动物细胞培养(2018.3.26)
动物细胞培养
理化环境可精确调控，生理条件相对恒定；
对于同一来源的组织样品，随着传代进行，细胞系逐渐趋于均一；
培养过程经济有效且可规模化；
可模拟细胞体内环境。
体外培养局限性：
对操作者的专业技术技能要求高；
能获得的细胞量较少（实验室：1-10g细胞/批，企业：100g细胞/批）；
培养过程中易出现细胞去分化和选择性培养的现象；
细胞质功能：
蛋白质和脂肪合成的重要场所，细胞内所有蛋白质合成的起始步骤都发生在细胞质基质的游离核糖体上；
细胞与环境、细胞质与细胞核以及细胞器之间的物质运输、能量交换、信息传递等都要通过细胞质基质来完成；
很多重要的中间代谢反应也发生在细胞质基中，糖酵解、磷酸戊糖途径、糖醛酸途径、糖原的合成与部分分解过程等；
线粒体
细胞中数量醉倒的细胞器（大约1700/cell），占细胞总体积的20%，人体内的细胞每天合成的数千克ATP大约95%由线粒体产生
超微结构：
线粒体是由两层单位膜套叠热诚的封闭的囊状结构。一般呈粒状或杆状
包括四个功能间隔：外膜、内膜、膜间隙、基质
线粒体的主要功能：
氧化磷酸化；合成ATP；为细胞的生命活动提供能量。
磷脂双层膜是一种非共价结合的聚合物，由磷脂组装而成，因此，可以自由活动：迅速地扩大、缩小、断裂、融合
细胞膜动态平衡：膜循环以维持平衡
小结——细胞膜
磷脂双分子层特性：磷脂双分子层是流动的，其流动性受温度、脂肪酸和胆固醇等因素影响；
磷脂双分子层由磷脂、糖脂、胆固醇和蛋白构成；
磷脂具四种类型结构，以甘油丝或丝氨酸为骨架；
细胞质面积：VSELs：6μm2，HSCs：35μm2
水：占尽80%；蛋白占10~20%。
生物选修3动物细胞培养流程和注意事项
生物选修3动物细胞培养流程和注意事项下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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动物细胞培养130913PPT课件
（2）适宜的温度和PH值
36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4
保证细胞顺利的 生长增殖
（3）必要的气体条件
O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）
维持培养液的PH
CO2 培养箱-模拟人体环境
• 维持二 氧化碳 水平（510％）
• 湿度
• 温度 （37℃）
大面积皮肤烧 伤或烫伤？
（三）动物细胞培养
1、概念： 从动物机体中取出相关组织，将它分散成单 个细胞，然后在适宜的培养基中，让这些细胞生 长和繁殖。
2、原理： 细胞增殖 （有丝分裂）
3、过程：
Q2 选什么组织？
动物胚胎或幼龄动物的组织、器 官，它们的细胞分化程度低，增 殖能力强，分裂旺盛，容易培养。
变化，带有癌变的特点，可能在培养条件下无限 制的传代下去，这种传代细胞称为细胞系。
写在最后
经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量 Study Constantly, And You Will Know Everything. The More
You Know, The More Powerful You Will Be
（1）大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、 干扰素、单克隆抗体）
资料1：
干扰素是动物细胞分泌产生的蛋白质，具有抗病毒 等多种生物学活性。 β干扰素是人的成纤维细胞产 生的，一个成纤维细胞产生的β干扰素量非常低。 现要获得大量的β干扰素。如何解决？
（2）培养的动物细胞可以用于检测有毒物质， 判断某种物质的毒性
信息2：
2005年4月，美国一家非官方癌症研究中心发布信 息说，“高露洁”牙膏中含有的抗菌化学物质三 氯生可能是致癌物质。公众对此表示怀疑。如何 检验该药物的毒性？
动物细胞培养(共20张PPT)
一、动物细胞培养
1.概念：动物细胞培养就是从动物
机体内取出相关的组织，将它分散 成单个细胞，然后，放在适宜的培 养基中，让这些细胞生长和增殖。
原理：细胞增殖
目的：获得细胞或细胞产品。
2.过程：
动物胚胎或幼 龄动物的组织、
器官
剪碎组织
胰蛋白酶或 胶原蛋白酶
分散成单 个细胞
成块组织不利于培养，分散了并制成细胞悬浊液，利于细胞与培养液充分接触，利于培养。
二、动物细胞培养条件
1、无菌、施：培养液中加一定量的抗生素。
2、营养
葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子（维生素、 激素等）和 动物血清
3、温度和PH 温度36.5+0.5度，pH7.2～7.4 4、气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）
专题2.2动物细胞工程
动物细胞工程
动物细胞培养
动物细胞工程 动物细胞核移植 常用的技术手段 动物细胞融合
生产单克隆抗体
其中，动物细胞培养技术是其他动物细胞 工程技术的基础。
动物细胞培养和核移植技术
教学目标
