临床免疫学实验诊断
临床免疫学检验项目
临床免疫学检验项目一、引言临床免疫学检验项目是通过检测人体免疫系统的功能和免疫相关指标，以辅助临床诊断和监测疾病进展的一种重要实验室检查方法。
免疫学检验项目广泛应用于各个领域，包括感染病、自身免疫病、肿瘤、器官移植、过敏性疾病等。
二、常见的临床免疫学检验项目1. 免疫球蛋白检测免疫球蛋白（Immunoglobulins，Ig）是人体内最重要的抗体，可分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE等不同类型。
通过检测免疫球蛋白的水平，可以评估人体免疫系统的功能状态，判断是否存在免疫缺陷或免疫异常。
2. 细胞免疫功能检测细胞免疫功能检测主要包括淋巴细胞亚群分析、细胞因子检测和免疫细胞功能评价等。
淋巴细胞亚群分析可通过检测CD4+和CD8+T 细胞的比例，评估免疫系统对感染和疾病的应答能力。
细胞因子检测可以检测IL-2、IL-6、IFN-γ等细胞因子的水平，用于评估炎症反应和免疫调节功能。
免疫细胞功能评价可以通过检测免疫细胞的增殖、杀伤力和吞噬功能等指标，评估免疫细胞的功能状态。
3. 自身抗体检测自身抗体是指机体免疫系统异常产生的针对自身组织或器官的抗体。
自身抗体检测可以帮助诊断自身免疫病，如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等。
常见的自身抗体检测项目包括抗核抗体（ANA）、类风湿因子（RF）、抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCAs）等。
4. 过敏原检测过敏原检测是通过检测人体对特定过敏原的免疫反应，帮助诊断和治疗过敏性疾病。
常见的过敏原检测方法有皮肤划痕试验、血清特异IgE抗体检测和免疫球蛋白E（IgE）介导的组织释放试验等。
5. 肿瘤标志物检测肿瘤标志物检测是通过检测体液或血清中特定蛋白质的水平变化，辅助肿瘤的早期诊断、疾病进展监测和预后评估。
常见的肿瘤标志物检测项目包括癌胚抗原（CEA）、前列腺特异性抗原（PSA）、甲胎蛋白（AFP）等。
三、临床意义和应用临床免疫学检验项目在临床诊断和治疗中具有重要意义。
通过对免疫学指标的检测，可以辅助诊断免疫缺陷病、自身免疫病、感染病等，并评估疾病的严重程度和预后情况。
免疫学检验
免疫学检验概述免疫学检验是一种通过检测人体免疫系统的功能和状态来评估健康状况的方法。
免疫学检验主要用于检测和诊断免疫相关疾病、监测免疫治疗效果和评估免疫功能。
在免疫学检验中，通常使用抗体和抗原相互作用的原理进行检测。
抗体是一种由免疫系统产生的特异性蛋白质，可以与抗原结合，形成免疫复合物。
通过检测免疫复合物的形成和浓度变化，可以获得相关信息和数据来评估免疫系统的功能和状态。
常见的免疫学检验方法免疫荧光检测免疫荧光检测是一种常用的免疫学检验方法。
它利用荧光标记的抗体与目标分子（如抗原、细胞表面分子等）发生特异性结合，然后使用荧光显微镜观察荧光信号的强度和分布情况。
免疫荧光检测具有高灵敏度和特异性的优势，可以用于检测抗体、抗原和免疫细胞的分布和表达情况。
在临床诊断中，免疫荧光检测常用于检测自身抗体、病毒抗体和细胞免疫功能等方面。
免疫酶联免疫吸附试验（ELISA）免疫酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种常见的免疫学检验方法。
它基于酶标记的抗体与抗原特异性结合的原理，利用酶催化的反应产生可测量的信号。
ELISA具有高精确性和灵敏度的特点，可用于检测抗体、抗原和细胞因子的浓度。
在临床检验中，ELISA常用于检测病毒感染、风湿性疾病和免疫调节等方面。
流式细胞术流式细胞术是一种免疫学检验方法，可以同时检测和分析多种免疫细胞类型和功能的改变。
它基于细胞表面标志物的特异性结合和荧光标记的抗体的检测，通过流式细胞仪实现高通量的细胞检测和分析。
流式细胞术广泛应用于免疫学研究和临床诊断中。
它可以用于检测细胞表面分子的表达情况、分析细胞亚群的比例和功能状态，并可进行细胞分选和细胞功能实验等。
