流式细胞术分析和分拣植物染色体
采用流式细胞仪鉴定3种秋海棠愈伤组织的遗传变异
采用流式细胞仪鉴定3种秋海棠愈伤组织的遗传变异[摘要]采用流式细胞仪，对3种离体培养多年的秋海棠属植物的dna含量进行了测定。
结果表明：掌叶秋海棠的dna含量发生了非整倍性变化，离体培养材料是温室保存材料的1.5倍，其它两种秋海棠的dna含量无明显变化。
[关键词]秋海棠；愈伤组织；变异；dna含量离体保存是种质资源保存的一条重要途径，具有节省人力、物力、财力以及避免自然灾害和病虫害等优点。
但是在离体保存过程中常有遗传变异的发生，因此需要对离体保存材料进行鉴定。
目前的鉴定方法包括形态学标记、细胞学标记、分子标记等。
秋海棠属植物的染色体很小，计数十分困难。
而且某些种类的细胞质中含有许多小颗粒，与因缢缩而变得极小的染色体难以区分，观察难度较大。
本研究用流式细胞仪对3种培养多年的秋海棠进行了dna含量分析，以期为进一步研究该属植物离体培养的遗传变异规律提供基础。
1.材料与方法1.1植物材料供试材料为温室中保存和以愈伤组织形式保存10年的的花叶秋海棠（β.cathayana）、掌叶秋海棠（β.hemsleyana）和假厚叶秋海棠（β.pseudodryadis）。
培养基为1／2ms培养基，不加激素，每2个月继代一次。
实验前随机选取3种秋海棠属植物的愈伤组织进行培养，直至幼嫩叶片长出。
1.2方法选取叶片约1cm2，加入0.5ml的otto i buffer和2μl／ml 的β巯基乙醇，用手术刀将其切碎，室温孵育30min后用200目尼龙网过滤得到悬浮液。
采用同样的方法获得水稻悬浮液。
往悬浮液中加入1ml的otto iibuffer（50μg·l-1的碘化丙啶和50μg·l-1的rnase），200目尼龙网过滤后置于常温黑暗条件下染色1h。
1.3分析方法流式细胞仪系统为facsaria（美国bd公司）。
以水稻为内标，每个种测定5个样品，每个样品至少收集20，000个细胞，变异系数控制在8％以内。
211004201_利用流式细胞术鉴定68份三角梅基因组大小与染色体倍性
接收日期：2022-11-18接受日期：2022-12-14基金项目：厦门市科技计划项目(3502Z20214ZD4001、3502Z20199008) *通信作者。
E-mail:****************利用流式细胞术鉴定68份三角梅基因组大小与染色体倍性陈宜木，周 群，钟颖颖，张万旗*，李可威，林悦其(厦门市园林植物园，福建 厦门 361000)摘 要：以国内外收集的54份三角梅(Bougainvillea )资源和14份实生种质为材料，选用番茄(Solanum lycopersicum )为内参，采用流式细胞术估测三角梅基因组大小，并以二倍体品种为对照，计算三角梅染色体倍性。
结果表明：(1) 所选用的内参与待检测样品的最高值能完全分开，没有重叠峰，峰型比较清晰集中，可以对三角梅基因组大小进行有效估测。
(2) 供试材料中有34份二倍体，基因组大小为2.48～2.86 Gb ；有28份三倍体，基因组大小为3.65～4.22 Gb ；有5份四倍体，基因组大小为4.98～5.12 Gb ；另外，‘大金边杨梅’为2X 、4X 、6X 混倍体。
利用流式细胞法鉴定三角梅染色体倍性可缩短鉴定时间，提高鉴定效率。
关键词：三角梅；流式细胞术；基因组大小；染色体倍性；育种Doi: 10.3969/j.issn.1009-7791.2022.06.001中图分类号：S685 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2022)06-0417-07Genome Size Estimation and Ploidy Identification of 68 ServingsBougainvillea by Flow CytometryCHEN Yi-mu, ZHOU Qun, ZHONG Ying-ying, ZHANG Wan-qi *, LI Ke-wei, LIN Yue-qi(Xiamen Botanical Garden, Xiamen 361000, Fujian China)Abstract: Using diploid variety tomato as the internal reference, the genome sizes of 54 collected germplasm at home and abroad and 14 seedlings of Bougainvillea resources were estimated by flow cytometry, and the chromosome ploidy was calculated with diploid as the control. The results showed that: (1) the peaks of the selected samples assayed were completely separated from that of the control without overlapping, and the peak shape was clear and concentrated, suggesting that the estimation of Bougainvillea genome size and ploidy was effective; (2) among the tested materials, 34 germplasm were diploids with genome sizes of 2.48–2.86 Gb, 28 germplasm were triploids with genome sizes of 3.65–4.22 Gb, 5 germplasm were tetraploid with genome sizes of 4.98–5.12 Gb. In addition, a Bougainvillea germplasm resource ‘Big Phnom Penh bayberry’ was identified as a mixoploid of 2X, 4X and 6X. The usage of flow cytometry assay could shorten the time while improve the efficiency towards the identification of Bougainvillea chromosome ploidy. Key words: Bougainvillea ; flow cytometry; genome size; ploidy; breeding三角梅是紫茉莉科(Nyctaginaceae)叶子花属(Bougainvillea )中具有园艺价值的一类藤状灌木[1]，也叫叶子花、三角花、南美紫茉莉、九重葛、宝巾花、簕杜鹃、贺春红等，至今已有250多年的栽培历史[2]。
流式细胞术的原理和应用
流式细胞术的原理和应用流式细胞术（Flow cytometry）是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的生物技术，它通过将单个细胞悬浮在溶液中，利用激光器照射并检测细胞表面或内部的荧光标记物，实现对细胞的定量和质量分析。
流式细胞术具有高通量、高准确性和高灵敏度的特点，被广泛应用于细胞表型分析、细胞分选、DNA含量测定、蛋白质定量、染色体分析、细胞凋亡测定等领域。
本文将对流式细胞术的原理和应用进行详细介绍。
一、流式细胞术的原理1. 细胞悬浮流式细胞术的第一步是将待检测的细胞悬浮在生理盐水或缓冲液中，以确保细胞处在单个状态，方便后续的激光检测。
2. 细胞标记细胞通常会被标记上与特定蛋白或分子结合的荧光标记物，通过特异性和高亲和力结合到细胞表面或内部的特定结构上。