新课标要求 • 简述动物细胞培养的过程、条件及应用。
• 简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程 和应用前景。
3.用于检测有毒物质。 4.培养正常或病变的细胞，用于生理、病理、药理等方面
的研究。可用于健康细胞的培养，如获得大量自身的 皮肤细胞，用于植皮；用于筛选抗癌药物等，为治疗
和预防疾病提供理论依据
植物细胞和动物细胞培养的比较
比较项目 原理
培养基性质 培养基特有成分
植物组织培养
细胞的全能性 固体培养基 蔗糖、植物激素
资料：烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治 疗该病人？ 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 简述动物细胞培养的过程、条件及应用。
动物细胞培养基本操作
实验一动物细胞培养细胞培养是用无菌操作的方法将动物体内的组织(或器官)取出，模拟动物体内的生理条件，在体外进行培养．使其不断地生长、繁殖，人们借以观察细胞的生长、繁殖、细胞分化以及细胞衰老等过程的生命现象。
细胞培养的突出优点，一是便于研究各种物理、化学等外界因素对细胞生长发育和分化等的影响；二是细胞培养便于人们对细胞内结构(如细胞骨架等)、细胞生长及发育等过程的观察。
因而细胞培养是探索和指示细胞生命活动规律的—种简便易行的实验技术，同时我们也不可忽略的另一个因素，那就是它脱离乐生物机体后的—些变化。
细胞培养技术目前已广泛地被应用于生物学的各个领域。
如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿痛学及病毒学等为此有必要使学生在细胞培养方面得到一些初步的感性知识，了解动物细胞培养的基本操作过程，观察体外培养细胞的生长特征，对原代细胞与传代细胞有一个基本概念。
本实验分两次进行．即清洗与消毒和传代细胞的培养与观察。
Ⅰ清洗与灭菌一、实验目的能独立地进行用于细胞培养的各种器皿的清洗与消毒，掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作，了解化学消毒法的使用方法。
二、实验原理清洗与消毒是组织培养实验的第一步，是组织培养中工作量最大，也是最基本的步骤。
体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌的要求程度很高。
细胞养不好与清洗不彻底有很大关系。
清洗后的玻璃器皿，不仅要求干净透明，无油迹，而且不能残留任何物质。
如有毒的化学物质，哪怕残留0．1个，也可能影响细胞生长。
灭菌手段的选择十分重要，对不同的物品需采用不同的灭菌方法。
假如选用的方法不对，即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。
以下在每种灭菌步骤中都介绍其使用范围。
三、实验材料、用品材料：无臭氧型紫外灯，微孔滤膜(直径25)：孔径为0．22μm，微孔滤膜(直径90)：孔径为0．22 μm，过滤器(直径25)。
药品：70％或75％酒精，0．1％新洁尔灭，煤酚皂溶液(来苏儿水)，0．5％过氧乙酸，乳酸，37％甲醛，高锰酸钾，NaOH，盐酸，重铬酸钾，浓硫酸(工业)，DEPC水[体积分数0．1％的焦炭酸二乙酯(diethylpyroearbonate)]。
2018年实验九动物细胞培养-文档资料
原代培养的绍鸭成纤维细胞，相差显微镜照片
传代培养的绍鸭成纤维细胞形态（DAPI染色）
正常细胞
凋亡细胞
分裂中期细胞
六、作业
• 1. 细胞培养过程中应该注意哪些事项？ • 2. 描绘培养成纤维细胞的形态（或提供照
片）。
1万单位/ml青、链霉素）。 • 维持液： DMEM培养基（含5%小牛血清、
1万单位/ml青、链霉素）。
四、原代培养
• 1.酒精棉球消毒鸭蛋，剥出鸭胚，去头、翅、爪和内脏， 加Hank’s 液，剪碎为0. 5 -1mm3 的小块， Hank’s 液洗涤2 - 3 次。
• 2. 组织块移入培养瓶，间距0.5cm摆放后倒置培养瓶，加少量营养液， 保持湿润，37 ℃培养，2hr后翻转培养瓶，添营养液继续培养。
二、实验原理
• 原代培养 ：培养直接来自动物机体的细胞群，将 细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶称为传 代或传代培养。
• 细胞株：从原代培养细胞群中筛选出的具有特定 性质或标志的细胞群。
• 细胞系：从肿瘤组织培养建立的细胞群或培养过 程中发生突变或转化的细胞，可无限繁殖。
三、实验器材与试剂
• 1. 器具 • 显微镜、电热恒温水浴锅、天平、CO2培养箱、
• 3. 定期观察细胞贴壁生长状况，如颜色变黄，说明细胞生长，3-5天 后更换培养液。
• 4 .倒置显微镜下观察拍照。 • 5.单层细胞用Hank’s 液洗涤后，加入维持液，用于原代细胞维持。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
动物细胞培养
