亚慢性毒性试验
亚慢性、慢性毒性及其评价方法
功能蓄积可能是
❑ 由于贮存体内的化学物或其代谢产物的数 量极微，不能检出物质的蓄积 ❑ 或者是由于每次机体接触化学物之后所引 起的损害累积所致
蓄积作用的检测有两类方法
• 理化方法：应用化学分析或其他技术测定 化学物进入机体以后，在体内含量变化的 过程 该方法可确定化学物的半减期，故可 作为检测物质蓄积的方法
二、慢性毒性作用 （chronic toxicity)
（一）概念 慢性毒性：是指实验动物或人长期 （甚至 终生）反复接触外源化学物所产生的毒性 效应。
• 慢性毒性试验的试验期限，应依受试物的 具体要求和实验动物的物种而定 • 如用大鼠试验期限可为1年，用狗则试验期 限可1～2年 • 慢性毒性试验可终生接触受试物 • 如果慢性毒性试验与致癌试验结合进行， 则实验动物染毒时间最好接近或等于动物 的预期寿命
• 蓄积系数法由于分次染毒的设计不同， 分 为： 1. 固定剂量法： ➢ 先测出1次染毒的LD 50（1），然后每天 给予 1/10(1/20) LD 50 直到半数动物死亡为 止， 此时总剂量即为 LD 50（n）
2. 剂量递增法： ➢ 实验开始时 ， 按 0.1 LD 50 × 4 天 ， 0.15LD 50 × 4天，0.22LD 50 × 4天， 0.34LD 50 × 4天，依次类推，最长28天， 试验期间，当化学物引起动物累计死亡一 半时间即可终止，计算K值
3、剂量选择与分组
亚慢性试验的上限剂量，需控制在实 验动物接触受试化合物的整个过程中，不发 生死亡或仅有个别动物死亡，但有明显的中 毒效应，或靶器官出现典型的损伤。此剂量 的确定可参考两个数值，一是以急性毒性的 阈剂量为亚慢性试验的最高剂量；一是以此 化合物LD 50 的 1/20－1/5为最高剂量。
通肾颗粒的亚慢性毒性试验
动物医学进展,2021,42(1):82-87ProgressinVeterinary Medicine通肾颗粒的亚慢性毒性试验王军1,王雅倩2,侯会霞2,边小利3,王虹雅2,陈胡羚2,张芬芳2,,孙蓉2,李引乾2*(1.陕西汉中市动物疾病预防控制中心，陕西汉中723000；.西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌712100;3.陕西省府谷县麻镇畜牧兽医工作站，陕西府谷7194003；.陕西省眉县畜牧兽医工作站，陕西眉县722300)摘要：采用大鼠亚慢性毒性试验评价通肾颗粒的毒性。
将SD大鼠随机分为4组,3个试验组分别以12、6、3g/kg对大鼠进行灌胃，对照组给予等体积生理盐水，连续6周，观察记录大鼠的反应。
结果显示，SD 大鼠的健康状况指标如血常规和生化等无不良变化，内脏器官也没有不良变化，但会对大鼠的生长发育产生一定的抑制作用。
关键词：通肾颗粒；大鼠；亚慢性毒性试验中图分类号:S853.74；S852.31文献标识码:A文章编号：1007-5038(2021)01-0082-06肾炎(nephritis)是临床上以水肿、肾区疼痛、尿量改变、尿液含有多量上皮细胞和管型为特征的肾小球、肾小管或肾脏间质组织发生炎症的病理过程［1。
发病多与感染、毒物刺激和变态反应有关2。
临床治疗以消炎利尿、抑制免疫反应和清热利湿、止血凉血为主［4。
通肾颗粒由黄芪、苦参、白茅根、金银花等中药组成，具有可清热燥湿，清热利尿和清热解毒之功效，临床上用于治疗以水肿、尿少、尿血、腰收稿日期20190521基金项目：陕西省重点研发计划项目(2018NY-005)作者简介：王军(1963—)，男，云南昆明人，高级兽医师，主要从事畜牧兽医技术推广工作。
