血清肌酸激酶活性测定和前白蛋白测定详解
血清肌酸激酶活性测定和前白蛋白测定
二、试剂
1.128mmol/L咪唑-醋酸盐缓冲储存液 （pH7.0， 0.25℃） 2.应用试剂Ⅰ 3.应用试剂Ⅱ 4.待测标本
三、操作步骤
1.手工操作 现以具有37℃恒温比色池的分光光度计为例，说 明操作过程。 （1）吸应用试剂Ⅰ2mL加入测定管中，加血清 100μL，混合，放入37℃水浴至少5min。 （2）在37℃水浴中预温应有试剂Ⅱ至少5min。 （3）加入应有试剂Ⅱ200μL，混合，转入3mL比 色皿Ⅲ（1.0cm光径），立即放入恒温比色槽内。 （4）待120s的延滞期后，在340nm波长处，连续 监测线性反应期吸光度变化速率（120s），以吸 光度增加的速率计算血清中CK的活性浓度。
血清肌酸激酶 活性测定
Ⅰ连续监测法测 定血清肌酸激酶
一、检验原理：
磷酸肌酸＋ADP CK 肌酸＋ATP ATP＋葡萄糖 HK 6－磷酸葡萄糖＋ ADP ＋ 6－磷酸葡萄糖＋NADP G6P-DH 6－磷酸葡萄糖酸＋NADPH
原理：
利用酶偶联反应原理连续监测NADP,后
者引起340nm吸光度的增高，在340nm 监测单位时间内NADPH的生成量，可 计算出CK的活性浓度。
2.自动化生化分析仪操作程序的设置 按手工操作要求设置参数为：系数3698、温 育时间min、滞留时间120s、比色皿光径 1.0cm、稀释倍数23、血清占反应液体积分 数0.0430
四、临床意义
1、CK主要存在于骨骼肌和心肌，在脑组织 中也有存在。正常人血浆中酶活性很低。血 清中CK活性的变化主要见于下列情况。 (1) CK主要用于心肌梗死的诊断：心肌梗死 会出现血清CK活性明显变化。心肌梗死发病 的早期，即发病后2~4小时此酶即开始升高， 12~48h达最高值，可高达正常上限的10~12 倍，在2~4天降至正常水平。此酶对诊断心 肌梗死较其他的心肌酶谱AST、LD的阳性率 高，特异性强，是用于心肌梗死早期诊断， 估计病情和判断预后的较好指标。病毒性心 肌炎时CK也有明显升高，而且样品溶血情况 不影响CK活性的测定。
血清前白蛋白(PA)—生化检测项目
血清前白蛋白（PA）
一、检测原理
试剂中的抗前白蛋白抗体与样品中的前白蛋白抗原进行抗原—抗体反应，形成不溶性复合物，而产生浑浊，浊度的高低与样品中前白蛋白的浓度成正比，在415nm或694nm波长处进行终点比浊法测定，而求得前白蛋白的浓度。
二、参考区间
血清：150—350mg/L
三、临床意义
1、血清前白蛋白是肝脏合成的一种糖蛋白。
2、血清前白蛋白测定可反映肝脏合成和分泌蛋白质的功能，可作为肝功能损害的早期指标以及提示一些疾病的变化及预后。
3、升高：急性肝炎恢复期、有肝损害者戒酒后、霍奇金病、肾病综合征
4、降低：重症肝炎、急性肝炎、慢性活动性肝炎、非代偿性肝硬化、肝癌、阻塞性黄疸、溃疡性结肠炎、甲状腺功能亢进、营养不良等。
比较两种方法测定血清中肌酸激酶同工酶质量与活性在急性心肌梗死诊断中的意义
比较两种方法测定血清中肌酸激酶同工酶质量与活性在急性心肌梗死诊断中的意义血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)增高是目前公认的诊断心肌梗死(AMI)最重要的指标之一[1]，特别是对于心电图无Q波的急性心肌梗死(AMI)和再发心肌梗死。
由于血清CK-MB活性时常收到干扰因素的影响，因此选择一种灵敏度高、所受干扰因素影响小的检测方法是非常必要的，对早期诊断和治疗AMI具有重要的意义。
