免疫标记
免疫标记的种类
免疫标记的种类免疫标记是指在人体免疫系统中起到标记作用的分子，它们能够被免疫系统识别并激活免疫反应。
在免疫学领域，免疫标记被广泛应用于研究和治疗各种免疫相关疾病。
根据其性质和功能，免疫标记可以分为多种类型。
1. 抗原抗原是一种能够引起免疫反应的物质，包括细菌、病毒、真菌、寄生虫、肿瘤细胞等。
抗原可以被免疫系统中的抗体或T细胞受体识别，并引发相应的免疫反应。
在免疫治疗中，抗原可以被用作疫苗或免疫细胞治疗的靶点。
2. 抗体抗体是一种由B淋巴细胞分泌的蛋白质，能够与抗原特异性结合并中和或清除其作用。
抗体可以被用于诊断、治疗和预防多种免疫相关疾病。
例如，抗体可以被用于检测某些感染或肿瘤标志物，或者被用于治疗自身免疫性疾病、癌症等。
3. 细胞表面标记物细胞表面标记物是指存在于细胞表面的蛋白质或糖类分子，它们能够识别和结合其他细胞或分子，并参与多种生理过程。
在免疫学中，细胞表面标记物可以用于鉴定不同类型的免疫细胞，例如CD4、CD8等T细胞标记物，B淋巴细胞标记物CD19、CD20等。
4. 细胞因子细胞因子是一类由免疫细胞或其他细胞分泌的蛋白质，它们能够调节和影响其他细胞的生长、分化和功能。
在免疫反应中，细胞因子可以促进或抑制免疫细胞的活性，调节免疫反应的强度和持续时间。
例如，白细胞介素-2（IL-2）可以促进T细胞增殖和活化，干扰素（IFN）可以增强巨噬细胞和NK细胞的抗肿瘤活性。
5. 核酸标记物核酸标记物包括DNA和RNA等分子，在免疫学中主要用于检测和鉴定不同类型的细胞或分子。
例如，PCR技术可以扩增某些特定的DNA序列，用于检测某些感染或遗传性疾病；RNA测序技术可以鉴定不同类型的RNA分子，并用于了解基因表达调控机制。
总之，免疫标记是免疫学中非常重要的概念，它们可以用于鉴定、治疗和预防多种免疫相关疾病。
随着科技的不断进步，我们相信将会有更多新型的免疫标记出现，并为人类健康事业做出更大的贡献。
免疫标记技术名词解释
免疫标记技术名词解释免疫标记技术是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的技术。
它利用特异性抗体与待检测的分子结合，然后利用这些抗体上的标记物（如酶、荧光剂或放射性同位素）来检测和定量目标分子的存在和表达水平。
下面是一些常见的免疫标记技术及其解释：1. 免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）：在组织切片或细胞上，利用抗体与特定抗原结合，再利用染色剂（如酶、荧光剂）将目标抗原可视化，从而研究和分析细胞或组织中特定蛋白质的表达和定位情况。
2. 免疫荧光（Immunofluorescence，IF）：通过与荧光素结合的抗体，将特定蛋白质或其他目标分子在细胞或组织中可视化。
这种技术不仅可以用于检测蛋白质的表达和定位，还可以用于研究细胞的功能、相互作用和信号通路等。
3. 免疫酶标记（Immunoenzymatic labeling）：利用酶标记（如辣根过氧化物酶-HRP）结合抗体，形成特定酶抗体复合物。
通过加入合适底物和显色反应，可以观察到酶的活性，从而实现对目标分子的检测和定量。
4. 免疫原位杂交（Immunohistochemical In Situ Hybridization，IHC-ISH）：结合免疫组化和原位杂交的技术，可以同时检测细胞或组织中的蛋白质表达和基因表达情况。
通过使用标记有荧光或酶的核酸探针，可以在组织切片或细胞上可视化特定基因的表达位置。
5. 流式细胞术（Flow cytometry）：该技术利用荧光标记的抗体与细胞中的特定分子结合，经过流式细胞仪检测细胞的荧光强度和分布情况。
