线粒体膜电位检测试剂盒（JC-10）使用说明
JC 线粒体膜电位的检测方法
JC-1线粒体膜电位检测试剂盒产品组成：产品编号BB-4105-1 BB-4105-2 BB-4105-3规格20 assays 50 assays 100 assaysJC-1 100ul 250ul 500ul10×孵育缓冲液4ml 10ml 20ml产品简介：线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)△Ψm的理想荧光探针。
可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。
在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，488nm激发时的最大发射波长为590nm，可以产生红色荧光，在流式图上表现为FL1和FL2双阳性；在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体，488nm激发时最大发射波长为527nm，可以产生绿色荧光，形成流式图中所有细胞FL1均为阳性。
凋亡细胞则大多为FL1单阳性。
这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。
常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
贝博线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)可以快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化，可以用于早期的细胞凋亡检测。
试剂盒染料与其他的阳离子染料如DiOC6(3)和罗丹明123相比，特异性更高，对线粒体膜电位变化的特异性高于质膜电位变化，对线粒体去极化检测的检测一致性更好；红绿色荧光强度比率只受线粒体膜电位的变化，不受线粒体大小，形状，密度的差异干扰；检测灵敏度强，对细胞应激反应的微小异质性都能辨别；使用方法：悬浮细胞1、孵育缓冲液和JC-1染色工作液的配制：根据样品数按下列比例配制孵育缓冲液和JC-1染色工作液。
取100ul 10×孵育缓冲液加900ul无菌纯水稀释，混匀并预热至37℃，即成1×孵育缓冲液；在500ul 1×孵育缓冲液中加入5ul JC-1，涡旋混匀配成JC-1染色工作液；2、收集样本细胞以及阴性、阳性对照细胞。
组织线粒体膜电位检测方法
组织线粒体膜电位检测方法检测细胞内线粒体膜电位的方法可以帮助研究者了解线粒体功能和细胞代谢状态。
以下是几种常用的检测线粒体膜电位的方法：1. Rhodamine 123 染色法： Rhodamine 123 是一种荧光染料，它能够进入活性线粒体并与线粒体膜电位呈反比关系。
这种染料会在正常的线粒体内累积并发出荧光信号，可以通过荧光显微镜或流式细胞仪来观察和测量。
线粒体膜电位高时，Rhodamine 123 的荧光信号较强；而电位低时，荧光信号则减弱。
2. JC-1染色法： JC-1 是一种双荧光探针，可根据线粒体膜电位的变化而显示不同的荧光颜色。
在正常的线粒体膜电位较高时，JC-1 形成聚集体，产生红色荧光。
而当线粒体膜电位低时，JC-1 解聚，产生绿色荧光。
通过观察红色与绿色荧光的比例变化，可以间接反映线粒体膜电位的高低。
3. TMRM染色法： Tetramethylrhodamine methyl ester (TMRM) 是一种荧光染料，其进入细胞内后与活跃的线粒体结合并发出荧光信号。
其荧光强度与线粒体膜电位的高低成正比关系。
通过荧光显微镜或流式细胞仪来观察和测量 TMRM 的荧光信号，以评估线粒体膜电位的变化。
4. 光学显微测量法： 这种方法通常利用荧光探针或荧光指示剂结合光学显微技术，直接在细胞或组织水平上测量线粒体膜电位的变化。
可以使用适当的荧光显微镜系统和图像分析软件来观察和分析线粒体膜电位的变化。
需要指出的是，这些方法每一种都有其优缺点。
选择适合的方法应根据研究需求、实验条件和所研究的细胞类型来决定。
同时，使用这些荧光探针测量线粒体膜电位时，需要注意其特异性、灵敏度和操作的准确性，以确保获得可靠和准确的结果。
线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1 )使用说明