本文通过对AMI，非AMI，健康对照三组的血清CK-MB的质量和活性的检测比较，来探讨肌酸激酶同工酶（CK-MB）质量与活性在急性心肌梗死诊断中的意义，现报告如下：1.资料与方法1.1 一般资料按照2000世界卫生组织(WHO)提出的急性心肌梗死的诊断标准①缺血症状;②心电图出现病理性Q波;③心电图呈缺血改变（ST段抬高或降低）;④冠状动脉有异常[2]。
AMI组：选取2010年5月-2010年12月就诊于我院急诊的AMI患者43，其中男性31例，女性12例，年龄41-86岁，平均年龄52岁；非AMI组:选择就诊于我院急诊科的CK-MB活性增高的非急性心肌梗死的患者36例，其中男性22例，女性14例，年龄32-83岁，平均年龄45岁；健康对照组：选取来我院体检中心体检者38例，其中男性21例，女性17例，年龄28-75岁，平均年龄38岁；三组人员年龄无统计学差异。
1.2仪器和试剂：日本OLYMPUS AU2700全自动生化分析仪检测试剂为原装进口配套试剂;德国罗氏公司生产的电化学发光免疫分析仪601 检测试剂为原装进口配套试剂。
1.3 方法：AMI组和非AMI组患者入院立刻取静脉血3ml，健康对照组查体时取静脉血3ml，37℃水浴5分钟，3500r/min离心8分钟，取血清，在相同条件下分别通过OLYMPUS AU2700检测CK-MB活性，通过罗氏601检测CK-MB质量。
1.4 统计学处理：通过SPSS13.0统计，计量资料以均数±标准差(-x±s)表示，采用t检验。
血清肌酶谱在不同类型肌肉病中的鉴别诊断价值
血清肌酶谱在不同类型肌肉病中的鉴别诊断价值
血清肌酶谱是一种常用的用于肌肉病鉴别诊断的检测手段，通过检测血清中的肌酶水平来判断肌肉损伤的程度和类型。
常见的血清肌酶包括肌酸激酶(CK)、天门冬氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)等。
在不同类型的肌肉病中，血清肌酶谱的变化具有一定的特异性。
在进行鉴别诊断时，需要综合考虑以下几个方面：
1. 肌酸激酶(CK)：CK是最常用的肌肉损伤指标之一，其水平
在肌肉损伤后的数小时内升高，并在数天内恢复。
在鉴别诊断中，CK的升高可以提示肌肉炎症性疾病、肌肉营养不良症等。
不同类型的肌肉病CK的升高程度和持续时间也有所不同。
2. 天门冬氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸酶(AST)：ALT
和AST是常规肝功能指标，但也能反映肌肉损伤。
在肌肉病中，ALT和AST的水平往往会升高。
特别是在肌营养不良症、代谢性肌病等疾病中，ALT和AST的升高较为明显。
3. 乳酸脱氢酶(LDH)：LDH是一种细胞内酶，其水平在细胞损伤后会升高。
在肌肉病中，由于肌肉细胞受损，LDH的水平
也会上升。
LDH的升高与肌酸激酶的升高程度并不完全一致，因此在鉴别诊断时需要综合考虑。
需要注意的是，血清肌酶谱虽然在肌肉病的鉴别诊断中具有一定的价值，但不能单凭肌酶水平来做出确诊，还需要结合临床
表现、影像学检查等综合判断。
此外，不同肌酶在不同类型的肌肉病中的变化也有差异，因此具体的诊断还需要个体化评估。
实验十二血清肌酸激酶测定与应用
上清液
0.5
0.5
0.5
α-萘酚溶液
1
1
1
双乙酰液
0.5
0.5
0.5
置37℃水浴保温15 min
蒸馏水
3
3
3
离心3~5min， 520nm波长处进行比色
读取各管的光密度
计算：
⑵肌酸磷酸激酶检测试剂盒法：
3 实验器材与试剂 ⑴器材
⑴器材
试管、分光光度计、分析天平、采血装置（注射器）、水浴箱、离心机
混合底物
01
02
03
04
⑵试剂