这些标记物可以是荧光染料、荧光免疫球蛋白（Fluorescent-labeled antibodies）等。
3. 激光照射悬浮细胞通过流式细胞仪中的微流道单个流经，在通过激光照射后，激光与标记物产生光散射或荧光发射。
4. 光散射和荧光检测流式细胞仪通过多个检测器检测光散射和荧光发射强度，这些数据被传输到计算机中进行分析和图形呈现。
5. 数据分析通过计算机软件对检测到的数据进行图形处理和数据分析，包括各种细胞表型的区分、细胞计数、蛋白质表达水平、细胞周期分析等。
二、流式细胞术的应用1. 细胞表型分析流式细胞术可以用来分析细胞的表面标记物和内部标记物，比如CD标记、HLA标记、细胞凋亡标记等，帮助研究者深入了解细胞的功能和特性。
2. 细胞分选基于细胞表面标记物的差异，流式细胞术结合细胞分选仪可以实现对不同亚群细胞的快速纯化和分离，广泛应用于免疫学、干细胞研究等领域。
3. DNA含量测定通过DNA特异性荧光染料，流式细胞术可以对细胞的DNA含量进行测定，帮助研究细胞周期的变化、细胞增殖速率的测定等。
4. 蛋白质定量利用荧光标记的免疫球蛋白，流式细胞术可以对细胞中蛋白质的表达水平进行定量分析，比如研究细胞信号通路的活性等。
流式细胞术测定植物基因组大小 一、流式细胞术的基本知识 二、植物C值分析原理
Sheath fluid
Fluorescence signals Focused laser beam
液流中心由单列 匀速运动颗粒组 成的液柱
分选系统
488 nm laser FALS Sensor
Fluorescence detector
Charged Plates
+
Single cells sorted into test tubes
流式细胞仪(Flow Cytometer)
集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机技术、细 胞荧光化学技术、流体力学为一体的一种新型高科技仪器。
流式细胞术特点
单细胞悬液 或生物颗粒 分析速度高 多参数 精度高 高灵敏度 无害分析 和分选
当代最先进的细 胞定量分析技术
国际两大流式细胞仪生产商：
流式细胞仪计算测量DNA 含量实际上是细胞周期的测 量，由于细胞核G1期的DNA含量反应一个细胞的倍性，因 此常用DNA含量来估计细胞倍性，包括DNA的绝对含量或相 对含量。
测量DNA的绝对含量时，须设一个已知DNA含量的标准样 品作对照，来换算出DNA的绝对含量。
样品2C DNA含量=[(样品G0/G1峰均值)/ (标准G0/G1峰均值)] ×标准2C DNA含量(pg DNA)
台式机和大型机
EPICS XL 流式 细胞分简便
使用寿命长
配备1-2根激光 细胞分选速度慢， 主要用于细胞分析
临床型(BD,FACSCalibur台式机)
特点： 分辨率高 选配多种波长和 类型激光器 可把感兴趣细胞 分选到特定培养孔 或板上（4路和24 孔板） 大型机(BD,FACSAria科研型) 适用于高速分选 和多色分析
基于流式细胞术对27种石斛的倍性鉴定和基因组大小分析
基于流式细胞术对27种石斛的倍性鉴定和基因组大小分析作者：熊文艳普冉刘云礼陈军文张敬丽来源：《热带作物学报》2022年第11期摘要：石斛屬（Dendrobium）是兰科（Orchidaceae）一个大属，我国植物志记载有76种，主要分布于我国海南省、西南和两广地区，石斛属植物种类繁多，花朵鲜艳，颜色丰富，花期长，具有极高观赏价值。
目前，石斛属植物野外资源濒临灭绝，面临自交异交不亲和、观赏种数量少、缺乏优良育种亲本的困境，为保护现有良种、培育新物种及为建立基因分子库奠定基础，以石斛属植物幼嫩叶片为材料，采用MGb解离液制备细胞核悬浮液，利用玉米（Zea mays，‘B73’）和番茄（Lycopersicon esculentum）作为内标，建立了基于流式细胞术测定石斛倍性和基因组大小的方法，用流式细胞仪对兰科（Orchidaceae）石斛属（Dendrobium）27种石斛属植物的倍性和基因组大小进行测定。