这种技术可以用于检测和分析细胞表面标记物、细胞周期、凋亡等多种细胞特性。
免疫标记技术的应用范围非常广泛，可以用于癌症诊断、药物研发、免疫学研究和疫苗开发等领域。
通过免疫标记技术，科研人员可以更加准确地了解分子的功能、定位以及其在疾病中的变化，从而为疾病的早期诊断和治疗提供重要的依据。
免疫标记技术的原理应用
免疫标记技术的原理应用1. 什么是免疫标记技术？免疫标记技术（Immune Labeling Techniques）是一种利用抗体与待检测物质特异性结合的原理，通过对待检测物质进行标记，从而实现疾病诊断、研究细胞功能、鉴定蛋白质等目的的一种技术手段。
2. 免疫标记技术的原理免疫标记技术的原理基于抗体与抗原的特异性结合。
抗体是一种高度特异性的蛋白质，能够结合到目标分子（抗原）上，形成抗原-抗体复合物。
在免疫标记技术中，通常使用荧光染料、放射性同位素、酶等标记抗体或者直接标记抗原来实现标记。
3. 免疫标记技术的应用领域免疫标记技术在生物医学研究、药物研发等领域具有广泛的应用。
以下是一些常见的应用领域：•免疫组织化学：免疫标记技术可以用于标记和检测组织中特定细胞或者蛋白质的表达，帮助研究组织的结构和功能，以及相关疾病的诊断和治疗。
•流式细胞术：免疫标记技术可以用于标记和检测特定细胞类型和分子的表达，帮助研究细胞的免疫功能、疾病诊断和治疗效果评估。
•免疫印迹（Western blotting）：免疫标记技术可以用于研究蛋白质的表达水平和相互作用，帮助研究蛋白质功能、疾病机制和药物研发。
•免疫组化：免疫标记技术可以用于标记和检测肿瘤标志物、炎症标志物等，帮助研究疾病诊断、治疗效果评估和预后判断。
•分子生物学实验：免疫标记技术可以用于检测和定量特定蛋白质的表达水平，帮助研究基因功能、信号转导和细胞周期等。
4. 免疫标记技术的优势免疫标记技术具有以下几个优势：•高度特异性：免疫标记技术通过抗体与抗原的特异性结合，可以准确地标记和检测特定分子或者细胞。
•高灵敏度：免疫标记技术通常采用放射性同位素、酶或者荧光等标记物，具有很高的检测灵敏度。
•广泛适用性：免疫标记技术可以应用于不同的样本类型，包括组织、细胞、血清等，适用于各种实验条件。
•定量和定位分析：免疫标记技术不仅可以检测目标分子的表达水平，还可以用于研究分子定位和相互作用。
荧光免疫标记技术
适用于标记样品量少、蛋白含量低的抗体溶液，此法标记抗体比较 均匀，非特异性染色也比较少。
【主要试剂与器材】 1．器材 （1）铁立架、蝴蝶夹、层析柱、洗脱瓶、搅拌器、磁棒、
紫外分光光度计 （2）烧杯、试管、滴管、吸管、洗耳球、pH试纸、黑纸 2．试剂 （1）抗体 （2）异硫氰基荧光黄（FITC） （3）葡聚糖凝胶（Sephadex G-25） （4）pH9.5，0. 5M 碳酸缓冲液 （5）pH7.0，0.005M 磷酸缓冲液
免疫标记技术的应用 标记物与抗原、抗体的连接技术； 标记后的抗原、抗体进行特异性检测的实验设计原理 以及相应的检测仪器的使用方法。
免疫荧光标记技术（immunofluorescence technique）
是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素，当与其相对应 的抗原或抗体起反应时，在形成的复合物上就带有一定量 的荧光素，在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗 体结合部位，检测出抗原或抗体。
荧光免疫标记技术
免疫标记（immunolabelling technic）