pH 7.4 三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液：称取三羟甲基氨基甲烷（Tris）2.4g，加蒸馏水至100 ml，再加入0.2 N盐酸88.8 ml及无水硫酸镁0.34g，调节pH至7.4。此液在室温下可保存数月。
5 注意事项
红细胞中肌酸磷酸激酶活力很低，故溶血标本不影响测定结果。 混合底物的pH要求准确。 氧氧化钡和硫酸锌要滴定至恰好等量，否则离心后会出现混浊。特别是钡离子多时，不能完全被硫酸根清除尽，使显色混浊而影响测定结果。 肌酸磷酸激酶活力单位定义：以1 ml血清在37℃与底物作用1小时，生成1μM肌酸为1个肌酸磷酸激酶活力单位。 酶的活力太高时，应将血清用Tris-HCl缓冲液稀释后再行测定，结果乘以稀释倍数。 因α-萘酚本身颜色不恒定，试剂空白每次深浅不同，故不能用标准曲线工作法。
012 M磷酸肌酸溶液：称取磷酸肌酸钠（C4H8O5-O4PNa3·6H2O）436 mg，加蒸馏水至100 ml，调节PH至7.4，保存于-25℃或普通冰箱上层冰盒中，可用一个月左右。
001 M ADP溶液：称取ADP钠盐0.233g，加蒸馏水至100 ml，调节PH至7.4，保存于-25℃或冰箱上层冰盒中，可用一个月左右。
19血清肌酸激酶测定
19血清肌酸激酶测定一、目的肌酸激酶（CK）又称肌酸磷酸激酶（CPK）。
主要存在于骨骼肌、心肌和脑组织的胞质和线粒体中。
正常人血清中CK活性很低，当上述组织受损时，CK进入血中，使血中CK 随即上升。
二、方法连续监测法（N—乙酰半胱氨酸法）三、原理磷酸肌酸肌酸+ATPATP+ 葡萄糖HK 6—磷酸+ADPG6PDH 葡萄糖—6—磷酸+NADP+6—磷酸—葡萄糖酸+NADPH+H +四．标本1.静脉抽取病人空腹血，置于洁净干燥试管或含促凝剂的真空管内。
2.采血后应立即送到检验科生化室。
3.样品收到后立即分离血清，不能及时测定的血清应于2-80C保存。
4．严重溶血或脂血的标本不能测定。
五．设备及试剂1．希迈全自动生化仪。
2．上海复星长征公司肌酸激酶试剂。
3．肌酸激酶剂应贮存于2—8℃冰箱。
六．操作步骤1．样本的准备：将编好号的样品离心，取血清加入样品杯放到样品盘的规定位置，再把样品盘放到仪器中相应位置。
2．试剂的检查：每天测定前先检查各种试剂的数量、效期、定标等情况，认无误后方可进行测定。
3．操作方法：详见希迈生化仪操作手册。
七．质量控制每天操作过程中应使用上海复星长征公司的生化质控血清至少做一次室内质控，每年定期参加海南省临检中心所组织的室间质评。
八、干扰因素1、手术后，反复肌肉注射，剧烈运动等，CK活性会升高。
2、不同年龄、性别存在差异。
3、红细胞内不含CK，但红细胞内含有腺苷酸激酶（AK）能催化ADP直接转化成ATP，使CK增高。
九、参考区间24—195U/L十、实验室解释1、CK主要存在于骨骼肌和心肌，在脑组织中也有存在。
各种类型进行性肌萎缩时，血清CK活性均可增高。
神经因素引起的肌萎缩如脊髓灰白质炎时活性正常，皮肌炎时CK活性可有轻度或中度增高。
急性心梗后2—4小时就开始升高，可高达正常上限的10—12倍。
CK对诊断心梗较AST、LDH特异性高，但此酶增高持续时间短，2—4天就恢复正常。
病毒性心肌炎时也明显升高，对诊断及预后有参考价值。
肌酸激酶检测方法
肌酸激酶检测方法肌酸激酶（Creatine Kinase，CK）是一种存在于细胞质和线粒体中的酶，能催化肌酸磷酸盐（creatine phosphate，CP）与ADP之间的磷酸转移反应，生成肌酸（creatine）和ATP，为供能储备提供了重要的基质。