免疫学检验的临床应用免疫学检验在临床诊断和治疗中具有重要的应用价值。
它可以用于检测和诊断多种免疫相关疾病，如自身免疫病、感染性疾病和免疫缺陷病等。
在自身免疫病的诊断中，免疫学检验可以检测自身抗体的产生和水平变化，帮助确定疾病类型和活动度。
免疫学检验的方法和特点
免疫学检验的方法和特点免疫学检验是一种通过检测和分析机体免疫系统相关指标来评估机体免疫功能的方法。
它可以用于疾病的诊断、预防和治疗过程中，对于研究免疫系统的功能和疾病的免疫机制也具有重要意义。
免疫学检验的方法主要包括体外诊断试验、免疫组化技术和流式细胞术等。
下面将逐一介绍这些方法的特点和应用。
1. 体外诊断试验：体外诊断试验是最常用的免疫学检验方法之一，包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫分析（RIA）、免疫印迹（Western Blot）等。
这些试验通过检测血清中的抗体或抗原来评估机体的免疫状态。
其特点是操作简单、结果准确可靠、样本来源广泛，可以用于检测多种疾病，如感染病、自身免疫病等。
体外诊断试验的优势在于可以进行大规模筛查，对于人群健康状况的监测和疾病的早期诊断具有重要意义。
2. 免疫组化技术：免疫组化技术是利用抗体与组织或细胞中特定分子的结合反应来检测和定位这些分子的方法。
常用的免疫组化技术包括免疫组织化学（IHC）和免疫荧光染色（IF）等。
这些技术可以用于检测和定位肿瘤标志物、炎症细胞因子、免疫细胞表面标志物等，对于疾病的诊断和治疗有重要的指导意义。
免疫组化技术的优势在于可以直接观察到分子的表达和分布情况，具有较高的灵敏度和特异性。
3. 流式细胞术：流式细胞术是一种通过检测和分析细胞表面标志物来鉴定和分类细胞的方法。
通过标记细胞表面的抗原或抗体，结合流式细胞仪的高速流式分析技术，可以对单个细胞进行高通量的检测和分析。
流式细胞术可以用于检测和鉴定免疫细胞亚群、肿瘤细胞、干细胞等，对于疾病的诊断和治疗选择有重要的指导作用。
流式细胞术的优势在于可以同时检测多个指标，对于复杂的样本分析有较高的效率和准确性。
免疫学检验的特点包括以下几个方面：1. 高度特异性：免疫学检验方法可以通过特异的抗体-抗原反应来检测和定量分析特定的分子或细胞，具有较高的特异性。
这使得免疫学检验方法在疾病的诊断和治疗中具有重要的优势，可以准确地鉴定和区分不同的疾病类型。
临床免疫学检验
一、名解带现象（前带、后带）：在等价带的前后，由于抗体和抗原过量，形成的沉淀物少，上清液中可测出游离的抗体或抗原，这种现象称为带现象。
当抗体过量时称为前带，抗原过量时称为后带。
凝集反应：是指细菌和红细胞等颗粒性抗原或表面包被可溶性抗原（或抗体）的颗粒性载体与相应抗体（或抗原）特异性结合后，在适当电解质存在下，出现肉眼可见的凝集现象。
直接凝集反应：在适当电解质参与下，细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原直接与相应抗体结合出现肉眼可见的凝集现象，称为直接凝集反应。
间接凝集反应：将可溶性抗原（或抗体）先吸附于适当大小的颗粒性载体（如正常人O型红细胞、细菌、胶乳颗粒等）的表面，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适当电解质存在条件下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应或被动凝集反应。
Coombs试验：又称抗球蛋白试验，是抗球蛋白参与的间接血凝试验，用于检测抗红细胞不完全抗体。
不完全抗体多半是7S的IgG类抗体，能与相应的抗原牢固结合，但因其分子量较小，体积小，不能起到桥联作用，在一般条件下不出现可见反应。
利用抗球蛋白抗体作为第二抗体起桥联作用，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗体，使红细胞凝集。
沉淀反应：是指可溶性抗原与相应抗体在适当条件下发生特异性结合而出现可见的沉淀现象。
高剂量钩状效应：抗原过量可引起高剂量钩状效应，即抗原过量致形成的IC分子小，发生再解离，浊度下降，光散射减少。