*通讯作者Isolation and Identification of Fungal Endophyte in Aconitum gymnandrum LIU Xin-yu1,HUANG En-xia1,ZHANG Shu-hang1,ZHANG Yu1,ZHU Yan-li1,LIU Yi-ing1, WANG Jing-ong2,,SUN Lu1,SONG Run-jie1,ZHAO Bao-yu1,LU Hao1(1.CoUege of VebeHnary Medicine,Northwest A&F UniversiLy<,Yangling,Shaanxi712100,China；2.Barley ImprovemenL and Yak Breeding Key LaboraLory of Tibet Autonomous Region, Lhasa,Tibet,85000, China；3.InsHuU of PraLacuIbural Science,Tibet Academy of Agriculiural and Animal Husbandry Sciencss,Lhasa,Tibet,50000, China) Abstract:In order to investigate the species and population distribution of fungal endophyte in Acoeitum gymnndTum collected from Tianzhu of Gansu province,endophytic fungal isolation was conducted by sur-facedisinfection，speciesandITSsequenceanalysistechniquesforspeciesidentificationofisolatedstrains，andsystematicevolutionanalysisusedby MEGA505software Theresultsshowedthattherewereabun-dantfungalendophytesin Aconitumgymnandrum，33fungalendophyteswereisolatedfromroots，stems，leaves,flowers and seeds,after identification,they were belonged to2classes,orders,families and4gen-era；thetotalrelativeisolatiofrequency was9394%Endophyticfungihavethehighestfrequencyofleaf infection，thesecondisthestem，leastintheseed；theirspecies Penici ium sp hadthehighestrelativeiso-lationfrequencyandwasthedominantspeciesoffungalendophytesin Aconitumgymnandrum，theirspe-cieswerefoundina l theabovetissuesandtheirdistributionwasthemostextensive Accordingtophylo-genetic analysis,these isolated strains were divided into population I,population n and population川. Theseresultscanfurtherenrichthediversityoffungalendophytesof Aconitum andlayafoundationforthe researchofsecondary metabolitesofendophyticfungiin AconitumgymnandrumKey words：A co eU u m gymeaedrum；fungal endophyte；isolation and identification；P s HS iSum王军等：通肾颗粒的亚慢性毒性试验83部疼痛等为主症的肾炎。
