理(包括环境﹑设备﹑仪器﹑原始记录等)要达到程序文件的要求f 实验室出据的检测报告要达到程序文件的规定要求g 客户要求的机密信息包括电子储存，传输结果和所有权不得转发或打印，需设定相应的访问权限。
临床微生物学实验手册
临床微生物学实验手册前言临床微生物学实验须知一实验规则临床微生物学实验的对象大多为致病性微生物，工作中经常使用电源和易燃物品，为了防止发生实验室感染与火灾、烧伤、触电等意外事故外，必须严格遵守下列规则。
1 进实验室应穿工作服，只带必要的文具和讲义等。
2 实验室内保持肃静、整洁，禁止饮食、吸烟和开玩笑。
实验时严肃认真、集中精力完成实验操作，操作过程中，不应谈话，不旁视，养成在室内手不触及口腔、头发及身体的习惯，长头发者诮将头发向后扎紧或戴工作帽，以防头发被污染或烧焦。
3 发生操作事故，工作环境被带菌材料污染，立即报告教师进行处理。
4 实验用过的带菌材料(如吸管、玻片等)必须立即放在指定的消毒缸内，不得放置实验台上。
待消毒或废弃物品放在指定地点。
实验室内任何物品不得带出室外。
5 实验完毕时，必须整理清洁实验台和实验室，关好水、电、门窗等。
6 离室前应用肥皂和水洗手，并用消毒剂擦手。
二实验课的基本要求1 实验前必须认真做好预习，教师将检查预习情况。
2 实验时严格遵守实验规则，认真做好每个实验。
3 实验后必须按本人所得实验结果如实写出实验报告，并通过复习有关理论知识，对自己的实验结果作出分析和解释。
4 实验课是本门课程的重要内容，教师将根据实验课表现，实验结果、实验报告及实验考核评定成绩，并作为总成绩的重要组成部分。
第一章临床细菌学基本技术第一节普通光学显微镜显微镜的光学原理、使用方法和保养详见有关教材。
第二节形态学检查技术1.2.1 不染色细菌标本的检查法不染色的细菌标本的镜检，虽可观察细菌的大小、形态，但主要用于观察细菌的动力。
（一）悬滴法【操作方法】1 取凹玻片，于凹窝内周围涂凡士林(可浆糊)少许。
2 在盖玻片中央放一接种环细菌的肉汤培养物。
3 将凹玻片反转，使凹窝对准盖玻片中央并盖于其上，然后翻转玻片，以小镊子或接种环柄轻加压力，使盖玻片与凹窝边缘沾紧。
如无凹玻片时，亦可在载玻片之适当位置上加凡士林，其中垫以其他物体，然后使盖玻片重叠于玻片之上。
药品微生物实验室规范指导原则
2010《中国药典》一部附录XVIII G 2010《中国药典》二部附录XIX Q
药品微生物实验室规范指导原则
药品微生物实验室规范指导原则
USP31版<1117>MICROBIOLOGICAL BEST LABORATORY PRACTICES
FDA《药品质量控制微生物实验室检查指南》 ISO/IEC17025《检测和校准实验室能力的通用要求》 CNAL/AC05 2003《实验室认可准则在微生物检测实验
药品微生物实验室规范指导原则
配制培养基使用的容器应是玻璃器皿或搪 瓷器皿如搪瓷筒、量筒、漏斗、三角烧瓶、刻 度吸管、试管、培养皿等。洗净，用蒸馏水冲 净，烘干后方可使用。禁用金属容器如铁、铜、 铝容器，避免金属离子与培养基成分结合，生 成有害物质，影响细菌生长。
配制培养基最常用的溶剂是纯化水，特殊 情况下需要用去离子水和蒸馏水，对热敏感的 培养基应用灭菌水和无菌容器配制与分装，配 制时若需加热助溶应注意温度不要过高。
药品微生物实验室规范指导原则
配制培养基必须矫正pH，干燥培养基也必须 对pH进行验证，高压灭菌前的pH应比最终pH高 0.2左右。
配制好的培养基应按照生产商提供或使用者验 证的参数进行灭菌。商品化的成品培养基必须附有 所用灭菌方法的资料，培养基灭菌一般采用湿热灭 菌技术,特殊培养基可采用薄膜过滤除菌。
药品微生物实验室规范指导原则
微生物实验室管理人员包括工作人员和监督人 员，其专业技能和经验水平应与他们的职责范围相 符。
管理人员也应接受系统的教育和微生物实验室 的培训如：管理技能、实验室安全、试验按排、预 算、实验室研究、实验结果评估和数据偏差的调查 及技术报告书写等。