海德堡曲线理论：当抗体过量时，IC的形成随着抗原递增至抗原、抗体比例最适处达最高峰，沉淀反应最明显，称等价带，高峰区域左侧，抗体浓度过高，沉淀反应不明显，称前带；高峰区域右侧，抗原浓度过高，沉淀反应也不明显，称后带，这就是海德堡曲线理论。
包被：将抗体或抗原结合在固相载体上的过程称为包被。
封闭：由于包被过程中固相载体表面不能被抗体或抗原蛋白质完全覆盖，实验操作过程中加入的血清标本以及酶结合物中的蛋白质也会部分地非特异性吸附于固相载体表面，最终产生非特异性显色导致测定本底偏高，在这种情况下，需用1%-5%的牛血清白蛋白或5%-20%小牛血清再包被一次，消除此干扰，此过程称为封闭。
实验诊断学--临床常用免疫学检查 ppt课件
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IgM 约占血清总Ig的 5%~10%
分子量最大（900000），由五个IgM 单体连接而成，故又称巨球蛋白。
脾脏是它的主要合成部位，IgM主要分 布于血液中，防止发生菌血症方面起重 要作用，半衰期5天左右。
天然同族凝集素抗 A抗B、冷凝集素及 伤寒沙门菌的抗体
均属此类。
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百分比
参考值
正常人群各年龄 段个体中血清 IgG、IgA、IgM 的含量有很大差
异
70%-80% 7.0-16.6g/L
10%-15% 0.7-3. 5g/L
5%-10% 0.5-2.6g/L
0.02%-1% 0.6-2.0mg/L
0.002% 0.1-0.9mg/L
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测定方法
❖ 血清中含量较高的 IgG、IgA、IgM多 采用单向免疫扩散法、火箭免疫电泳法和免 疫比浊法，而标本中含量极微的IgD和IgE则 采用敏感度较高的放射免疫法和酶免疫法等 进行定量测定。
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IgG 占总Ig的70%~80%
是血清中的主要抗体，主要由脾脏和 淋巴结合成，在机体的免疫防御中起重要作 用，抗细菌、病毒和寄生虫等，还具抗毒素 作用，为不完全抗体，分子量小 （150000），唯一能自由地通过胎盘。
半衰期约为23天， 故临床上使用丙球 作治疗时以2～3周
注射一次
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22
高Ig血症
❖ 慢性细菌感染:肺结核,麻风,慢性支气管炎, 感染早期IgM显著升高，以后IgG升高，IgA 也可升高。
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IgA 约占血清总Ig 10%~15%
分为血清型与分泌型两种，具有抗细 菌、抗病毒、抗毒素作用，其中的分泌 型（SIgA）在局部与抗呼吸道、消化道 和泌尿生殖道感染、炎症或肿瘤等病变 密切相关,是抗过敏的重要免疫屏障。
实验诊断学：临床常用免疫学检测
各种免疫复合物性疾病等。
二、补体C3 、C4检测
C3：含量最高，是补体系统经典激活途径与旁路激活途径的 汇合点和关键物质，为急性时相反应蛋白。
C4：参与经典途径，多种生物学功能。 临床意义： （1）增高：急性炎症、传染病早期、组织损伤、移植排斥反应
(一)正常血清免疫球蛋白（五大类） ：有抗体活性
IgG---含量最多、比例最高、唯一通过胎盘的主力抗体。 IgA---分泌型IgA（SIgA）主控黏膜局部免疫，存在于外
分泌液中（如唾液、泪液、母乳等）。 IgM---分子量最大、凝集和溶解力最强。 IgD---含量很低功能不祥。 IgE---含量最低、亲细胞、参与变态反应（如寄生虫感染、
NK细胞活性：减低见于血液系统肿瘤、实体瘤、免疫缺 陷病、艾滋病和某些病毒感染等；升高见于宿主抗移植 物反应。
抗体依赖性细胞介导的细胞毒（ADCC）:由细胞表面的抗 体Fc受体介导。
四、细胞因子（cytokine,CK）检测