4.干细胞的应用 （1）应用原理：有着自我更新能力及分化潜能的干细胞，与组织、 器官的发育、再生和修复等密切相关。 （2）应用实例： 造血干细胞：治疗白血病及一些恶性肿瘤放疗或化疗后引起的 造血系统、免疫系统功能障碍等疾病
加培养液
细胞悬液
转入
培养瓶内培养 （原代培养）
（ 细胞贴壁长成单层细胞,有接触抑制现象）
1.取动物组织 （1）取材:一般取材于动物胚胎或幼龄动物的组织、器官。 （2）取材原因: 细胞分化程度低，增殖能力强，容易培养
2.制成细胞悬液
（1）将组织分散成单个细胞
①方法: 机械法 用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间
细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄动物的细胞增殖能 力强，有丝分裂旺盛，老龄动物的细胞则相反。所以，一般来 说，幼龄动物的细胞比老龄动物的细胞易于培养。同样，分化 程度越低的细胞，增殖能力越强，所以更容易培养。
2.动物细胞培养和植物组织培养有什么相同和不同之处？
思考-讨论:
（1）培养前为什么分散成单个细胞？
②原因: Ⅰ.从动物体取出的成块组织中，细胞与细胞靠在一起，彼 此限制了生长和增殖； Ⅱ.能使细胞与培养液充分接触，更易进行物质交换。
（2）用培养液将细胞制成细胞悬液。
去掉组织
（一）
动 物
动物胚胎或 幼龄动物的 组织、器官
间蛋白 胰蛋白酶
单个细胞
剪碎
加培养液
细胞 悬浮液
细
分化程度低， 增殖能力强
胞
①成块组织中细胞与细胞靠在一起，彼此限制了生长与增殖 ②利于与培养液充分接触，保证O2与营养供应和代谢物及时排出。
动物细胞培养课件
法规实施时间： 2021年4月15日
07 动物细胞培养未来发展
动物细胞培养技术发展趋势
细胞培养技术 将更加成熟， 提高细胞存活 率和生长速度
细胞培养技术 将更加智能化， 实现自动化和
智能化操作
细胞培养技术 将更加环保， 减少对环境的
污染和破坏
细胞培养技术 将更加精准， 实现对细胞生 长和分化的精
动物细胞培养课件
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汇报人：PPT
目录 /目录
01
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04
动物细胞培养 基
02
动物细胞培养 概述
05
动物细胞培养 设备
03
动物细胞培养 技术
06
动物细胞培养 安全性
01 添加章节标题
02 动物细胞培养概述
动物细胞培养环境保护
生物安全：确保细胞培养过程中无 病原体污染
化学试剂：使用环保型化学试剂， 减少对环境的影响
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
废物处理：妥善处理培养过程中产 生的废物，避免环境污染
生物伦理：遵守生物伦理原则，保 护实验动物的权益
动物细胞培养伦理问题
动物权益：动物细胞培养 是否侵犯动物权益
动物细胞培养基选择与使用
培养基类型：选择适合细胞生长的培养基类型，如DMEM、RPMI等 培养基成分：根据细胞类型和实验需求，选择合适的培养基成分，如血清、抗生素等 培养基配制：按照说明书进行培养基配制，注意无菌操作和温度控制 培养基更换：定期更换培养基，保持细胞活力和生长状态
05 动物细胞培养设备
完全培养基：含有细胞生长所需的所有 营养物质
动物细胞培养
动物细胞培养细胞培养是指细胞在体外条件下的生长，动物细胞在培养的过程中不再形成组织。
1.概念动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
2.动物细胞培养的简介1.动物细胞培养液的成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。
动物细胞培养成功的关键在于培养液中是否含有动物血清，因为由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境，此外动物血清中也包含了一些动物的激素和酶，可以促进细胞的发育。
2.动物细胞培养液的特点：液体培养基、含动物血清。
3.动物细胞培养的条件：①无菌、无毒的环境：对培养液和所有培养用具进行无菌处理，通常还要在培养液中加入一定量的的抗生素，以防被污染。
此外应定期更换培养液，以便清除代谢产物防止细胞代谢产物累积对细胞自身产生危害。
②营养物质：无机物（无机盐、微量元素等），有机物（糖、氨基酸、促生长因子、血清、血浆等）③温度和pH（36.5±0.5℃，7.2~7.4）④气体环境（95%的空气+5%CO动物细胞培养2的混合气体）3.基本过程取动物胚胎或幼龄动物器官、组织。
将材料剪碎，并用胰蛋白酶（或用胶原蛋白酶）处理（消化），处理形成单个细胞，将单个的细胞放入培养基中配成一定浓度的细胞悬浮液。
悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，成为细胞贴壁。
当贴壁细胞分裂生长到互相接触时，细胞就会停止分裂增殖，出现接触抑制。
此时需要将出现接触抑制的细胞重新使用胰蛋白酶处理。
再配成一定浓度的细胞悬浮液。
另外，原代培养就是从机体取出后立即进行的细胞、组织培养。