是指用一些易测定的、具有高度敏感性的标记物质：荧光素、放射 性核素、酶、胶体金、生物素、铁蛋白及化学（或生物）发光剂等作为 追踪物，标记特异性的抗原、抗体分子进行的抗原、抗体反应。
通过这些标记物的增强放大效应来显示反应系统中抗原、抗体的性 质与含量。并借助于荧光显微镜、射线测量仪、酶标检测仪、电子显微 镜和发光免疫测定仪等精密仪器对试验结果直接镜检观察或进行自动化 测定。
免疫荧光技术- 基本原理
免疫荧光技术是将抗原抗体反应的特异性和敏感性与显微 示踪的精确性相结合。
以荧光素作为标记物，与已知的抗体(或抗原)结合、但不 影响其免疫学特性。然后将荧光素标记的抗体作为标准试 剂，用于检测和鉴定未知的抗原。
免疫标记技术原理
免疫标记技术原理
免疫标记技术是一种用于检测或定位特定分子的方法。
它基于免疫学原理，利用特异性抗体与目标分子结合，并通过标记物的发光、荧光、酶、放射性等性质来检测或可视化目标分子。
免疫标记技术的原理主要包括以下几个步骤：
1. 抗体选择：选择与目标分子高度特异性结合的抗体。
这些抗体常通过免疫动物（如小鼠）注射目标分子来获得。
2. 标记物的选择：选择适当的标记物，如荧光染料、酶（如辣根过氧化物酶）、放射性同位素等，用于标记抗体。
标记物的选择通常取决于实验的要求，如需要检测感光杯、细胞表面分子或组织切片等。
3. 抗体与目标分子的结合：将标记的抗体与待检的样品中的目标分子结合。
这一步可以在体内（如细胞或组织内）或体外（如孵育在试管中）完成。
4. 洗涤：通过洗涤步骤，去除未结合的抗体和其他非特异性结合物质，以减少背景信号。
5. 检测与可视化：根据所使用的标记物的性质，采用相应的方法进行检测和可视化。
例如，对于荧光标记的抗体，可以使用荧光显微镜进行观察；对于酶标记的抗体，可以使用酶底物产生显色反应。
免疫标记技术在生物医学研究和临床诊断中广泛应用。
它能够高效、高灵敏地检测和定位目标分子，为疾病诊断、药物研发等领域提供了重要的工具和方法。
临床常用标记免疫技术及特点
临床常用标记免疫技术及特点1.引言1.1 概述标记免疫技术是现代生物医学领域中常用的一种实验方法，其通过在生物样本中引入特定的标记物，来检测、定量或分析目标物质的存在和性质。
这些标记物可以是荧光染料、放射性同位素、酶或其他具有特异性的物质。
在临床医学中，标记免疫技术具有广泛的应用，可以用于诊断疾病、评估治疗效果、研究疾病机制等方面。
常用的标记免疫技术包括免疫荧光染色、酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)等。
免疫荧光染色技术是一种利用特异性抗体与标记物结合后发出荧光信号的技术。
通过荧光显微镜观察样本中的荧光信号，可以定位、鉴定并定量分析目标物质。
这种技术具有高灵敏度、高特异性和高分辨率的特点。
酶联免疫吸附测定(ELISA)是一种利用特异性抗体与酶结合后，通过酶催化反应来产生可定量的信号的技术。
ELISA技术可以用于检测血清中的免疫球蛋白、抗原、抗体等多种生物分子，并可定量测定其浓度。
ELISA 技术具有高灵敏度、高准确性和高通量的特点。
放射免疫测定(RIA)是一种利用放射性同位素标记分子，通过测量放射性同位素放出的射线来定量目标物质的技术。
RIA技术在测定极低浓度物质或微量物质时具有非常高的敏感性和特异性。
然而由于放射性同位素标记物的安全性和环境污染问题，RIA技术在临床实验室中的应用受到了限制。
总之，标记免疫技术在临床医学中具有重要的应用价值，可以帮助医生准确、快速地诊断疾病，评估治疗效果，深入研究疾病的发生机制。
