功能性腹泻脾虚证动物模型的制作与评价思路初探

临床研究［ Ｊ］ ．山 西 医 药 杂 志： 上 半 月，２０１０，３９ （ ２ ） ：１７６ －
１７７ ． ［６］ 刘汶，张敦义．番泻叶致脾虚证动物模型的造型方法［ Ｊ］ ．中
国中西医结合脾胃杂志，１９９８，６（４） ：２３１ －２３２． ［７］ 北京师范大学．中医基础理论的研究：脾虚证动物模型的建
※ 项目来 源： 国 家 重 点 基 础 研 究 发 展 计 划 （ ９７３ 计 划 ） （ 编 号： ２０１３ＣＢ５３１７０３） ；北京中医药 大 学 自 主 选 题 在 读 研 究 生 资 助 项 目 （ 编号：２０１３ －ＪＹＢＺＺ －ＸＳ －０３９） ；北京中医 药大 学 科研 基金项 目 （ 编号：２０１３ －Ｘ －０３８） △ 通讯作者：北京中医药大学中医诊断学教研室，北京 １０００２９ １ 北京中医药大学 ２０１０ 级博士研究生，北京 １０００２９ ２ 北 京 中 医 药 大 学 中 医 诊 断 学 教 研 室 ，北 京 １０００２９ ３ 北 京 中 医 药 大 学 科 研 中 心 ，北 京 １０００２９ ４ 北京中医药大学 ２０１２ 级硕士研究生，北京 １０００２９ 作者简介：白世 敬 （１９８７—） ，女，硕 士 研 究 生 在 读，学 士。 研 究 方 向：中医病证结合规律的研究。
【关键词】 腹泻；脾虚；疾病模型，动物；评价研究 【中图分类号】 Ｒ４４２．２；Ｒ５７４．６２；Ｒ －３３２ 【文献标识码】 Ａ 【文章编号】 １００２ －２６１９（２０１４）０４ －０５９２ －０３
功能性腹泻作为一种功能性胃肠疾病，临床上较为常 见。 脾虚证是中医概念，是一种常见的中医证候。 脾虚证 可分为以消化不良为主要症状的脾虚证和以腹泻为主要 症状的脾虚证，功能性腹泻的临床表现与以腹泻为主要症 状的脾虚证很相似，二者皆可出现便溏、腹泻等症状。 “功 能性胃肠病罗马Ⅲ诊断标准” 中规定功能性腹泻的诊断 标准为：至少 ７５％的排便为不伴腹痛的松软（ 糊状） 或水 样便，诊断前症状出现至少 ６ 个月，近 ３ 个月症状符合以 上标准［１］ 。 脾虚证诊断标准为：①主症：食少纳呆，体倦乏 力，食后或午后腹胀，大便异常（ 溏、烂、先便后溏、时溏时 硬） ；②次症：神疲懒言，口淡不渴，腹痛绵绵，恶心呕吐，脘 闷，肠鸣，面色萎黄，水肿，排便无力，舌质淡，舌体胖或有 齿印，苔薄白，脉细弱。 具备主症 ２ 项或主症 １ 项加次症 ２ 项即可诊断［２］ 。 脾虚证病程较长，与功能性腹泻在病程上 也具有一致性。 在临床中，功能性腹泻往往伴随脾虚证。 因而，从病证 结 合 角 度 研 究 功 能 性 腹 泻 脾 虚 证 有 重 要 意 义，而从病证结合角度对功能性腹泻脾虚证动物模型进行 研究十分有必要。 １ 功能性腹泻动物模型的制作与评价现状 １．１ 功能性腹泻动物模型的制作现状 功能性腹泻是一 种常见的功能性胃肠疾病，国外研究主要集中在临床疗效 观察。 由于其病因未明，腹泻不伴随腹痛，且要排除胃肠 或全身器质性疾病引起的腹泻，如炎症性肠病、贫血、甲状 腺疾病等［３］ ，故模型制作困难，至今尚未形成成熟的动物 模型。 １．２ 功能性腹泻动物模型的评价现状 功能性腹泻动物
参考文献
［１］ 罗马委员会．功能性胃肠病罗马Ⅲ诊断标准［ Ｊ］ ．胃肠病学，
２００６，１１（１２） ：７６１ －７６５． ［２］ 郑筱萸．中药新药临 床研究指导 原则 （ 试行） ［ Ｓ］ ．北 京：中
国 医 药 科 技 出 版 社 ，２００２ ：３６２ ． ［３］ 罗金燕．功能性肠病与罗马Ⅲ［ Ｊ］ ．胃肠病学，２００６，１１（１２） ：
河北中医 ２０１４ 年 ４ 月第 ３６ 卷第 ４ 期 Ｈｅｂｅｉ Ｊ ＴＣＭ，Ａｐｒｉｌ ２０１４，Ｖｏｌ ３６，Ｎｏ．４
５９３