亚慢性毒性试验解析
毒理学作业农药2,4-滴钠盐原药为白色粉末，水溶性，表1是其对SD大鼠的急性经口试验结果，请根据表中结果，给出该农药的90天亚慢性试验的试验方案，以及如何对保证实验质量予以控制。
表1 2，4-滴钠盐原药对SD大鼠急性毒性实验结果剂量设置高剂量为25%LD50，中剂量为12.5%, 低剂量为6.3%。
雌性LD50为584mg/kg，高剂量为146mg/kg,中剂量为73mg/kg,低剂量为37mg/kg；雄性为501mg/kg，高剂量为125mg/kg，63mg/kg,低剂量为31mg/kg。
根据GB15670《农药登记毒理学实验方法》的农药急性毒性分级标准，2，4-滴钠盐原药的LD50>500mg/kg，属于低度农药。
因此试验时选择SD大鼠的LD50为584mg/kg。
农药2,4-滴钠盐原药SD大鼠亚慢性毒性试验目的;研究喂饲农药2,4-滴钠盐原药对大鼠的亚慢性毒性。
方法：取初断乳 SD大鼠80只，雌雄各半按照体重随机分为4组。
将2,4-滴钠盐原药按146、73、37mg/kg mg/kg剂量分别拌入饲料内经口喂饲染毒90d。
观察：大鼠外观体征、体质量、进食情况等。
在实验中期和末期采血检测检测血液学。
试验末期检测血生化指标以及尿常规检查。
实验结束时处死实验动物，计算脏器指数，并对主要脏器进行病理组织学观察。
1 材料和方法1.1 受试物农药2,4-滴钠盐原药，白色粉末，水溶性，由某地某农药公司提供。
SPF级初断乳大鼠80只，雌雄各半，体质量50~100 g，由XXX实验动物研究所繁育场提供，动物合格证号为医动字第XX-XXXX号。
1.2 饲养与管理SPF 环境条件下，同组同性别两只一笼喂养，自由进食和饮水。
环境温度 21～25℃，相对湿度 40%～60%。
严格控制昼夜交替。
1.3实验方法试验前将雌、雄大鼠各半按体重随机分为3个剂量组和1个对照组，每组20只，将2,4-滴钠盐原药按146、73、37mg/kg mg/kg剂量分别均匀混入饲料中制成颗粒饲料辐照灭菌后分别供高、中、低剂量组动物食用，连续每日一次喂养90d；对照组给予不加受试物的正常饲料。
短期、亚慢性、慢性毒性评价
接触天数
1～4 5～8 … 25～28
每天接触剂量LD50 0.1 4天接触剂量LD50 0.4 累计接触剂量LD50 0.4
0.15 … 1.12
0.6 … 4.48
1
… 12.74
15
③剂量固定的20天蓄积法
通常采用经口灌胃染毒方式，将动物随机分成五组，包
括阴性对照组和1/20LD50，1/10LD50，1/5LD50，1/2LD50四 个剂量组，每组动物数10只。每日染毒一次，连续染毒20 天。观察每组雌雄合计动物数。
6
7
2.物质蓄积(material accumulation): 机体多次地接触 化学毒物一定时间之后，用化学分析方法能够测出 机体内存在该物质或其代谢产物时，称为物质蓄积。
3.功能蓄积(functional accumulatio): 机体多次地接触 化学毒物一定时间之后，虽不能测出该物质或其代 谢产物，但机体有慢性中毒的症状出现，这种情况 称为功能蓄积。
20
forward
毒效应谱
对外源化学物的负荷增加
意义不明的生理和生化改变
亚临床改变
临床中毒
死亡
损害效应
Hale Waihona Puke 癌 致突变 致畸fallback
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(三)亚慢性毒性试验方法要点
