复习_单克隆抗体的过程
单克隆抗体的流程
单克隆抗体的流程单克隆抗体的那些事儿。
一、免疫动物。
要得到单克隆抗体呀，得先找个合适的小动物来进行免疫。
一般会选择小鼠之类的小可爱哦。
为啥选小鼠呢？因为它们好养呀，而且繁殖快，成本也比较低呢。
就像我们出门旅行会选择性价比高的酒店一样，选小鼠做这个事儿也是图个实惠又好用。
把抗原，也就是我们想要让小鼠身体识别产生抗体的东西，注射到小鼠体内。
这个过程就像是给小鼠一个小挑战，让它的免疫系统开始工作起来，就像我们被小石子硌了一下脚，身体会做出反应来保护自己一样。
二、细胞融合。
等小鼠的免疫系统被抗原刺激得差不多了，就到了一个超神奇的步骤啦，那就是细胞融合。
我们要从免疫后的小鼠脾脏里取出能产生抗体的B淋巴细胞，再找个小伙伴，这个小伙伴就是骨髓瘤细胞。
这两种细胞就像两个不同的小团队，要把它们融合在一起呢。
这个融合的过程有点像小朋友们玩拼图，把两个不同的部分拼在一起，组成一个新的东西。
这个新的细胞就叫做杂交瘤细胞啦。
不过这个融合可不容易，就像要让两个性格不太一样的人突然变得很默契一样难呢。
所以呀，还得加一些特殊的试剂来帮忙，就像给它们之间加点小魔法一样。
三、筛选杂交瘤细胞。
融合完了之后，可不是所有的细胞都是我们想要的杂交瘤细胞哦。
里面还有好多其他的细胞在捣乱呢。
这时候就得进行筛选啦。
这个筛选的过程就像是在一堆沙子里找珍珠一样。
我们会用一种特殊的培养基，这种培养基就像一个魔法筛子。
在这个培养基里，只有杂交瘤细胞才能生长，其他的细胞就会被淘汰掉啦。
这一步可重要了呢，要是没筛选好，后面得到的单克隆抗体可就不纯啦，就像我们炒菜要是调料没选对，菜的味道就不对了。
四、克隆化培养。
筛选出杂交瘤细胞之后呢，还得把它们单个单个地分开来培养，这就是克隆化培养啦。
这一步就像是把一群小伙伴分成一个个单独的小房间，让它们各自成长。
这个过程有好几种方法呢，比如说有限稀释法。
就像把一杯浓浓的果汁一点点地稀释，最后让每个小杯子里只有一个细胞。
这样每个细胞就可以独立地繁殖，变成一个小的细胞群体啦。
单克隆抗体的过程
单克隆抗体的过程
单克隆抗体的过程是指从单一的淋巴细胞中制备出一种特异性
很高、只与一种抗原结合的抗体。
这种抗体被称为单克隆抗体，是研究和应用领域中非常重要的工具。
单克隆抗体制备的过程主要包括以下几个步骤：
1. 免疫原注射：将一种抗原注射到小鼠或大鼠体内，以激发其
免疫系统产生特异性抗体。
2. 淋巴细胞分离：从小鼠或大鼠的脾脏或淋巴结中取出特异性
抗体产生的淋巴细胞。
3. 融合细胞制备：将淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合，得到一
种能够长期生长和分泌抗体的杂交瘤细胞。
4. 筛选杂交瘤：通过对杂交瘤进行筛选，筛选出只分泌与所需
抗原结合的单克隆抗体的杂交瘤细胞。
5. 培养单克隆抗体：将根据筛选结果得到的杂交瘤细胞进行培养，得到单克隆抗体。
6. 纯化单克隆抗体：采用各种化学和生物学方法，将得到的单
克隆抗体进行纯化和加工处理。
单克隆抗体制备的过程需要经过多个阶段，其中淋巴细胞的分离、杂交瘤的筛选和单克隆抗体的培养是关键步骤。
随着技术的不断发展，单克隆抗体制备的效率和质量也在不断提高，为生命科学和医学研究提供了更加可靠的工具。
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单克隆抗体的制备流程
单克隆抗体的制备流程1.免疫原的制备和动物的免疫：在开始制备单克隆抗体之前，首先需要制备免疫原。
免疫原可以是蛋白质、多肽、多糖、细胞表面抗原等。
制备免疫原的常用方法包括化学合成、原核表达系统、真核表达系统等。
制备好免疫原后，将其与适当的佐剂混合，然后通过注射等方式将免疫原引入到实验动物体内。
通常使用小鼠、大鼠或兔子作为免疫动物。
2.脾细胞的获取和混合瘤细胞的建立：在免疫过程中，免疫原会刺激机体产生大量的抗体。
当机体免疫反应达到一定水平时，需要从免疫动物体内获取脾脏，获得含有抗体产生细胞的脾细胞悬液。
将脾细胞与能激活脾细胞的细胞（如骨髓瘤细胞）进行融合，形成混合瘤细胞。
3.杂交瘤细胞的筛选和鉴定：将混合瘤细胞进行稀释，分装到96孔板中，使每个孔中只包含一个细胞。