研究表明：以玉米为内标区分度较好，且没有重叠峰，峰型清晰集中，对27种石斛属植物的倍性和基因组大小能准确估测；27种石斛中二倍体19种，三倍体5种，四倍体3种；27种石斛分属于8组，分别是禾叶组1种，顶叶组2种，石斛组16种，瘦轴组1种，叉唇组1种，距囊组1种，草叶组4种，基肿组1种，各个组间基因组大小不同，各组内基因组大小也存在差异；27种石斛预估基因组大小在0.98～2.41 pg 之间，预估的平均基因组大小为1.44 pg，27种石斛的基因组大小均大于0.7 pg，主要集中在0.7～1.4 pg之间，其中草石斛的预估基因组最大，梳唇石斛最小，二者的预估基因组大小相差近2.5倍；27种石斛的基因组可归为极小基因组或小基因组。
该研究为石斛属植物的人工杂交授粉配置、杂交育种、多倍体诱导提供便利，同时，为石斛属植物基因分子库的建立以及石斛属植物基因组学、遗传变异、进化生物学与全基因组测序等研究奠定基础。
流式细胞术在植物研究中的应用
流式细胞术在植物研究中的应用作者：徐可来源：《农家科技中旬刊》2018年第02期摘要：随着我国社会经济的不断发展，流式细胞仪也在不断改革创新，其自身能对液流中的细胞，或是其他微粒多参数的进行分析与分选，具有速度快、灵敏度高、参数多、全面分析、对细胞无害等特点。
本文通过分析流式细胞术在植物研究中的应用，以期为今后相关研究提供经验及帮助。
关键词：流式细胞术；植物研究；应用1.前言流式细胞仪（FCM）是集物理技术、细胞免疫化学技术、计算机技术、流体力学、单克隆抗体技术等相融合的一种高科技技术设备。
该仪器主要包含光学技术、液流技术、细胞分选技术以及信号采集数据处理技术等，其能根据细胞理化性质，如细胞大小、DNA含量以及表面抗原等参数，准确分析细胞群体或亚群体[1]。
2.流式细胞仪的结构与原理流式细胞仪主要由四大部分组成：液流系统；光学系统；电子系统；分选系统。
其主要的技术指标包括：分选速度与纯度、荧光分辨率、分选收获率等方面。
细胞仪工作原理：将需要检测的标本制作成一个单细胞液，通过特异性的荧光染料对标本进行染色，并将标本放入实验管，通过流体力学系统的压缩，让其进入布满鞘液的流动室，当标本的压力和鞘液的压力形成一定的压力差，细胞就会在鞘液的制约下形成单列成排的现象，通过鞘液流动室的喷嘴向外喷出，经过激光聚集区最后形成细胞柱，与激光束形成交叉垂直，通过激光的扫射，形成产生荧光信号和散射光。
散射光信号主要包括前向角散射与侧向角散射，荧光信号可以反映出经过测试后的细胞的大小，而散射光则反映了经过检测的细胞胞膜以及胞质和核膜的折射、细胞内的小颗粒的形状。
经过设备的光学系统比如其中的滤片、透镜以及检测器，聚集光的散射或者光的吸收还有细胞的电阻抗等信号，然后通过计算机技术进行收集和分析，显示出被检测的信号，并将每一项指标都进行分析，通过二维点阵图或一维直方图、数据表或三维图形得以显示。
除此之外，FCM还能分别选择或者选取比较有针对性的细胞，经过分离，有效的降低单细胞的含有数量。
流式细胞术检测药用植物基因组大小的研究策略
流式细胞术检测药用植物基因组大小的研究策略
刘佩;杜芬;邓静怡;曾蒋玲;卢小舒;蓝培基
【期刊名称】《医学综述》
【年(卷),期】2024(30)11
【摘要】流式细胞术是一种可以对悬浮于液体中微小颗粒进行分选和计数的方法。
该方法的步骤包括制备完整的细胞核悬浮液、对核酸荧光染色、根据相关荧光含量分类。
分析荧光标记悬液中的单细胞或其他微小颗粒信号,可以实现蛋白质含量、
细胞DNA含量、酶活性、细胞膜受体和表面抗原、细胞体积等参数的快速测定。
该技术可以用于植物倍性分析和基因组大小估测等研究。
目前利用流式细胞术对药用植物进行基因组大小评估的研究较少,未来有待深入研究,以期为利用流式细胞术检测基因组大小提供相关资料。
【总页数】4页(P1292-1295)
【作者】刘佩;杜芬;邓静怡;曾蒋玲;卢小舒;蓝培基
【作者单位】韶关学院
【正文语种】中文
【中图分类】Q943.2
【相关文献】