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1. 实验动物选择： ①物种和品系: 啮齿类 大鼠、小鼠、家兔 两个动物种属 非啮齿类 犬、猴子
评价：均无死亡
蓄积性不明显
仅1/2LD50有死亡 仅1/20LD50无死亡 均有死亡，且有剂量反应关系
弱蓄积性 中度蓄积 强蓄积
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亚慢性和慢性毒性作用
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一、亚慢性毒作用
动物安全药理实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的本研究旨在通过动物安全药理实验，对某新型药物进行安全性评价，包括急性毒性、亚慢性毒性、慢性毒性以及遗传毒性等方面，为该药物的临床应用提供科学依据。
二、实验材料1. 实验动物：健康昆明小鼠，体重18-22g，雌雄各半。
2. 药物：某新型药物，纯度≥98%，由某制药企业提供。
3. 试剂与仪器：生理盐水、苦味酸、戊巴比妥钠、注射器、灌胃针、电子天平、手术剪、止血钳、平皿、托盘、烧杯等。
三、实验方法1. 急性毒性实验（1）实验分组：将实验动物随机分为5组，每组10只，分别为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和最大耐受量组。
（2）给药方式：除对照组外，其他各组分别灌胃给药，剂量分别为0.5、1.0、2.0、4.0g/kg体重。
（3）观察指标：观察实验动物在给药后24小时内出现的死亡、中毒症状及体征。
2. 亚慢性毒性实验（1）实验分组：将实验动物随机分为5组，每组10只，分别为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和最大耐受量组。
（2）给药方式：除对照组外，其他各组分别灌胃给药，剂量分别为0.5、1.0、2.0、4.0g/kg体重，连续给药90天。
（3）观察指标：观察实验动物在给药期间及停药后30天内出现的死亡、中毒症状及体征，并进行血液学、血液生化、脏器系数等指标检测。
3. 慢性毒性实验（1）实验分组：将实验动物随机分为5组，每组10只，分别为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和最大耐受量组。
（2）给药方式：除对照组外，其他各组分别灌胃给药，剂量分别为0.5、1.0、2.0、4.0g/kg体重，连续给药6个月。
（3）观察指标：观察实验动物在给药期间及停药后30天内出现的死亡、中毒症状及体征，并进行血液学、血液生化、脏器系数、病理学等指标检测。
4. 遗传毒性实验（1）实验分组：将实验动物随机分为2组，每组10只，分别为实验组（给药组）和对照组。
（2）给药方式：实验组灌胃给药，剂量为2.0g/kg体重，连续给药90天。
毒理学基础 第六章 化学物的一般毒性作用
〔四〕慢性实验设计要点
1.实验动物 2.染毒途径与期限
3.剂量分组: 高剂量组：1/5-1/2 LOAEL〔亚慢〕 中剂量组：1/50-1/10LOAEL 低剂量组：1/100 LOAEL或：1/1000-1/10LD50 阴性对照：
4.观察指标 同亚慢，但精，为亚慢显现靶的指标。
〔五〕结果评价
染毒使半数动物出现相同效应〔或死亡〕的剂量[ED50(1)]
的比值，K 即= 蓄ED5积0(n)系数。
ED50(l)
LD50(n
K
=
)
LD50(l
)
1)固定剂量法 2)剂量递增法
〔2〕生物半减期法
用毒物动力学原理描述化学毒物在机体内的蓄积作用 化学物的蓄积极限：
a.半减期的测定 b.计算蓄积极限