应熟练的应用SOP有关内容到管理工作中；如 制定不同工作岗位实验人员的培训课程和继续教育 计划，随时掌握和了解试验人员的水平，根据每个 人的技术水平分配适宜的工作岗位。
中心实验室技术手册全册
中心实验室技术手册全册简介本实验室技术手册旨在提供对中心实验室各项技术的详尽说明，以便实验室成员能够正确、安全地操作设备和进行实验工作。
目录1. 实验室安全操作须知2. 常用实验设备操作指南3. 实验数据收集和分析方法4. 实验技术常见问题解答5. 实验室常见故障排查方法6. 实验室仪器维护保养手册7. 实验室环境管理与废物处理指南实验室安全操作须知本章节详细介绍了实验室安全操作的基本原则和注意事项，包括个人防护装备的使用、实验室紧急事故的应急措施和安全演练等内容。
常用实验设备操作指南本章节提供了常用实验设备的操作指南，包括实验室常用的离心机、显微镜、pH计、分光光度计等设备的使用方法和注意事项。
实验数据收集和分析方法本章节介绍了实验数据的收集和分析方法，包括数据记录的标准化、数据分析的常用方法和软件工具的使用等内容。
实验技术常见问题解答本章节汇总了实验过程中常见的问题和解决方法，例如实验结果异常、实验步骤不清楚等问题，并给出了相应的解答和建议。
实验室常见故障排查方法本章节提供了实验室常见设备故障的排查方法，包括故障现象的分析、故障原因的判断和故障处理的步骤等内容。
实验室仪器维护保养手册本章节介绍了实验室常用仪器的维护保养方法，包括定期清洁、零部件更换和设备校准等内容，以确保仪器的正常运行和使用寿命。
实验室环境管理与废物处理指南本章节详细说明了实验室环境管理的要求和操作指南，包括实验室物品和试剂的储存管理、废物分类和处理方法等内容。
以上是《中心实验室技术手册全册》的目录，希望能够为中心实验室成员提供有益的参考和指导，提高实验室的安全性和工作效率。
un 实验和标准手册
UN 实验和标准手册一、实验目的本手册旨在提供UN实验的标准操作流程和注意事项，以确保实验结果的准确性和可靠性。
通过遵循本手册，实验人员可以按照规定的方法和步骤进行实验，以确保实验结果的可比性和可重复性。
二、实验原理UN实验是一种常用的材料力学性能测试方法，用于测定金属材料在不同温度和应力条件下的屈服强度、蠕变性能和疲劳性能等。
实验原理基于金属材料的力学性能和温度应力之间的关系，通过在特定条件下对试样施加应力，观察试样的变形行为和失效模式，从而得出材料的力学性能指标。
三、实验步骤1. 试样制备：按照标准试样制备方法，将金属材料加工成标准尺寸的试样。
2. 试样处理：对试样进行表面处理，如清洁、脱脂、干燥等，以确保实验结果的准确性。
3. 温度控制：将试样置于温度可控的加热炉或冷却设备中，控制试样的温度。
4. 应力施加：将试样固定在实验机上，对试样施加应力，并记录实验过程中的变形行为和应力变化。
5. 数据记录：详细记录实验过程中的数据，如温度、应力、变形量等。
6. 结果分析：根据实验数据，分析材料的力学性能指标，如屈服强度、蠕变性能和疲劳性能等。
四、实验结果通过UN实验，可以得到金属材料在不同温度和应力条件下的屈服强度、蠕变性能和疲劳性能等指标。
这些指标可以用于评估材料的力学性能和耐久性，为工程设计和材料选择提供重要依据。
五、实验结论通过UN实验，可以得出金属材料的力学性能指标，并评估其在不同温度和应力条件下的耐久性。
这些结论可以用于指导工程设计和材料选择，提高工程结构的可靠性和安全性。
六、实验方法选择在进行UN实验时，应根据具体需求选择合适的实验方法。
常用的UN实验方法包括拉伸试验、压缩试验、弯曲试验等。
选择合适的实验方法可以确保实验结果的准确性和可靠性。
七、实验条件设定在进行UN实验时，应设定合适的实验条件，如温度、应力等。
这些条件应根据具体需求和材料特性进行设定，以确保实验结果的准确性和可靠性。
ISO15189质量管理体系检验科全套SOP文件5生化室作业指导书