随着科学技术的不断进步，标记免疫技术也在不断发展，将为临床医学带来更多的突破和进展。
1.2文章结构文章结构部分：本篇文章主要介绍临床常用标记免疫技术及其特点。
文章结构如下：第一部分为引言，包括概述、文章结构和目的。
在概述中，将介绍免疫技术在临床应用中的重要性和广泛应用的背景。
在文章结构部分，将详细说明本篇文章的章节分布和内容安排。
在目的部分，将说明本文的目的和意义，为读者明确文章的目标。
常用的免疫标记技术
常用的免疫标记技术免疫标记技术是一种用于检测和分析生物分子的方法，其中利用特定的抗体或其他免疫物质标记目标分子，从而使这些分子能够被观察和测量。
以下是一些常用的免疫标记技术：1.免疫荧光技术（Immunofluorescence）：在这种技术中，用于检测目标分子的抗体被标记上荧光染料。
通过荧光显微镜观察样本，可以定位和定量目标分子的位置和数量。
2.免疫酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）：这是一种广泛用于检测抗体或抗原的技术。
ELISA 利用酶标记的抗体或抗原与目标分子结合，然后通过酶的底物反应来产生可测量的信号。
3.免疫印迹技术（Western Blot）：Western Blot用于检测蛋白质。
蛋白质被电泳分离，然后通过免疫印迹将其转移到膜上。
接着使用特定抗体标记的酶或荧光物质来检测目标蛋白质。
4.免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）：IHC用于在组织切片中检测特定抗原的存在。
切片上的抗原与标记有酶、荧光染料或其他标记的抗体结合，通过显微镜观察抗原的分布。
5.流式细胞仪技术（Flow Cytometry）：该技术通过激光照射细胞，测量细胞表面或内部的荧光标记物，以分析细胞的类型、状态和功能。
6.蛋白质质谱法（Mass Spectrometry）：将样品中的蛋白质离子化，并通过质谱仪测量质量。
免疫质谱结合了免疫标记和质谱技术，可用于检测和鉴定蛋白质。
7.免疫电镜技术（Immunoelectron Microscopy）：在电子显微镜下观察样本，通过标记的抗体来可视化细胞或亚细胞结构中的特定蛋白质。
8.免疫磁珠技术（Immunomagnetic Bead Assay）：使用带有磁珠的抗体，通过磁场将目标分子分离出来。
常用于细胞分离和分析。
这些免疫标记技术在生物医学研究、临床诊断和药物开发等领域发挥着关键作用，可以用于检测和定量各种生物分子，如蛋白质、抗体、核酸等。
免疫标记技术的基本原理
免疫标记技术的基本原理
免疫标记技术是一种常用的细胞分子生物学技术，它是通过利用免疫原/抗原反应，将抗体与抗原或细胞内的标记物质结合在一起，以便识别、追踪、回收、测量和检测标记物质的手段。
免疫标记技术的基本原理相当简单，即在微小样品中检测特定抗原的方法。
它充分利用免疫系统的特性：抗体可以与外来的受体（抗原）结合，而不对正常细胞发生反应。
抗体与抗原结合时，会产生一种特殊的生物反应，该反应可以把抗体和抗原标记的某一特定的抗原分子联系起来，从而实现抗体和抗原之间的标记化效果。
免疫标记技术中首先要选择合适的抗体，并将其做好标记，然后将抗体接种到实验动物（如小鼠、大鼠）中，令其产生一种针对抗原特异性的免疫应答。
当抗体与抗原结合时，均会由于表位的分子吸引力而结合在一起，并且都会引发一系列的生物化学反应。
抗体标记物中的抗原与受体结合时，抗体也会受到外部影响而引发生物学改变，从而使其达到对目标抗原的特异性结合，从而提高标记物的特异性。
最后，在细胞或组织内观察抗体标记物所标记后的抗原或受体，以获得免疫标记技术的结果，从而实现抗原的高度特异性鉴定。