线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）使用说明货号：M8650规格：100T内容：产品名称包装JC-1（200×）100µL/管，共5管超纯90mLJC-1染缓冲液（5×）80mLCCCP（10mM）20µL保存条件：-20℃避光保存，尽量避免反复冻融，有效期一年。
超纯水和JC-1染色缓冲液（5×）也可4℃保存。
产品简介：线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）是一种以JC-1为荧光探针，快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化的试剂盒，可以用于早期的细胞凋亡检测。
JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位Ψm△的理想荧光探针。
可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。
在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，可以产生红色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体，可以产生绿色荧光。
这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。
常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也可以用JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。
JC-1单体的最大激发波长为515nm，最大发射波长为529nm；JC-1聚合物的最大激发波长为585nm，最大发射波长为590nm。
实际观察时，使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。
本试剂盒提供了CCCP作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照。
对于六孔板中的样品，本试剂盒共可以检测100个样品；对于12孔中的样品，本试剂盒共可以检测200个样品。
操作步骤：1、JC-1染色工作液的配制：六孔板每孔所需JC-1染色工作液的量为1mL，其他培养器皿的JC-1染色工作液的用量以此类推；对于细胞悬液每50～100万细胞需0.5mL JC-1染色工作液。
线粒体膜电位检测方法
线粒体膜电位检测方法线粒体膜电位是细胞内线粒体膜的电压差，是维持细胞内稳态的重要参数之一。
线粒体膜电位的变化与细胞内能量代谢、细胞凋亡等生物学过程密切相关，因此对线粒体膜电位的检测具有重要的生物学意义。
本文将介绍几种常用的线粒体膜电位检测方法，希望能够对相关研究工作者提供一定的参考。
1. 荧光探针法。
荧光探针法是一种常用的线粒体膜电位检测方法。
通过使用荧光探针染色细胞，荧光信号的变化可以反映线粒体膜电位的变化。
常用的线粒体膜电位荧光探针包括JC-1、TMRE等。
这些荧光探针在不同的线粒体膜电位下会发生荧光信号的变化，可以通过流式细胞仪或荧光显微镜来检测和分析线粒体膜电位的变化。
2. 膜电位敏感染料法。
膜电位敏感染料法是另一种常用的线粒体膜电位检测方法。
通过使用膜电位敏感染料，如Rhodamine 123等，可以对线粒体膜电位进行实时监测。
这些膜电位敏感染料可以在不同线粒体膜电位下发生荧光信号的变化，通过荧光显微镜或荧光酶标仪等设备可以对线粒体膜电位进行定量检测和分析。
3. 膜电位探针法。
膜电位探针法是一种新型的线粒体膜电位检测方法。
通过使用膜电位探针，如刚果红等，可以对线粒体膜电位进行高灵敏度的监测。
这些膜电位探针可以在不同线粒体膜电位下发生颜色的变化，通过比色法或光谱法可以对线粒体膜电位进行定量检测和分析。
4. 膜电位记录仪法。
膜电位记录仪法是一种直接记录线粒体膜电位变化的方法。
通过使用膜电位记录仪，可以实时监测线粒体膜电位的变化情况。
这种方法对线粒体膜电位的变化有较高的时间分辨率和灵敏度，可以对线粒体膜电位的动态变化进行准确的记录和分析。
总结。
以上介绍了几种常用的线粒体膜电位检测方法，包括荧光探针法、膜电位敏感染料法、膜电位探针法和膜电位记录仪法。
这些方法各有特点，可以根据具体的实验要求和设备条件选择合适的方法进行线粒体膜电位的检测。
希望本文对相关研究工作者有所帮助，促进线粒体膜电位的研究和应用。
(完整版)线粒体膜电位检测(JC-1).