这样每个孔中的细胞都是一个潜在的单克隆细胞。
随后，每个孔中的细胞在培养基中进行培养，以使细胞形成单个克隆。
根据杂交瘤细胞产生的特定抗体，可以使用ELISA等方法进行筛选和鉴定，以确定具有所需抗体的杂交瘤细胞。
4.单克隆抗体的生产和纯化：将筛选出来的单克隆杂交瘤细胞进行扩大培养，并定期收集培养上清液以获取单克隆抗体。
为了提高单克隆抗体的纯度和浓度，通常需要对培养上清液进行多次纯化。
典型的纯化方法包括亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析等。
综上所述，单克隆抗体的制备流程包括免疫原的制备和动物的免疫、脾细胞的获取和混合瘤细胞的建立、杂交瘤细胞的筛选和鉴定，以及单克隆抗体的生产和纯化等几个主要步骤。
每个步骤都需要精确操作和耐心等待，但最终可以获得高纯度和高特异性的单克隆抗体，这在生物医学研究和临床诊断中具有重要的应用价值。
单克隆抗体制备步骤及注意事项
单克隆抗体制备步骤及注意事项单克隆抗体（Monoclonal antibody，mAb）是指由单一B细胞克隆分离得到的抗体，其具有高特异性和高亲和力。
制备单克隆抗体的方法主要有杂交瘤技术和重组DNA技术。
以下是单克隆抗体制备的步骤及注意事项。
步骤一：抗原免疫1.选择合适的抗原：根据需要检测的分子或细胞表面标志物，选择合适的抗原。
2.免疫动物：常用的动物有小鼠、兔子等。
选择适合的动物后，根据抗原的种类和免疫动物对该抗原的敏感性，设计免疫方案。
3.免疫计划：免疫计划包括免疫剂量、免疫途径和免疫次数等。
通常先进行原位免疫，然后再以单体或混合抗原进行体内免疫。
步骤二：细胞融合1.收集脾细胞：在最佳时期，解剖免疫动物，取出脾脏。
2.细胞培养：将收集的脾细胞在无菌条件下分散成单个细胞，并在培养基中培养，以供细胞融合使用。
3.准备骨髓瘤细胞：选择合适的骨髓瘤细胞，例如NS0或SP2/0等。
将其培养至对数生长期。
4.细胞融合：在抗原刺激下，将脾细胞与骨髓瘤细胞以一定比例混合，用聚乙烯醇或其他化合物促进细胞融合。
步骤三：细胞筛选与扩展1. HT增重培养：用含有hprt缺陷的培养基筛选融合细胞，以选择杂交瘤细胞。
2. Limited Dilution扩展：以一细胞一孔的方式将杂交瘤细胞进行有限稀释，使其实现单克隆化。
3.细胞培养：将单克隆细胞株移植到培养瓶中，进行培养和扩增。
步骤四：单克隆抗体鉴定1.酶联免疫吸附试验（ELISA）：用ELISA方法筛选单克隆细胞株，检测其抗原特异性。
2.免疫组织化学检测：将单克隆抗体应用于细胞和组织切片，检测其在特定细胞或组织中的反应。
3.流式细胞术：通过流式细胞仪检测单克隆抗体与特定细胞表面标志物的结合情况。
步骤五：单克隆抗体生产与纯化1.细胞培养：将单克隆细胞株培养扩增至一定程度。
2.抗体收集：将培养上清液进行抗体收集。
3.纯化与浓缩：利用亲和层析、离子交换、凝胶过滤等技术，对抗体进行纯化和浓缩。
单克隆抗体高三知识点
单克隆抗体高三知识点单克隆抗体是一类由单一种克隆的细胞分泌的抗体，其具有特异性和高亲和力的特点。
现在让我们来了解一下高三生物单克隆抗体的一些重要知识点。
一、单克隆抗体的概念单克隆抗体是指通过将与特定抗原结合的淋巴细胞与癌症细胞融合，从而获得一种能够识别与之融合的抗原的抗体。
二、制备单克隆抗体的步骤1. 抗原注射：将目标抗原注射到小鼠体内。
2. 细胞融合：分离与抗原结合的淋巴细胞和骨髓瘤细胞，使它们融合成为杂交瘤细胞。
3. 杂交瘤细胞筛选：利用杂交瘤细胞的克隆性，将其培养于选择性培养基中，筛选出能够产生特定单克隆抗体的杂交瘤细胞克隆。
4. 杂交瘤细胞培养：将筛选出的单克隆抗体杂交瘤细胞克隆培养，并收集细胞培养液。
5. 检测单克隆抗体：使用不同的方法对单克隆抗体进行检测，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫组织化学（IHC）等。
三、单克隆抗体的应用1. 生命科学研究：单克隆抗体可以用于研究细胞分子组成、细胞信号传导途径、蛋白质相互作用等。
2. 临床诊断：单克隆抗体可以用于检测疾病标志物，如癌胚抗原、风湿因子等，提高疾病的早期诊断率。
3. 药物研发：单克隆抗体具有特异性和高亲和力，可以作为药物靶点，用于治疗肿瘤、自身免疫病等疾病。