1.应用流式细胞术测定药用植物黄芩基因组大小
2.基于流式细胞术和基因组Survey的花榈木基因组大小及特征分析
3.DNA流式细胞术及其在植物基因组大
小与倍性检测中的研究与应用4.基于流式细胞术与基因组Survey分析白及基因组大小及特征
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
流式细胞术在植物学研究中的应用——检测植物核DNA含量和倍性水平
流式细胞术在植物学研究中的应用——检测植物核DNA含
量和倍性水平
弓娜;田新民;周香艳;刘建全
【期刊名称】《中国农学通报》
【年(卷),期】2011(27)9
【摘要】流式细胞仪作为高效的检测工具,在植物学研究的多个领域都发挥了重要作用。
兰州大学干旱与草地生态教育部重点实验室分子生态所通过大量的植物流式细胞术实验,针对检测植物核DNA含量和倍性水平,总结出一套详细通用的实验方法。
同时着重阐述了各个实验环节的关键点,分析因碎片过多而导致实验失败的原因,并提供了切实可行的解决方法。
对今后检测各种植物具有重大指导意义,同时也促进了流式细胞术在植物学研究中的应用。
【总页数】7页(P21-27)
【关键词】流式细胞术;植物核DNA含量;倍性水平;C值
【作者】弓娜;田新民;周香艳;刘建全
【作者单位】兰州大学干旱与草地生态教育部重点实验室分子生态所,兰州730000;甘肃农业大学生命科学技术学院,兰州730000
【正文语种】中文
【中图分类】Q943
【相关文献】
1.水稻细胞核 DNA 含量和倍性的流式细胞术测定 [J], 覃永华;徐鑫;王春台
2.应用流式细胞计检测肾癌和膀胱腺癌的DNA含量研究倍体状态能否超越肿瘤分期提高对预后的判断 [J],
3.流式细胞术在水生生物DNA含量和倍性分析中的应用 [J], 耿波;孙效文
4.利用流式细胞术鉴定甜樱桃砧木细胞核DNA含量和染色体倍性 [J], 吴雅琴;周锡明;陈龙;程和禾;李玉生;吴永杰;赵艳华
5.中国吊钟花属植物核DNA含量(2C-值)与倍性水平研究 [J], 梁华;蒋露;朱大海;周建伟;范邓妹;张志勇
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
目前 $ 细菌人工染色体! X 7 ; 0 1 / 8 7 :7 / 0 8 = 8 ; 8 7 :; 5 / . G . ? $ 也能被分开分析 ’ ( R . G 1 R X J >" 将这个技术修改用于植物染色体研究进展并不
&’
&! 流式细胞术分析染色体的基本原理
’ & ($ & & 此外许多 植 物 很 难 进 行 悬 浮 的 细 胞 培 观察到 & $
养 ( 最近人们使用活跃生长的植物根尖用于染色体 不需要严格 的分离 ( 这个方法 似 乎 更 简 单 而 有 效 $ 的组织培养且 核 型 稳 定 ( 从 植 物 根 尖 分 离 染 色 体 $ 至今有多个种的流式核型被构建 ( 一个好的流式核型的获得依赖于染色体悬浮液 质量 $而染色体悬浮液的质量很 大程度 上与 材料中 中期染色体的比例 有 关 $ 高比例游离的而又少细胞 杂质的中 期 染 色 体 悬 浮 液 是 高 质 量 的 染 色 体 悬 浮
测$ 最终在电脑中 形 成 一 个 直 方 图 $ 在 这 个 图 中$ 每 一个 峰 代 表 一 个 或 一 组 染 色 体 ( 从 & * " ’年首次使 流式核型分析被证明 用流式细胞仪分析 染 色 体 起 $ 是一个非常有用的 工 具 $ 它能快速精确定量地检测 染色体数目和结构 的 畸 变 % 非整倍体和染色体缺失 也能很容易被检测到 ( 人类染色体流式核型分析技
/ 0 1 2 -$ # ( ( " !$ 9 1 + 2"