线粒体膜电位检测（JC-1)大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位（△ψ的破坏，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。
JC-1(5,5’,6,6’-tetrachloro-1,1’,3,3’-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide)是一种阳离子脂质荧光染料，可作为检测线粒体跨膜电位指示剂。
JC-1有单体和多聚体两种存在状态，在低浓度时以单体的形式存在，高浓度时以多聚体形式存在，两者的发射光谱不同，但均可在流式细胞仪绿色（FL-1）通道检测出绿色荧光，JC-1可透过正常细胞膜以单体状态聚集胞内，正常健康线粒体的膜电位（△ψ）具有极性，JC-1依赖于△ψ的极性被迅速摄入线粒体内，并因浓度增高而在线粒体内形成多聚体，多聚体发射光为红色荧光；可被流式细胞仪的红色（FL-2）通道检测到，而细胞发生凋亡时，线粒体跨膜电位被去极化，JC-1从线粒体内释放，红光强度减弱，以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光。
根椐这一特征检测线粒体膜电位的变化。
所需仪器或者试剂流式细胞仪或荧光显微镜、高速离心机、CO2培养箱、微量移液器1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、灭菌去离子水使用注意事项1．微量试剂取用前请离心集液。
2． JC-1避光保存及使用。
3．细胞培养的数量不宜超过1×106，否则细胞会产生自然凋亡影响检测。
4．对PH变化过于敏感的细胞建议用胎牛血清取代Buffer孵育染色及洗涤，或延长观测时间5．流式细胞仪检测线粒体膜电位变化受到多种因素的影响，因诱导剂、细胞株类型，作用时间的不同而荧光强度比例都有不同，因此没有通用标准的补偿设门指南，因此每个试验需设阴性及阳性对照组进行荧光补偿及设门。
流式细胞仪检测细胞凋亡操作流程 - 线粒体膜电位变化检测细胞凋亡
线粒体膜电位变化检测细胞凋亡实验原理JC-1（5,5′,6,6′-Tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethyl-imidacarbocyanine iodide）是一种广泛用于检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)△Ψm的理想荧光探针。
可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。
在线粒体膜电位较高时，JC-1 聚集在线粒体的基质(matrix)中，形成聚合物(J-aggregates)，可以产生红色荧光（FL-2 通道）；在线粒体膜电位较低时，JC-1 不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1 为单体(monomer)，可以产生绿色荧光（FL-1 通道）。
这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。
常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
通过JC-1 从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也可以用JC-1 从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。
JC-1 单体的最大激发波长为514nm，最大发射波长为527nm；JC-1 聚合物(J-aggregates)的最大激发波长为585nm，最大发射波长为590nm。
实验用品1.12⨯75mm 的Falcon 管和15ml 聚苯乙烯离心管2.微量加样器和加样头3.线粒体检测试剂盒（货号551302，100tests），包括JC-1和10 ⨯ Assay Buffer, 注：每个KIT 包括 4 小瓶JC-1 试剂，每小瓶试剂足够检测25 个样本4.离心机5.CO2 培养箱6.流式细胞仪样本制备图1：试剂准备和JC-1 染色步骤总揽1.在JC-1粉末中加入125ulDMSO使其充分溶解，配成JC-1 Stock Solution，需根据实验的量分装-20度保存。
2.根据样本量配制JC-1 Working Solution，每个样品500ul 1×Assay Buffer + 5ulJC-1 Stock Solution。
肝癌细胞 线粒体膜电位 检测方法
线粒体膜电位是反映线粒体功能的重要参数，其检测有助于评估细胞的能量代谢状态以及细胞凋亡等过程。
肝癌细胞线粒体膜电位的检测方法可以采用荧光探针法，常用的荧光探针包括JC-1、Rhodamine 123等。