4. 蛋白质纯化：单克隆抗体可以用于纯化目标蛋白质，提高纯度和产量。
四、单克隆抗体的优势和局限性1. 优势：单克隆抗体具有高特异性和高亲和力，能够准确识别目标抗原，具有较低的交叉反应性。
2. 局限性：制备单克隆抗体的过程较为复杂和耗时，制备成本较高；同时，单克隆抗体可能存在较长的保护期，需要定期验证。
五、常见的单克隆抗体药物1. 曲妥珠单抗（Rituximab）：用于治疗非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病等。
2. 重组人源化抗EGFR单抗（Cetuximab）：用于治疗表达高表皮生长因子受体的转移性结直肠癌等。
3. 格列卫单抗（Trastuzumab）：用于治疗表达高表皮生长因子受体2的早期和转移性乳腺癌等。
【高中生物】高中生物知识点：单克隆抗体
【高中生物】高中生物知识点：单克隆抗体单克隆抗体：1、抗体：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。
从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。
2、单克隆抗体的制备（1）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞（2）获得杂交瘤细胞①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合；②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体。
（3）克隆化培养和抗体检测（4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖（5）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取3、单克隆抗体的应用(1)作为诊断试剂，具有准确、高效、简易、快速的优点。
(2)用于治疗疾病和运载药物。
血清抗体与单克隆抗体的比较：名称产生特点血清抗体由B淋巴一般从血清中分离，产量低、纯度低、特异性差单克隆抗体由杂交瘤细胞分泌特异性强，灵敏度高，能大量制备知识点拨：1、融合的结果是有很多不符合要求的；如有2个B淋巴细胞融合的细胞等，所以要进行筛选。
2、筛选出能够分泌所需抗体的杂种细胞。
3、杂交瘤细胞的特点：既能大量繁殖，又能产生专一的抗体。
4、单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。
5、单克隆抗体的作用：作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。
用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症治疗，可制成“生物导弹”，也有少量用于治疗其它疾病。
知识拓展：制备单克隆抗体过程中的筛选：筛选是将未融合的B淋巴细胞、骨髓瘤细胞以及BB融合、瘤瘤融合的细胞通过选择培养基淘汰，筛选出B瘤融合的细胞。
筛选是将产生特定抗体的B瘤细胞通过细胞培养用相应抗原检测的办法筛选出来。
因为从体内取免疫过的B淋巴细胞时取出很多种，形成的杂交瘤细胞有很多种，所以需筛选出产生特定抗体的杂交瘤细胞。
相关高中生物知识点：植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术：1、植物体细胞杂交技术：就是将不同种的植物体细胞原生质体在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成完整植物体的技术。
制备单克隆抗体的过程
制备单克隆抗体的过程
嘿，你知道制备单克隆抗体是多么神奇的一件事儿吗？这就好像是一场精心编排的舞蹈！
首先，得找到合适的抗原，这就好比是为这场舞蹈挑选出最闪亮的主角。
然后，把抗原注射到小鼠体内，让小鼠的免疫系统认识它，这就像是给小鼠发出了一个特别的邀请。
接下来，小鼠的免疫系统开始行动啦！B 淋巴细胞被激活，它们就像是一群充满活力的舞者，开始尽情展现自己的本领。