免疫标记技术的优势在于可以在细胞或组织的微小样品中检测出特定的抗原，而不需要大量的样品研究。
免疫标记技术
常用的酶及其底物 酶 辣根过 氧化物 酶 (HRP) 底物
邻苯二胺 (OPD) 四甲替联苯胺 (TMB) 5氨基水杨酸 (5AS) 邻联苯甲胺 (OT) 2,2‘-连胺基-2(3-乙基-并噻 唑啉磺酸-6)铵盐 (ABTS )
显色反应 测定波长
橙红色 蓝绿色 棕色 蓝绿色
蓝绿色
492 450 449 425 642
酶是一种有机催化剂，很少量的酶即可导致大 量的催化过程，所以极为敏感。它的催化过程 有两种基本形式： (1)E十S →(ES)→E十P (2)E十S →＝(ES) (ES)十D1 →E十P十D2 E为酶，S为酶作用的底物，P为底物分解 后的产物，D，为供氢体，D：为D1的氧化型。 如P或D：为有色化合物，即可用呈色反应显示 酶的存在。
HRP的催化反应需要底物过氧化氢(H2O2) 和供氢体(DH2)。供氢体多为无色的还原型 染料，通过反应可生成有色的氧化型染料 (D)。酶促反应的过程如下: HRP DH2＋H2O2────→D＋2H2O
供氢体的种类很多，形成的产物特点不一。如 DAB(3.3－二氨基联苯胺)的反应产物为不溶性沉 淀物，并有电子密度，故适宜于做免疫酶染色或 电镜观察。5AS(5-氨基水杨酸)早期曾用于ELISA， 但其溶解度不够大，且空白孔不易控制到无色， 现已很少应用。OT(邻联甲苯胺)的特点是能产生 鲜艳的蓝绿色产物且灵敏度较高，但反应中受温 度影响较大，而且由于产物不稳定，需要在短时 间内进行测定。
荧光是指一个分子或原子吸收了给 予的能量后，即刻引起发光；停 止能量供给，发光亦瞬即停止。 荧光素是一种能吸收激发光的光能 产生荧光，并能作为染料使用的 有机化合物。目前用于标记抗体 的荧光素主要有异硫氰酸荧光黄 (FITC)、四乙基罗丹明及四甲基 异硫氰酸罗丹明。
免疫标记技术的原理及应用
免疫标记技术的原理及应用1. 引言免疫标记技术是一种通过添加荧光染料或酶等标记物，使得目标分子可以被直接观察、定量或检测的技术。
它在生物学、医学、生物工程等领域具有广泛的应用。
本文将介绍免疫标记技术的原理和常见的应用案例。
2. 免疫标记技术的原理免疫标记技术主要依赖于抗体的高度特异性和结合能力。
它通过标记抗体或抗原来实现目标分子的可视化或检测。
其中最常见的免疫标记技术包括：免疫荧光染色、酶联免疫吸附实验（ELISA）和免疫组织化学。
2.1 免疫荧光染色免疫荧光染色是利用荧光染料标记抗体或抗原，并通过特定的荧光显微镜观察目标分子的分布。
这种技术能够在细胞水平上观察目标分子的定位和表达水平。
免疫荧光染色常用在免疫细胞化学、蛋白质定位和细胞信号转导的研究中。
2.2 酶联免疫吸附实验（ELISA）酶联免疫吸附实验是一种常见且灵敏的定量检测方法。
它通过将酶标记的抗体或抗原与待检测分子结合，再用底物与酶作用生成可测量的产物。
这种技术广泛应用于血液学、临床诊断和药物研发等领域。
2.3 免疫组织化学免疫组织化学是通过在组织切片上标记抗体或抗原，利用显微镜观察目标分子在组织中的位置和表达情况。
它在研究肿瘤、组织发育和疾病等方面有重要应用。
3. 免疫标记技术的应用免疫标记技术在许多领域都有广泛的应用，下面介绍一些常见的应用案例。
3.1 免疫组织化学在癌症诊断中的应用免疫组织化学可以通过标记抗体来检测肿瘤标志物，从而帮助医生诊断和治疗癌症。
例如，可以利用针对特定抗原的抗体来检测肿瘤细胞在组织中的分布和表达水平，以辅助早期的癌症诊断和预后评估。