这些荧光探针可以与线粒体膜电位结合，发出荧光信号，从而反映线粒体膜电位的变化。
具体操作步骤如下：
1.收集肝癌细胞样本，并进行适当的处理，如洗涤、离心
等。
2.将荧光探针与肝癌细胞孵育，使荧光探针与线粒体膜电
位结合。
3.洗涤去除未结合的荧光探针。
4.使用荧光显微镜或流式细胞仪等设备检测荧光信号，分
析线粒体膜电位的变化。
需要注意的是，荧光探针法虽然简便易行，但也可能受到一些因素的干扰，如细胞自噬、线粒体膜通透性改变等。
因此，在实际应用中，需要综合考虑多种因素，选择适当的检测方法，并结合其他指标进行综合分析。
此外，线粒体膜电位的检测还可以采用其他方法，如电化学法、原子力显微镜等。
这些方法的原理和操作步骤各有不同，可以根据具体需求和条件进行选择。
jc-1共聚焦步骤
jc-1共聚焦步骤
JC-1是一种荧光染料,常用于测定细胞线粒体膜电位。
其共聚焦显微镜观测步骤如下：
1. 将待测细胞接种在共聚焦培养皿中,使其附着并生长至适当的数量。
2. 用PBS缓冲液洗涤细胞1~2次,以去除培养液和细胞碎片等。
3. 将含1µM JC-1的PBS加入共聚焦培养皿中,孵育30分钟至1小时,使JC-1染料进入细胞,并形成线粒体膜电位相关的荧光染色体。
4. 用PBS缓冲液洗涤细胞1~2次,尽可能地去除未结合的JC-1染料。
5. 将培养皿放入共聚焦显微镜中,使用荧光激发光源激发JC-1的红色和绿色荧光。
6. 通过软件调节激发波长和滤镜,使观察到的荧光信号最佳。
7. 通过共聚焦显微镜观察线粒体膜电位的变化。
通常,高线粒体膜电位的细胞会表现出更多的红色荧光,而低线粒体膜电位的细胞会表现出更多的绿色荧光。
JC-10 线粒体膜电位的检测
悬浮细胞 1、 1X 染色缓冲液和 JC-10 染色工作液的配制： 根据样品数按下列比例配制 1X 染色缓冲液和 JC-10 染色工作液。 取 100ul 10×染 色缓冲液加 900ul 无菌纯水稀释，混匀并预热至 37℃，即成 1×染色缓冲液； 用 1×染色缓冲液将 JC-10 稀释 1000-3000 倍，充分混匀配成 JC-10 染色工作液。
5ml
10ml
20ml
使用说明书
1
1
1
各组份储存条件：
JC-10 染液-20℃避光保存；避免反复冻融，可根据需要小量分装。 10×染色缓冲液 2-8℃保存。
有效期： 一年。
V2.16
组份编号 41052A 41052B
※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制： 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
技术支持： 产品技术问题可发邮件至 bestbio@ 咨询。 如果您有任何关于产品性能或者新应用和技术的建议，欢迎您随时联系我们。
产品简介：
线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位（△Ψmt）的破坏，被认为是细胞凋 亡级联反应过程中最早发生的事件之一，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA 断 裂）出现之前，一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。
产品更新： 贝博会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的 版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说 明书，可能是不同的版本。 需要最新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
如何快速检测分析线粒体膜电位变化？JC-1来助力
如何快速检测分析线粒体膜电位变化？JC-1来助力JC-1 检测线粒体膜电位（Membrane potential）原理：在细胞凋亡的过程中往往伴随着线粒体跨膜电位的破坏，这被广泛认为是细胞凋亡过程中zui早发生的事件之一。
线粒体膜电位的检测有很多方法，JC-1的流式检测是比较常见的一种方法。
JC-1有单体和多聚体两种存在状态，低浓度时，以单体存在，可检测到绿色荧光，用流式检测时，通常为FL-1通道(和FITC同通道）高浓度时，以多聚体存在，可检测到红光，流式检测通常为FL-2通道（和PE同通道)。
因JC-1浓度的变化,在单体和多聚体之间形成一个可逆的转变过程。
正常细胞，膜电位正常时，JC-1通过线粒体膜J性进入线粒体内，并因浓度升高而形成发射红色荧光的多聚体，而凋亡细胞，线粒体跨膜电位去J化，JC-1从线粒体内释放，浓度降低，逆转为发射绿色荧光的单体形式。
故而可以通过检测绿色和红色荧光来定性(细胞群的偏移）定量（细胞群的荧光强度）的检测线粒体膜电位的变化。