然后呢，把这些产生抗体的 B 淋巴细胞提取出来，这可不容易哦，得小心翼翼，就像从一堆宝藏中挑选出最珍贵的宝石。
这时候，另一个关键角色登场了，那就是骨髓瘤细胞！把 B 淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合在一起，哇，这简直就是一场奇妙的结合，如同两颗星星碰撞出耀眼的火花！
融合之后，可不是就万事大吉了哦。
还得进行筛选，把那些真正融合成功的细胞挑选出来，这可需要一双敏锐的眼睛，就像在茫茫人海中找到那个对的人。
筛选出来的细胞，就开始大量培养啦！它们不断生长、分裂，就像是一片生机勃勃的花园，绽放出美丽的花朵。
然后，对这些细胞进行鉴定，确保它们能产生我们需要的单克隆抗体。
这就像是给这些花朵贴上属于它们的独特标签。
最后，收获这些宝贵的单克隆抗体，那感觉，真的是太棒啦！就像是收获了满满的果实，充满了喜悦和成就感！
制备单克隆抗体的过程，不就是一场充满挑战和惊喜的冒险吗？它需要耐心、细心和智慧，每一个步骤都至关重要，缺一不可。
这真的是太神奇，太让人着迷了！难道不是吗？我们能够利用这个技术，为医学、生物学等领域带来那么多的帮助和突破，这是多么了不起的事情啊！。
单克隆抗体制备的流程
单克隆抗体制备的流程单克隆抗体的制备就像是一场奇妙又复杂的旅程。
咱先得找到合适的材料。
就好比做菜得先选好食材一样，制备单克隆抗体要选对免疫动物。
这动物可以是小鼠之类的，要健康活泼的。
然后给这小动物注射特定的抗原，这抗原就像是给小动物的身体下达的一个特殊任务指令。
想象一下，这个抗原就像一个小特务，进入动物身体后，小动物的免疫系统就开始警惕起来，体内的免疫细胞就像一个个小战士，开始识别这个外来的“特务”。
免疫细胞里有个很重要的角色叫B淋巴细胞。
这些B淋巴细胞在遇到抗原后就开始发生变化，就像战士们在接受特殊训练一样。
它们会变得能够产生针对这个特定抗原的抗体。
但是呢，B淋巴细胞有个小毛病，就是它在体外不能长时间大量繁殖。
这可咋整呢？这时候就需要找个小伙伴来帮忙了。
这个小伙伴就是骨髓瘤细胞。
骨髓瘤细胞就像一个繁殖小能手，它能在体外不断地分裂繁殖。
不过骨髓瘤细胞它自己可没什么特殊的本领去识别特定抗原产生抗体。
那怎么把这俩的优点结合起来呢？这就有个很巧妙的办法。
把免疫后的动物的脾脏取出来，在脾脏里就有很多经过抗原刺激而产生变化的B淋巴细胞。
然后把这些B淋巴细胞和骨髓瘤细胞放在一起，用一种特殊的融合剂，就像是一种魔法胶水一样，让这两种细胞融合在一起。
这融合后的细胞就叫杂交瘤细胞啦。
这个杂交瘤细胞可不得了，它既有B淋巴细胞能产生特异性抗体的能力，又有骨髓瘤细胞能在体外大量繁殖的本事。
可是呢，融合出来的可不止是我们想要的杂交瘤细胞，还有好多其他的细胞组合。
这就像是在一堆混合的东西里找宝贝一样。
得想个办法把我们要的杂交瘤细胞筛选出来。
有一种叫HAT的培养基就像一个大筛子。
在这个培养基里，只有杂交瘤细胞能生长，其他的细胞要么死翘翘了，要么就不能繁殖。
这样就能把杂交瘤细胞单独挑出来啦。
挑出来的杂交瘤细胞也不是每个都一模一样优秀。
还得一个一个去检测，看看哪个杂交瘤细胞产生的抗体是我们最想要的那种。
这个检测的过程就像是一场选美比赛，每个杂交瘤细胞都展示自己产生的抗体，然后我们从中选出最符合要求的那个。
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单克隆抗体的制备 1、怎样获得能分泌专一抗体的B淋巴细胞？
反复注射特定的抗原，免疫小鼠。
2、从何处获得较多的B淋巴细胞？ 小鼠的脾脏 3、用什么方法可以使B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合？
PEG、灭活的病毒等
4、怎样筛选出杂交瘤细胞？利用HAT选择培养基培养，筛选
5、怎样获得只产生特异性抗体的杂交瘤细胞？
不断分裂增殖。
你想到筛选杂交瘤细胞的方案了么？
在培养基中加入氨基嘌呤，收集增殖细胞！ 3种杂交细胞：①B-B融合细胞、②杂交瘤细胞 ③瘤-瘤融合细胞
未融合的细胞：④单个的B细胞、⑤单个的骨髓瘤细胞
这五种细胞中， ① ④没有分裂能力，逐渐衰老死亡； ③ ⑤的DNA复制只有D途径， 加入氨基嘌呤后，使 D 合成途径阻断，也逐渐衰老死亡， 但②的DNA复制有D、S两条途径，虽然D途径被氨基嘌呤阻断， 但是还可以通过 S 途径进行DNA的复制，使细胞有分裂能力。