当细胞从动植物中生长迁移出来，形成生长晕并增大以后，科学家接着进行传代培养，即将原代培养细胞分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增殖。
通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞称为细胞株。
动物细胞培养ppt课件
❖不适应（Deadaption）
细胞在体内时所拥有的分化特性减 弱或不显。
❖脱分化（Dedifferentiation）
由于基因变异而使细胞失去分化能 力。如肝细胞失掉产生精氨酸酶及氨基 酸转移酶的特性后，储存肝糖元的能力
烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的 健康皮 肤进行 自体移 植，但 对于大 面积烧 伤病人 来讲， 健康皮 肤很有 限，请 同学们 想一想 如何来 治疗该 病人
组织培养的分类及基本概念
分类:
1.组织培养(Tissue Culture) 2.细胞培养(Cell Culture) 3.器官培养（Organ Culture）
组织培养的细胞生物学特点:
1.体内外细胞的差异：当人工条件和体内实际情况不
完全相同时，细胞在体外培养后，一旦失去神经体液调节 和细胞间相互影响，生活在缺乏动态平衡的环境中，发生 变化则是必然。细胞最多见的表现是：返祖（Atavism） 现象，即失去原有组织结构和细胞形态、分化减弱或不显、 细胞趋单一化、不死性、恶性状。
烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的 健康皮 肤进行 自体移 植，但 对于大 面积烧 伤病人 来讲， 健康皮 肤很有 限，请 同学们 想一想 如何来 治疗该 病人
2) 指 数 生 长 期 （ Logarthmic growth phase）：
细胞增殖最旺盛时期，一般用细胞分裂指 数（Mitotic index，MI）表示，即细胞群中每 1000个细胞中的分裂相数。体外培养细胞分裂 指数介于0.1~0.5%，且受细胞种类培养液成分、 pH、温度等影响。
培养细胞的生长和增殖
1.原代培养（Primary Culture）阶段：或称 初代培养。从体内取出组织接种培养到第一次 传代，随不同的组织时间长短不一，一般为 1~4w 2.传代培养（Subculture）阶段：或称继代培 养。也就是细胞系（Cell line）阶段，细胞增 殖旺盛，一般细胞可传代10-50代）。
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3、（旁栏思考）胰蛋白酶真的不会把细胞消 化掉吗？为什么？ 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长 时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤 作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。
4、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或 组织做动物细胞培养材料？
3、过程
①原代培养
定义：人们通常将 动物组织消化后的 初次培养称为原代 培养。
动物胚胎或幼龄动物 总结：动物细胞培养过程 的组织、器官 剪碎、用胰蛋白酶处理 单个细胞 原代培养特点：细胞贴壁、 加培养液稀释 接触抑制 配置细胞悬液 原 代 遗细 转入培养瓶 培 传胞 物株 分瓶传代培养 养
传代10代以内，遗传物质不改变 传代10-50代左右，增长缓慢以 至于完全停止，部分细胞核型可 能发生变化（遗传物质可能改变） 10-50代细胞 继续传代培养少部分细胞获得不 死性，细胞突变，遗传物质已经 改变，等同于癌细胞。
2）营养：
液体合成培养基：糖、氨基酸、促生长因子、 水、无机盐、微量元素等；通常还需加入 血浆、血清等天然成分。
3）温度和pH： 4）气体环境：
旁栏思考：动物血清的作用？ 主要是：提供有利于细胞生长增殖所需 的激素、生长因子或提供合成培养基所 缺乏的营养物质等。
4.动物细胞培养的条件:
1）无菌无毒 的环境：
细胞的全能性 固体培养基 蔗糖、植物 激素 植物体 快速繁殖、培育 无病毒植株等
动物细胞培养
细胞增殖 液体培养基 葡萄糖、动 物血清
原理
培养基性质 培养基特有成分
培养结果 培养目的
细胞群体
获得细胞 或细胞产物
练一练~~~
1．动物细胞工程常用的技术手段中， 最基础的是
A.动物细胞培养 C.单克隆抗体
问题
思考题
６、细胞膜的主要成份是什么？ 蛋白质和磷脂 ７、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？ 能 ８、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分 散成单个细胞要注意什么问题呢？ 注意时间的控制 ９、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？ 不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细 胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近 10、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄 动物的组织或器官，请解释原因？ 胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、增殖旺盛
