输血前血型血清学检查疑难标本的实验操作及试剂的使用

可以将细胞配成0.8%的悬液，加50ul到LISS/Coombs卡中， 直接离心判读结果。 特别注意：抗人球蛋白试剂
凝聚胺




试管中加入2滴血清（血浆）和1滴2%-4%红细胞悬液，混匀。 以1000g离心15秒，观察结果。如果阴性则继续试验；如果阳性，需 分析原因排除干扰后继续后续试验（此处发现并处理冷凝集素）。 加0.6-1mlLIM试剂，混匀后室温放置1分钟。 加入2滴Polybrene试剂，混匀后立即以1000g离心15秒，弃去试管中 液体，轻摇试管，肉眼判断红细胞凝集情况。如果有凝集出现则继续 操作，如果没有凝集出现则该试验无效。 加入2滴重悬液，轻摇试管，肉眼观察结果。 结果判定：1分钟内凝集消失为聚凝胺试验阴性，1分钟内凝集不消失 为聚凝胺试验阳性。 对于可疑的弱阳性结果，可用生理盐水洗涤3遍后，加2滴抗人球蛋白 试剂，离心后判读结果。
试管法正反定型
ABO血型定型试剂
抗-A1
抗-A1 用于检测A亚型。 注意： 抗-A1反应阴性 A亚型 A型抗原减弱 A型新生儿与抗A1反应阴性或 弱反应
抗-H
抗-H 用于检测ABO亚型及 孟买、类孟买型。
( A或B亚型H抗原增强，孟买、
类孟买H抗原阴性。)
注意：


血液病致A、B抗原减弱，H抗原 可能出现增强或减弱。 必须做对照试验。

抗-D试剂
三 抗体筛选

否存在有临床意义的 抗体。 如果抗筛阳性，需要做抗体鉴定来确认有临床意义的抗体、 最终选择合适的血液输注，同时提醒临床医生可能推迟提 供配合的血液。 抗体筛选应该作为输血前检测的一部分，它提供了比交 叉配血更为可靠和灵敏的检测抗体的方法（剂量效应等）。 抗体筛选或鉴定比交叉配血更敏感，认为：最严格的配血 能配上就安全的认识是不全面的。
输血前血型血清学检查
疑难标本的实验操作 及试剂的使用
输血前血型血清学检查 （输血相容性检测）
《临床输血技术规范》要求



血型鉴定（受血者、献血者的ABO和RhD血型） 抗体筛选（受血者意外抗体筛查） 交叉配血
一 ABO血型
ABO 正反定型相符：正反定型相符且正定型反应强度4+； 反定型反应强度≥ 2+。
巯基试剂消除自身凝集红细胞


巯基试剂：DTT、2-Me 巯基试剂可以裂解IgM抗体单体间的二硫键，用以消除冷 自身抗体造成的红细胞的自发凝集，为血型检测提供不凝 集的红细胞。 用盐水洗涤红细胞3遍并配成50%的悬液，加入等量的 0.01M的DTT，37℃孵育30分钟，将细胞洗涤3遍后配成24%的悬液备用。
LISS/Coombs卡配血不合、凝聚胺法配血相合
凝聚胺法会漏检抗体，交叉配血结果以LISS/Coombs卡为 准。
抗体筛选阴性、 LISS/Coombs卡配血不合



献血者DAT阳性。 新生儿血清中存在母体的IgG抗-A/B抗体。 患者曾接受ABO不相合造血干细胞移植。 患者3个月内曾接受ABO同型的实体器官移植，由于供者淋 巴细胞产生的IgG型抗-A及抗-B。 患者血清中有针对进口筛选细胞没有但亚洲人有的抗原的 抗体，如抗-Mia、抗-Mur、抗-Dia。 静脉丙球中的血型抗体。 患者血清中有抗低频抗原的抗体。
抗人球蛋白卡VS凝聚胺
抗体筛选阴性 两种方法交叉配血结果不一致

按那种方法的结果发血？ 以抗人球蛋白卡为准吗？
怎么办？
找原因！找原因！！找原因！！！
抗人球蛋白卡VS凝聚胺
凝聚胺法配血不合、 LISS/Coombs卡配血相合

37度无反应性的IgM抗体（同种抗体、冷自身抗体） 凝聚胺能检出而抗人球法漏检的抗体
吸收放散试验 唾液型物质检测 毛细管离心分离自身和输入红细胞 DTT处理自身凝集红细胞 分子生物学检测（血型基因）

询问、查阅病历 试管法正反定型 血型鉴定特殊技术 观察 ↓ 假设 ↓ 验证 ↓ 解决
试管法
试管法：血型定型金标准，常用于疑难血型鉴定。


可以反复离心看结果。 可以延长抗原抗体反应时间，可以改变反应温度（4℃、 37℃孵育），有利于弱抗原、抗体的检出或排除冷凝集 素的干扰。 可以观察红细胞混合外观现象。 可以观察红细胞溶血现象。
没有可见的细胞凝集，呈均匀的红细胞悬液 部分溶血：残留部分红细胞，液体出现透明澄清红色 完全溶血：未见红细胞，液体出现透明澄清红色
mf
混合外观凝集，部分红细胞形成较大凝块，周围是游离的红细胞
试管法凝集强度
为什么要使用标准凝 集强度：