概念：细胞因子是一类由免疫细胞和相关细胞产生的调节细胞功能的 高活性、多功能、低分子的分泌性蛋白质，属于微量免疫调节因子。
参考值：形态学法的转化百分率为（60.1±7.6）%。 临床意义：同前，但Down综合征时明显升高。
（三）T细胞分化抗原（CD）测定
1.T细胞分化抗原主要类别： CD3+ —代表总T细胞、 CD4+ —代表T辅助性 细胞（Th）、 CD8+ —代表T抑制性细胞（Ts）。
2.临床意义： CD3+降低：自身免疫性疾病（AID），如SLE、RA等。 CD4+降低：恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷症、 AIDS、应用免疫抑制剂者
临床常用免疫学检验
〖临床意义〗 1. IgE增高：见于IgE型多发性骨
髓瘤、特应性哮喘、特应性皮炎、过敏 性鼻炎、寄生虫感染、热带嗜酸细胞增 多症、SLE、RA及某些霉菌病等。
2. IgE减低：一般无意义。可见于 原发性无丙种球蛋白血症、恶性肿瘤及 细胞毒药物治疗后。
〖注意事项〗 年龄、性别均可影响总IgE水平。一
〖参考值〗 依年龄、性别、地区等因素有 差异。
IgG： 6.94－16.18g/ L IgA： 0.68－ 3.78g/ L IgM： 0.60－ 2.63g/ L 〖临床意义〗 1. Ig 含量减低：一种或多种Ig 水 平减少，分原发性和继发性。见于各种先 天性或获得性免疫缺陷病。继发性常与免 疫抑制剂应用、射线、蛋白质丢失、营养 不良等有关。也可见于细胞毒药物治疗后。
一些专家认为，目前应用的实验室检查项 目，在临床应用前并未给予充分的评价。 Jaeshke等认为，判断一项诊断试验是否 有用的最终标准是：试验是否增加了有用 的诊断信息。Burke认为,如果一项试验主 要用于筛检，其敏感性一定要高，但易出 现假阳性。任何新的检验只有在充分评价 其可靠性、准确性后才能用于临床实践。 而现实是，由于制造商的热情提供试剂、 临床医师和检验人员的欣然接受含量因检测方法不同而有差别，各地 区参考值也不相同，在判断结果时应综 合考虑。如有“M 蛋白”，可进一步作 血清或尿液免疫电泳，检测轻链和重链。
二. 血清总IgE测定 IgE为血清中含量极少的一种免疫球蛋白，
与过敏性疾病和寄生虫感染有关。目前检测 方法有多种，包括 ELISA、间接血凝试验 （indirect hemoagglutination assay IHA ）、 RIA、电化学发光法 （electrochemiluminescence immunoassay， ECLIA，）、IFA 等。 〖参考值〗 0.1-150IU/ml
11免疫学实验诊断
3
免疫学技术的发展史
年代 1894 J. Bordet 学者 贡献 补体与溶菌活性
1896
1896 1897
H. Durham, M. von Gruber
G. Widal, A. Sicad 淀试验
1900
1900 1906 1935 1941 1946 1948 1953 1960 1966 1975
免疫复合物的 浓度与透射光 的衰减呈正相 关
测吸光度 计算抗原 或抗体的 含量
抗体
抗原
6
血清IgG、IgA、IgM测定的临床意义
低Ig血症:先天性低Ig血症（免疫缺陷病） 获得性低Ig血症(蛋白丢失) 高Ig血症:多克隆Ig增高（感染） 单克隆Ig增高（免疫增殖病）
7
血清IgD、IgE测定
正常人血清中IgD含量很低，膜结合型 IgD(mIgD)构成BCR，是B细胞分化发育成熟 的标志。
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（二）B细胞免疫检测
B细胞表面有：膜表面免疫球蛋白
(SmIg)、CD抗原、Fc受体、补体受体、 EB病毒受体和小鼠红细胞受体等标 志。
37
方法：免疫荧光法、流式细胞术 临床意义： 升高：急性淋巴细胞白血病（B细胞型）、 慢性淋巴细胞白血病和Burkitt淋巴瘤等。 降低：无丙种球蛋白血症、放化疗及使 用免疫抑制剂等。
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补体总活性测定方法是以红细胞的 溶解为指示，以50%溶血为判断终点， 称为CH50。