第六章 化学物的一般毒性作用
急性毒性 一般毒性亚慢性毒性
慢性毒性
急性毒性试验 亚慢性毒性试验 慢性毒性试验
第一节 急性毒性作用
一、急性毒性的概念
➢ 急性毒性(acute toxicity) ：是指机体〔实验动物或人〕 一次或24小时内屡次接触外源化学物后在短期内所引 起的毒性效应。
➢ 包括一般行为、外观改变、大体形态变化以及死亡效应 ➢ 说明： ➢ 1.接触的次数：一次/屡次 ➢ 2.毒效应出现时间： ➢ 3.中毒效应的强度：
〔二〕染毒途径
1.经消化道染毒 2.经呼吸道染毒 3.经皮肤染毒 4.经注射染毒
〔三〕剂量选择及分组
1.剂量范围确实定： 动物死亡率0％－100％ 〔或10％-90%〕的致死剂量范围
2.分组及剂量确实定： 窛氏法：6－8组为宜，各组剂量呈等比级数 霍恩氏法：4组，各组剂量呈等比级数
〔四〕毒作用观察
急性毒性、蓄积毒性、亚慢性毒性、亚急性毒性、慢性毒性资料区分
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易混知识
毒性概念区分 蓄积性毒性(资料不要求，但注意区分)
蓄积性毒性：当化学毒物反复多次(未有时间要求)给动物(实验或靶动物)染毒，化学 毒物进入机体的速度（或总量）超过代谢转化和排泄的速度（或总量）时，化学毒物或 其代谢物在机体内逐渐增加并贮留的现象为化学毒物的蓄积作用。 蓄积作用是发生亚慢性、慢性毒作用的物质基础。 试验目的：求出外源化学毒物的蓄积系数K，了解蓄积毒性的强弱，并为慢性毒性试 验及其他有关毒性试验的剂量选择提供参考。 评价方式： 1.蓄积系数法（accumulation coefficient）以蓄积系数K为指标，一般认为K值越小，蓄 积毒性越大(参考《蓄积系数分级标准》表) 2.生物半减期法（biological half-life, t1/2）,根据得到的蓄积极限值可以推断产生中毒的 大概时间。
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易混知识
兽药易混知识点 2.毒性概念区分 (临床资料22号-26号)
毒性：指外源化学物质在一定剂量、一定接触时间和一定接触方式下，对 动物机体产生的总体毒效应的能力，又称作一般毒性作用。 毒性分类 1.一般毒性根据外源化学物质剂量大小和时间长短分为：急性毒性、蓄积 毒性、亚慢性毒性、亚急性毒性、慢性毒性等。 442公告中中兽药要求的23号资料要求长期毒性试验（化药为亚慢性毒 性），长期毒性即包括：亚慢性毒性和慢性毒性试验！ 2.相对特殊毒性根据观察目标不同可分为：遗传毒性、生殖发育毒性、致 癌性、免疫毒性、神经毒性和神经行为毒性等。
毒理学实验技术总结
毒理学实验技术总结毒理学作为一门研究外源性化学物质对生物体产生有害作用的学科，其实验技术的发展对于评估化学物质的安全性和风险至关重要。
以下是对常见毒理学实验技术的总结。
一、急性毒性实验急性毒性实验是评估化学物质在短时间内（通常 24 小时至 2 周）对生物体造成的毒性效应。
实验动物通常选用小鼠或大鼠，通过不同的给药途径（如经口、经皮、吸入等）给予一定剂量的受试物。
观察指标包括动物的死亡情况、临床症状（如行为异常、呼吸困难等）、体重变化等。
根据实验结果，可以计算出半数致死剂量（LD50）或半数致死浓度（LC50），这是衡量化学物质急性毒性的重要指标。
二、亚急性和亚慢性毒性实验亚急性毒性实验的时间通常为 28 天至 90 天，亚慢性毒性实验则为90 天至 180 天。
这些实验旨在观察化学物质在较长时间内低剂量暴露下对生物体的潜在毒性。
除了观察一般症状和体重变化外，还会检测血液生化指标（如肝功能、肾功能指标）、组织病理学变化（如肝脏、肾脏、心脏等器官的组织形态改变）等。