ISO15189质量管理体系范本文件（第五册）生化室作业指导书文件编号：ABCD-3-SF-01~61第A版编制：审核：批准：生效日期：2006年8月8日ABCD人民医院检验科目录修订页血清总胆红素(T-BIL)测定1. 实验原理血清中的胆红素分为直接（结合）胆红素和间接（未结合）胆红素。
大多数方法是在1883年Ehrlich提出的重氮法胆红素测量法1，一些改良的方法已被用来增进反应。
这些改良的方法是使直接胆红素直接和重氮化合物进行反应，生成一种有颜色的化合物，而间接胆红素需要一种溶剂，如表面活性剂后才能进行反应。
申能总胆红素试剂是改良的重氮法。
使用一种稳定的重氮盐，2,4-二氯苯胺重氮盐（DCA），与胆红素反应，形成红色偶氮化合物，它在540nm吸光度最大。
在540/600nm时的吸光度与标本中总胆红素的浓度成正比。
胆红素+DCA 红色偶氮化合物表面活性剂2. 标本：2.1 病人准备：无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。
3. 标本存放：15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。
4. 标本运输：常温条件下避光保存运输。
5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。
6. 实验材料6.1 试剂：申能总胆红素试剂盒（141 0817170 1 试剂1＋试剂2）6.1.1 试剂组成试剂1：6×64 ml磷酸缓冲液40mmol/L氯化钠9g/L表面活性剂,稳定剂适量试剂2：6×16 ml2,4-二氯苯胺重氮盐1mmol/L盐酸30mmol/L表面活性剂适量6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂有效期为18个月。
试剂2必需避光保存。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
中国药品检验标准操作规程2010版
99.5.2
20～25℃培养 5～7 天，使大量的孢子产生。加入 3～5ml 含 0.05％（ml／m1）聚山梨酯 80 的 0.9％无菌氯化钠溶液，用无菌玻棒或接种环轻轻将孢子洗脱。然后可用一支 l0ml 无菌 球形毛细吸管，其管口用无菌棉花或纱布包扎且能过滤菌丝的装置，吸出孢子悬液至无菌 试管内，将孢子悬液稀释至每毫升含 50～l00cfu。 9.5.4 进行验证试验时，若因没有适宜的方法消除供试品中的抑菌作用而导致微生物
9.3
结果判定对照组的菌回收率均应不低于 70％。若供试品组的菌回收率均不低于
70％，则可按该供试液制备方法和菌落计数法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌数；若任 一次试验中供试品组的菌回收率低于 70％，应建立新的方法，消除供试品的抑菌活性，并 重新验证。 9.4 9.5 验证试验可与供试品的细菌，霉菌及酵母菌计数同时进行。 注意事项 黑曲霉菌的菌液制备 将黑曲霉菌接种至改良马丁琼脂斜面培养基上，于
中国药品检验标准操作规程2010微生物限度检查法第22页共27页控制菌检查用培养基适用性检查项目菌株及判断指标培养基测试菌株测试特性测试指标胆盐乳糖培养基大肠埃希菌促生长能力浑浊铜绿假单胞菌浑浊金黄色葡萄球菌抑制能力未见浑浊mug培养基大肠埃希菌促生长能力浑浊大肠埃希菌指示能力366nm有荧光或麦康凯琼脂大肠埃希菌促生长能力回收率乙型副伤寒沙门菌回收率大肠埃希菌指示能力颜色形态同对照乙型副伤寒沙门菌颜色形态同对照乳糖胆盐发酵管大肠埃希菌促生长能力浑浊产气金黄色葡萄球菌抑制能力未见浑浊乳糖发酵培养基大肠埃希菌促生长能力浑浊大肠埃希菌指示能力营养肉汤乙型副伤寒沙门菌促生长能力浑浊金黄色葡萄球菌促生长能力浑浊四硫磺酸钠亮绿培养乙型副伤寒沙门菌促生长能力上清浑浊
中国药品检验标准操作规程 2010 版
(完整版)实验室手册
10.检测人员的工作质量职责.