# 5 7 0 ’ * / , ’ < : . Q; 0 . G 1 0 / 1 = 1 / R 0 . 0 5 10 1 ; 5 9 8 , 1Q 5 1 / 10 5 1G 1 7 R , / 1 G 1 9 0 . = 0 5 1R 8 ; 7 : 7 9 2; 5 1 G 8 ; 7 : ; 5 7 / 7 ; 0 1 / 8 R 0 8 ; R 4 4/ S 4 $ . =7 / 0 8 ; : 1 R 8 9 ; : , 2 8 9 5 / . G . R . G 1 R 9 , ; : 1 8 7 9 2; 1 : : R 8 RG 7 2 17 R 0 5 17 / 0 8 ; : 1 R7 R R 8 97 = : , 8 2R 0 / 1 7 G0 5 / . , 57G 1 7 R , / 8 9 T; T T " = : . Q; 0 . G 1 0 / 7 9 7 : R 8 R5 7 R: 7 1 27 9 8 G . / 0 7 9 0 / . : 18 95 , G 7 9T 1 ? . 8 9 0 R , / / . , 9 2 1 23 97 / / 7 = 2 1 0 1 ; 0 . / R @ < > U! 4 4 4 4 47 4. $ $G : 9 . G 1/ . 1 ; 0 R @ E 5 8 R 0 1 ; 5 9 8 , 1 8 R9 . Q8 9 ; / 1 7 R 8 9 R 1 20 .1 R 0 7 3 : 8 R 5= : . QV 7 / . 0 1 R R . / 0; 5 / . G . R . G 1 R 7 1 9 1 R 4 -T H S T 4, 4 7 9 2; . 9 R 0 / , ; 0W 6 J: 8 3 / 7 / 8 1 R 8 9: 7 9 0 R @ E 5 8 R1 / / 1 C 8 1 Q 1 2/ . / 1 R R 8 9 = : . Q; 0 . G 1 0 / 8 ;7 9 7 : R 8 R. = : 7 9 0 1 9 . G 1 R @ 7 T 4 4 T # % % % 1 : 7 9 0 ; 5 / . G . R . G 1 = : . QV 7 / . 0 8 ) # * 1 0 < : . Q; 0 . G 1 0 / ; 5 / . G . R . G 1R . / 0 8 9 ; 5 / . G . R . G 1 ? R 1 ; 8 = 8 ; : 8 3 / 7 / 4 4 4 T 4 4 &$
#’ ( 后计算机软件分析处理这些数据 &
顺利 $ 主要原因是由 于 很 难 制 备 适 合 流 式 分 析 的 染 许多 植 物 有 相 似 的 染 色 体 形 态 大 小 使 色体悬浮液 $ 分辨单个染色体变得困难 ( 第一次用于流式细胞仪 分析和分类的植物染色体悬浮液是用体外生长的单
’ & 冠毛植物的悬浮细胞制备的 & ( 悬浮培养的细 胞是
! " # $% ’ # ( ) ’ * + ,. / " 0 + 0/ . 12 # * ’ + . 45 " / . ’% 6 * # ( # 0 # ( ) 0 & & 3#
$ K L K 8 ? M 8 7 + N 6 OP , 9 ? > 5 , 9
! / 0 1 2 -3 + 4 * 5 6 + 7 9 : ; ; * *: < = + < *( > + * > * 6$ ? * 2 @ : 5 2 7 : 5 < 7 1 *A + + 6 7 5 <" B 0 > 2 7 + : -: <C ; 2 7$ * 4 * ; : E * 7 2 ;) + : ; : . 8$ 8$ . 8= 8: 8: D
类$ 开创了流式细胞遗传学
用于基因组大小测量 ! 包括专门的 J E和 O > 碱基对 内容 " ) 细胞周期分析 ) 流式核型 ! 通过测 (
