脾气虚证动物模型造模方法综述

脾气虚证动物模型造模方法综述季婧２００２２０７１３７上海中医药大学摘要：脾气虚证动物模型是重要的动物模型之一，其主要的造模方法有泻下法、偏食法（偏食醋法、偏食酒加醋法、偏食苦味法）、饮食失节法（限制饮食法、肥甘过度法、饥饱失常法）、耗气破气法、现代医学造模法（利血平法、秋水仙碱法、环磷酰胺法、Ｘ射线法）、综合法（耗气破气加苦寒泻下法、耗气破气加饮食失节法、劳倦过渡加苦寒泻下法、劳倦过度加饮食失节法、劳倦过度加饮食失节加苦寒泻下法、病证结合造模法）等。本文对这几种方法作了介绍，并讨论了现存的一些问题。关键词：脾气虚动物模型综述中医的现代研究离不开动物实验，而辩证是中医的特点之一，因此中医证动物模型的应用已成为中医科研方法体系的一个重要组成部分，是开展中医证候及中药新药实验研究的一个重要方法。脾气虚证模型是重要的动物模型之一，近几年来不断发展和规范，现将目前主要的脾气虚证模型的造模方法作一综述。１．泻下法李东垣在《脾胃论》中有苦寒之药损其脾胃，泄泻致虚的论述。根据这一理论，采用苦寒泻下法来制造脾气虚证模型。常用药物为大黄、番泻叶等。例如有学者给ｌ８～２０ｇ的雌雄昆明种小鼠喂饲大黄水煎剂，剂量为１．２ｇ／ｋｇ，连续用药１Ｏ天①；给２００～３００ｇ的ＳＤ大鼠灌服１ｇ／ｍＬ的生大黄煎剂，剂量为２０ｍｌ／ｋｇ，每天２次，连续用药１８天②；给２２０～２５Ｏｇ的雄性ｗｉｓｔａｒ大鼠灌服１０～２０％的番泻叶水浸剂３～４ｍｌ／ｄ，连续用药１２天③；给１８０ｇ的雄性Ｗｓｉｔａｒ大鼠喂饲药物饲料（大黄：芒硝：普通饲料＝０．８５：０．１５：９．００），连续用药２２天④等来复制脾气虚证动物模型。２．偏食法中医理论认为，五味入五脏，偏嗜五味，损伤五脏。据此产生了不少偏食法塑造脾虚证动物模型的方法。比较成功的有偏食醋法、偏食酒加醋法、以及偏食苦味法。《素问生气通天论》中有云：味过于酸，肝气以津，脾气乃绝。因此有用食醋法制造脾气虚证动物模型。例如彭成等⑤给ＳＤ大鼠灌胃山西白醋ｌＯｍｌ／ｋｇ，每日一次，连续１０天。《灵枢论勇篇》中又云：酒者，水谷之精，熟谷之液也，其气剽悍，其入于胃中，则胃胀。因此亦有将酒与醋结合造脾虚模型的，先用白酒损伤脾胃，再用食醋加重病情。罗光宇等⑥给Ｗｉｓｔａｒ大鼠第１日用５０白酒２ｍＬ／２００ｇ灌胃，第２日后每天用食醋２ｍＬ／２００ｇ灌胃，连续１０天，研制出脾气虚证模型。彭成等⑦认为偏食苦味法也能塑造脾虚动物模型，并予以实践。方法是用１００％的黄连液和１００％的杏仁液分别胃饲苦寒药造模组和苦温药造模组的昆明种小鼠，剂量均为０．２５ｍｌ／１０ｇ，每日一次，持续用药１５天。结果两组均出现了类似脾气虚证的表现，用四君子汤反证治疗后逐渐恢复正常。３．饮食失节法