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补体含量和活性相关的疾病
1．免疫相关性疾病： 如自身免疫性疾病时，C1、C2、C3、C4和Hf等缺陷； 超敏反应时（III型超敏反应），C3a、C5a等过敏毒素的产生。 2．与补体有关的遗传性疾病： ①C2、C3缺陷导致的严重感染； ②与C1抑制物缺陷相关的遗传性血管神经性水肿 ③SLE患者出现的细胞表面CR1缺陷与C1C清除障碍 ④涉及I因子、H因子缺陷的肾小球肾炎； ⑤DAF缺陷引起的阵发性血红蛋白尿； ⑥C1q缺陷表现的严重顽固性皮肤损害，以及C1q、 C1r、C4、C2缺陷造成的 (图)血管神经性水肿 免疫复合物性血管炎（包括肾炎）等。
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免疫比浊法原理
抗体 抗原
免疫复合物的 浓度与透射光 的衰减呈正相 关
测吸光度 计算抗原 或抗体的 含量
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概述：标记免疫技术
概念：用荧光素、酶、同位素等标记抗体 或抗原用以测定相应抗原或抗体的技术。
免疫荧光技术、酶免疫技术、放射免疫检 测技术等。
特点：敏感、特异、快速，能定性、定量、 定位。
3
临床免疫学实验诊断
• 实验诊断学 • 临床免疫学实验诊断
临床免疫学实验诊断
• 概述 • 感染性疾病免疫学诊断 • 肿瘤免疫学诊断 • 免疫增殖和免疫缺陷病诊断 • 超敏反应性疾病免疫学诊断 • 自身免疫性疾病诊断 • 移植免疫学 • 临床免疫学检验的自动化
5
免疫与疾病 6
免疫系统功能的生理和病理表现
1.血清抗链球菌溶血素“O”试验：A链 • 近期感染，活动性风湿热、风湿性关节炎、
• 抗HCV IgM早期诊断。 • 确证 免疫印迹法
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丁型肝炎免疫学检测
1）HDV抗原 2）抗HDV IgM 3）抗HDV
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戊型肝炎免疫学检测
抗体检测
IgM型：诊断指标， ELISA法
IgG型：双份血清，流 行病学调查、既往 感染或疫苗接种效 果评价
病毒抗原
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（二）细菌感染免疫学诊断
人感染病原体产生特异性抗体可持续一段时 间，→现症诊断，疾病追溯。
功能名称
生理功能
病理表现
免疫防御 清除病原微生物及其它抗 超敏反应（强）
原性异物
免疫缺陷病（弱）
免疫自稳 清除损伤或衰老细胞
自身免疫性疾病
免疫监视 清除突变或畸变细胞，防 肿瘤或病毒持续性感 止肿瘤发生、杀伤病毒感 染 染细胞
临床免疫学与免疫检验
• 免疫检验可分为两部分：
• 一部分为利用免疫检测原理与技术检测免 疫活性细胞、抗原、抗体、补体、细胞因 子、细胞粘附分子等免疫相关物质；
实验诊断学
临床免疫学实验诊断
1
目的要求
• 病毒性肝炎免疫学特征、免疫学检测方法和意义 • 肿瘤标志物的检测特征及其意义 • 自身免疫性疾病的特点和主要指标 • 酶联免疫吸附试验的原理，方法
• 酶免疫组化技术概念、过程及应用。 • 沉淀试验、凝集试验和标记技术原理 • 细胞因子的检测及临床应用 • T细胞和B细胞免疫缺陷病检测方法 • 移植排斥反应的免疫学监测 • 外周血单个核细胞的分离方法；细胞表面标志检测
• 另一部分是利用免疫检测原理与技术检测 体液中微量物质如激素、酶、血浆微量蛋 白、血液药物浓度、微量元素等。
年代
1894 1896 1896 1897 1900 1900 1906 1935 1941 1946 1948 1953 1960 1966 1975
免疫学技术发展史
学者