适宜的酸碱度：PH：7.2-7.4
4）气体环境：“95％空气+5％CO2”的混合气体培养箱。
氧气是细胞代谢必须的； CO2维持培养 液的PH。
5、动物细胞培养技术的应用
① 生物制品的生产 ② 用于基因工程
③ 用于检测有毒物质
④ 细胞的生理、病理、药理研究
植物细胞和动物细胞培养的比较
比较项目
植物组织培养
Back
1、动物细胞培养的过程：
细胞悬液 原代培养 10代细胞
遗传物质 未改变
50代细胞 无限传代
传代培养
遗传物质 已改变
Back
没有 1、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？ ２、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的吗？是 ３、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？ 成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖 ４、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？ 先用剪刀剪碎,后用蛋白酶处理 ５、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质 是什么成份？ 胰蛋白酶水解蛋白质 细胞间的成份是蛋白质(胶原蛋白等)
知识回顾
植物细胞工程 植物细胞工程应用
植 物 繁 殖 的 新 途 径
作 物 新 品 种 的 培 育
细 胞 产 物 的 工 厂 化 生 产
植物细胞工程技术 植 物 组 织 培 养 植 物 体 细 胞 杂 交
动物细胞工程常用的技术：
动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 生产单克隆抗体等
原代培养
原代细胞 胰蛋白酶 遗传物质未 改变
细胞贴壁 接触抑制
分瓶传代培养
10—50代细胞(细胞株ห้องสมุดไป่ตู้ 传代培养
遗传物质己 改变
无限传代（细胞系）
强调：细胞株、细胞系（了解即可，老课本体系）
细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞 生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存 活到40-50代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞 生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的 改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这 种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物 质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制， 容易传代培养。
出代谢废物；而用大块组织培养时，内部细胞
的营养供应和代谢废物的排出都较困难。
2、（旁栏思考）用胰蛋白酶对动物组织进行 处理是因为细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白 酶可以吗？
细胞间的物质主要是蛋白质（胶原纤维）。 胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6 时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的 适宜环境pH为7.2～8.4。多数动物细胞培养的 适宜pH为7.2～7.4。
思考题
11、贴附性细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？ 易于培养细胞贴壁，进行生长增殖 12、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、 增殖？ 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞 分裂就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。 13、如果此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎 样办？细胞株和细胞系通常是培养多少代的细胞? 将贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后继续增 殖。这样的过程叫做传代培养