三、慢性毒性实验慢性毒性实验的周期较长，一般为 1 年以上，甚至可能持续动物的整个生命周期。
这种实验更能反映化学物质长期暴露对生物体的影响，包括致癌性、致畸性、致突变性等。
检测指标与亚急性和亚慢性毒性实验类似，但更加注重对肿瘤发生、生殖系统影响以及遗传物质损伤的评估。
四、遗传毒性实验遗传毒性实验用于检测化学物质对生物体遗传物质（DNA）的损伤作用。
常见的方法包括：1、细菌回复突变试验（Ames 试验）：通过观察受试物是否能引起细菌基因突变来评估其遗传毒性。
2、染色体畸变试验：观察细胞染色体结构和数量的变化。
3、微核试验：检测细胞中微核的形成，反映染色体的损伤。
五、生殖毒性实验生殖毒性实验主要研究化学物质对生殖系统的影响，包括对生殖器官、生殖细胞、胚胎发育等方面的作用。
实验分为三段：1、Ⅰ段：生育力与早期胚胎发育毒性实验，评估对雌雄动物生殖能力和早期胚胎发育的影响。
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毒理学作业农药2,4-滴钠盐原药为白色粉末，水溶性，表1是其对SD大鼠的急性经口试验结果，请根据表中结果，给出该农药的90天亚慢性试验的试验方案，以及如何对保证实验质量予以控制。
表1 2，4-滴钠盐原药对SD大鼠急性毒性实验结果剂量设置高剂量为25%LD50，中剂量为12.5%, 低剂量为6.3%。
雌性LD50为584mg/kg，高剂量为146mg/kg,中剂量为73mg/kg,低剂量为37mg/kg；雄性为501mg/kg，高剂量为125mg/kg，63mg/kg,低剂量为31mg/kg。
根据GB15670《农药登记毒理学实验方法》的农药急性毒性分级标准，2，4-滴钠盐原药的LD50>500mg/kg，属于低度农药。
因此试验时选择SD大鼠的LD50为584mg/kg。
农药2,4-滴钠盐原药SD大鼠亚慢性毒性试验目的;研究喂饲农药2,4-滴钠盐原药对大鼠的亚慢性毒性。
方法：取初断乳 SD大鼠80只，雌雄各半按照体重随机分为4组。
将2,4-滴钠盐原药按146、73、37mg/kg mg/kg剂量分别拌入饲料内经口喂饲染毒90d。
观察：大鼠外观体征、体质量、进食情况等。
在实验中期和末期采血检测检测血液学。
试验末期检测血生化指标以及尿常规检查。
实验结束时处死实验动物，计算脏器指数，并对主要脏器进行病理组织学观察。
1 材料和方法1.1 受试物农药2,4-滴钠盐原药，白色粉末，水溶性，由某地某农药公司提供。
SPF级初断乳大鼠80只，雌雄各半，体质量50~100 g，由XXX实验动物研究所繁育场提供，动物合格证号为医动字第XX-XXXX号。
1.2 饲养与管理SPF 环境条件下，同组同性别两只一笼喂养，自由进食和饮水。
环境温度 21～25℃，相对湿度 40%～60%。
严格控制昼夜交替。
1.3实验方法试验前将雌、雄大鼠各半按体重随机分为3个剂量组和1个对照组，每组20只，将2,4-滴钠盐原药按146、73、37mg/kg mg/kg剂量分别均匀混入饲料中制成颗粒饲料辐照灭菌后分别供高、中、低剂量组动物食用，连续每日一次喂养90d；对照组给予不加受试物的正常饲料。
1.4 观察指标1.4.1一般情况试验期间观察动物的一般情况包括外观体征和行为活动、粪便性状、食物摄入量及体重变化等。
1.4.2血常规在实验中期和末期按常规方法测定血液学指标1.4.3血液生化指标试验末期检测血液生化指标1.4.5尿常规检查尿常规测定颜色、 pH值、比重(SG)、尿糖(GLU)、尿蛋白，将尿液离心，并对尿中沉淀物进行镜检。
1.4.6脏器病理解剖动物，取心、肝、脾、肺、肾、胃肠、肾上腺、胸腺、脑和卵巢、睾丸等脏器，观察大体变化并称重（胃肠除外），计算脏器指数[脏器质量/体重）×100%]。
将解剖取得的脏器福尔马林固定，常规制片，HE 染色，光学显微镜进行病理组织学检查。