近年来研究发现线粒体功能状态和不少疾病的密切相关，多种细胞在不同因子作用下发生凋亡时均伴有MMP的下降，而检测线粒体膜电位(MMP)的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
如何快速检测分析线粒体膜电位变化？我们可以通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也可以用JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。
Abbkine线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）#KTA4001 就此提供了一种简单的方法，基于JC-1来检测线粒体跨膜电位的变化，区分健康和凋亡细胞。
在健康细胞中，这种染料在线粒体中积聚并聚集，在线粒体中形成明亮的红色荧光团块。
任何消除线粒体膜电位的事件都会阻止JC-1染料在线粒体中的积累，因此，染料以其单体形式保留在细胞质中，导致红色转变（聚集的JC-1，Ex/Em = 585/590nm）至绿色荧光（JC-1单体，Ex/Em = 510/527nm）。
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线粒体膜电位检测试剂盒（JC-10）使用说明
线粒体膜电位检测试剂盒（JC-10）使用说明
产品货号：CA1310
产品规格：100T
产品内容：
产品名称包装
JC-10（200×）100μL/管，共5管
超纯90mL
JC-10染缓冲液（5×）80mL
CCCP20μL
保存条件：
-20℃避光保存，尽量避免反复冻融，有效期一年。
超纯水和JC-10染色缓冲液（5×）也可4℃保存。
产品简介：
线粒体膜电位检测试剂盒（JC-10）是一种以JC-10为荧光探针，快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化的试剂盒，可以用于早期的细胞凋亡检测。
JC-10是一种广泛用于检测线粒体膜电位Ψm△的理想荧光探针。
可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。
在线粒体膜电位较高时，JC-10聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，可以产生红色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-10不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-10为单体，可以产生绿色荧光。
这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位
的变化。
常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
通过JC-10从
红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也
可以用JC-10从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的
指标。
JC-10单体的最大激发波长为515nm，最大发射波长为529nm；JC-10聚合物的最大激发波长为585nm，最大发射波长为590nm。
实际观察时，使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。
本试剂盒提供了CCCP作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照。
对于六
孔板中的样品，本试剂盒共可以检测100个样品；对于12孔中的样品，
本试剂盒共可以检测200个样品。
操作步骤：
1、JC-10染色工作液的配制：
六孔板每孔所需JC-10染色工作液的量为1mL，其他培养器皿的JC-10染
色工作液的用量以此类推；
对于细胞悬液每50～100万细胞需0.5mL JC-10染色工作液。
取适量
JC-10（200×），按照每50μL JC-10（200×）加入8mL超纯水的比例稀释JC-10。
剧烈震荡充分溶解并混匀JC-10。
然后再加入2mL JC-10染色缓冲液（5×），
混匀后即为JC-10染色工作液。
2、阳性对照的设置：
把试剂盒中提供的CCCP（10mM）推荐按照1：1000的比例加入到细
胞培养液中，稀释至10μM，处理细胞20分钟。
随后按照下述方法装载JC-10，进行线粒体膜电位的检测。
对于大多数细胞，通常10μMCCCP处理20分钟后
线粒体的膜电位会完全丧失，JC-10染色后观察应呈绿色荧光；而正常的细胞经JC-10染色后应显示红色荧光。