10.1负责规定的理化测试工作，并对测试数据结果的正确性，完整性及测试报告的准确性和公正性负责。
10.2.负责测量设备仪器的保管、使用和维护。
10.3.保证测量设备技术状态满足规定及有关法规的要求。
10.4.收集、保管有关质量记录。
13.4.检测设备及零配件台帐。
13.5.设备运行记录本。
13.6.内部记录检测本。
13.7.检测报告。
13.4.ＺＫＹ－２型：哑铃制样机安全操作规程。
13.5.ＳＲＺ－４００Ｃ型：熔体流动速率测定仪安全操作规程。
13.6.分析天平安全操作规程。
13.7.检测室环境要求。
13.7.检测式样调节的标准环境。
14.记录
14.1.外来人员参观的登记记录本。
14.2.检测实验的记录。
14.3.设备维护、保养记录本。
8.检测标准的使用
8.１.正确安装，调试
8.2.正确使用检测标准。（按国家标准优先执行，行业标准、其次是企业标准特殊情况除外）。的设备仪器，应立即停止使用，并报告相关领导。经调、修并重新校准合格后方能使用。
8.4.检测用设备仪器，量具等一律不得外借（即检测设备、仪器不能离开理化检测室使用），如特殊情况需要外借时，应经公司领导批准,并由理化检测操作人员操作。（借出人员应作借出存档记录）
6.对上岗人员的基本要求：
在具备软件和硬件条件后，技术课负责组织对操作人员进行培训（时间2-3个月,达到掌握相关标准独立制作满足检测要求的标准样条,熟练操作各种设备）。经考试合格后，由企管课发给上岗证，持证上岗，每一台设备操作至少两人取得上岗证。
分子实验室手册
无菌技术操作
1 何时使用无菌技术 2 无菌技术 3 保护实验人员
Logo
什么时候使用无菌技术
➢当必须进行无菌操作时
无论什么时候在进行活的有机体实验或是为进 行活体实验二准备培养基、缓冲液、培养容器 等时，必须使用无菌操作技术，例如：
• 准备转化用的大肠杆菌培养物 • 制备LB平板培养基 • 分装细胞 • 过滤培养基的血清 • 打开和溶解冻细胞
溶剂使整个溶液的体积接近所需体积的90%。
• 6.将溶液倒回烧杯或三角瓶中，调pH值。 • 7.在烧杯上标记好内容物。
五、测定pH值
➢ 校准PH计
• 至少两种PH标准溶液（通常使用PH4和10的标准
液。）
• 3~4个50ml的玻璃或塑料药品杯 • 棉纸
➢校准PH计
• 1.将电极从浸泡缓冲液中拿出，用蒸馏水冲洗，用棉纸
➢如何分装
①配制储备液须知：
• 物质的工作浓度 • 在什么溶剂中溶解物质 • 分装的体积
②决定配成几倍。 ③准备好无菌的管子，做好标签。如果要分装的
物质必须冷藏，就把管子置于冰上。 ④配制浓溶液，如果需要，过滤。 ⑤把配好的无菌溶液分装到试管,存放在冷藏库或
者是合适温度的架子上。 ⑥在记录本上做好记录。
4℃
紧急贮藏
细胞
平板或穿刺培养物 4℃
液体培养物
4℃
冻干培养物
4℃
冷冻培养物
-70℃
放射性同位素
32P 33P 35S 125I 3H 14C
核苷酸态的，-20℃；磷酸盐的，4℃ 4℃ 甲硫氨酸的硫，-70℃ 125I 蛋白质A，4℃；单质 125I 通风橱室温保存 4℃ 4℃
储存试剂 ➢储存试剂的须知 ➢储存和丢弃须知的获取 ➢怎样保存需要干贮的试剂 ➢如何储存光敏感试剂 ➢如何储存氧敏感试剂
TORCH临床应用及结果解读
TORCH系列测定可检测是否存在对上述病原体的抗体，以帮助确定 感染状态的特征。
Stegmann et al. (2002 Aug) Curr Womens Health Rep. 2(4), 253-8 Andre J Nahmias, et al. The ToRCH complex-perinatal infections. Pediatric Research (1971) 5, 405–406; .