Create PDF with GO2PDF for free, if you wish to remove this line, click here to buy Virtual PDF Printer《灵枢》有云：人之所受气者，谷也谷不入半日则气衰，一日则气少矣。脾胃为气血生化之源，过饥、过渴能耗伤元气，致使脾胃虚弱。因此可用限制饮食的方法来制造脾虚动物模型。陈小野等⑧给１８０～２２０ｇ的雄性ＷｉｓｔａｒⅡ级大鼠半量饮食，喂饲饲料９ｇ／只／ｄ，持续１２天，来制造脾虚动物模型。根据饮食自倍，肠胃乃伤，饮食无度，过食生冷甘肥会损伤脾胃，黄炳山等⑨给健康小鼠单日喂饲甘兰，双日加喂猪脂一次，数量不限，持续９天后成功的制备了脾虚动物模型。《内外伤辨惑论》中又云：人在围城中，饮食不节朝饥暮饱，动经三两日，胃气乏矣。因此可用饥饱失常法来制造脾虚动物模型。陈红宾等⑩使大鼠连续禁食４８小时（不禁水）后，给予自由饮食２小时（自由饮食２小时的进食量相当于正常饮食状态下每日饮食量的７５％～８０％），来制造脾虚动物模型。４．耗气破气法《本草经疏》有云：脾虚忌下、降泄、破气＂。因此可用耗气破气法来造模。阚甸嘉等１１取１２０～１５０ｇ雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，把大黄、厚朴、枳实按重量比１：１：１制成含２ｇ／ｍｌ生药的煎剂，每次灌喂２ｍｌ，２次／ｄ，连续４２天，来复制脾气虚证大鼠模型。５．现代医学造模法由于西医药的副作用常产生类似于脾虚的临床表现，实验研究中出现了采用西医病因病理来复制脾气虚证动物模型的方法。常见的有利血平动物模型、秋水仙碱动物模型、环磷酰胺动物模型和Ｘ射线动物模型等。利血平可以耗竭中枢及外周的儿茶酚胺递质，使得副交感神经机能亢进、肠功能紊乱，造成类似脾气虚的症状。例如有学者取体重１８～２２ｇ的昆明种小白鼠，皮下注射利血平针每天０．１ｍｇ／ｋｇ，连续１４天１２；取体重１８０～２２０ｇ的ＷｉｓｔａｒⅡ级雄性大鼠，腹侧皮下注射利血平注射液０．１５ｍｇ／ｋｇｂｗ／ｄ，每日１次，连续１２天１３；取体重１．８～２．３ｋｇ的雌雄新西兰兔，肌肉注射利血平注射液０．２５ｍｇ／ｋｇ／ｄ，每日１次，连续５天１４来制造脾气虚证动物模型。秋水仙碱临床上常用于抗肿瘤，其长期使用可导致吸收不良综合征，还可引起肌无力和肌病，以及血小板减少等副作用，因此秋水仙碱可用来造模。刘士敬等１５取１７０～２３０ｇ的雌雄Ｗｉｓｔａｒ大鼠，每日胃饲秋水仙碱水溶液１．２ｍｇ／ｋｇ／只，持续给药２５天，制造出脾气虚证动物模型。环磷酰胺也是一种临床上广泛应用的抗癌药，同时又是一种免疫抑制剂。使用环磷酰胺后会出现骨髓抑制所造成的白细胞减少及食欲不振、恶心、呕吐、全身乏力等类似中医脾虚证的症状。王禾等１６取体重１８～２２ｇ的雄性昆明种小鼠，腹腔注射环磷酰胺１０ｍｇ／ｋｇ，连续１４天，使动物出现了较为明显的脾气虚症状，服用四君子汤后症状改善。方肇勤等１７用１８～２０ｇ的雄性昆明种小鼠，腹腔注射环磷酰胺１ｍｇ／１０ｇ，第１、２天各１次，并进行了四诊的评价，认为其证型主要是脾气（阳）虚证。而放射治疗在运用于肿瘤的治疗时疗效尚可，但其副作用严重，临床表现也以中医脾气