肌酸激酶检测方法是通过测定体内血清或尿液中的肌酸激酶活性来评估体内的肌肉和心肌等组织受损程度。
这种检测方法广泛应用于临床诊断中，特别是对急性心肌梗死的早期诊断起到了重要的作用。
肌酸激酶检测方法一般包括血清检测和尿液检测。
下面将详细介绍这两种检测方法及其相关的注意事项。
1. 血清检测肌酸激酶的血清检测方法一般采用酶促荧光法、酶促免疫法、比色法等。
其中最常用的是酶促荧光法。
（1）酶促荧光法酶促荧光法是一种通过在底物与酶催化下发光产生信号，进而测定酶活性的方法。
该方法通过测定在特定条件下底物水解的速率，即可计算出肌酸激酶的活性。
酶促荧光法通常由两个步骤组成：底物与酶反应和读数。
首先是将底物与酶混合，使其反应产生化学荧光。
然后使用荧光分析仪读取发光的强度，根据标准曲线计算出待测样品中肌酸激酶的浓度。
（2）注意事项a. 空腹检测：由于肌酸激酶在多种组织中都有分布，因此血清中的肌酸激酶可能来自多个源头，比如肌肉、心肌、脑组织等。
为了减少其他组织来源的肌酸激酶对结果的干扰，一般要求患者在8小时内禁食，并且避免剧烈运动。
b. 时间窗口：肌酸激酶是一个特殊的指标，其峰值活性在损伤后的6-24小时之间，通常在2-3天后恢复正常水平。
因此，若对心肌梗死等疾病进行早期诊断，需要在损伤发生后的6-24小时内进行检测。
c. 辅助检测：肌酸激酶的检测结果是个综合指标，虽然对某些疾病的诊断具有重要的参考价值，但并非完全特异。
因此，在临床上常结合其他生化指标如心肌肌钙蛋白（cTroponin）等进行综合分析。
2. 尿液检测尿液中的肌酸激酶主要来自于肾小球滤过的肌酸激酶，因此，尿液中的肌酸激酶活性与血清中的活性相关。
肌酸激酶测定方法
肌酸激酶测定方法
肌酸激酶测定方法是一种常见的生化分析技术，用于评估细胞内肌酸激酶(CK)酶活性的水平。
肌酸激酶是一种酶，存在于多种组织和细胞内，包括肌肉、心脏和脑部组织。
肌酸激酶的水平通常被用作一种生物标志物，以帮助诊断心肌梗死、肌无力症、红细胞破裂等疾病。
常用的肌酸激酶测定方法包括酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫荧
光法(IF)、放射性免疫沉淀法(RIA)等。
其中，ELISA法是最常用的
方法之一，它利用特异性抗体与肌酸激酶结合，再通过酶标记技术进行检测和定量。
肌酸激酶测定方法的操作步骤一般包括样品的制备、试剂的配制、反应的进行和结果的读取。
在样品制备中，通常需要将含有肌酸激酶的样品(如血液、尿液等)离心、稀释等处理，以获得适宜的测量浓度。
在试剂配制方面，需要根据具体的检测方法选择合适的试剂，并按照指导书的要求进行配制。
反应的进行通常需要在特定的温度、时间、pH等条件下进行，以保证反应的稳定和准确性。
结果的读取可以通
过光度计、荧光计等仪器进行，也可以通过目视判断等方法进行初步分析。
总的来说，肌酸激酶测定方法是一种简单、快速、可靠的生化分析技术，广泛应用于医学、生物学等领域。
在实际应用中，需要根据具体的研究目的和需求选择合适的检测方法，并注意操作规范和安全。
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临床意义 课本P109
❖ 1.作为营养不良的评价标准。其评价标准： PA0.2~0.4g/L为正常，0.1~0.15g/L为轻度缺 乏，0.05~0.1g/L为中度缺乏，<0.05g/L为严 重缺乏。
❖ 2.作为肝脏损害的评价指标。PA作为营养不 良和肝功能不全的指标比清蛋白和转铁蛋白 敏感性更高。
估计病情和判断预后的较好指标。病毒性心 肌炎时CK也有明显升高，而且样品溶血情况 不影响CK活性的测定。