3.2 免疫荧光染色在细胞生物学研究中的应用免疫荧光染色可以在细胞水平上观察某个特定蛋白质的定位和表达情况。
这种技术广泛应用于细胞生物学研究中，例如研究细胞器的分布和功能、蛋白质互作和信号通路等。
3.3 ELISA在生物药物研发中的应用ELISA是一种常用的生物药物研发工具，可以用于检测和定量药物分子、抗体和蛋白质的浓度。
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• 实验目的 • 通过HBsAg的检测，了解酶联免疫吸附试验的原理和 类型，熟悉双抗体夹心法的原理及其临床意义。
【原理】
以特异性抗体(抗-HBs)包被载体表面，然后将待测标本 加入反应孔，混匀，37℃孵育，洗去未结合的抗原，加 入酶标特异抗体(酶标 抗-HBs)37℃孵育30min。酶标抗 体就连接到已结合于致敏载体表面的抗原上，孵育后， 洗去未结合的酶标抗-HBs。最后加入底物溶液，根据颜 色反应来判定抗原含量。
已包被抗-HBs的反应孔 + 被测标本→+ 酶标抗-HBs → 混匀 37℃30min →洗涤液手工冲洗5次，拍干→ 加显色剂A液，再加B液 各1滴混匀 → 37℃10min →观察判断结果。 先观察3个对照孔结果。
双抗体夹心法检测抗原原理示意图
取出水洗5次
酶标抗HBs-Ab 放37℃，30min
• 4. 结果判断须在10min内完成。
【临床意义】
• 血清中检测到HBsAg可确证有乙型肝炎
（HBV）感染。我国有1亿HBsAg多健康携带者
• 但不一定是乙型肝炎患者。 实验报告
1. 简述荧光免疫法检测ANA的实验原理
2. 试述酶联免疫法检测HBs-Ag的实验原理
3. 报告实验结果：标本号，阴性，阳性，对照结果
• 实验物品发放：被检血清，每人一份，报告标本号
【方法】 阴性对照、阳性对照、空白对照全班各作2分。共6分
于已包被抗-HBs的试验孔内加入待测血清标本，每孔50μl
空白孔不加血清 阴、阳、空白对照 各2孔，全班
加入酶标抗-HBs，每孔1滴 (50μl)充分混匀，37℃ 30min
手工洗板:弃去反应孔内液体、拍干、用洗涤液注满孔， 弃去拍干，同法反复洗涤五次后，拍干。每次泡20秒
3次→加荧光标记羊抗人IgG→37℃30min保湿温育→PBS冲洗3次 晾干→加PBS-甘油缓冲液（1：1）→加盖片于荧光显微镜下观察。
荧光标记（间接法）检测血清ANA试验原理
被检血清 已知抗原 抗原 抗体 荧光素标 记抗体 F
37℃ 察
30min
水洗
37℃，30min
水洗
镜下观
强阳性
阳性
阴性
【实验材料】
1. 抗原片，小鼠肝组织印片 2. 被检血清、阴性、阳性对照血清
3. 荧光素标记羊抗人IgG（抗核抗体）
4. PBS缓冲液pH8.0、甘油-盐水缓冲液、丙酮 5. 试管、滴管、保湿盒、37℃温育箱、荧光显微镜等
【操作方法】 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
肝细胞抗原片制备
新鲜制备小白鼠肝组织印片→丙酮浸泡5min→PBS漂洗3 次每次3min→晾干- 20℃备用。
注：每次注满孔保留20s以上
加显色剂:先加显色剂A，每孔1滴 (50μl)，然后再加显色剂B， 每孔1滴 (50μl)，混匀，37℃孵育10min。 每孔加终止液1滴 (50μl)，混匀 ，观察结果
50微升约 为1大滴
注：用加液器加抗血清50微升，其余加量均为一滴
【注意事项】
• 1.试剂盒置2℃～8℃保存 • 2.使用前试剂应摇匀，并弃去1～2滴后垂直滴加。 • 3.从冷藏环境中取出试剂后置室温平衡30min再行测 试，余者应及时封存于冰箱中保存以备后用。