1.5 统计学分析亚慢性毒性试验结果经正态性检验后，符合正态的指标采用SPSS13.0统计软件进行单因素方差分析，否则经变换后分析。
２结果2.1 一般状况2.2 体重变化见表22.3 血常规检验结果见表32.4 血生化检测结果见表42.5 尿常规检查2.5 脏器指数见表52.6 病理组织学检查表2 2，4滴原药大鼠90 d亚慢性毒性试验体质量变化情况性别剂量（mg/kg)染毒周数0 2 5 8 10 13雌03773146雄03773146表3 2，4-滴钠盐原药大鼠90 d亚慢性毒性试验血液常规检验性别剂量（mg/kg) RBC/(×1012·L-1)Hb/(g·L-1)WBC/(×109·L-1)GRA/%LYM/%雌性试验前0 37 73 146雄性试验前0 37 73 146雌性试验后0 37 73 146雄性试验后0 37 73 146表4 2，4-滴钠盐原药大鼠90 d亚慢性毒性试验血生化检测结果性别剂量（mg/kg) AST/(U·L-1)ALT/(U·L-1)ALP/(U·L-1)BUN/(mmol ·L-1)TP/(g ·L-1)ALB/(g ·L-1)雌03773146雄03773146表5 脏器指数%性别剂量（mg/kg)大脑肝脏脾脏心脏肺脏胸腺肾脏肾上腺睾丸（卵巢）雌03773146雄037731463.讨论控制实验质量1 大鼠毒理学实验中实验技术因素的质量控制1. 1 动物临床观察指标的质量控制在药品临床前大鼠毒理学实验研究过程中 , 其临床观察指标主要包括行为活动、体质量、增质量、饲料生物利用度等，而体质量、增质量、饲料生物利用度指标均为需要统计分析的客观指标。
因其贯穿于整个实验周期 ,数据的客观性与实验环境、给药过程中动物感受是否舒适、动物密度、动物健康状况等因素相关。
在动物临床指标统计分析前控制体系中 , 实验环境应选择 S P F级动物实验室 ;每笼 2只 ;体质量在实验前应适应环境周期≥1周 ; 计算饲料摄入量每日应称质量 , 每周给药完毕即计算大鼠的饲料生物利用度 ,比较分析各组动物饲料生物利用度的统计学意义 ; 分析产生差异的原因 ,讨论差异是否与动物自发性疾病 ( 如大鼠自发性糖尿病会引起大鼠饲料生物利用度明显增大 ) 有关 , 同时应排除营养因素或给药途径对动物的损伤因素 ; 在动物行为活动指标观察中应在每日投药过程中重点观察大鼠投药部位是否发生充血、水肿、呕血 ,是否发生动物争斗外伤、皮毛稀疏竖散、粪便性状改变等变化 ,并及时处理与药物因素无关的改变 ,并详细记录 ,认真分析。
1. 2 血液学样本的质量控制大鼠慢性毒理学实验中血液学常规的检测项目主要有红细胞计数 ( R B C ) 、血红蛋白定量 ( H b ) 、白细胞计数及其分类计数 ( WB C+D C ) 、血小板计数 ( P T ) 、凝血时间 ( C T ) ; 血清生物化学检测项目主要有天门冬氨酸氨基转移酶 ( A S T ) 、丙氨酸氨基转移酶 ( A L T ) 、碱性磷酸酶 ( A L P ) 、总蛋白 ( T P ) 、清蛋白 ( A L B ) 、总胆固醇 ( T -C H O ) 、总胆红素 ( T - B I L ) 、空腹血糖 ( G L U ) 、尿素氮 ( B U N ) 、肌酐 ( C r ) 。
选择合适的血样采集法，不仅对动物损伤小、样本溶血率低、可重复采样等优势 ,而且使大鼠慢性毒理实验中分阶段检测药物对造血系统、生化系统的影响成为可能。
1. 3 动物病理组织标本分析前的质量控制组织病理学检查对于判断实验动物的毒性靶器官或靶组织具有重要意义。
在长期毒理学实验中有重要地位 , 是评价药物毒性的重要依据。
组织病理学检查对判断动物的毒性靶器官或靶组织具有重要意义。