（3）大量制备单克隆抗体的方法主要有两种： ①体外培养法，可获得10μg/mL的抗体；②动物体内 诱生法可获得5~20mg/mL的抗体。你选择的方法及原 因是 大量生产选①，小规模生产选② 。
（4）用本法制备出的单克隆抗体仍具有局限性，因 效应B 为它是用小鼠的_______细胞制备的，其化学本质是 蛋白质 ___________，应用于人体，会作为 异物 产 生 免疫反应，解决这个问题的方法是 采用人的效应B细胞制备 _____________________________。
5.整个制备过程为何要经过两次筛选? 第一次筛选用特定的选择培养基， 筛选出杂交瘤细胞（多种）
第二次用多孔培养板，
筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。
单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的 不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。
科勒
米尔斯坦
荣获1984年诺贝尔生理学或医学奖
4、单抗隆抗体的应用
①作为诊断试剂
15、（1）单克隆抗体是指化学性质单一，特异性强的抗体 。 （2）制备单克隆抗体的步骤： 抗原 ①将__________注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细 胞，其中至少1个淋巴细胞带有抗该抗原的抗体。 ②将步骤①获得的B淋巴细胞与步骤②培养的骨髓瘤细胞 在_________________的诱导下融合。 聚乙二醇 选择性 ③将诱导后产生的多种细胞，放在_______培养基的多孔 培养板上培养，筛选。 产生专一抗体 ④这样获得的杂交瘤细胞既具有B淋巴细胞_____________ 无限增殖 的能力，又具有________________的本领。 ⑤检测和分离带有抗X抗体的阳性细胞，培养板中每孔放 一个细胞进行培养。 ⑥将阳性细胞进行增殖，从而制备出大量抗该抗原的单克 隆抗体。
• 动物细胞工程： • 动物细胞培养（细胞增殖） • 核移植（动物细胞核的全能性） 动物细胞融合（细胞膜的流动性） • 单克隆抗体 • （细胞膜的流动性、细胞增殖）
传统的抗体生产方法及缺陷
1.传统的生产方法:
主要分布血清， 还有的分布在组织液，外 分泌液
向动物体内反复注射某种抗原，使动物产 生抗体，然后从动物血清中分离所需要的 抗体。
2.缺陷：产量低、纯度低，而且制备的抗体 特异性差。
单克隆抗体
1.概念： 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆）， 形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所 产生的化学性质单一、特异性强的抗体 称为单克隆抗体。 2.特点： 特异性强、灵敏度高
单克隆抗体
一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体
骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖
用于体外诊断人类和动植物疾病及病原鉴定，纯度高、 特异性强，具有准确、高效、简易、快速的优点。
②定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病
利用同位素标记单抗，在特定组织成像
③用于治疗疾病和运载药物
制成生物导弹，将药物定向带到癌细胞所在的位置， 在原位杀死癌细胞，疗效高、副作用小。
“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物 导向 杀死癌细胞
单克隆抗体
温故知新：
• 1.细胞工程的两大类型？各自的技术手段及 其原理是？ 2.核移植的两大类型？其中提供细胞质 的为去核的卵母细胞，为什么选去核的 卵母细胞？
体积大，易操作； 含有使细胞核的全能性容易表达的物质和营养条件
3.动物细胞融合的实质，原理和方法？ 融合后的细胞叫？