Create PDF with GO2PDF for free, if you wish to remove this line, click here to buy Virtual PDF Printer虚为主。刘士敬等１８用Ｘ射线照射大鼠腹部以复制脾气虚证动物模型。方法为取１７０～２３０ｇ的雌雄Ｗｉｓｔａｒ大鼠，每只大鼠按２５０ｒａｄ／ｍｉｎ的照射剂量进行腹外照射，共７天。指标检测结果与临床脾气虚证相类似，且用健脾益气中药反证治疗获效。６．综合法以上方法均为单因素造模，而复杂的病因是中医临床症候的一个特点，因此为弥补单因素造摸的不足又创建了耗气破气加苦寒泻下法、耗气破气加饮食失节法、劳倦过渡加苦寒泻下法、劳倦过度加饮食失节法、劳倦过度加饮食失节加苦寒泻下法、病证结合造模法等复合因素造模法。６．１耗气破气加苦寒泻下法陈小野等１９用耗气破气降气加苦寒泻下法来制造脾气虚证动物模型。具体方法为：取１８０～２２０ｇ的ＷｉｓｔａｒⅡ级雄性大鼠，采用游泳时间测定体质，取平均约４ｍｉｎ的体质弱者用于造模。再用２００％浓度的方１煎剂（生大黄：厚朴：枳实＝２：１：１）和２５０％浓度的方２煎剂（广豆根：旋覆花：槟榔＝３：１：１）分别于４℃交替灌喂，４ｍｌ／只／次，次数按３／２比例，造模前１８天３次／ｄ，后１２天４次／ｄ，两次灌喂间隔≥３．５ｈ，同时以药化饲料（含７５０ｇ生药的方１煎剂配６０００ｇ饲料）自由喂饲，５０ｇ／３００ｍｌ浓度的药化饮水（旋覆花：槟榔＝１：１）自由饮用，一共造模３０天。６．２耗气破气加饮食失节法王淑兰等２０选用了马属动物驴为实验动物，并将厚朴、枳实、大黄按３：３：２的比例制成散剂，每次剂量为１．５ｇ／ｋｇ，用开水８００ｍＬ浸泡１０ｍｉｎ后，稀释至２６００ｍＬ，隔日灌胃一次。在每日灌胃的当日禁食，次日足量喂饲，持续６周，成功研制了脾气虚证模型。柳和培等２１取Ｗｉｓｔａｒ大鼠，将厚朴、枳实、大黄按３：３：２的比例制成１００％煎剂，每天４ｍｌ灌胃，隔日一次，给药当天禁食，次日给足量食物，共造模４２天。６．３劳倦过渡加苦寒泻下法梁嵘等２２选用１６０～２００ｇ的Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠，并将大黄、芒硝、标准饲料按０．８５：０．１５：９．０的比例均匀混合后制成药化饲料，每克饲料含生药０．１ｇ，每日给予足量药化饲料，并于上午８－１２点在振荡器上振荡（振动２４３次／ｍｉｎ，幅度３６ｍｍ）４小时（每振荡２０ｍｉｎ，停荡５ｍｉｎ），持续２１天，塑造了大鼠脾气虚证模型。陈易新等２３选用体重２００ｇ～２５０ｇ的ＷｉｓｔａｒⅡ级雌性大鼠，每天予以番泻叶水煎剂３ｍｌ灌胃并游泳１５ｍｉｎ。水深约７５ｃｍ，水温２０～２２℃，持续１３天，塑造了大鼠脾气虚证模型。李月华等２４用１９０～２５０ｇ的雌雄Ｗｉｓｔａｒ大鼠。灌喂２００％的大黄煎剂４０ｇ／ｋｇ后ｌｈ开始分批强迫游泳（大塑料浴盆水温４２～４４℃水．水深３５～４０ｃｍ）。当每组的半数动物出现自然沉降时．即停止游泳．以上措施连续１４天，造成脾气虚证模型。６．４劳倦过度加饮食失节法傅湘琦等２５用劳倦过度和饮食失节法塑造了大鼠脾气虚证模型。方法是每日振荡１０小时左右，同时用普通混合饲料隔日喂食，给食时保证足量，除振荡时间外其他时间自由饮水，持续３３天。