测 160
结 果
140
（ 120
100
抗体纵向检测：
IgG
✓ 排除假阳性
✓ 排除持续阳性
AU/ml
80
60
） 40
假阳性/持续阳性
20
IgM
0
-20 0 11 24 3 8 4 515 565 759 865 9 6710 7121 7142 1739 148415 8816 95 99
感染时间（天）
没有血清学证据 证明以前感染过， 应提供怎样避免 弓形虫感染的知 识
妊娠期随访发现 阳转
如果IgG+、 IgM+或仅IgG+
处理流程
在妊娠初期3个月内正常状态下进行
弓形虫
IgG+ IgM-
妊娠<18周，过去 感染或妊娠前感染 患先天性弓形虫并 风险为0，除非患者 伴随有免疫性疾病
IgG- IgM+ 1-3周后重新检测
3 ToRCH检测结果解读及处理流程
妊娠前（准备近期怀孕者）或妊娠期ToRCH筛查
• 确定孕妇的基础免疫状况 • 孕中筛查回顾性分析的依据
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验规范手册2010年4月制目录第一章各实验所需主要试剂及溶液的配制1. 细胞培养 (1)2. 质粒的提取和纯化 (1)3. 趋化运动实验 (1)4. Western Blotting (2)5. RT-PCR (4)6. 肌动蛋白聚合实验 (5)7. Matrigel体外侵袭实验 (5)8. 免疫共沉淀实验 (5)第二章实验规范化流程1. 细胞培养相关技术 (7)2. 划痕实验 (8)3. 趋化运动实验 (8)4. 粘附实验 (10)5. 肌动蛋白聚合实验 (11)6. Western Blotting实验 (11)7. RT-PCR实验 (13)8. 免疫共沉淀实验 (15)9. 苏木精-伊红染色法 (16)10. 免疫组化实验 (17)11. 细胞免疫组化实验 (18)12. 免疫荧光 (19)13. Matrigel体外侵袭实验 (21)14. 细胞周期检测 (21)15. RNAi转染实验 (22)16. 质粒DNA转染实验 (22)17. 转化实验 (23)18. SCID小鼠的饲养 (23)附件1 不同培养容器中细胞数 (25)附件2 抗体条件 (26)第一章各实验所需主要试剂及溶液的配制1. 细胞培养所需：1×PBS (pH 7.2) ：NaCl 8.00gKCl 0.20gNa2PO4·12H2O 2.083gKH2PO4·12H2O 0.261g加DDW至950ml，HCL 调节pH至7.2，蒸馏水定容至1000ml，高压灭菌。
2. 质粒的提取和纯化所需：1)LB培养基：胰化蛋白胨 10g酵母提取物5gNaCl 10g加蒸馏水至950ml，调节pH至7.2，蒸馏水定容至1000ml，高压灭菌。
2)SOC培养基：胰化蛋白胨 20g酵母提取物5gNaCl 0.5g加蒸馏水至950ml，至溶质完全溶解后加入10ml 250mmol/L KCl溶液，调pH值至7.0，用蒸馏水定容至1000ml，高压灭菌，在溶液使用前，加入5ml 灭菌的2mol/L的MgCl2。
待冷却至60°C以下，加入20ml灭菌的1mol/L葡萄糖溶液。
3)用于铺盘的含抗生素的LB培养基：在100ml LB培养基中加入1.5g琼脂(Argrose)，高压灭菌后冷却至60°C加入200µl氨苄青霉素（工作浓度为100µg/ml），用于铺盘。
3. 趋化运动实验所需：1) 所需试剂：趋化小室Neuro probe公司聚碳酸酯膜Neuro probe公司人源趋化因子EGF Chemicon 公司Fibronectin Sigma公司2) Binding medium (BM)：RPMI-16400.1%BSA25mM HEPES4. Western blotting所需：1) 1×SDS lysis buffer：Tris-HCl (pH 6.8) 0.757g 62.5mMSDS 2g 2%甘油10ml 10% 加蒸馏水定容至100ml，分装于15ml离心管中，-20°C冻存。