操作标准化。 实验结果有回溯性。 保证不同实验室、不同工 作人员对同一标本实验结 果的一致性。

对受血者只需用IgM抗-D试剂检测 红细胞上是否有D抗原。 以输血为目的常规检测没有必要使 用高效价的单克隆抗-D试剂及 IgM+IgG单克隆抗-D试剂检测D变异 型及对D阴性的标本进行确认试验， 否则有不必要的风险。因为：
必须设立一个凝集强度来区分正常D和D 变异型，增大了误判的风险。 用于献血者的抗-D试剂盐水介质离心能 检出部分D变异型。 如果DAT阳性，用IgG抗-D做IAT试验时 将D阴性误判为D阳性。
DTT处理自凝红细胞
二 RhD血型

被检红细胞与抗-D试剂凝集者为RhD阳性，不凝集 者为RhD阴性。 正常的RhD阳性：与IgM抗-D≥3+ 反应强度。 红细胞与IgM抗-D反应强度≦2+
D变异型 自身凝集红细胞 抗-D引起的新生儿溶血病。 血液病致D抗原减弱 直接抗人球蛋白强阳性红细胞



四 交叉配血

抗体筛选阴性：
LISS/Coombs卡、凝聚胺法。

如患者血浆中有（或既往曾有）临床可能有意义 的红细胞抗体，必须使用间接抗人球蛋白法进行 交叉配血。
1.同种抗体： LISS/Coombs卡（选择没有抗体对应抗原的红细胞成分）。 注意：IgM抗体，应加做试管盐水离心法。 2.自身抗体：经典-IAT法。 3.同种抗体+自身抗体：经典-IAT法（选择没有抗体对应抗原的红细胞成 分）。

同种抗体


同种抗体的结果须永久保存
有剂量效应的抗体及一些弱抗体，与相应抗原纯合子 反应、与杂合子不反应，配血相合不能保证输血安全 性。 随着时间的推移，有些抗体会减弱甚至无法检出，配 血相合，输血后会引起免疫记忆细胞在短时间产生大 量抗体，引起溶血性输血反应。 对于同种抗体，每次输血都应选择无对应抗原的红细 胞成分，而非仅配血相合。
注意：


反定型抗-A减弱，可能出 现与A1细胞阳性反应，与 A2细胞反应阴性。

规范的摇试管方法
试管法凝集强度判读
反应强度 4+ 3+ 2+ 1+ 红细胞凝集情况 一个结实的大凝块，背景清楚 几个大凝块，背景清楚 中等大小凝块，背景清楚 小凝块，背景较混浊
w+
0 pH H
有少量肉眼可见的凝集，背景红色混浊，显微镜下可观察到较多凝 集细胞


D抗原分类
D抗原的分类：根据D抗原的数量和表位不同， 将D抗原分为以下3类：
正常的D：与IgM抗-D≥3+ 反应强度。 D变异型：与IgM抗-D弱反应或阴性，需IgG抗-DIAT才能 检出。 1.弱D（weak D） 2.部分D（partialＤ）

DEL型：只有吸收放散才能检出D。
IgM抗-D试剂


抗体筛选的技术

患者血浆＋筛选细胞 患者血浆＋自身细胞（自身对照）
自身对照无须作为抗体筛检的一部分。 抗体筛选阳性，应做患者自身细胞对照，这有助于识别高 频抗原的抗体还是自身抗体。


方法： LISS-IAT法（低离子强度盐溶液-间接抗人球蛋白试验）由于 它的速度快、灵敏度和特异性高，被公认为检测有临床意义抗体的最 适合方法。 LISS-IAT法可以检测IgG抗体和37 ℃有反应性的IgM抗体。 LISS-IAT法（试管法、 LISS/Coombs卡）。
筛选细胞

3%

0.8%
抗人球蛋白卡（LISS/Coombs卡）

凝胶

玻璃珠
抗人球蛋白试剂

多特异抗-IgG+C3d 单特异抗-IgG
抗体筛选
抗体筛选：存在血浆干扰时应选择试管LISS-IAT法；存在自身抗体时选 择盐水介质-IAT法。
LISS-IAT：2滴血清（血浆）、1滴2-4%的红细胞，加2-4滴LISS液后混匀，37℃ 孵育15分钟，离心观察细胞的凝集、溶血情况，用生理盐水洗涤3遍后倾倒上 清液，控干，加2滴抗人球蛋白试剂后混匀，1000g离心15s后判读结果。 盐水介质-IAT：2滴血清（血浆）、1滴2-4%的红细胞，37℃孵育45-60分钟，离 心观察细胞的凝集、溶血情况，生理盐水洗涤3遍后倾倒上清液，控干，加2 滴抗人球蛋白试剂后混匀，1000g离心15s后判读结果。

ABO 正反定型相符， 但弱反应，正定型反 应强度＜4+，反定型 反应强度＜2+。
正反定型不符

正定型为O型，反定型非O 型或Ac、Bc凝集强度差别 ＞2+以上
正反定型不符处理的程序





排除仪器设备、试剂、标 本及操作失误。 查阅、询问病历资料，设 计针对性试验。 选择试管法做正反定型。 ABO血型鉴定的特殊技术。
抗体鉴定

患者抗体筛选阳性，如果时间允许，应做抗体鉴定并评估 其临床意义，抗体鉴定结果应记录在患者病历中。
鉴定抗体类型：IgM、IgG。 鉴定抗体种类：同种抗体、自身抗体 。 鉴定抗体特异性:抗-？