师范大学生物系消化生理科研组认为动物出现体质量减 轻，并伴有便溏、纳呆、消瘦、少动、四肢无力、脱肛、毛发枯 涩、畏寒、耐寒力低等症状为脾虚证造模成功的标志。 此 后的脾虚动物实验多沿用此标准。 在实验研究中，研究人 员也试图寻找脾虚证的客观指标，在集中研究探索消化道 及消化相关脏器组织形态、内分泌及功能变化、血液及微 循环改变、供能系统及肌组织形态学变化后发现，脾虚时， 大鼠的血乳酸值［２０］ 、尿 Ｄ －木糖排泄率、唾液淀粉酶活 性［２１］ 会出现相应变化，对脾虚证的诊断具有一定价值。 同时，也有实验人员从实验大鼠 Ｔｈ１ ／Ｔｈ２ 细胞因子［２２］ 、 ５ －羟色胺（５ －ＨＴ）及其受体变化［２３］ 等方面进行研究，也 取得了一些成果。 总体上看， 脾 虚 证 动 物 模 型 的 评 价 缺 乏 客 观 量 化 标 准，客观指标繁杂且特异性差，未能形成客观、统一的评价 标准体系。 建立脾虚证动物模型客观评价体系势在必行。 ３ 从病证结 合 角 度 讨 论 功 能 性 腹 泻 脾 虚 证 动 物 模 型 的 制作 国外没有对功能性腹泻脾虚证的研究，国内对脾虚型 功能性腹泻虽有研究，但研究局限于临床，并没有进行动 物实验，故从病证结合角度研究功能性腹泻脾虚证动物模 型的制作对于研究功能性腹泻脾虚证具有重要意义。 从病证结合角度出发，功能性腹泻脾虚证动物模型制 作的基本原则为：动物模型从病因、症状、病程上兼具功能 性腹泻及脾虚证的特点。 由于功能性腹泻病因未明，在制作动物模型时可以参 考中医脾虚证病因。 脾虚证的病因多样，有情志失调、劳 倦过度、饮食不节等，但由于中医学病因具有多重性，伤脾 同时多五脏同伤，故在造模时应纯化病因，分清饮食失节、 劳倦过度、情志失调等病因在导致脾虚证过程中的主次关 系，优选纯化造模因素，根据其发病规律进行复合造模，同 时注意多元化造模因素的层次性、动态性，尽可能使其不 确定性降至最低［２４］ 。 在症状上，功能性腹泻脾虚证须兼有功能性腹泻与脾 虚证的临床表现。 即其动物模型须具备至少 ７５％的排便 为松软（ 糊状） 或水样便，动物出现体质量减轻、纳呆、消 瘦、少动、四肢无力、毛发枯涩等症状。 病程对功能性腹泻脾虚证动物模型的制作有较高要 求。 功能性腹泻与脾虚证病程都较长，在造模时应以人与 动物寿命长度比例要求造模时间，使动物模型病程与人类 功能性腹泻“ 诊断前症状出现至少 ６ 个月，近 ３ 个月症状 符合以上标准”时间同比例。 在造模时，不仅要求症状符 合病证要求，也要使症状持续时间符合病程要求。 ４ 从病证结 合 角 度 探 讨 功 能 性 腹 泻 脾 虚 证 动 物 模 型 的 评价 功能性腹泻脾虚证动物模型评价的基本要求为：①其 病因、症状、病程符合功能性腹泻与脾虚证的特点；②参考 临床研究可能存在的客观指标对动物模型进行检测；③应 用临床有效药物对模型进行反证，药物有效。
功能性腹泻脾虚证动物模型病因上要符合中医脾虚 证病因；在症状上，功能性腹泻脾虚证动物模型要兼具功 能性腹泻与脾虚证的症状表现；在病程上，动物模型要与 人类功能性腹泻“ 诊断前症状出现至少 ６ 个月，近 ３ 个月 症状符合以上标准” 时间同比例。 需要注意的是，功能性 腹泻临床上诊断要求“ 至少 ７５％的排便为不伴腹痛的松 软（ 糊状）或水样便，诊断前症状出现至少 ６ 个月，近 ３ 个 月症状符合以上标准 ” ，在动物实验中，腹泻、便质及病程 都可以通过观察计算数值，但腹痛为主观感受，这就要求 在评价模型时要采用一定方法确定是否存在腹痛。 功能 性腹泻诊断时要排除胃肠或全身器质性疾病引起的腹泻， 故要对动物模型进行全面的检查，排除胃肠及全身器质性 疾病。 参考临床研究可能存在的客观指标对动物模型进行 检测：由于功能性腹泻临床指标欠缺，故动物模型指标检 测可偏重脾虚证的客观指标，如选择脾虚证弱阳性指标乳 酸值、尿 Ｄ －木糖排泄率、唾液淀粉酶活性等。 反证模型：临床上，治疗功能性腹泻常用药物有天然 蒙脱石粉剂［２５］ 、益生菌［２６］ 等，临床验证有效。 中医治疗 功能性腹泻常用药物有加味乌梅汤［２７］ 、金匮肾气丸［２８］ 、 四神丸合香砂六君子汤［２９］ 、参苓白术散［３０］ 、参苓白术散 合理中汤［３１］ 、痛泻要方［３２］ 等，临床验证有效。 其中治疗 脾虚型功能性腹泻的药物如参苓白术散等可作为反证功 能性腹泻脾虚证的药物施之于功能性腹泻脾虚证动物模 型，如有效，则可视为模型制作成功。