2) RIPA裂解液：1M Tris-HCl (PH=7.5) 25mL 50mM10% Triton X-100 50mL 1%10% 去氧胆酸钠 25mL 0.5%20% SDS 2.5mL 0.1%5M NaCl15mL 150mM1M MgCl2 5mL 10mM20% NaN3 0.5mL 0.02%100mM PMSF 1mMH2O 371.5mL3)5×SDS凝胶加样缓冲液：1M Tris-HCl (PH=6.8) 2.5mL 250mMSDS 1g 10%100% 甘油 2.5mL 25% 溴酚蓝 2.5mg 25mg/100mL混匀后，分装于1.5mLEP管中，4°C保存。
4)Transfer Blotting Buffer（蛋白转移缓冲液）：甘氨酸 14.41gTris碱 3.03g甲醇200ml定容于1000ml 蒸馏水中，溶于1L蒸馏水中，甲醇最后加，室温保存，次液可重复使用3次。
5)5×泳动Buffer：Tris 15g甘氨酸 72gSDS 5g溶于1000ml 蒸馏水中，溶解后室温保存。
6)10×丽春红储存液：丽春红S 2g三氯醋酸 30g磺基水杨酸 30g加蒸馏水至100ml，用时稀释10倍。
7) Solution 1：丙烯酰胺 58.4gN, N-甲叉双丙烯聚酰胺(BIS) 1.6g溶于200ml蒸馏水中，避光，4°C保存。
8) Solution 2：Tris 36.3gSDS 0.8g溶于150ml蒸馏水中，调pH至8.8，加蒸馏水定容至200ml，室温保存。
9) Solution 3：Tris 6.06gSDS 0.4g溶于150ml蒸馏水中，调pH至6.8，加蒸馏水定容至200ml，4°C保存。
10) 25%过硫酸胺 (APS)：APS 0.25g蒸馏水1ml分装于每个200uL，-20°C保存。
4°C一周有效。
11) 10% SDS溶液：SDS 10g，加入蒸馏水定容至100ml，保存于室温。
12) Blocking buffer（封闭液）：5% 脱脂奶粉，TBST溶解，4°C保存。
13) 10×TBS：Tris 24.2gNaCl 80g溶于1000mL蒸馏水中，HCl调PH到7.6。
用时稀释至1×，每1000ml TBST 加入0.5ml Tween-20。
14）考马斯亮蓝染色液甲醇 180mL醋酸20mL0.5g 考马斯亮蓝ddH2O 180mL配制时，先用甲醇溶解染料，再用醋酸和水混匀后，过滤，室温保存。
15) 洗脱抗体缓冲液1M Tris(PH 6.7) 6.25mL20% SDS 10mL14M beta-Me 710uLH2O 83mL50°C洗涤30分钟。
16)1M Tris-HClTris 30.29g蒸馏水200mL溶解后，HCl调整PH值，并用蒸馏水定容到250mL，室温保存。
5. RT-PCR所需：1) 0.1% DEPC水：在1000ml蒸馏水中加入DEPC溶液1ml，胶塞封口后用力震荡使DEPC溶液充分溶解，37°C放置过夜，高压灭菌。
2) 5×TBE电泳缓冲液：Tris-base 54g硼酸 27.5g0.5M EDTA (pH8.0) 20ml加蒸馏水定容至1000ml。
3) 溴化乙啶 (10mg/ml)：在20ml 0.1% DEPC水中溶解0.2g溴化乙啶，混匀后分装，于4°C避光保存。