练一练~~~
2 .下列有关克隆的叙述，不正确的是 A.生物体通过体细胞进行的无性繁殖 B.将某种瘤细胞体外培养繁殖成大量细胞 C.扦插和嫁接实质上也是克隆 D.将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA中
1、动物细胞培养的过程：
取动物器官 和组织
幼龄动物
剪碎组织
胰蛋白酶处理 单个细胞 加培养液
细胞培养
⑤ 可以用于组织器官的移植
6、存在问题：
① 成功率低 ② 克隆动物存在健康问题 ③ 克隆动物食品的安全性问题存有争议
练一练~~~
1.从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注 入到母羊乙的去核卵母细胞中，融合后 的细胞经卵裂形成早期胚胎，再将胚胎 移到另一只母羊丙的子宫内，出生的小 羊大多数性状 A. 难以预测 B. 像甲 C. 像乙 D. 像丙
强调二：接触抑制
■当贴壁细胞分裂生 长到表面相互接触时, 细胞就会停止分裂增 殖，这种现象称为细 胞的接触抑制。
细胞的接触抑制
思考：如此时细胞数量并未达到人们 的需求，应该怎样办？
②传代培养
定义：
当原代培养的细胞处于接触抑制后, 用胰蛋白酶处理,使细胞从瓶壁上脱离下 来,然后加入新的培养液,将细胞分离稀释, 并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内,这 个过程称传代培养.（分瓶培养的过程）
1、为什么要对取出的动物组织进行处理，使细胞分散？ 2、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物 质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗？ 3、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 4、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动 物细胞培养材料？ 5、简述动物细胞培养的操作过程。
1、为什么要对取出的动物组织进行处理， 使细胞分散？ 分散的单个细胞容易摄取所需的营养，排
A.无丝分裂 C.减数分裂
B.动物细胞融合 D.胚胎核移植
B.有丝分裂 D.增殖
2．贴壁细胞的分裂方式具体是
练一练~~~
3．关于动物细胞培养的叙述，不正确的是
A.动物细胞培养前要用胰蛋白酶或胶原蛋白 酶使细胞分散开来 B.通常将动物组织消化后的初次培养称为原 代培养 C.动物细胞培养只能传50代左右，所培育的 细胞全部衰老死亡 D.用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物 的器官或组织
3、分类： 胚胎核移植、体细胞核移植。 胚胎细胞分化程 度低，恢复其全 能性相对容易。 动物体细胞分化 程度高，恢复其 全能性十分困难
4、过程：
减数第二次分裂中期 （MⅡ卵母细胞）
去核的卵母细胞
供体细胞注入 去核卵母细胞
胚胎移植
激活受体细胞， 完成分裂、发 育 代孕牛子宫 克隆牛
供体细胞 （供核）
思考？
许多动物的细胞能够分泌蛋白质，如抗体 等。但是，单个细胞的蛋白质量是很少的， 怎样才能获得大量的分泌蛋白呢？
一、动物细胞培养
1、概念：从动物机体中取出相关组织，将它 们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基 中，让这些细胞生长和增殖。
2、原理： 细胞增殖
如何进行动物细胞培养?
阅读“动物细胞培养过程”并思考
最基础的是 ——动物细胞培养技术
动物细胞培养技术
学习目标：
1、简述动物细胞培养的过程、条件及 应用 2、对比说出动物细胞培养与植物组织 培养原理、条件、结果、培养目的
生活联系：
烧伤病人的治疗通常 是取烧伤病人的健康皮 肤进行自体移植，但对 于大面积烧伤病人来讲， 健康皮肤很有限，请同 学们想一想如何来治疗 该病人？
对培养液和所有培养用具无菌处理；培养液 中添加抗生素防止培养过程中污染；定期更 换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞 造成危害。
2）营养：
液体合成培养基：糖、氨基酸、促生长因子、 水、无机盐、微量元素等；通常还需加入 血浆、血清等天然成分。
3）温度和pH：适宜的温度：人和哺乳动物细胞最适温度为 36.5±0.5℃。
细胞培养
体细胞 注入 无核卵 母细胞
细胞 融合
卵巢卵母细胞 去核 （MⅡ中期：供质） 胚胎 构建重 移植 代孕 母体 组胚胎 归纳:
1.共分成两大阶段：核移植和胚胎移植
重 组 细 胞
生出与供体遗 传基本相同的 个体
2.严格来说新个体有卵巢母细胞的细胞质所以有两个亲本的性状
5、应用前景：
① 加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 ② 保护濒危物种，增加存活数量 ③ 克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 ④ 可以作为异种移植的供体