❖ （2）肌营养不良症、皮肌炎、骨骼肌损伤等 也可导致CK升高。脑血管意外，脑膜炎，甲 状腺机能低下症等疾病及一些非疾病因素 （如剧烈运动，各种插管及手术，肌肉注射 冬眠灵和抗生素等）也可能引起CK活性增高。
二、试剂
❖ 1.128mmol/L咪唑-醋酸盐缓冲储存液 （pH7.0， 0.25℃）
❖ 2.应用试剂Ⅰ ❖ 3.应用试剂Ⅱ ❖ 4.待测标本
三、操作步骤
❖ 1.手工操作
现以具有37℃恒温比色池的分光光度计为例，说 明操作过程。
（1）吸应用试剂Ⅰ2mL加入测定管中，加血清 100μL，混合，放入37℃水浴至少5min。
按手工操作要求设置参数为：系数3698、温 育时间min、滞留时间120s、比色皿光径 1.0cm、稀释倍数23、血清占反应液体积分 数0.0430
四、临床意义
❖ 1、CK主要存在于骨骼肌和心肌，在脑组织 中也有存在。正常人血浆中酶活性很低。血 清中CK活性的变化主要见于下列情况。
❖ (1) CK主要用于心肌梗死的诊断：心肌梗死 会出现血清CK活性明显变化。心肌梗死发病 的早期，即发病后2~4小时此酶即开始升高， 12~48h达最高值，可高达正常上限的10~12 倍，在2~4天降至正常水平。此酶对诊断心 肌梗死较其他的心肌酶谱AST、LD的阳性率 高，特异性强，是用于心肌梗死早期诊断，
取各管的吸光度。 ❖ （4 ）单位定义：1mL血清在37℃与底物作用1h产
生1μmol肌酸为1个CK活性单位，若此单位乘以 1000/60或16.7可换算成国际单位（U/L）。
前白蛋白的 测定
原理
❖ 样本中的PA（前白蛋白）与试剂中相应的抗 体相遇，立即形成抗原抗体复合物，在特定 的缓冲环境中形成浊度，其浊度在合适的抗 体浓度存在时与抗原含量成正比，与相同条 件操作的较准品比较，即可求出样本中PA的 含量。
血清肌酸激酶 活性测定
Ⅰ连续监测法测 定血清肌酸激酶
一、检验原理：
磷酸肌酸＋ADP CK 肌酸＋ATP
ATP＋葡萄糖 ADP
HK 6－磷酸葡萄糖＋
6－磷酸葡萄糖＋NADP＋ G6P-DH
6－磷酸葡萄糖酸＋NADPH
原理：
❖ 利用酶偶联反应原理连续监测NADP,后 者引起340nm吸光度的增高，在340nm 监测单位时间内NADPH的生成量，可 计算出CK的活性浓度。
Hale Waihona Puke Ⅱ肌酸显色法测 定血清肌酸激酶
一、原理
❖ 磷酸肌酸+ADP CK
❖ 肌酸+双乙酰+α-萘酚 (λ=540nm)
肌酸+ATP Mg²＋ 红色化合物
❖ 在一定范围内，红色深浅与肌酸量成正比，
从而可求得血清中CK活性。在反应性体系中 加入Mg²＋做激活剂，半胱氨酸供给巯基，保 持CK活性中心必需基团不被氧化；氢氧化钡 和硫酸锌沉淀蛋白质并中止反应。
二、试剂
❖ 1、混合底物溶液 ❖ 2、储存碱溶液 ❖ 3、双乙酰溶液 ❖ 4、 α-萘酚溶液 ❖ 5、1.7mmol/L肌酸标准溶液 ❖ 6、50g/L硫酸锌溶液 ❖ 7、60g/L氢氧化钡溶液 ❖ 8、待测标本
三、操作步骤
❖ （1）取4支试管，分别标明空白管、标准管、对照 管和测定管。
❖ （2）按书的表格进行操作。 ❖ （3）混匀，在540nm波长处，用空白管调零，读
（2）在37℃水浴中预温应有试剂Ⅱ至少5min。 （3）加入应有试剂Ⅱ200μL，混合，转入3mL比
色皿Ⅲ（1.0cm光径），立即放入恒温比色槽内。
（4）待120s的延滞期后，在340nm波长处，连 续监测线性反应期吸光度变化速率（120s）， 以吸光度增加的速率计算血清中CK的活性浓度。
❖ 2.自动化生化分析仪操作程序的设置