对于特定的细胞，CCCP的作用浓度和作用时间可能有所不同，需自行参考相关文献资料
3、对于悬浮细胞：
（1）取10～60万细胞，重悬于0.5mL细胞培养液中，细胞培养液中可以含血清和酚红。
（2）加入0.5mL JC-10染色工作液，颠倒数次混匀。
细胞培养箱中37℃孵育20分钟。
（3）在孵育期间，按照每1mL JC-10染色缓冲液（5×）加入4mL蒸馏水的比例，配制适量的JC-10染色缓冲液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育结束后，600g4℃离心3～4分钟，沉淀细胞。
弃上清，注意尽量不要吸除细胞。
（5）用JC-10染色缓冲液（1×）洗涤2次：加入1mL JC-10染色缓冲液（1×）重悬细胞，600g4℃离心3～4分钟，沉淀细胞，弃上清。
再加入1mL JC-10染色缓冲液（1×）重悬细胞，600g4℃离心3～4分钟，沉淀细胞，弃上清。
（6）再用适量JC-10染色缓冲液（1×）重悬后，用荧光显微镜或激光
共聚焦显微镜观察，也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
4、对于贴壁细胞：
注意：对于贴壁细胞，如果希望采用荧光分光光度计或流式细胞仪检测，可以先收集细胞，重悬后参考悬浮细胞的检测方法。
（1）对于六孔板的一个孔，吸除培养液，根据具体实验如有必要可以用
PBS或其它适当溶液洗涤细胞一次，加入1mL细胞培养液。
细胞培养液中可以含有血清和酚红。
（2）加入1mL JC-10染色工作液，充分混匀。
细胞培养箱中37℃孵育20分钟。
（3）在孵育期间，按照每1mL JC-10染色缓冲液（5×）加入4mL蒸馏水的比例，配制适量的JC-10染色缓冲液（1×），并放置于
（4）37℃孵育结束后，吸除上清，用JC-10染色缓冲液（1×）洗涤2次。
（5）加入2mL细胞培养液，培养液中可以含有血清和酚红。
（6）荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察。
5、对于纯化的线粒体：
（1）把配制好的JC-10染色工作液再用JC-10染色缓冲液（1×）稀释5倍。
（2）0.9mL5倍稀释的JC-10染色工作液中加入0.1mL总蛋白量为10～100μg纯化的线粒体。
（3）用荧光分光光度计或荧光酶标仪检测：混匀后直接用荧光分光光度计进行时间扫描（time scan），激发波长为485nm，发射波长为590nm。
如果使用荧光酶标仪，激发波长不能设置为485nm时，可以在475～520nm范围内设置激发波长。
另外，也可以参考下面步骤6中的波长设置进行荧光检测。
（4）用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察：方法同下面的步骤6。
6、荧光观测和结果分析：
检测JC-10单体时可以把激发光设置为490nm，发射光设置为530nm；检测JC-10聚合物时，可以把激发光设置为525nm，发射光设置为590nm。
注意：此处测定荧光时不必把激发光和发射光设置在最大激发波长和最大发射波长。
如使用荧光显微镜观察，检测JC-10单体时可以参考观察其它绿色荧光时的设置，如观察GFP或FITC时的设置；检测JC-10聚合物时可以
参考观察其它红色荧光，如碘化丙啶或Cy3时的设置。
出现绿色荧光说明线粒体膜电位下降，并且该细胞很可能处于细胞凋亡早期。
出现红色荧光说明线粒体膜电位比较正常，细胞的状态也比较正常。
注意事项：
（1）JC-10（200×）在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘
在离心管管底、管壁或管盖内，可以20～25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
（2）必须先把JC-10（200×）用试剂盒提供的超纯水充分溶解混匀后，才可以加入JC-10染色缓冲液（5×）。
不可先配制JC-10染色缓冲液（1×）再加入JC-10（200×），这样JC-10会很难充分溶解，会严重影响后续的检测。
（3）装载完JC-10后用JC-10染色缓冲液（1×）洗涤时，使JC-10染色缓冲液（1×）保持4℃左右，此时的洗涤效果较好。
（4）JC-10探针装载完并洗涤后尽量在30分钟内完成后续检测。
在检测前需冰浴保存。
（5）请勿把JC-10染色缓冲液（5×）全部配制成JC-10染色缓冲液（1×），本试剂盒使用过程中需直接使用JC-10染色缓冲液（5×）。
（6）如果发现JC-10染色缓冲液（5×）中有沉淀，必须全部溶解后才
能使用，为促进溶解可以在37℃加热。
（7）CCCP为线粒体电子传递链抑制剂，有毒，请注意小心防护。
（8）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。