J. Bordet H. Durham, M. von Gruber G. Widal, A. Sicad R. Kraus J. Bordet, O. Gengou K. Landsteiner A. Wassermann M. Heidelberger, F. Kendall A. Coons J. Oudin O. Ouchterlony, S. Elek P. Grabar, C. Williams R. Yallow, S. Berson S. Avrames, J. Uriel, et al G. Kohler, C. Milstein
25
甲型肝炎免疫学检测
免疫电镜查病毒颗粒。放射免疫 (RIA) 或酶 免疫 (EIA) 测抗原。
26
甲型肝炎免疫学检测
• 抗体检测
–IgM型：常用IgM抗体捕 捉ELISA检测法
–IgG型：双份血清，用 于流行病学调查、既往 感染或疫苗效果评价
• 抗原检测
–ELISA夹心法 –难以常规开展
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乙型肝炎免疫学检测
16
免疫荧光技术
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酶联免疫吸附试验(ELISA-间接法1)8
斑点金免疫渗滤试验
A
加尿样
B
除去滤器
C
D
加胶疫层析试验
质控线 测试线
尿样
阳性 弱阳性 阴性 无效
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化学发光/电化学发光技术
免疫印迹法图解
电转印至NC膜上
SDS裂解 病毒
聚丙酰胺凝胶电泳
携带者
+
+
-
-
+ 急性或慢性乙型肝炎（传染性强，
“大三阳”）
+
-
-
+
+ 急性感染趋向恢复（“小三阳”）
-
-
+
+
+ 既往感染恢复期
-
-
+
+
- 既往感染恢复期
-
-
-
-
+ 既往感染或“窗口期”
-
-
+
-
- 既往感染或接种过疫苗
30
丙型肝炎免疫学检测
• 免疫学：筛选试验 ELISA、放射免疫法抗 HCV IgG或IgM。
-
+
置待测血清中，漂洗； 加酶标抗抗体，漂洗；
加底物 显色
95
68 45 12KD
120
41 24KD
22
临床应用
一 感染性疾病免疫学诊断
• （一）病毒性肝炎 • （二）细菌感染 • （三）病毒感染 • （四）真菌感染 • （五）寄生虫感染 • （六）其他
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肝炎
• 甲型肝炎乙型肝炎 • 丙型肝炎丁型肝炎 • 戊型肝炎
应过程 • 标记技术、单克隆技术、高智能自动化技术的最佳组合
免疫检验涉及的主要技术
• 放射免疫技术 化学发光免疫技术 • 荧光免疫技术 流式细胞免疫技术 • 酶联免疫技术 免疫印迹技术 • 透/散射免疫技术 单克隆抗体技术
概述：凝集反应
12
T细胞亚群的检测——花环法（一）13
单向琼脂扩散试验
贡献
补体与溶菌活性 特异凝集反应 肥达试验 沉淀试验 补体结合反应 人类ABO血型及其抗体 梅毒补体结合反应 纯化抗体,定量沉淀反应 免疫荧光标记 凝胶内沉淀反应 双扩散沉淀反应 免疫电泳分析,Ig多样性 放射免疫标记 酶标免疫技术 杂交瘤技术与单克隆抗体
发展进程的主要阶段
• 自然的肉眼观察的抗原抗体反应（沉淀反应、凝集反应） • 加速的肉眼观察的抗原抗体反应（电泳技术、分离技术） • 标记性免疫技术提高抗原抗体反应的特异性、敏感性 • 半自动、自动化检验仪器与免疫反应原理结合，加快了反
• 乙肝患者最多国家。发病前五：死亡前五：
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实验室检查
蛋白质代谢功能检查 胆红素代谢检查 常用的血清酶及同工酶检查 肝纤维化常用标志物检测
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乙型肝炎病毒抗原抗体系统检测结果分析
HBsAg HBeAg 抗-HBs 抗-HBe 抗-HBc
结果分析
+
-
-
-
- HBV感染或无症状携带者
+
+
-
-
- 急性或慢性乙型肝炎，或无症状