6. 肌动蛋白聚合实验所需：1) 所需试剂：Alexa Flour 568 phalloidin Invitrogen公司2) F- buffer：5mM EGTA （100×）0.5M EGTA2mM MgCl2（500×）1M MgCl2PBS（phosphate-buffer saline）pH=6.87. Matrigel体外侵袭实验所需：1)Transwell小室：24孔板配套的小室，膜孔径为8.0µm(Corning Inc.)。
2)上层培养液：上层培养液采用无血清培养基，为维持渗透压，加入0.05-0.2%BSA。
3)细胞：胶质瘤LN-229细胞，提前用无血清培养基饥饿细胞12h，再进行实验。
4)基质胶：人工重构基底膜材料Matrigel(BD Biosciences)，是一种细胞外基质，4°C时是液体，在37°C会逐渐凝固成胶状。
主要成分为层黏连蛋白和Ⅳ型胶原。
5)下层培养液：含10%FBS的RPMI-1640培养液。
6)细胞培养板：用于Transwell侵袭实验的24孔细胞培养板(Corning lnc.)，与Transwell小室相配套。
8. 免疫共沉淀所需：1) Protein A 与Protein G的选择：Rabbit来源的抗体的使用Protein A大部分Mouse来源的抗体Protein A与Protein G均可使用，但是mouse IgG1和mouse 多抗来源的抗体必须使用Protein G2) 细胞裂解液：Tris-triton：40mM Tris120mM NaCl1%Triton X-100（该裂解液用于普通IP）HEPES-CHAPS：40mM HEPES120mM NaCl0.3% CHAPS（该裂解液用于mTOR复合物的特殊蛋白与蛋白间的IP）使用时均加入: 1mM的NaF （200×）200mM NaF1mM的Na3VO4 （200×）200mM Na3VO41×Cocktail （50×）Cocktail可选择性加入：EDTAPMSF第二章实验规范化流程一、细胞培养相关技术实验进行前：无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30分钟灭菌并开启无菌操作台风扇运转10min。
1. 培养传代：1) 细胞在含10%FBS、100U/ml的青霉素、100U/ml的链霉素的RPMI-1640(或DMEM)培养液中，放入37°C，5%CO2孵化箱中孵育，待细胞融合到约90%时，做传代以保持细胞的活力；2) 倒掉培养液，PBS冲洗，加入0.25%胰酶消化液，37°C孵育3-5min；3) 镜下观察至细胞形态变圆、间隙变大时，加入RPMI-1640(或DMEM)+10%FBS培养液终止消化；4) 以吸管上下吸放数次以打散细胞团块，混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，以正常培养条件培养。
补加培养液，在37°C孵箱中培养并在盖上标明传代的次数及换液的日期。
2. 细胞复苏：1)细胞从液氮中取出后迅速放入37°C水浴中，并不时摇动，水面高度不可接近或高过冷冻管的盖沿，否则易发生污染，在1分钟内使其完全融化，缩短常温下细胞与DMSO的接触时间；2)将细胞移入15ml离心管中加入RPMI-1640(或DMEM)+10%FBS培养液5ml，1000转/min离心10min；3)弃上清，加入RPMI-1640(或DMEM)+10%FBS培养液6ml重悬细胞；4)细胞移入培养瓶，37°C，5%CO2孵化箱中孵育。
3. 细胞冻存：1)细胞约90%融合时，倒掉培养液，PBS冲洗；2)加入0.25%胰酶消化液，镜下观察至细胞形态变圆，间隙变大时，加入RPMI-1640+10%FBS培养液终止消化；3)吹打悬浮细胞，1000转/min离心5min；4)弃上清，加入冻存液（DMSO 1份，RPMI-1640+10%FBS培养液9份）1ml；5)移入冻存管，每个冻存管加入1-1.5ml细胞悬液，保存于-80°C冰箱双层泡沫盒内。