实践中使用的组织学检测前优质标本取材流程可以为 : ①根据实验取材项目设计表格 ,需要取得脏器系数的器官或组织和其他器官或组织分别标示于一个完整的记录单元中 ; ②使用 250 m L广口瓶贮存新鲜配制的 10%甲醛溶液 180 ～200 m L 备用 ; ③对拟取材的大鼠进行解剖分组顺序编号 ; ④大鼠麻醉状态下 ,股动脉放血致死→胸腔组织 ( 胸腺、心、肺 ) →腹腔组织 ( 胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、直肠、肝、脾、胰腺、肾上腺、肾、卵巢、子宫、膀胱、前列腺、睾丸、附睾 ) →颈、脑部组织 ( 甲状腺、脑、垂体、脊髓 ) 。
其中胸腺、胰腺、肾上腺、卵巢、甲状腺、垂体、脊髓等腺体组织或微小组织应使用擦镜纸或纱布非挤压式包裹置于 3. 6% ～ 4. 0%甲醛。
这样使浸泡于甲醛溶液中的易混淆脏器在进行石蜡包埋时容易分辨 ,同时保证病理组织学检查中组织样本数目完整 ; 其他组织除大体观察有明显病灶的组织外 ,要求动物组织样本均取自该组织的代表区。
1. 4 动物实验中的给药途径不同而引起的取材质量控制因临床给药途径不同 , 在大鼠慢性毒理实验项目中存在不同的给药方式 , 主要给途径有主要给药途径有灌胃、直肠、舌下、腹腔注射、肌内注射、皮肤涂抹等。
在毒理学研究中可能通过对直接接触药物部位的检测结果分析药物慢性刺激对直接刺激局部组织的影响 ,还可以分析药物吸收和给药技能合理与否。
2 影响大鼠毒理学实验结果的环境、动物福利、误差控制2. 1 毒理学实验中的环境控制在不同环境中进行动物实验的大鼠 ,对照组和药物组动物均不同程度地存在因环境所致的炎性细胞浸润或间质性肺炎等病理变化 ,这些变化与实验环境级别及日常消毒措施合理与否息息相关。
样本固定前的大体解剖观察处理与组织学检查结果具有直接关系 ,取样以肉眼能观察到病灶的肺叶和表面观察正常的肺叶各取一为原则 ,在同一个受试动物肺组织中不可单一地单纯选择大体观察异常的小叶或大体观察正常的小叶样本。
2. 2 毒理学实验中的动物福利控制动物在毒理学研究过程中，会产生紧张、疼痛、呼吸困难、痉挛、颤抖、腹泻、孔道出血、瘫痪、休克 , 甚至死亡的情况。
因此 ,它们在遇到恐惧或恶劣环境时 ,生理和心理都可能患病。
控制原则为实验人员投药过程时间宜短不宜长 , 抓取动物轻拿轻放 , 血清采样宜快不宜慢 ,尽量提供人为因素影响小的实验环境，要求实验研究人员具备爱护动物之心和熟练的动物实验技能并贯穿于整个实验周期。
2. 3 毒理学实验中的误差质量控制在大鼠慢性毒理学实验中系统误差主要与样本的随机性、实验操作的一致性、流程的恒定性有关。
①抽样误差 : 一般情况下 ,慢性毒性实验中每个实验组应使用相等数量的雌、雄动物。
每组动物大鼠至少 20只。
差异应不超过平均体质量的 20%。
②系统误差。
包括下列两类情况。
实验技术熟练因素造成的误差 : 在毒理学实验研究中 ,为了真实反映外来化合物的毒性 ,除了要统一各种实验条件外 , 每日的给药时间应一致。
一是可比性强 ,二是为了避免错误而影响其他药理实验甚至临床用药。
因此 , 应将实验人员的技术熟练因素以一定的模式贯穿于各实验组中 ,在整个给药期中给药人员每天应互换给药的组别 ,同时应保证给药时间的准确性和一致性；流程造成的误差控制 : 系统误差可因分析方法、仪器校正错误、试剂纯度不够、检测者的感观、环境因素改变等因素造成 ;随机可能因动物实验过程中各种随机因素的共同作用等因素造成。
如实验过程的温度波动 - 电压变化- 仪器故障 - 操作技术差别等 ; 过失误差可因工作人员不负责任( 器皿不净、加样错误、计算错误 ) 而造成。
这些误差因素与实验结果判断有直接关系。
在药物安全性评价中 ,系统误差与动物是否接受了足够的药物及其在动物体的代谢时间相关。
比如空腹抽血与进食后抽血 ,对临床患者的 T G 、C K 、C h o 、G L U等有明显影响。