收稿日期 ! 修回日期 ! ! ( ( $ ( ) ! (" ! ( ( $ & ( ( * "和湖北省杰出青年基金 & 基金项目 ! 国家自然科学基金 ! 编号 # # ( ! " ( % " )% # ( ! " ( " $ ( + , . / 0 1 23 0 5 16 7 0 8 . 9 7 : 6 7 0 , / 7 : + ; 8 1 9 ; 1< . , 9 2 7 0 8 . 9. => 5 8 ? 4 ! " ’ 9 7 6 . @ # ( ! " ( % " )% # ( ! " ( " $ ( 7 9 2 0 5 16 7 0 , / 7 :+ ; 8 1 9 ; 1< . , 9 2 7 0 8 . 9. =A , 3 1 8B / . C 8 9 ; 1 作者简介 ! 李立家 ! $ 男$ 博士 $ 专业 # 植物分子细胞遗传学 (E # # & * % "D " 1 : ( ! " ? % ) " % ) $ ’ ( ’$ F ? G 7 8 : : : 8 7 ) )"4 7 5 . . @ ; . G@ ; 9 H
& &’
流式细胞技术用于植物基因组分析分拣有一些 优势 $ 正如在人和哺乳动物染色体的研究 $ 流式核型 分析和染规 模W 6 J 测序和基 因 定 位 技 术 的 进 展 大 大 促 进 了 其 他大基因组植物的 分 析 $ 许多植物基因组遗传和物 分子标记技 术 以 及 基 因 克 隆 等 的 研 究 目 前 理作图 $ 正迅速进行 $ 然而许多植物基因组很大 $ 而且包含着 大量的重复 W 这些重复 W 6 J$ 6 J 阻碍它们基因组的 分析和功能基因的图位克隆 ( 发展染色体分拣技术 将加强这些植物染色体和基因组分析以及基因定位
首先用专 性 结 合 染 色 体 ! 的荧 W 6 J 或 蛋 白 质" 光染料染色 $ 或用耦连有荧光染料的 抗 体或 W 6 J探 针结合染色体 $ 然后 流 式 细 胞 仪 通 过 测 量 荧 光 染 料 的荧光强 度 而 对 染 色 体 进 行 快 速 定 性 和 定 量 的 分 析 ( 在一个带有分拣 设 备 的 流 式 细 胞 仪 ! 也叫荧光 激 活 流 式 细 胞 分 拣 仪$ < : , . / 1 R ; 1 9 ; 1 ? 7 ; 0 8 C 7 0 1 2; 1 : : 中$ 染色体 悬 浮 液 被 吸 入 注 射 进 一 个 $ R . / 0 1 / < J > +" 流式室 ! 喷管 " $ 这个流式室中充满了正在高速地流 动的套式 流 体 ! 通常是去离子水或 B ( X + 盐 溶 液" 样品在直径为 ’ G 的孔中加速流动导致染色 (!) (# 体在液流的中间一 个 一 个 的 流 动 $ 这个过程被称为 流水动力学聚 焦 ( 在 流 体 中 的 染 色 体 以 ! * (G R的 速度流动 $ 穿过一束强光 $ 波长调节为能激发结合染 色体的染料 ( 可调的汞离子光源或高压汞弧光灯是 最常用的激发光 源 ( 激 发 光 引 起 染 料 发 荧 光 $ 同时 染色体结构引起荧 光 散 射 $ 向前散射的激发光被一 向右角 散 射 的 光 和 染 色 体 自 发 荧 光 被 个透镜接收 $ 另一个透镜收集 ( 这些收集的光分别被不同的探测 器! 光电二极管或光 电 倍 增 管 " 转 换 成 电 流 信 号$ 最
! 遗!传 ! " # # " # " $ % & ’ (! ) * + + ! " $ % &!$ % ’$ ! ( ( ’ , ."
技术与方法
流式细胞术分析和分拣植物染色体
李立家 ! 宋运淳
! " 武汉大学生命科学学院植物发育生物学教育部重点实验室 $ 武汉 $ # ( ( " !
摘!要! 流式细胞术是当染色体 ) 细胞核和细胞等颗粒随着流动的液体 ! 水或缓冲 液 " 通过一个测量点时$ 被探测器 探测到 $ 这样根据颗粒的物理和化学特征而将不同的颗粒分开并计数分拣的技 术 ( 流 式 细 胞 分 析 在 人 类 基 因 组 计 划中发挥了重要作用 $ 流式细胞技术的应用也适用于植物 $ 目前这个技术应用范 围 包 括 流 式 核 型 分 析 $ 分析方面的研究进展 ( 关键词 ! 流式细胞仪 % 植物染色体!!!! 文献标识码 ! ! " 文章编号 ! ( ! ’ #D* " " ! ! ( ( ’ ( #D( $ % &D( ’