免疫、放射免疫、酶标免疫，免疫胶体金、免疫 电镜等技术。
实验四
免疫标记技术的应用─
一、免疫荧光检测技术(Immunofluorescence Technique)
利用荧光免疫技术检测自身免疫性疾病（SLE） 血清中的ANA.（示教） 二、酶联免疫吸附试验（操作） (Enzyme Linked Immunosorbent Assay
ELISA)
采用双抗体夹心法检测乙肝表面抗原 HBs-Ag
一、免疫荧光检测法 ——抗核抗体（ANA）的间接免疫荧光检测 【原理】
系统性红斑狼疮（SLE）患者血清中出现的ANA。 以小白鼠肝细胞核作为已知抗原基质，加病人血清 (第一抗体)再加荧光标记的羊抗人IgG(第二抗体，抗抗体) 若患者血清中有ANA,即与肝细胞核抗原结合→复合物， 再与荧光标记的羊抗人IgG结合，在荧光显镜下 可见细胞显示黄绿色特异荧光。 SLE患者血清中ANA+小鼠肝细胞核→复合物37℃30min→PBS冲洗
酶标抗体 E
显色反应
HBs-Ag
标本（含抗原）
固相抗体
底物 E
E
已包被在 反应版内 抗HBs-Ab 具有过氧化物酶作用的酶
底物只对特异性的酶标 抗体和与其结合的 复合 物产生显色反应 显色，+，不显色 —
双抗体夹心法检测 HBs-Ag
E
E
E
（ +）
（ -）
【材料】
• • • • • • • 包被抗-HBs反应孔 病人血清、HBsAg阳性对照血清、HBsAg阴性对照血清 酶结合物（辣根过氧化物酶-抗-HBs） 洗涤液 （使用前作1:20稀释） 显色剂：（H2O2）A液；（TMB）B液（四甲基联苯胺） 终止液：比色法时，各管加终止液50微升。可不加 恒温箱、酶标仪、光密度计等 1. 3. 4. 5. 6. 被检血清：2分/4人； 2. 方盘4个/每室 试剂：1盒/每室（酶标抗体，显色剂）； 手套：4包/4人 TIP吸头4个/4人 阳性对照、阴性对照、空白对照 全班各两份。
美丽的海医校园
临床免疫学实验指导
海南医学院
免疫标记技术的应用：【定义】
是指利用荧光素、酶、放射性核素 、胶体金等电子 致密物质为发光物，标记抗原或抗体 后进行免疫 反应，从而对抗原、抗体或复合物进行定性、定量、 定位分析的检验技术。
免疫标记技术的特点与应用： 特点：特异性，敏感性，灵敏度高，结果易观察 应用：根据采用标记物和检测方法不同分为；荧光
【结果观察与判断】
以细胞出现明显荧光的血清最高稀释度为效价 如：1：640血清稀释度处可见细胞呈明显荧光 即可报告。表明患者血清中含有ANA
强阳性
阳性
阴性
ANA（+）均质型 核膜型
ANA（+）斑点型
阴性反应
二、酶联免疫吸附试验
——双抗体夹心法检测HBsAg 酶联免疫吸附试验： （Enzyme Linked Immunosorbent Assay ,ELISA）
【操作方法】 制备肝细胞抗原片
1. 新鲜制备小白鼠肝组织印片→丙酮浸泡5min→PBS漂洗 3次每次3min→ 晾干放-20℃备用。
2. 用PBS稀释被检血清，1∶5，1∶10，1∶20 · · · · · · 1∶1280 3. 取已经制备好的抗原片做好标记，每孔加入患者不同稀释 度血清10μ l；同时取阳性对照片、阴性对照片，分别加入 对照血清10μ l →37℃保湿温育30min。 4. 取出用PBS缓冲液轻轻冲洗未结合血清，再用PBS漂洗3次 每次3min,晾干。 5. 分别滴加 1∶10荧光标记-羊抗人IgG 10μl →37℃保湿 温育30min→ 用PBS漂洗3次， 每次3min,晾干。 6. 在染好玻片上滴加50%甘油缓冲液，加盖片，荧光镜下观察