• 植物细胞工程： • 植物组织培养（细胞的全能性） • 植物体细胞杂交 • （细胞的全能性、细胞膜的流动性）
单克隆 抗体
动物细胞培养技术
杂交瘤细胞
动物细胞融合
既能在体外大量繁殖， 又能产生特异性抗体
融合 浆细胞
第一次筛选用特定的选择培养基 帅选出杂交瘤细胞
小资料：
①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被
氨基嘌呤阻断。 ②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般 不分裂增殖。 ③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但能
用多孔细胞培养板培养，稀释度要保证每个孔内不多于一个细胞。 抗原抗体杂交法检测——呈阳性反应
6、怎样获得大量的单一抗体？
体内或体外大量培养特异的杂交 瘤细胞，从中提取单一抗体。
(1)若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自小鼠 体内的 效应B 细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之 前，应给小鼠注射_____________类物质。 抗原 （2）d过程是一个_____________过程，该过程的进 细胞融合 行常用_____________或_____________的诱导。 聚乙二醇 灭活的病毒 (3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成 3 种 选择性 类型的C细胞，因此需用__________培养基筛选出D细 胞用于培养，D细胞的名称是 杂交瘤细胞 ，其特点 是_________________________________________。 既能无限增殖又能产生特异性抗体
方法——抗原-抗体杂交法
阳性孔 用多孔细胞培养板培养，稀释度要保证每个孔内 不多于一个细胞。
抗原抗体杂交法检测——呈阳性反应
如何得到大量的单克隆抗体？
单克隆抗体的优点： 特异性强，灵敏度高，并可以大量制备。
免疫 经过免疫的 注射抗原 B淋巴细胞
骨髓瘤 细胞
单 克 隆 抗 体 的 制 备 过 程 ：
有丝 (4)在培养时通过________分裂方式大量繁殖。D细 胞体外培养需要注意的条件是（要求答5项） 无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和pH； __________________________________。 适宜的气体环境 （5）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面 特异性强、灵敏度高 ，与常规抗体相比，其特点是_________________。
诱导细胞融合
动物 细胞 融合 技术 动物 细胞 培养 技术 杂交细胞 第一次筛选 杂交瘤细胞 第二次筛选 特异性杂交瘤细胞 体外或体内 培养 杂交瘤细胞系 提取 单克隆抗体
特点：既能大量繁殖 又能产生专一抗体
特点：特异性强灵敏 度高可大量制备
特定的选择培养 基
多孔细胞培养板
高考热点：
1.此过程中的B淋巴细胞是经过免疫的，实际 上就是浆细胞。 2.融合后形成的杂交细胞有多种，考虑两两 融合，共有三种： B-B、B-瘤(杂交瘤细胞) 、瘤-瘤 3.单克隆抗体制备中用到的技术手段： 动物细胞融合、动物细胞培养。 4.原理：细胞膜的流动性、细胞增殖
②再筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞
通常采用有限稀释法，将筛选出来的杂交瘤 细胞多倍稀释，接种在多孔细胞培养板上培养， 使每孔细胞不多于一个，再由这些单细胞克隆生 长，然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那 些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。 最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩 大培养。