Create PDF with GO2PDF for free, if you wish to remove this line, click here to buy Virtual PDF Printer谢仰洲等２６使大鼠隔日在跑步机上跑步３０ｍｉｎ，造成过劳损伤，再佐以饮食失节、甘肥过度。于单日精炼猪油灌胃，一日２次，共６ｍＬ；双日喂大白菜，不限量，自由进水，持续３周，塑造了大鼠脾气虚证模型。吕爱平等２７取１８０～２２０ｇ的雌雄ＳＤ大鼠，单日游泳至耐力极限，甘蓝ｌ０～１５ｇ／只喂饲；双日猪油脂２ｍｌ／只灌胃，连续１２天。从第１３天始，每日增加生理盐水２ｍｌ／只灌胃，连续１５天，来复制大鼠脾气虚证模型。刘红春等２８给８０～１３０ｇ的雌雄Ｗｉｓｔａｒ大鼠灌胃２Ｏｇ／Ｌ水杨酸钠溶液，２ｍｌ／（次ｄ），灌胃前后１ｈ禁食禁水，连续８周，自第５周开始在给水杨酸钠的同时，每天置入温水游泳１０ｍｉｎ使其劳累，自由进水，单日禁食，双日给食不限量，使其饥饱失常，至第８周造模结束６．５劳倦过度加饮食失节加苦寒泻下法郑小伟等２９选用１６０～２００ｇ的雌雄Ｗｉｓｔａｒ大鼠制造脾气虚证动物模型，其具体方法为：①每日上午以３ｍｌ／只灌服大黄制剂液，每日１次；②每日下午将动物负重（于大鼠尾根部缠绕重量为该大鼠体重１０％的保险丝），放入水深５０ｃｍ、水温２０℃的水槽中游泳，以力竭为度（大鼠鼻尖没入水面１０ｓ），每日１次；③控制饮食，每日８：００ａｍ给食，８：００ｐｍ撤食。共造模２１天。６．６病证结合动物模型辨证与辨病相结合是中医临床诊疗的一大特点，这一特点在中医模型上的体现就是病证结合动物模型。例如有脾气虚型胃溃疡模型、脾气虚型慢性萎缩性胃炎模型、脾气虚型创伤愈合模型造模、脾气虚型肝癌模型、脾气虚型哮喘模型、脾气虚型糖尿病模型等等。其一般的造模方法为：用中医理论来塑造证候模型，用西医理论来塑造疾病模型。例如李锦毅等３０取１８～２２ｇ的雌雄昆明种小鼠，采用耗气破气加饥饱失常的方法，选用厚朴、大黄水煎液灌胃，隔日加喂猪脂，每只小鼠ｌｍｌ灌胃，造模时间９天，形成脾气虚证动物模型。在建立此模型的第１０天，抽取接种７天的肝癌Ｈ２２腹水型小白鼠的腹水，用生理盐水１：３稀释。在每只小鼠的右前肢腋下皮下注射０．２ｍｌ（含１ｘｌＯ个癌细胞），造成脾气虚证肝癌（Ｈ２２）荷瘤小鼠模型。７．讨论综上所述，脾气虚证动物模型的造模方法大体可分为三类：模拟中医传统病因建立动物模型的方法（如泻下法）、采用西医病因病理复制动物模型的方法（如利血平法）、根据中西医结合病因学说塑造动物模型的方法（如病证结合动物模型）。这三种模型各有自己的优缺点。模拟中医传统病因的方法比较符合中医理论，但中医病因具有非特异性和多重性，一种病因可致多种病证，多种病因又可致同一种病证。因此这些造模因素，除可以引起脾气虚外，还易引发其它征候。此外，其造模因素总体而言仍较单一，不大符合临床所见脾气虚证病因复杂的特点。且绝大多数模型在造模停止后迅速恢复，不类似临床脾气虚患者的难以自愈。迅速的自然恢复难以说明其虚证表现是由于机体的虚，还是由于造模因素的作用。寻找能严重损伤模型动物机体内在正气的造模方法，以达到精气夺则虚，为解决这一问题提供了