立及其实质的探讨（ 一） 脾虚证动物的造型［ Ｃ］ ／／北京市中 医论文选辑，１９７９，５：１０ －２４ ． ［８］ 郭显椿．中药对小白鼠腹 腔巨噬细胞吞 噬功能的影 响 ［ Ｊ］ ． 中兽医医药杂志，１９９０，（１） ：５． ［９］ 孙贰堂．豚鼠脾虚泄泻动物模型在体胃肠电的变化及四君 子汤对其抑制作用［ Ｊ］ ．中医药学报，１９８９，（１） ：４１ －４４ ． ［１０］ 黄柄山．饮 食 失 节 所 致 的 脾 虚 动 物 模 型 及 中 药 治 疗 观 察
５９２
河北中医 ２０１４ 年 ４ 月第 ３６ 卷第 ４ 期 Ｈｅｂｅｉ Ｊ ＴＣＭ，Ａｐｒｉｌ ２０１４，Ｖｏｌ ３６，Ｎｏ．４峰△ 马 捷１ 宋月晗２ 刘 燕３ 韩晨霞４ （北京中医药大学 ２０１１ 级硕士研究生，北京 １０００２９）
模型制作方法不成熟，评价标准也相应缺乏。 评价功能性 腹泻动物模型时一般以症状表现为主。 在临床研究中， Ｓｃｒｉｍｓｈａｗ ＮＳ 等［４］ 认为肠道乳糖酶的缺乏导致乳糖吸收 率低是引起慢性腹泻的原因之一，王玉玲等［５］ 认为肠道菌 群失调参与了功能性腹泻的发病，但是这些说法并未在动 物实验中验证，因而也无法作为客观指标用于功能性腹泻 动物模型的评价。 故功能性腹泻动物模型的客观指标评 价目前尚无定论。 ２ 脾虚证动物模型的制作与评价现状 ２．１ 脾虚证动物模型的制作现状 脾虚证作为一种中医 证候概念，国内研究较多，临床研究及实验研究都到了一 个较高层次。 根据制作方法的不同，脾虚证动物模型制作 方法可分为以下几种：中医病因造模法、理化因素造模法、 复合因素造模法。 其中中医病因造模法分为中医病因单 因素造模法和中医病因多因素造模法。 中医病因单因素 造模法包括苦寒泻下法 （ 使用苦寒药物如番泻叶［６］ 、大 黄［７］ 、承气汤［８］ 等致泻）、耗气破气法（ 使用耗气破气药物 如大黄加芒硝［９］ 等致泻）、饮食失节法（ 双日猪脂加单日 甘蓝［１０］ 使饮食失节伤脾致泻） 等；中医病因多因素造模法 如饮食 失 节 加 耗 气 破 气 法［１１］ 、 劳 倦 过 度 加 苦 寒 泻 下 法［１２］ 、饮食失节加劳倦过度加苦寒泻下法［１３ －１４］ 等。 理化 因素造模法是运用药物毒副作用或其他理化手段使动物 出现类似脾虚证的症状，如肌肉注射利血平法［１５］ 、胃饲秋 水仙碱法［１６］ 、Ｘ 射线照射法［１７］ 、乙酸灌肠法等。 复合因 素造模法是结合中医病因造模法与理化因素造模法，如苦 寒泻下加乙酸灌肠法［１８］ 等。 以上动物模型制作方法为研究脾虚证起了重要作用， 但也存在许多争议和问题。 如动物模型的自愈性强，对施 加的各种造模因素有过强的依赖性，一旦去除造模施加因 素，模型便很快自然恢复，与临床所见的脾虚证不经治疗 难以自愈的特点相违背。 中医病因具有多重性，故造模时 所采用的病因 如 过 劳、 饮 食 不 节、 饮 食 偏 嗜， 以 及 灌 服 大 黄、番泻叶、承气汤等造模因素并不单独伤脾，而是五脏同 受其害。 理化因素造模虽然可以出现类似脾虚证的临床 表现，但是其不符合中医理论，其副作用对人体的影响是 否与中医脾虚证相同，也有待进一步深入研究［１９］ 。 ２．２ 脾虚证动物模型的评价现状 脾虚证动物模型的评 价主要是以体征表现为主，如最早进行脾虚证造模的北京